环孢素衍生物(γ-hydroxylmethylleucine^4)-cyclosporin A的分离纯化与鉴定

目的研究高纯度环孢素衍生物(γ-hydroxylmethylleucine4)-cyclosporin A的分离纯化工艺。方法采用HPLC检测方法,以大孔树脂、聚合物微球为载体进行分离纯化。利用质谱(MS)和核磁共振谱(NMR)解析化合物的结构。结果发酵液经过滤,吸附,结晶得到粗提物,粗提物再经聚合物微球,浓缩,萃取,结晶得到高纯度产品,光谱数据确定为(γ-hydroxylmethylleucine4)-cyclosporin A,所得产品纯度≥95%,收率大于70%。结论建立(γ-hydroxylmethylleucine4)-cyclosporin A的分离纯化工艺,流程简单、可行,为该产品产业化开发提供基础。

钙调神经磷酸酶在血管紧张素Ⅱ刺激的心脏成纤维细胞增殖中的作用

本研究观察了钙调神经磷酸酶 (CaN)在血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )刺激的大鼠心脏成纤维细胞增殖中的作用。在培养的大鼠心脏成纤维细胞上 ,应用双波长荧光光度计检测Fura 2标记的细胞游离Ca2 +浓度 ;应用对硝基苯磷酸 (PNPP)作底物测定钙调神经磷酸酶 (CaN)活性 ;根据 3H 胸腺嘧啶掺入法评估CaN特异性抑制剂环胞素A(CsA)对AngⅡ刺激的心脏成纤维细胞DNA合成的影响。结果表明 ,AngⅡ (10 -7mol/L)刺激培养的大鼠心脏成纤维细胞 3H 胸腺嘧啶掺入较对照组增高 72 % (P <0 0 1) ,CsA可以抑制AngⅡ刺激的细胞 3H 胸腺嘧啶掺入。AngⅡ刺激的大鼠心脏成纤维细胞胞内Ca2 +浓度及CaN活性较对照组分别增高 112 % (P <0 0 1)和 17% (P <0 0 5 )。结果提示 ,CaN在一定程度上参与AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞增殖的信号传递。

1例纯红细胞再生障碍性贫血患者出现癫痫发作的药源性因素分析

一位77岁老年女性患者,因"纯红细胞再生障碍性贫血"入院,住院期间先后给予左氧氟沙星0.2 g,ivgtt,bid,环孢素100 mg,po,q 12 h。两药联用1 d后,患者出现突发短暂抽搐、呼之不应、小便失禁等症状,10 min后稍缓解,30 min后出现四肢强直抽搐、意识丧志,双眼向左上凝视,口吐白沫,呼之不应等症状。给予安定10 mg静推,后下肢仍有间断震颤,停用环孢素,给予注射用丙戊酸钠0.4 g,ivgtt,bid对症治疗,症状稳定后改为丙戊酸缓释片0.5 g,bid维持治疗,患者之后仍处于不清醒状态。经分析认为该不良反应由药物相互作用导致环孢素血药浓度升高所致可能性较大,而由左氧氟沙星引起该反应的可能性较小。

HLA新基因B"非汉字符号"610携带者家系B淋巴细胞系的建立

目的 建立HLA新基因B 5 6 10携带者家系的B淋巴细胞系 ,用于该基因的研究和确证。方法 采集外周血分离淋巴细胞 ,用EBV感染淋巴细胞后 ,加入含 2 0 %FBS、2 μg/mlCsA的RPMI16 4 0进行培养。 结果 5位家庭成员的无限增殖化B淋巴细胞系新基因稳定遗传。结论 建立的无限增殖化B淋巴细胞系的HLA新基因B 5 6 10遗传稳定 ,为大量保存和繁殖珍贵的生物医学材料奠定了基础。

环孢菌素A体外对再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征患者造血祖细胞作用的研究

目的 观察了环孢菌素A(CSA)体外对 18例再生障碍性贫血 (AA) ,17例骨髓增生异常综合征 (MDS)和 10例正常对照粒系和红系祖细胞 (CFU GM、CFU E)的作用。方法 采用RPMI16 4 0琼脂和McCoy’S5A甲基纤维素半固体平皿法。 结果 (1)AA和MDS患者的CFU GM和CFU E较正常对照明显减低 (P <0 0 0 0 1) ;(2 )CsA能明显促进AA和MDS患者CFU GM、CFU E的增殖 ,这种促增殖作用随CsA剂量增加而增加 ;(3)SAA患者CFU GM和CFU E对CsA的有效率较CAA高 ;(4)MDS RAEB和RAEB T型患者CFU GM、CFU E对CsA有效率较RA、RAS高 ;(5 )MDS和AA患者中CFU GM、CFU E值重、中度减低者对CsA有效率较零者高。结论 CsA体外可促进部分AA和MDS患者CFU GM、CFU

环孢素A滴眼液治疗结膜干燥综合征的机理探讨

目的 建立结膜干燥综合征的动物模型。证实实验动物出现结膜干燥综合征后，予以环孢素A(CsA)滴眼液治疗，观察环孢素A滴眼液对结膜干燥综合征的治疗效果，治疗前后结膜杯状细胞的数量、结膜上皮细胞和杯状细胞及腺样层水通道蛋白3(AQP3)表达量的变化以及淋巴细胞浸润程度的改变。方法 百日咳疫苗+完全弗氏佐剂+同种鼠结膜抗原，多点注射于小鼠的足塾、背部皮下及四肢腋下淋巴结，诱导结膜干燥综合征动物模型，再用环孢素A滴眼液予以治疗。观察对照组与实验组、实验组治疗前后泪液分泌量、泪膜破裂时间的变化；作病理切片观察结膜杯状细胞破坏程度及破坏后的恢复程度，淋巴细胞浸润程度；用免疫组化SP法测量结膜上皮细胞和杯状细胞及腺样层AQP3表达量的变化。结果 CsA滴眼液治疗前后小鼠泪液分泌量、泪膜破裂时间、结膜杯状细胞数和AQP3表达量都有明显变化，淋巴细胞浸润程度减轻。结论 CsA滴眼液对结膜干燥综合征有明显的治疗作用，治疗的机理包括抑制淋巴细胞，增加结膜杯状细胞的数量，上调结膜上皮细胞和杯状细胞及腺样层AQP3的表达量。

叶绿素铜钠盐联合环孢菌素A对免疫介导再生障碍性贫血模型小鼠的实验研究

目的探讨叶绿素铜钠盐(SCC)联合环孢菌素A(CsA)治疗再生障碍性贫血(AA)的疗效。方法建立免疫介导AA模型小鼠,分别胃饲2种不同剂量SCC12.5mg/(kg·d)+CsA12.5mg/(kg·d),SCC25mg/(kg·d)+CsA12.5mg/(kg·d),以CsA,SCC[各25mg/(kg·d)]为阳性对照组,正常对照组及模型对照组胃饲生理盐水,每组灌胃0.5ml/d,分2次给药,连续14d,分别检测血象,另取股骨作骨髓病理切片。结果SCC+CsA小剂量组WBC、HB、PLT均明显高于AA模型组,且HB,PLT分别高于SCC组和CsA组(P<0.05)。骨髓病理切片显示SCC+CsA小剂量组骨髓增生较模型组小鼠(造血组织容量<34%)改善明显(造血组织容量80%)。结论SCC+CsA促进AA模型小鼠造血功能,提高小鼠外周血白细胞、血红蛋白、血小板三系,对AA模型小鼠具有一定的治疗作用,且疗效好于单用SCC、CsA。

亲环素A在心血管系统中的作用

亲环素A是一种在生物体内普遍存在的蛋白质,具有肽脯氨酰顺反异构酶活性,并作为一种分子伴侣,参与体内多种蛋白的成熟、折叠、活化、稳定及定位。亲环素A具有很多生物学功能,包括免疫调节、细胞生长、肿瘤发生和血管疾病。其中,它在心血管疾病中的作用涉及环孢霉素A和MAPK家族。本文就亲环素A在心血管系统中的作用作一综述。

环孢菌素A联合造血细胞因子治疗骨髓增生异常综合征的临床疗效

目的探讨环孢菌素A(CsA)联合造血细胞因子治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的临床疗效。方法采用环孢菌素A(CsA)联合造血细胞因子治疗难治性贫血(MDS-RA)患者19例,定期观察患者外周血象和骨髓细胞形态学、并随诊观察远期疗效。结果19例患者治疗后总有效率为73.7%(14/19),全部病例未见严重副作用,未发现向白血病转化的病例,治疗后骨髓细胞形态学未见改变。结论环孢菌素A(CsA)联合造血细胞因子治疗MDS-RA疗效可靠。

FK506与环孢霉素A对角膜上皮愈合影响的实验研究

目的:由角膜上皮损伤修复中表皮生长因子(EGF)与纤维连结蛋白(Fn)的表达试探讨FK5 0 6对兔角膜上皮愈合的影响机制,并与环孢霉素A(CsA)对比。方法:建立18只新西兰白兔的角膜上皮损伤模型,分三组,每组6只,随机分为4只和2只,均于去除角膜上皮后即照像一次,4只兔右眼点0 .1%FK5 0 6眼液,左眼点0 .5 %CsA眼液,另2只兔眼不点药。三组分别于点眼后12、2 4、36、4 8、72小时各照像一次;并分别于去除角膜上皮后3.5天、4天、5天取材角膜行组织病理学及EGF与Fn免疫组织化学检查。结果:FK5 0 6组与CsA组及空白组相比较均有显著性差异(P <0 .0 5 ) ;而CsA组与空白组比较无显著性差异。伤后3.5、4、5天,FK5 0 6组角膜上皮层EGF表达渐减弱,第5天与第3.5天比较差异有显著性(P <0 .0 1) ;Fn表达渐减弱,第5天与第3.5天比较差异有显著性(P <0 .0 5 )。而CsA组与空白组各时间段相比无显著性差异。结论:FK5 0 6组EGF与FN表达的减弱可能与其促角膜上皮愈合有关。

钙调神经磷酸酶基因多态性对环孢素A药效的影响

目的:研究钙调神经磷酸酶基因多态性对环孢素A(Cs A)药效的影响。方法:收集服用Cs A患者的血样,采用酶放大免疫法检测Cs A谷浓度,以限制性片段长度多态性-聚合酶链反应(RFLP-PCR)方法检测PPP3CA和PPP3CB的基因型,以T细胞核因子(NFAT)下游基因白细胞介素(IL)2、γ干扰素(IFN-γ)和粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的表达作为Cs A间接药效指标,并采用实时定量PCR(RT-q PCR)法检测其表达,利用相关性分析和多因素回归等方法研究基因多态性与Cs A药效的关系。结果:共收集Cs A血液样本100份,Cs A药效相关的NFAT下游基因GM-CSF的表达与CsA谷浓度无显著性相关(rGM-CSF=-0.04,P=0.238),IL-2和IFN-γ的表达与Cs A谷浓度存在显著性负相关(rIL-2=-0.384 3,P<0.001;r_(IFN-γ)=-0.335 4,P<0.001)。以IL-2和IFN-γm RNA表达均数作为间接药效指标,发现PPP3CB rs3763679位点基因多态性对Cs A药效有显著性影响(P<0.05),而未发现PPP3CA rs3804358对药效有明显影响(P>0.05)。分层分析结果显示,肾移植和免疫病患者中PPP3CB rs3763679基因变异(TC+TT)的患者药效优于野生型(CC)(P<0.05)。将药效以浓度标化后,多因素回归分析显示Cs A浓度标化后的药效与患者性别、PPP3CB rs3763679、乳酸脱氢酶和肌酐呈显著性负相关,与PPP3CA rs3804358、白细胞计数、尿素氮和三酰甘油等呈显著性正相关。结论:PPP3CB rs3763679基因多态性对Cs A药效有影响,在肾移植和免疫性疾病患者中,PPP3CB rs3763679 TT+TC者药效优于CC者;同时,性别、PPP3CA rs3804358、白细胞计数、乳酸脱氢酶、肌酐、尿素氮和三酰甘油等多种因素皆可不同程度影响标化后Cs A药效,在给予Cs A时也需同时考虑多方面的因素。

CsA在兔眼滤过性手术中的抗增殖研究

目的 :研究环孢霉素A(cyclosporinA ,CsA)在抗青光眼滤过性手术中的抗增殖作用。方法 :将 36只健康新西兰大白兔随机分成 2组 ,即实验组为 (CsA)组、对照组为丝裂霉素C(mitomycinC ,MMC)组均行小梁切除术 ,术中分别在Tenon囊和巩膜之间放置 2 %CsA、0 .0 0 2 %MMC的海绵块 5min后 ,用 0 .9%生理盐水冲洗干净。分别在术后d7、15d、30d检查滤过泡、角膜、眼底 ,并进行病理切片AgSNORs和HE染色。结果 :CsA组多数形成功能性滤过泡 ,无任何并发症 .两组成纤维细胞AgNORs颗粒数比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :CsA在抗青光眼滤过术中抗增殖作用与MMC的作用相当 ,但其副作用小 ,值得推广应用。

肾移植术后四例死亡病例分析

本文提示造成肾移植术后死亡的首要原因是严重感染,尤其是细菌、霉菌、病毒混合感染。同时对环孢素(CsA)中毒引起的癫痫、失明、昏迷等神经系统并发症也绝不能轻视,而且一旦发生,预后很差,应高度警惕。

辨证分型联合西药治疗IgA肾病随机平行对照研究

[目的]观察辨症分型联合西药治疗IgA肾病疗效。[方法]使用随机平行对照方法，将150例住院患者按病志号抽签法简单随机分为两组。对照组75例免疫抑制剂-雷公藤，10~20mg/次，2~3次/d；爱若华10~20mg/次，1次/d；骁悉，1~2g次，1次/d；环孢素A，25mg/次，1次/d。治疗组75例辨证分型，肾功能急速衰竭伴随尿蛋白含量较高用协定方（枸杞4g，柴胡6g，白术12g，黄岑6g，菊花15g，白芍12g，杜仲8g，黄芪30g，川芎12g，葛根8g，黄精10g）；蛋白尿伴血尿用肾二方（生蒲黄12g，女贞子15g，生地18g，龟板6g，旱莲草12g）；病情严重用通络方（白蒺藜6g，夏枯草12g，藤梨根6g，留行子10g，僵蚕4g，白芥子6g）；肾功能衰退用百令胶囊，1g/次，3次/d；西药治疗同对照组。连续治疗28d为1疗程。观测临床症状、24hU-Pro、U-RBC、BuN、SCr、GFR、不良反应。连续治疗3疗程，判定疗效。[结果]治疗组痊愈45例，显效18例，有效10例，无效2例，总有效率97.33%。对照组痊愈30例，显效15例，有效20例，无效10例，总有效率86.67%。治疗组疗效优于对照组（P＜0.05）。两组相关指标大部分有改善（P＜0.05），GFR无显著改善（P＞0.05），治疗组改善大部分优于对照组（P＜0.05），GFR两组无显著差异（P＞0.05）。[结论]辨症分型联合西药治疗IgA肾病疗效满意，无严重不良反应，值得推广。

环孢素A通过活化Src信号通路促进人绒毛膜癌细胞株JEG-3侵袭

目的:探讨Src信号通路在环孢素A(cyclosporin A,CsA)促进人滋养细胞侵袭中的作用。方法:应用Transwell侵袭实验观察CsA对人绒毛膜癌细胞株JEG-3侵袭能力的影响,应用Western blotting检测CsA作用于JEG-3细胞后Src的活化水平,并观察Src特异性抑制剂PP2对CsA作用后JEG-3细胞侵袭能力及E-钙粘蛋白表达水平的变化。结果:CsA可明显促进JEG-3细胞的侵袭(P<0.05),并可提高JEG-3细胞Src的活化水平(P<0.05),降低E-钙粘素蛋白的表达。PP2可明显抑制JEG-3细胞CsA诱导的Src活化(P<0.05),阻抑CsA对细胞侵袭的促进作用(P<0.05)和恢复CsA下调的E-钙粘蛋白表达水平(P<0.05)。结论:CsA可通过增强Src信号通路活化促进JEG-3细胞侵袭,并下调E-钙粘蛋白的表达,提示Src信号通路可能参与CsA对人滋养细胞生物学行为的良性调节作用。