野生多花兰的快速繁殖与保存

目的:建立、优化多花兰组培快繁体系和种质资源保存方案。方法:以野生多花兰蒴果为材料,研究其种子无菌萌发、原球茎增殖和出芽、芽生根和保存方案。结果:种子所需萌发时间为60 d,萌发率为55.00%;原球茎培养30 d增殖率为90.00%,单个原球茎可分化出8个芽,分化出芽率达95.00%以上;芽保存方案生根率为92.50%、芽伸长约4.35 cm、芽增殖率约为90.66%,保存时间长达6个月;最适保存培养基中加入1.00 g·L^(-1)活性炭可保证生根率不变,生根时间缩短到30 d。结论:多花兰快繁体系可在120 d内获得组培苗,且仅使用基本培养基添加1~2种植物生长调节剂和/或水解乳蛋白,大大减少繁育成本,为其种苗工厂化生产奠定基础;保存方案保存时间长达6个月,对其野生资源的保护和保存具有重要意义。

多花兰的离体萌发和试管成苗技术研究

[目的]建立多花兰的组培快繁技术体系。[方法]以多花兰种子为试验材料,研究基本培养基和添加物对其无菌萌发、原球茎增殖与分化、试管苗壮苗培育的影响。[结果]在MS、VW、KC、HP[Hyponex(花宝1号)3 g/L+Peptone(蛋白胨)4 g/L]4种培养基中,以VW中的萌发率最高,达到75%;添加AgNO31 mg/L+La(NO3)2.6H2O1 mg/L对原球茎的增殖与分化起促进作用;添加0.3%的活性炭可克服培养过程中的褐化现象;HP培养基添加10%香蕉可以获得壮苗。[结论]在不同培养阶段,通过基本培养基与添加物的优化组合可以建立高效的多花兰无菌播种试管成苗技术体系。

多花兰传粉生物学研究

传粉是植物繁殖和进化的一个关键环节,为探讨中国产多花兰(Cymbidium floribundum)的传粉生物学特性,对其开花物候、繁育系统、花的挥发性成分、传粉昆虫行为学实验进行了研究。结果表明,多花兰不存在自动自交和无融合生殖,种子的形成有赖于传粉媒介。其自然结实率远低于人工授粉,存在严重的传粉限制。中华蜜蜂(Apis cerana)为多花兰的有效传粉昆虫,但未能从中获得报酬,在传粉过程中将花粉块连药帽一起带出。通过昆虫的行为学实验发现,多花兰气味对中华蜜蜂具有显著性吸引作用,而颜色对中华蜜蜂无显著性吸引作用。花朵的主要挥发性成分为醛类与醇类物质,一天之中在种类和量上几乎没有变化,只有芳樟醇含量的变化与传粉昆虫活动频率相关。本研究可为兰多花兰的野生保护和杂交育种提供一定依据。

送春与多花兰种间杂交后代的ISSR分析

该文使用简单重复序列间（ISSR）分子标记,对送春与多花兰种间杂交后代进行了研究。结果表明：从80个ISSR引物中筛选出14个扩增效果稳定的ISSR引物,对两亲本和59个F1代个体进行了ISSR扩增,得到107个扩增位点,扩增的片段大小位于90~2 100 bp之间,平均每个引物扩增7.64条条带,得到11种类型的带。ISSR标记在送春×多花兰的F1代中表现出一定的多态性,分离频率为44.86%,分离位点有83.33%符合孟德尔1：1或3：1的分离规律,产生偏孟德尔分离的位点占12.50%,余下的4.17%属于特殊分离带型。可能导致后代变异的位点为偏孟德尔分离的6条带、缺失的8条带或新生成的2条带。聚类图中父本和母本与F1代个体间的遗传距离较远,59个杂交后代先聚集成一组,再同母本相聚为一组,最后才同父本聚在一起,59个杂种均偏母本型。送春与多花兰的杂交后代在植株形态、染色体、遗传物质方面都具备双亲特点,61个个体间的ISSR分子量标记结果和植株形态学特征都说明,59个F1代杂种包含送春和多花兰的遗传特性是真杂种;F1代杂种既有双亲的互补特征带,又有双亲的重组片断即产生新的特异带,这说明送春与多花兰的杂交后代具有遗传变异的特点。该研究结果可以有效地对杂交后代进行定向选择,为兰花的杂交育种提供了分子依据。

亚美万代兰与多花兰种子发芽过程的扫描电镜观察

兰种子发芽之后形成原球茎与根状茎,前者以亚美万代兰,后者以多花兰为材料进行扫描电镜观察。多花兰种子发芽初期,与亚美万代兰相似,但分化子叶的能力较差,在暗培养下,只形成鳞片状叶,紧贴在根状茎的分生组织上。根状茎只有转入光培养才有茎叶分化。兰种子发芽时的毛状物,在电子显微镜下观察,其形态与根毛较接近。

蜜蜂兰组培快繁技术体系的建立

为了筛选蜜蜂兰组培快繁的最佳外植体以及蜜蜂兰种子诱导增殖、生根的最佳培养基配方。以未成熟蒴果果荚、成熟略黄蒴果果荚(未裂开)、成熟至裂开蒴果果荚3种不同成熟度的蜜蜂兰蒴果果荚作为外植体,研究不同成熟度果荚对蜜蜂兰诱导培养的影响;以MS为基本培养基及附加卡拉胶,采用四因素三水平正交试验方法研究添加不同浓度6 BA、NAA、IBA、活性炭、香蕉泥对蜜蜂兰丛生芽诱导增殖的影响;以1/2MS为基本培养基及附加白糖、卡拉胶、香蕉泥,研究添加IBA、NAA、活性炭对蜜蜂兰丛生芽生根培养的影响。结果表明:蜜蜂兰以成熟且未开裂蒴果果荚作为外植体进行组培快繁表现最优,其诱导时间短、诱导率高、感染率低,且生长情况良好。蜜蜂兰丛生芽诱导增殖最佳培养基为MS+6 BA 2.0 mg·L^(-1)+NAA 0.15 mg·L^(-1)+香蕉泥120 g·L^(-1)+蔗糖35 g·L^(-1)+卡拉胶7.0 g·L^(-1),增殖系数可达到3.1;生根壮苗最佳培养基为1/2MS基本培养基+NAA 0.9 mg·L^(-1)+IBA 0.9 mg·L^(-1)+香蕉泥120 g·L^(-1)+蔗糖20 g·L^(-1)+卡拉胶7.0 g·L^(-1),此培养条件下蜜蜂兰根系粗壮整齐,其生根率可达100%。

多花兰与蕙兰杂交及种胚萌发研究

为选育出有香味、观赏性好、抗性强、栽培容易的品种,以多花兰为父本、蕙兰大一品为母本进行杂交,研究人工授粉、果实生长情况,开展兰花种间杂交育种的基础研究工作,了解杂交过程中可能出现的问题;对得到的杂交种子进行非共生萌发,建立完整的非共生萌发技术体系;在杂交根状茎的培养阶段,设计不同基本培养基、激素浓度和添加物,筛选最佳根状茎增殖、分化和生根壮苗的培养基。结果表明:多花兰与蕙兰大一品杂交授粉容易,结实率高,为100%。杂交适宜采收期90～150d;接种种胚最佳萌发时间为90～150d。最佳萌发培养基为ZB11。其根状茎的最佳增殖、分化和生根培养基为:1/2MS+6-BA 0.3mg.L-1+NAA1.0mg.L-1+椰汁20mL.L-1+AC 0.5g.L-1。在试验增殖的过程中出现了较为整齐的分化和生根,分化率达到95%以上。炼苗基质以草炭∶珍珠岩∶火山石=3∶3∶4为最佳。

大花蕙兰、蝴蝶兰在湖州地区的引种栽培及适应性分析

浙江省湖州林科所于2000年首次引进栽培大花蕙兰与蝴蝶兰,共引进了6个品种的大花蕙兰和3个系列的蝴蝶兰。通过引种、栽培及适应性分析,认为湖州地区发展大花蕙兰和蝴蝶兰是可行的,生产的花品质高,经济效益明显。

多花兰实时荧光定量PCR内参基因的筛选

多花兰(Cymbidium floribundum)为兰科(Orchidaceae)兰属(Cymbidium)多年生草本植物,具有极高观赏价值。本研究以多花兰的营养器官(根,假鳞茎,叶片)和花器官(萼片,捧瓣,唇瓣和合蕊柱)为材料,使用实时荧光定量PCR技术对5个备选内参基因(18SrRNA,28SrRNA,Actin,GAPDH和25SrRNA)进行扩增,结合NormFinder、geNorm和Bestkeeper这3个软件分析各内参基因的稳定性,筛选出合适的内参基因。结果显示,在多花兰营养器官和花器官中不同内参基因表达稳定性有一定差别,综合3个软件的分析结果表明多花兰的花器官和营养器官最合适内参基因分别是GAPDH和28SrRNA。