半滑舌鳎胚胎发育及仔鱼生长与盐度的关系

就半滑舌鳎(CynoglossussemilaevisGünther)受精卵和早期仔鱼生长发育与盐度的关系作了初步探讨。受精卵在盐度低于25的海水中全部下沉,在高于29的海水中浮在水面,而当盐度在26～28.5之间时在海水中呈悬浮状态。受精卵孵化的最适盐度为25～35,此盐度范围内孵化率都可达88%以上,盐度低于20或高于40孵化率降低,初孵仔鱼畸形率升高。盐度对仔鱼生长有一定的影响:盐度在25～35时初孵仔鱼存活率最高,盐度32.5时生长最好;盐度30～32.5范围内刚开口仔鱼的存活率较高,生长最快;盐度低于20时变态期仔鱼的存活率与盐度高于25时没有显著差异(P>0.05),但两者体长存在显著差异(P<0.05)。盐度高于40或低于10会延滞胚胎发育速率,孵化时间在盐度低于10时会相对延长。

半滑舌鳎促黄体激素基因克隆和表达分析及其血清浓度测定

利用RACE技术首次克隆了半滑舌鳎脑垂体中促黄体激素(LH)基因cDNA全长序列。该基因全长670 bp,开放阅读框为477 bp,编码158个氨基酸。与其他脊椎动物的LH成熟肽氨基酸序列同源性比较表明:半滑舌鳎LH与鲽形目和鲈形目同源性高58%～68%。另外,半滑舌鳎LH含有12个保守的半胱氨酸残基和1个N-糖基化位点(19～21 NQT)。实时荧光定量组织表达分析表明,LH mRNA在脑、垂体、卵巢等组织中表达,垂体中表达量最丰富,其他组织尤以脑、性腺表达量较高,推测半滑舌鳎LH可能具有广泛的垂体外生理功能;实时荧光定量PCR方法对繁殖周期雌性半滑舌鳎LH表达水平进行测定,结果表明,LH mRNA在Ⅱ～Ⅵ各繁殖周期的脑、垂体、卵巢3种组织都有表达,但表达水平有差异,在Ⅳ、V期表达量最丰富,说明LH主要促进卵母细胞最终成熟及排卵。利用125I标记的放射免疫测定(RIA)技术检测繁殖周期半滑舌鳎血清LH浓度,结果表明LH在V期含量最丰富,也说明LH主要促进卵母细胞最终成熟及排卵。

非连续密度梯度离心法分离半滑舌鳎外周血白细胞

为研究非连续密度梯度离心法分离半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)外周血白细胞的影响因素,探索Percoll分离半滑舌鳎外周血白细胞的最佳方法,试验设置了密度梯度为1.015/1.065g/mL、1.020/1.070g/mL、1.025/1.075g/mL、1.030/1.080g/mL、1.035/1.085g/mL的五种分离液,分别于600×g、800×g和1 000×g离心力下进行半滑舌鳎白细胞分离,以所得白细胞密度、白细胞纯度、活细胞率作为评判指标,并对分离的白细胞进行了显微观察、鉴定,比较不同密度梯度分离液、不同离心力的分离效果。结果显示:以1.020/1.070g/mL密度梯度分离液、800×g离心力条件下分离效果最佳,每毫升外周血可分离到白细胞数量平均为(2.485±0.182)×107个,白细胞纯度平均为(97.926±0.679)%,活细胞率平均为(97.037±0.925)%。