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兰州鲇性腺型芳香化酶cyp19a1a基因克隆及表达定位分析 被引量:3
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作者 李敏敏 俞兆曦 +7 位作者 张利平 刘凯 肖伟 刘彦斌 赛清云 田永华 吴旭东 连总强 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期654-667,共14页
【目的】性腺型芳香化酶基因cyp19a1a在硬骨鱼类性腺发育和性别决定过程中具有重要作用,克隆分析该基因在生长和体型性状具有性别二态性兰州鲇(Silurus lanzhouensis)不同组织的表达与定位,并对已获得YY超雄个体的雌雄同体亲本进行不同... 【目的】性腺型芳香化酶基因cyp19a1a在硬骨鱼类性腺发育和性别决定过程中具有重要作用,克隆分析该基因在生长和体型性状具有性别二态性兰州鲇(Silurus lanzhouensis)不同组织的表达与定位,并对已获得YY超雄个体的雌雄同体亲本进行不同组织表达验证分析,为加快培育全雄兰州鲇良种新品种提供理论依据和技术支撑。【方法】采用同源克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)法获得兰州鲇cyp19a1a全长cDNA序列,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测该基因在3月龄、1龄和3龄兰州鲇正常雌雄鱼和3龄雌雄同体鱼的不同组织表达,并采用免疫组织化学法(IHC)分别检测该基因在3月龄、1龄和3龄正常雌性鱼性腺组织的表达与定位。【结果】cyp19a1a c DNA序列全长为2168 bp,其中5′非编码区(Untranslated region,UTR)53 bp,开放阅读框(OFR)1707 bp,3′UTR408 bp,编码568个氨基酸残基,具有芳香化酶氨基酸序列的保守功能区。兰州鲇cyp19a1a mRNA主要在性腺表达,3龄雌雄同体表达特征与3龄正常繁育个体相同,且卵巢表达量显著高于精巢(P<0.05);正常繁育养殖个体表达量随性腺发育而显著增加。IHC结果显示,不同时期卵巢组织中,卵原细胞仅在3月龄和1龄分布且没有发现阳性信号,卵母细胞在不同时期均有分布且信号随着卵母细胞发育而逐渐增强,其中3月龄至1龄主要分布于胞质,3龄时主要分布于胞质、滤泡膜以及放射膜和鞘膜细胞;不同时期精巢组织中仅在间质细胞有微弱表达。【结论】cyp19a1a基因在兰州鲇卵巢发育和卵细胞生长发育过程中都具有重要作用,对精巢发育和维持以及精子发生具有一定的促进作用,在雌雄同体兰州鲇性腺中的作用和兰州鲇正常繁育个体一致。本研究为鱼类性别决定与分化以及性腺发育调控机制提供了重要的理论依据。 展开更多
关键词 兰州鲇 雌雄同体 cyp19a1a基因 基因克隆 性腺发育 mRNA表达 细胞定位
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尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)cyp19a1a原核表达与蛋白纯化 被引量:1
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作者 王金 文春根 +3 位作者 赵燕 王慧 王艺雅 季相山 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2014年第4期45-50,共6页
为表达和纯化尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)cyp19a1a蛋白,本研究从尼罗罗非鱼卵巢提取总RNA,反转录获得cDNA模板后,利用设计的引物PCR扩增cyp19a1a ORF区1200 bp片段,双酶切后连接到pET-28a(+)表达载体上,经酶切验证和DNA测序鉴定... 为表达和纯化尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)cyp19a1a蛋白,本研究从尼罗罗非鱼卵巢提取总RNA,反转录获得cDNA模板后,利用设计的引物PCR扩增cyp19a1a ORF区1200 bp片段,双酶切后连接到pET-28a(+)表达载体上,经酶切验证和DNA测序鉴定,证明成功构建了pET-28a-cyp19a1a原核表达载体。将表达载体转化到大肠杆菌(E.coli)BL21中,优化IPTG诱导浓度和诱导时间。结果显示,在0.5 mmol/L IPTG诱导8 h后,cyp19a1a重组蛋白大量表达,并以包涵体形式存在。通过Ni2+-NTA层析柱和切胶纯化,获得与预期片段大小一致的表达蛋白,并用Western blotting验证了纯化的蛋白为目的蛋白。本研究为制备cyp19a1a抗体和研究高温对cyp19a1a蛋白表达的影响提供了重要的基础。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 cyp19a1a 原核表达 蛋白纯化
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花鲈性腺分化组织学及性别相关基因cyp11b和cyp19a1a的表达分析 被引量:3
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作者 李冰玉 温海深 +3 位作者 王灵钰 李金库 齐鑫 李昀 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2021年第6期185-193,共9页
以花鲈(Lateolabrax maculatus)1~214 dph(day post hatching)的仔稚鱼、幼鱼以及18月龄的雌鱼和雄鱼为研究对象,研究了花鲈早期性腺发生、发育和分化情况;分析了性腺分化过程中性别相关基因(cyp11b和cyp19a1a)的表达及与性别之间的关... 以花鲈(Lateolabrax maculatus)1~214 dph(day post hatching)的仔稚鱼、幼鱼以及18月龄的雌鱼和雄鱼为研究对象,研究了花鲈早期性腺发生、发育和分化情况;分析了性腺分化过程中性别相关基因(cyp11b和cyp19a1a)的表达及与性别之间的关系。结果显示,在30 dph[全长为(1.28±0.10)cm],首次在中肾管前端的腹腔膜周围观察到原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs),说明30 dph前是花鲈胚后PGCs迁移至生殖嵴的关键时期;在55 dph[全长为(2.45±0.19)cm],观察到一对呈对称分布的原始性腺已经形成,说明花鲈幼鱼的原始性腺在30~55 dph(全长为1.28~2.45 cm)之间发生;55~180 dph时(全长为2.45~12.28 cm),原始性腺不断发育变大,并且一直处于未分化状态;180 dph后性腺开始分化;在195 dph[全长(14.54±1.54)cm]观察到精巢开始分化,卵巢于205 dph[全长为(15.86±0.94)cm]开始分化,且性腺的解剖学分化要早于细胞学分化;18月龄的花鲈幼鱼性腺发育到Ⅱ期。性别分化相关基因cyp19a1a在花鲈卵巢中的表达量高于同期精巢,说明其在卵巢的分化及维持中发挥更关键的作用,而cyp11b在18月龄幼鱼Ⅱ期精巢中的表达量显著高于同时期的卵巢及Ⅰ期精巢,说明其主要在精巢的分化及维持中扮演重要角色。本研究结果不仅可以丰富花鲈的繁殖生理学资料,也为其性别调控技术的研究提供了科学依据。 展开更多
关键词 花鲈 性别分化 组织学 cyp11b cyp19a1a
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CYP19A1对兔卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响 被引量:2
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作者 杨安琪 李嘉诚 +5 位作者 宋颖 陈欣 靳荣帅 赵博昊 吴信生 陈阳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期4209-4219,共11页
旨在探究P450芳香化酶基因(cytochrome P450,family 19,subfamily A,polypeptide 1,CYP19A1)对兔卵巢颗粒细胞(granulosa cells,GCs)增殖和凋亡的影响。本研究选择健康状况良好的8月龄新西兰白兔母兔,采集卵巢组织,分离并鉴定GCs;利用... 旨在探究P450芳香化酶基因(cytochrome P450,family 19,subfamily A,polypeptide 1,CYP19A1)对兔卵巢颗粒细胞(granulosa cells,GCs)增殖和凋亡的影响。本研究选择健康状况良好的8月龄新西兰白兔母兔,采集卵巢组织,分离并鉴定GCs;利用一步克隆法获得兔CYP19A1基因全长序列,进行生物信息学分析;利用qRT-PCR、CCK8、FITC/PI等技术与方法,分析CYP19A1基因过表达和干扰对类固醇激素合成相关基因及GCs增殖和凋亡的影响。利用FSHR免疫荧光染色,鉴定分离的原代细胞是GCs,FSHR表达呈阳性。克隆CYP19A1基因,发现其cDNA全长为1512 bp,编码503个氨基酸。经生物信息学预测发现,CYP19A1蛋白是一种稳定的亲水性蛋白,含有一个P450家族结构域,与其它物种同源性较高。在GCs中,CYP19A1基因表达量的改变显著或极显著影响了类固醇激素合成相关基因IGF1R、CYP1B1、CYP1A1、BMP6、CYP17A1的表达(P<0.05或P<0.01)。过表达/干扰CYP19A1后,极显著上调/下调GCs增殖,极显著抑制/促进GCs凋亡水平(P<0.01)。综上所述,CYP19A1可以促进GCs增殖,抑制GCs凋亡,调控类固醇激素合成相关基因的表达,进而参与母兔卵泡发育进程。 展开更多
关键词 CYP19A1 卵巢GCs 增殖 凋亡
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中等强度有氧运动对衰老大鼠肾上腺CYP19A1和VDR表达的影响
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作者 李天 吕振磊 《九江学院学报(自然科学版)》 CAS 2023年第1期125-128,共4页
目的探究有氧运动对衰老大鼠肾上腺CYP19A1和VDR的表达情况。方法以SD雄性大鼠为研究对象,随机分为D-半乳糖衰老组(D)、运动抑制衰老组(A)、D-半乳糖衰老运动组(DE)、对照组(C)和运动组(E),建立D-半乳糖衰老模型和有氧运动模型,运用West... 目的探究有氧运动对衰老大鼠肾上腺CYP19A1和VDR的表达情况。方法以SD雄性大鼠为研究对象,随机分为D-半乳糖衰老组(D)、运动抑制衰老组(A)、D-半乳糖衰老运动组(DE)、对照组(C)和运动组(E),建立D-半乳糖衰老模型和有氧运动模型,运用Western Blot方法检测各组大鼠肾上腺CYP19A1,VDR的表达水平;运用SPSS13.0软件进行数据分析。结果①CYP19AI表达水平:运动抑制衰老组大于D-半乳糖衰老组(p<0.01),D-半乳糖衰老运动组大于D-半乳糖衰老组(p<0.01)。②VDR表达水平:D-半乳糖衰老运动组大于D-半乳糖衰老组(p<0.01),运动抑制衰老组大于D-半乳糖衰老组(p<0.01),结论中等负荷的有氧运动能够显著性的提高衰老大鼠肾上腺CYP19A1和VDR的表达含量。 展开更多
关键词 衰老大鼠 有氧运动 肾上腺 CYP19A1 VDR
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沼泽型水牛CYP19A1基因克隆、序列分析及组织表达研究 被引量:13
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作者 苏节 刘庆友 +3 位作者 朱鹏 沈开元 石德顺 崔奎青 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期514-521,共8页
旨在对沼泽型水牛CYP19A1基因进行克隆、生物信息学分析及对其在水牛组织的表达规律进行系统的探索。根据GenBank已公布的牛CYP19A1基因序列,设计特异性引物应用RT-PCR方法扩增克隆获得目的基因片段;应用生物信息学方法,分析和预测了水... 旨在对沼泽型水牛CYP19A1基因进行克隆、生物信息学分析及对其在水牛组织的表达规律进行系统的探索。根据GenBank已公布的牛CYP19A1基因序列,设计特异性引物应用RT-PCR方法扩增克隆获得目的基因片段;应用生物信息学方法,分析和预测了水牛CYP19A1的理化性质、蛋白质二级及三级结构;应用QRT-PCR技术对CYP19A1在水牛组织的表达进行了差异分析。测序结果表明:水牛CYP19A1基因的编码区全长1 512bp,共编码503个氨基酸。多重序列比较分析显示水牛CYP19A1核苷酸序列与牛、绵羊、猪、人、马相应序列相似性分别为99%、98%、91%、86%和84%,结合系统进化树分析结果推测,CYP19A1基因在不同物种以及进化的过程中具有高度保守性。定量分析结果显示:水牛CYP19A1在水牛垂体、大脑、肝脏、骨骼、卵巢、肌肉和心脏组织具有不同程度的表达,其中垂体和大脑表达量最高,骨骼和卵巢次之,肌肉表达最低。本研究成功地克隆了沼泽型水牛CYP19A1基因并研究了其在不同水牛组织中的表达规律,为阐明其在水牛性腺中参与的激素合成转化规律等研究奠定了理论基础。 展开更多
关键词 水牛 CYP19A1 克隆分析 表达模式
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芳香化酶抑制剂来曲唑对胡子鲇性腺分化及相关基因表达的影响 被引量:8
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作者 李广丽 邓思平 +3 位作者 孙晶 王文达 师尚丽 朱春华 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期911-917,共7页
采用组织学和荧光实时定量PCR方法,检测饲喂不同剂量芳香化酶抑制剂来曲唑(letrozole,50、100和200μg/g)对胡子鲇(Clarias fuscus)性腺组织学和性别比率的影响,以及200μg/g来曲唑对性分化前后脑型芳香化酶基因(Cyp19a1b)和翼状螺旋/... 采用组织学和荧光实时定量PCR方法,检测饲喂不同剂量芳香化酶抑制剂来曲唑(letrozole,50、100和200μg/g)对胡子鲇(Clarias fuscus)性腺组织学和性别比率的影响,以及200μg/g来曲唑对性分化前后脑型芳香化酶基因(Cyp19a1b)和翼状螺旋/叉头转录因子2(Foxl2)基因表达的影响,结果表明,50μg/g剂量的来曲唑对胡子鲇性腺分化无显著影响;但100μg/g和200μg/g剂量的来曲唑可促进胡子鲇精巢分化,抑制卵巢分化,卵巢腔最早出现时间和初级卵母细胞出现时间均分别推迟3 d和6 d,而初级精母细胞最早出现时间则分别提前2 d和5 d,且雄性率分别达65.8%和71.3%,显著高于50μg/L组和对照组(P<0.05)。胡子鲇性腺分化前(出膜后12 d),Cyp19a1b和Foxl2基因即开始表达,性腺分化前后Cyp19a1b相对表达量无显著差异(P>0.05),但Foxl2相对表达量则随性分化而逐渐降低,且来曲唑显著抑制性腺分化过程中Cyp19a1b和Foxl2的表达(P<0.05)。结果表明,100μg/g以上剂量的来曲唑可有效诱导胡子鲇分化为雄性;Cyp19a1b可能不直接参与胡子鲇性腺分化,但Foxl2直接参与此过程。 展开更多
关键词 胡子鲇 性分化 芳香化酶抑制剂 Cyp19a1b FOXL2
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性类固醇激素对胡子鲇性分化的影响 被引量:6
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作者 李广丽 邓思平 +4 位作者 王文达 孙晶 吴天利 师尚丽 朱春华 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1020-1027,共8页
研究采用组织学和荧光实时定量PCR方法,检测17α-甲基睾酮(17α-MT)和17β-雌二醇(17β-E2)对胡子鲇(Clarias fuscus)性腺组织学、性别比率以及性分化前后脑型芳香化酶基因(Cyp19a1b)和翼状螺旋/叉头转录因子2(Foxl2)基因表达的影响。... 研究采用组织学和荧光实时定量PCR方法,检测17α-甲基睾酮(17α-MT)和17β-雌二醇(17β-E2)对胡子鲇(Clarias fuscus)性腺组织学、性别比率以及性分化前后脑型芳香化酶基因(Cyp19a1b)和翼状螺旋/叉头转录因子2(Foxl2)基因表达的影响。结果表明:在出膜后2—30日龄,17α-MT(50、100和200μg/L)浸浴、17β-E2(100、200和300μg/g)投喂处理对成活率无显著影响,但中、高剂量(100和200μg/L)17α-MT显著抑制卵巢发育,促进精巢发育,卵巢腔出现时间分别推迟4d和6d,初级卵母细胞出现时间分别推迟8d和9d,而初级精母细胞出现时间则分别提前3d和5d,且雄性率分别达70%和76%,显著高于50μg/L组和对照组(P<0.05)。相反,中、高剂量17β-E2(200和300μg/g)处理使卵巢腔出现时间分别提前2d和3d,初级卵母细胞出现时间分别提前1d和3d,初级精母细胞出现时间分别推迟3d和7d,而雌性率分别达74%和78%,显著高于100μg/g组和对照组(P<0.05)。此外,在性腺分化期,17α-MT促进Cyp19a1b但抑制Foxl2的表达,而17β-E2促进Cyp19a1b和Foxl2的表达。结果显示Cyp19a1b不是引起胡子鲇性分化的直接因素,但可能通过"下丘脑垂体性腺轴"对胡子鲇性分化过程产生间接影响;而Foxl2直接参与胡子鲇的性分化,即17α-MT和17β-E2分别通过抑制和促进Foxl2的表达来影响雌激素的生物合成,从而调控胡子鲇性分化的方向。 展开更多
关键词 胡子鲇 性分化 17α-甲基睾酮 17Β-雌二醇 Cyp19a1b FOXL2
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CYP19A1基因多态性与乳腺癌患病风险的相关性 被引量:6
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作者 何三军 韩亦非 《新乡医学院学报》 CAS 2018年第9期788-791,共4页
目的探讨CYP19A1基因多态性与乳腺癌患病风险的相关性。方法选择2014年3月至2018年3月汉中市中心医院收治的女性乳腺癌患者300例为乳腺癌组,同时选择健康女性300例作为对照组,采集2组受试者血样,采用Sanger测序法对CYP19A1基因上rs4646... 目的探讨CYP19A1基因多态性与乳腺癌患病风险的相关性。方法选择2014年3月至2018年3月汉中市中心医院收治的女性乳腺癌患者300例为乳腺癌组,同时选择健康女性300例作为对照组,采集2组受试者血样,采用Sanger测序法对CYP19A1基因上rs4646、rs6493487、rs1062033、rs17601876和rs3751599共5个位点进行分型,分析CYP19A1基因多态性与乳腺癌患病风险的相关性。结果 CYP19A1基因上5个候选单核苷酸多态性均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。乳腺癌组CYP19A1基因上rs4646位点的等位基因C、rs6493487位点的等位基因G及rs17601876位点的等位基因A频率低于对照组(P<0.05)。乳腺癌组CYP19A1基因上rs4646位点的AA基因型、rs6493487位点的AG和GG基因型、rs17601876位点的AG和AA基因型频率低于对照组(P<0.05),而rs1062033位点的GG基因型频率高于对照组(P<0.05)。rs4646和rs6493487在显性遗传模型和加性遗传模型下与降低乳腺癌患病风险有相关性(P<0.05),rs1062033在隐性遗传模型下与增加乳腺癌风险有相关性(P<0.05),而rs17601876在3个遗传模型下均与降低乳腺癌风险有相关性(P<0.05)。结论 CYP19A1基因上的rs4646、rs6493487、rs17601876位点多态性与降低乳腺癌患病风险相关,而rs1062033位点多态性与增加乳腺癌患病风险相关。 展开更多
关键词 乳腺癌 单核苷酸多态性 CYP19A1 关联分析
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CYP19a1基因的单核苷酸多态性与中国汉族成人寻常痤疮的关联研究 被引量:2
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作者 刘晔 张正华 项蕾红 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期7-10,共4页
目的:初步探索CYP19a1基因的单核苷酸多态性(SNP)与中国汉族成人寻常痤疮发病和严重程度的关系。方法:共纳入309例Pillsbury分级Ⅰ~Ⅳ的寻常痤疮患者,分为轻度组(I级,99例)和中重度组(Ⅱ~Ⅳ级,210例)。从患者外周静脉血中... 目的:初步探索CYP19a1基因的单核苷酸多态性(SNP)与中国汉族成人寻常痤疮发病和严重程度的关系。方法:共纳入309例Pillsbury分级Ⅰ~Ⅳ的寻常痤疮患者,分为轻度组(I级,99例)和中重度组(Ⅱ~Ⅳ级,210例)。从患者外周静脉血中抽提DNA组.经多重聚合酶链式反应(PCR)获取目的基因片段后,采用SNaPshot分型技术检测CYP19a1基因上的10个候选SNP位点的基因型。结果:①rs28892002位点在显性遗传模式下,CC基因型的分布频率在中重度组显著高于轻度组(58.5%vs.46.5%.P=-0.046,OR=0.614,95%CI=0.379—0.993);②rs2255192-rs4646-rs10064-rs700519这组单倍型在显性模式下,其C—C—C—C、C—C—T—C基因型在两组间分柿差异有统计学意义(P值分别为0.0000、0.0216,OR值分别为5.0198和2.0707)。结论:中国汉族人群中.CYP19a1基因上的rs28892002位点CC野生纯合子基因型可能增加中重度寻常痤疮的患病风险;rs2255192-rs4646-rs10064-rs700519这组单倍型在显性模式下,其C—C—C—C、C—C—T—C基因型可能减少中、重度寻常痤疮的患病风险。 展开更多
关键词 1CYP19a1基因 寻常痤疮
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芳香化酶抑制通过降低抗氧化应激能力影响稳转hSOD1-G93A的NSC-34细胞活力
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作者 刘琦 闫丽娜 +2 位作者 李睿 刘亚玲 董惠 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2022年第4期210-214,共5页
目的 研究抑制芳香化酶表达对稳定转染人SOD1-G93A (hSOD1-G93A)的NSC-34细胞活力的影响并探讨可能的机制。方法 将稳定转染hSOD1-G93A的NSC-34细胞分为三组,分别为对照组(SOD-G93A)、转染空质粒组(SOD1-G93A-E)、转染芳香化酶抑制质粒C... 目的 研究抑制芳香化酶表达对稳定转染人SOD1-G93A (hSOD1-G93A)的NSC-34细胞活力的影响并探讨可能的机制。方法 将稳定转染hSOD1-G93A的NSC-34细胞分为三组,分别为对照组(SOD-G93A)、转染空质粒组(SOD1-G93A-E)、转染芳香化酶抑制质粒Cyp19a1 ShRNA组(SOD1-G93A-D)。通过实时定量PCR检测Cyp19a1 mRNA表达水平,通过CCK8试剂盒检测各组细胞活力,通过LDH试剂盒检测各组细胞LDH释放水平,通过蛋白印迹法检测各组细胞中芳香化酶(aromatase)、醌氧化还原酶1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase1,NQO1)和谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLM)表达水平。结果 瞬时转染48h后,SOD1-G93A-D组Cyp19a1 mRNA表达水平较SOD1-G93A-E组显著下降(P<0.05),细胞活力较SOD1-G93A-E组及SOD1-G93A组明显下降(P<0.05),LDH释放水平较其他两组明显升高(P<0.05)。细胞活力及LDH释放水平在SOD1-G93A-E组及SOD1-G93A组间未发现显著差异(P>0.05)。芳香化酶、NQO1和GCLM蛋白水平在SOD1-G93A-D组明显降低(P<0.05)。结论 抑制芳香化酶通过降低抗氧化应激能力影响稳转hSOD1-G93A的NSC-34细胞活力。 展开更多
关键词 肌萎缩侧索硬化 hSOD1-G93A Cyp19a1 芳香化酶 氧化应激
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广西麻鸡CYP19A1基因的克隆、序列分析和组织表达谱研究 被引量:5
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作者 孙甜甜 杨祝良 +3 位作者 邓继贤 曾令湖 蒋和生 杨秀荣 《中国家禽》 北大核心 2017年第18期60-62,共3页
为了克隆和分析广西麻鸡CYP19A1基因的编码区序列和产蛋期CYP19A1在各组织中的表达谱,根据Gen Bank已公布的鸡CYP19A1基因序列,设计特异性引物,从广西麻鸡卵巢PCR扩增CYP19A1基因编码区序列,将其克隆至p MD-18T载体,测序获得CYP19A1基... 为了克隆和分析广西麻鸡CYP19A1基因的编码区序列和产蛋期CYP19A1在各组织中的表达谱,根据Gen Bank已公布的鸡CYP19A1基因序列,设计特异性引物,从广西麻鸡卵巢PCR扩增CYP19A1基因编码区序列,将其克隆至p MD-18T载体,测序获得CYP19A1基因全序并对其进行序列分析。设计定量引物,对卵巢、睾丸和子宫等16个组织CYP19A1的表达谱进行了分析。结果表明:广西麻鸡CYP19A1基因的编码区长度为1 509 bp,共编码502个氨基酸。与参考序列相比,存在两处同义突变,一处错义突变(天冬氨酸突变为谷氨酸);物种间的同源性分析显示,广西麻鸡CYP19A1基因与鸡(Gallus gallus)、牛(Bos taurus)、马(Equus caballus)、人(Homo sapiens)、猕猴(Macaca muiatta)、小鼠(Mus musculus)、猪(Sus scrofa)的序列同源性分别为99.8%、72.5%、84.3%、84.4%、97.4%、81.5%、80.3%;进化树分析显示,广西麻鸡与鸡亲缘关系最近,与猪的亲缘关系最远。产蛋期CYP19A1的表达谱显示,CYP19A1在产蛋期特异在卵巢中表达,在其他组织中的表达量极低或不表达。结果为进一步研究鸡CYP19A1基因对鸡产蛋性能的影响奠定了基础。 展开更多
关键词 广西麻鸡 CYP19A1基因 序列分析 组织表达谱 产蛋性能
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CART对FSH诱导下水牛颗粒细胞雌二醇分泌及相关基因表达的影响 被引量:3
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作者 李玲玉 郑海英 +3 位作者 于农淇 尚江华 黄加祥 杨春艳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第9期2876-2883,共8页
本试验采用无血清培养体系培养原代水牛卵巢颗粒细胞,研究了外源可卡因-苯丙胺调控转录肽(exogenous cocaine amphetamine regulated transcript,CART)对促卵泡激素(FSH)诱导下颗粒细胞产生雌二醇(E2)的影响及其相关基因的表达情况。采... 本试验采用无血清培养体系培养原代水牛卵巢颗粒细胞,研究了外源可卡因-苯丙胺调控转录肽(exogenous cocaine amphetamine regulated transcript,CART)对促卵泡激素(FSH)诱导下颗粒细胞产生雌二醇(E2)的影响及其相关基因的表达情况。采用Long-term培养方法在无血清培养液中分别添加不同浓度的FSH(0、0.25、0.5、1、2、4 ng/mL)培养7 d,利用双抗体夹心法检测各孔的E2浓度,筛选出最佳添加浓度;将原代颗粒细胞随机分成4组(2组对照组(无FSH)和2组最佳FSH添加组)培养6 d后,其中一组对照组和FSH添加组分别与25μg/mL CART共作用24 h,检测E2浓度的变化并对颗粒细胞中CART受体(CARTPT)和芳香化酶基因(CYP19A1)进行定量检测。结果发现:①在培养液中不添加CART时,颗粒细胞中E2浓度随着FSH添加浓度的升高呈先升高后降低的趋势,当FSH添加浓度为1 ng/mL时,E2浓度达到最高值116.16 pmol/mL,显著高于对照组和其他浓度组(P<0.05);②添加外源CART显著降低了FSH作用下颗粒细胞培养液中E2的浓度(P<0.05),两对照组(0 FSH和0 FSH+CART)差异不显著(P>0.05);③在添加1 ng/mL FSH时,CART作用24 h后显著降低了FSH诱导下颗粒细胞中CYP19A1 mRNA的表达(P<0.05),而细胞中CARTPT mRNA的相对表达量显著升高(P<0.05)。在0 ng/mL FSH下,添加25μg/mL CART作用24 h,颗粒细胞中CYP19A1和CARTPT mRNA的表达与不添加CART组相比差异不显著(P>0.05)。由此推测CART在水牛卵巢发育中是一种负向调控信号,抑制卵泡的健康发育,且需一定量的FSH诱导CART对颗粒细胞增殖分化的负向压力。 展开更多
关键词 CART FSH E2 水牛 颗粒细胞 CYP19A1
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多囊卵巢综合征患者颗粒细胞中miR-1270及其靶基因CYP19A1的表达及临床意义 被引量:5
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作者 张慧敏 朱文倩 +4 位作者 马静 徐仰英 张玉 沈伟 郝翠芳 《生殖医学杂志》 CAS 2021年第5期649-657,共9页
目的探讨微小RNA-1270(miR-1270)及其靶基因细胞色素P45019A1(CYP19A1)在多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵丘颗粒细胞中的表达,并评价其临床意义。方法回顾性分析2019年4月至2020年12月期间行IVF或ICSI助孕的PCOS患者(PCOS组)和无PCOS的不孕... 目的探讨微小RNA-1270(miR-1270)及其靶基因细胞色素P45019A1(CYP19A1)在多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵丘颗粒细胞中的表达,并评价其临床意义。方法回顾性分析2019年4月至2020年12月期间行IVF或ICSI助孕的PCOS患者(PCOS组)和无PCOS的不孕患者(对照组)的临床资料,记录两组患者的基本临床资料和促排卵情况。并收集两组患者的卵丘颗粒细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测卵丘颗粒细胞中miR-1270与CYP19A1的表达。双荧光素酶报告基因系统检测miR-1270是否靶向结合CYP19A1。将miR-1270的模拟物或抑制剂转染至人卵巢颗粒细胞瘤细胞KGN,采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹检测CYP19A1的表达变化,采用ELISA测定KGN细胞培养液上清中雌二醇(E 2)的浓度。结果PCOS组不孕患者的窦卵泡数、体重指数(BMI)、抗苗勒管激素(AMH)、LH、LH/FSH、催乳素(PRL)、睾酮(T)均显著高于对照组(P<0.05),获卵数亦显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,PCOS组卵丘颗粒细胞中miR-1270表达量显著降低(P<0.05),CYP19A1表达量显著增加(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实了CYP19A1和miR-1270之间是直接结合的,并且miR-1270通过靶向结合CYP19A1抑制E 2合成。结论miR-1270靶向负调控CYP19A1的表达,影响PCOS患者卵丘颗粒细胞中E 2的生成,为PCOS患者卵泡发育障碍提出了可能的分子机制。 展开更多
关键词 miR-1270 CYP19A1 多囊卵巢综合征 雌二醇 芳香化酶
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乌鳢脑型芳香化酶基因cDNA的克隆及组织表达分析 被引量:1
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作者 王丹丹 张桂蓉 +4 位作者 魏开建 GARDNER Jonathan P.A. 杨瑞斌 陈昆慈 邹桂伟 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2015年第6期9-15,共7页
为了解乌鳢(Channa argus)性别分化相关机制,采用RT-PCR和RACE法克隆了乌鳢脑型芳香化酶基因Cyp19a1b cDNA部分序列,运用半定量RT-PCR和q PCR技术检测其在雌雄个体组织中的表达情况。结果显示,乌鳢Cyp19a1b cDNA部分序列为1 432 bp,包括... 为了解乌鳢(Channa argus)性别分化相关机制,采用RT-PCR和RACE法克隆了乌鳢脑型芳香化酶基因Cyp19a1b cDNA部分序列,运用半定量RT-PCR和q PCR技术检测其在雌雄个体组织中的表达情况。结果显示,乌鳢Cyp19a1b cDNA部分序列为1 432 bp,包括120 bp 3'-UTR和1 311 bp编码区,编码436个氨基酸。序列比对表明乌鳢Cyp19a1b氨基酸序列包含三个功能保守区,与毛足鲈、平鲷和金钱鱼Cyp19a1b同源性较高,分别为89%、88%和88%。半定量RT-PCR和q PCR结果显示,乌鳢Cyp19a1b基因在雌、雄成鱼垂体中表达量高,在肠组织中表达量低,在雄鱼脑组织中呈现高表达而在雌鱼脑组织中则未表达,在其他组织均未检测到表达,表明乌鳢Cyp19a1b基因的表达存在组织特异性及功能差异。 展开更多
关键词 乌鳢(Channa argus) Cyp19a1b CDNA克隆 基因表达 组织分布
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泥鳅cyp19a1基因克隆及其在倍性间的表达差异 被引量:1
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作者 曹文怡 易少奎 +4 位作者 杨楠 苏君晓 罗双双 高泽霞 周小云 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期166-176,共11页
克隆并分析泥鳅cyp19a1a的全长cDNA和5′侧翼序列,用qRT-PCR技术比较cyp19a1a在二倍体、四倍体泥鳅组织间和倍性间的表达差异。结果发现,泥鳅cyp19a1a的cDNA全长1905 bp,包括29 bp的5′TR、301 bp的3′UTR和1575 bp的ORF序列,其氨基酸... 克隆并分析泥鳅cyp19a1a的全长cDNA和5′侧翼序列,用qRT-PCR技术比较cyp19a1a在二倍体、四倍体泥鳅组织间和倍性间的表达差异。结果发现,泥鳅cyp19a1a的cDNA全长1905 bp,包括29 bp的5′TR、301 bp的3′UTR和1575 bp的ORF序列,其氨基酸序列中存在I-螺旋区、芳香化酶特异保守区以及血红素结合区等重要功能域。用hiTAIL-PCR克隆获得2040 bp的5′侧翼序列,在该序列上预测到典型元件TATA-box,以及C/EBPβ、SRY、ER、CREB、GR等转录因子结合位点。12月龄四倍体泥鳅的体长、体质量均显著高于二倍体,但性腺发育明显滞后于二倍体。cyp19a1a和cyp19a1b分别在二倍体、四倍体泥鳅的性腺和脑中的表达量最高。倍性间比较结果显示,cyp19a1a在四倍体各组织中的表达均高于二倍体(除精巢外);cyp19a1b在四倍体雌鳅脑中的表达量显著高于二倍体,但在四倍体雄鳅脑中的表达量显著低于二倍体。综合分析上述结果,四倍体中相对较高的cyp19a1a表达可能与其性腺所处发育时期有关,较晚的性成熟有利于泥鳅将更多能量用于个体生长。由于cyp19a1及其催化产生的雌激素还可以通过GH-IGF通路调节鱼类的生长,推测cyp19a1在泥鳅倍性间的差异表达可能与二倍体、四倍体间的生长生殖差异密切相关。 展开更多
关键词 泥鳅 cyp19a1 四倍体 性腺发育 基因表达 生殖调控
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牦牛卵泡发育及卵母细胞成熟过程中CYP19A1表达差异分析 被引量:2
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作者 孙莹 王萌 +4 位作者 孙晓军 王靖雷 马睿 余四九 潘阳阳 《甘肃畜牧兽医》 2021年第5期37-42,共6页
旨在探索CYP19A1在牦牛卵泡发育过程及不同成熟阶段卵母细胞中的表达水平。采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测CYP19A1在牦牛不同级别卵泡(≤3 mm、3~5 mm、5~8 mm及≥8 mm)和卵丘—卵母细胞复合体(Cumulus-o... 旨在探索CYP19A1在牦牛卵泡发育过程及不同成熟阶段卵母细胞中的表达水平。采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测CYP19A1在牦牛不同级别卵泡(≤3 mm、3~5 mm、5~8 mm及≥8 mm)和卵丘—卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complex,COCs)体外成熟的不同阶段(成熟0 h、12 h、18 h及24 h)中的表达水平,免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)检测CYP19A1蛋白在COCs中的表达定位。结果显示:CYP19A1基因在不同级别的卵泡中均有表达,在卵泡发育早期表达量最高,随卵泡发育呈低水平表达;CYP19A1基因在COCs中的相对表达量显示,未成熟(0 h)COCs的表达量最低,成熟18 h的COCs表达水平达到最高值,之后呈下降趋势。通过免疫荧光技术发现COCs中CYP19A1蛋白的表达主要集中在卵丘细胞上。推测CYP19A1在卵巢颗粒细胞中的表达有助于卵泡发育和卵母细胞成熟雌二醇(Estradiol,E2)的分泌,对卵泡和卵母细胞早期发育有积极的调控作用,为进一步探索CYP19A1在牦牛雌性生殖中的作用机制提供了理论支撑。 展开更多
关键词 牦牛 CYP19A1 卵泡液 卵丘—卵母细胞复合体 生殖激素
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CYP19A1基因突变致芳香化酶缺乏症1例
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作者 李红利 傅松波 +2 位作者 戴如春 盛志峰 刘玮 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期794-800,共7页
芳香化酶缺乏症(aromatase deficiency,AD)是一种罕见的芳香化酶基因(CYP19A1)失活突变引起的常染色体隐性遗传病,导致先天性雌激素缺乏综合征。AD患者的母亲在妊娠期以及女性胎儿出生时均可出现男性化表现,而男性患者通常在成年后因身... 芳香化酶缺乏症(aromatase deficiency,AD)是一种罕见的芳香化酶基因(CYP19A1)失活突变引起的常染色体隐性遗传病,导致先天性雌激素缺乏综合征。AD患者的母亲在妊娠期以及女性胎儿出生时均可出现男性化表现,而男性患者通常在成年后因身高持续增长和代谢异常才得以诊断。2019年中南大学湘雅二医院收治了1例AD患者,该患者为37岁成年男性,成年后仍持续生长,其雌二醇低于可测线、促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)升高、骨龄落后、骨骺未闭合、骨量减少,CYP19A1基因检测示c.1093C>T,p.R365W纯合子突变。该病临床较罕见,临床医生需提高对该病的认识,早期诊断和治疗,以改善患者的长期预后。 展开更多
关键词 芳香化酶缺乏症 CYP19A1基因 雌激素缺乏
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淇河鲫cyp19a1b基因的克隆表达及芳香化酶抑制剂对其表达的影响 被引量:4
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作者 李永婧 吴利敏 +2 位作者 王磊 马晓 李学军 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1169-1180,共12页
为探索脑型芳香化酶基因(cyp19a1b)在雌核发育三倍体鱼淇河鲫性别决定与分化过程中的作用,利用RACE方法克隆淇河鲫cyp19a1b基因cDNA全长序列,采用Real-time PCR分析其在不同组织、胚胎及胚后不同发育时期的表达情况,同时检测芳香化酶抑... 为探索脑型芳香化酶基因(cyp19a1b)在雌核发育三倍体鱼淇河鲫性别决定与分化过程中的作用,利用RACE方法克隆淇河鲫cyp19a1b基因cDNA全长序列,采用Real-time PCR分析其在不同组织、胚胎及胚后不同发育时期的表达情况,同时检测芳香化酶抑制剂Letrozole诱导性逆转及腹腔注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)后cyp19a1b在脑中的表达情况。结果显示,淇河鲫cyp19a1b cDNA全长2 984 bp(GenBank ID:MF926270),包含132 bp5′非编码区,1 319 bp 3′非编码区,1 533 bp开放读码框,编码510个氨基酸残基;氨基酸序列比对及系统进化分析结果显示,淇河鲫Cyp19a1b与其他鲤科鱼类同源性较高,与哺乳类、爬行类等脊椎动物同源性较低,这与其分类地位一致;组织分布检测结果显示,cyp19a1b基因在淇河鲫脑中表达量最高,在卵巢等其他组织中表达量较低;Realtime PCR结果表明,在胚胎发育过程中cyp19a1b在外源精子刺激后从囊胚期开始上调,神经胚期达到最高,随后降低;出膜后随着发育的进行,该基因在脑中表达量逐步上调,在躯体中一直维持在较低水平;除此之外,伴随着Letrozole诱导的性逆转,cyp19a1b在脑中表达量降低;腹腔注射hCG可以促进cyp19a1b在脑中表达。研究表明,淇河鲫cyp19a1b基因可能通过参与神经系统的形成及神经内分泌活动,在性别决定与分化过程中起到一定的作用。 展开更多
关键词 淇河鲫 cyp19a1b 克隆 表达 抑制剂
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Association of CYP19A1 gene polymorphisms with reproductive traits in pigs 被引量:2
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作者 ZHOU Rong YANG Ya-lan +3 位作者 LIU Ying CHEN Qi-mei CHEN Jie LI Kui 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2017年第7期1558-1565,共8页
Porcine reproductive traits are characterized by low heritability, making improvement by traditional selective breeding rather difficult. Molecular breeding offers powerful approaches to overcome previous limitations ... Porcine reproductive traits are characterized by low heritability, making improvement by traditional selective breeding rather difficult. Molecular breeding offers powerful approaches to overcome previous limitations and is expected to generate economic benefits via progress in pig breeding. Cytochrome P450 family 19 subfamilyA polypeptide 1 (CYP19A1) gene is a key enzyme of estradiol biosynthesis that plays an important role in the establishment of gestation and maintenance of pregnancy. In this study, the sequence and structure characteristics of the porcine CYP19A1 gene was analyzed and expression patterns of CYP19A 1 in different tissues of adult female pigs were detected. Fourteen single-nucleotide poly- morphisms (SNPs) in the exons and introns of porcine CYP19A1 were identified and genotyped using the Sequenom MassARRAY platform, after which the allele frequency of each SNP was analyzed..The association between CYP19A1 SNPs and litter size and piglet birth weight was assessed in a crossbred pig population (n=375). The expression pattern of CYPf9A1 revealed that it was highly expressed in the ovary, spleen, and uterus and lowly expressed in the other tissues. Moreover, one SNP, rs341891833, was significantly associated with piglet birth weight during the multiparity period (P〈0.01). We concluded that CYP19A1 could be used as a candidate molecular marker in breeding aimed at rapid improvement of the reproductive characteristics of pigs. 展开更多
关键词 CYP19A 1 PIG REPRODUCTION birth weight single nucleotide polymorphism
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