快速老化小鼠脑组织Aβ、CypD单核苷酸多态性及“三焦针法”对其作用的研究

[目的]研究快速老化小鼠SAMP8和同品系正常小鼠SAMR1海马、皮质神经元中淀粉样多肽蛋白(Aβ)、亲环蛋白D(CypD)差异表达是否与其基因CDS区DNA序列单核苷酸多态性(SNP)有关,以及"三焦针法"对Aβ、CypD基因CDS区DNA序列是否有干预作用。[方法]选取快速老化小鼠SAMP8为模型,采用PCR扩增、SNP一代测序等法比对小鼠皮质、海马组织中Aβ基因CDS区引物设计位点(17个)以及CypD基因CDS区引物设计位点(6个)的DNA序列,并观察"三焦针法"对Aβ、CypD基因CDS区DNA序列是否有干预作用。[结果]SAMR1正常对照组、SAMP8对照组小鼠皮质、海马Aβ和CypD基因CDS区引物设计位点DNA序列均未发生SNP,针刺组小鼠皮质、海马Aβ和CypD基因CDS区引物设计位点DNA序列未发生变化。[结论]Aβ、CypD mRNA及蛋白差异表达与其基因CDS区DNA序列SNP无关,"三焦针法"对Aβ、CypD基因CDS区DNA序列无干预作用,并推测AD的发生与Aβ、CypD基因CDS区DNA序列SNP无关,"三焦针法"并非通过改变Aβ、CypD基因CDS区DNA序列的途径实现对Aβ、CypD mRNA及蛋白含量的调节作用。

桃果实CyPD基因的克隆、生物信息学分析及蛋白表达

线粒体膜通透性转换孔(MPTP)是线粒体内膜上的一种蛋白复合体,在细胞凋亡或坏死中具有重要作用。亲环蛋白D(Cy PD)是MPTP的重要组成蛋白,对线粒体引起的细胞凋亡有重要的调节作用,但植物中该蛋白的研究较少。本试验通过PCR、RACE等分子生物学技术克隆获得了肥城桃果实线粒体Cy PD基因c DNA序列,该序列全长663 bp,开放阅读框为615 bp,编码204个氨基酸;系统进化树分析发现,肥城桃Cy PD与苹果Cy PD蛋白在进化关系上最为亲密;蛋白质三维结构模拟表明,该蛋白含有2个α螺旋、8个β折叠结构;体外构建了p ET-32a-Cy PD重组表达载体,并成功在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。这些结果为进一步研究Cy PD蛋白的结构和功能奠定了基础。

CypD敲除对衰老小鼠代谢状态及铁死亡的影响

目的观察CypD敲除对衰老小鼠代谢状态和铁死亡的影响。方法将10只SPF级CypD敲除的雄性小鼠和10只同窝野生型雄性(C57BL/6)小鼠分别设为CypD KO组和对照组,给予普通饲料喂养14个月,通过体质量、进食、代谢笼数据比较两组整体能量代谢差异;通过空腹血糖、糖耐量、胰岛素敏感性和丙酮酸耐量试验比较两组糖代谢差异。取两组肝脏和肌肉组织,利用普鲁士蓝染色和Western blotting法检测两组铁死亡指标并进行比较。结果与对照组相比,CypD KO组小鼠体质量降低,黑暗期呼吸交换率和光照期产热较高,空腹血糖、糖耐量、胰岛素敏感性和丙酮酸耐量优(P均<0.05)。与对照组比较,CypD KO组肝脏铁沉积轻,肝脏组织中的铁死亡关键蛋白Gpx4相对表达量高(P<0.05)。结论CypD敲除可以改善衰老小鼠的整体能量代谢和糖代谢,并且可以降低衰老小鼠的铁死亡水平。

益肾调督针灸法对AD大鼠海马线粒体CypD的影响

目的:观察益肾调督针灸法对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马线粒体亲环蛋白D(CypD)的影响,探讨针灸防治AD的具体作用机制。方法:将Wistar大鼠按随机数字表分为4组,即正常组、假手术组、模型组和针灸治疗组,采用双侧海马注射Aβ1-42的模型复制方法,针灸治疗组采用先针刺再艾灸"百会"和"肾俞"穴,通过免疫组化法观察大鼠海马线粒体中CypD的表达水平。结果:模型组CypD的表达明显高于正常组和假手术组(P<0.01),而针灸治疗组CypD的表达显著性降低(P<0.01)。结论:益肾调督针灸法可以有效地抑制海马线粒体CypD表达,从而阻滞线粒体通透性转换孔的形成,减少线粒体损伤,进而在AD防治中发挥作用。

针灸对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元线粒体中亲环蛋白D的影响

目的运用定量RT-PCR法观察针灸对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经元线粒体中亲环蛋白D(CypD)基因表达的影响,探讨针灸防治AD的具体作用机制。方法运用大鼠海马注射A 1-42的模型复制方法,将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和针灸组,采用针刺加灸百会和肾俞穴的治疗方法,通过定量RT-PCR法检测AD模型大鼠海马神经元线粒体中CypD mRNA的表达水平。结果大鼠行为学观察可见针灸组大鼠进食饮水量正常,对外界刺激反应尚可,较模型组有所改善,同时通过对大鼠海马神经元线粒体中CypD基因表达的扩增倍数统计学分析发现,模型组大鼠海马神经元线粒体中CypD的表达明显高于正常组和假手术组(P<0.01),而针灸组表达明显低于模型组(P<0.05),提示针灸能够有效抑制海马神经元线粒体中CypD的过度表达,从而改善海马神经元线粒体膜内外渗透失衡,减轻线粒体损伤。结论针灸防治AD可能与其抑制大鼠海马神经元线粒体中CypD的过度表达,阻滞mPTP形成并改善线粒体的损伤有关。

反相高效液相色谱法测定人尿中右美沙芬及去甲右美沙芬的含量

目的建立反相高效液相色谱法测定人尿中右美沙芬及其代谢产物去甲右美沙芬浓度的方法。方法以非那西丁为内标,尿样经水解,碱化后用正己烷-正丁醇(9:1)萃取,采用DiamonsilTMC18柱(250mm×4.6mm,5μm)分析。色谱条件:流动相为乙腈(A)-1%三乙胺(磷酸调节pH=2.2,B),梯度洗脱,0～15min,20%～35%A,流速为1.0ml/min,检测波长为280nm,柱温40℃。结果右美沙芬在0.05～2.0μg/ml范围内线性良好(r=0.9999,n=5),检测限为0.04μg/ml;去甲右美沙芬尿样浓度在0.5～20.0μg/ml范围内线性良好(r=0.9999,n=5),检测限为0.4μg/ml。两者日内、日间精密度RSD均<10%,低、中、高浓度的提取回收率在94%～108%之间。结论此方法简便准确、重复性好,适用于CYP2D6表型分析以及右美沙芬与其代谢产物的人体药代动力学研究。

CYP2D6 CYP2C19*2基因多态性与利培酮治疗精神分裂症临床效应的相关研究

目的探讨CYP2D6和CYP2C19基因多态性与利培酮治疗精神分裂症临床效应个体差异之间的相关性。方法应用聚合酶链反应(PCR)与DNA测序相结合的方法检测精神分裂症患者CYP2D6和CYP2C19基因多态性。应用高效液相色谱分别测定利培酮、9-羟利培酮的血药浓度,以治疗前后阳性和阴性症状量表(PANSS)评分减分率评价药物临床疗效,比较不同基因型之间血药浓度和药物临床疗效的差异。结果55例单用利培酮治疗的精神分裂症患者,CYP2D6(C100T)不同基因型之间利培酮血药浓度分布差异有统计学意义(P<0.05),但该位点与该药的临床效应之间没有相关性(P>0.05)。CYP2C19*2(G681A)基因多态性与利培酮在体内代谢以及该药临床效应之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论CYP2D6(C100T)对利培酮血药浓度有影响,但与利培酮的临床效应个体差异间无相关性。CYP2C19*2(G681A)可能不是引起利培酮代谢以及临床效应个体差异的主要因素。

针刺对痴呆小鼠线粒体mPTP相关蛋白的调整

[目的]观察"三焦针法"对线粒体通透性转换孔(mPTP)孔开放相关蛋白亲环蛋白D(CypD)、线粒体Aβ(Aβ)的调控作用,探讨"三焦针法"治疗阿尔茨海默病(AD)的机制。[方法]选取快速老化小鼠SAMP8为模型,采用Western blot等方法,观察小鼠皮质、海马线粒体Aβ、CypD含量的变化,以及"三焦针法"对其的影响。[结果]SAMR1正常组小鼠皮质与海马线粒体中Aβ42、CypD表达较低,SAMP8对照组小鼠皮质海马线粒体中Aβ42、CypD表达上调,针刺组小鼠皮质与海马线粒体中Aβ42、CypD表达,相对于SAMP8对照组下调或有下调趋势。[结论]"三焦针法"具有调整SAMP8鼠神经元线粒体皮质、海马Aβ42、CypD含量的作用。

线粒体渗透性转变孔结构和功能的研究进展

非正常生理浓度的Ca2+和氧化应激等刺激线粒体渗透性转变孔(mitochondria permeability tran-sition pore, MPTP)开放,使线粒体形态功能发生改变,被释放的细胞色素c和凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor, AIF)等参与到caspase信号通路中,诱导细胞发生凋亡。本文在MPTP的主要组成成分、两种不同的结构功能模型、抑制剂对MPTP的抑制机制和缺血/再灌注及缺血预适应对MPTP开放的影响等方面的研究进展作一综述。