CBS基因变异与血清同型半胱氨酸水平及先天性心脏病的关系研究

目的探讨核心家庭胱硫脒β-合酶(CBS)基因变异与子代发生先天性心脏病(CHDs)的关系。方法选择辽宁省234名CHDs患者(男116人,女118人)及其生物学父母作为病例组;选取同地区无出生缺陷病史及家族史的136名正常人(男78人,女58人)及其生物学父母作为对照组。所有研究对象均采集血样,提取血凝块DNA,分别以PCR和PCR-ARMS方法检测CBS基因844ins68和G919A位点基因型;对部分家庭的母亲和子代以荧光免疫偏振法检测血清tHcy水平。结果各组人群CBS基因844ins68和G919A位点基因型分布已达到Hardy-Weinberg遗传平衡。CBS 844ins68位点分析表明,与纯合野生型(DD)相比,母亲、父亲、子代杂合子(DI)的比值比[ORs(95%CI)]值分别为14.19(2.21,591.52)、4.37(1.24,23.47)和4.77(1.38,25.37)。CBS基因G919A位点分析表明,与GG基因型相比,杂合子GA和纯合子AA的ORs(95%CI)值分别为0.45(0.23,0.87)和0.34(0.11,1.01);母亲GA、父亲GA和AA基因型携带者其子代罹患先心病的危险性均明显降低,ORs(95%CI)值分别为0.44(0.23,0.84)、0.54(0.29,1.00)和0.24(0.08,0.71)。基因型联合分析表明,与无危险等位基因的基因型组合(0组)相比,母亲、父亲、子代携带2个危险等位基因者(组2)的ORs(95%CI)值分别为4.32(1.07,20.66)、3.43(0.88,13.71)和8.62(1.69,82.72),且均有统计学意义。不同组别血清tHcy水平比较表明,病理组与对照组tHcy水平无明显差异,CBS不同基因型间tHcy水平差异亦无显著性(P>0.05)。结论CBS基因844ins68位点杂合子(DI)以及G919A位点突变等位基因(A)与先心病高危险性有关,但对血清tHcy水平无明显影响。

高分辨率熔解曲线法检测CBS基因SNP的技术优化

目的探索高分辨率熔解曲线法(high resolution melting,HRM)检测胱硫醚β-合酶(CBS)基因SNP位点所需的最佳反应体系和条件,建立快速高效的对CBS基因分型的方法。方法通过普通PCR初步确立引物的退火温度范围,在实时荧光定量PCR(qPCR)-HRM反应中调整确定最佳退火温度。对影响qPCR-HRM的因素包括反应程序、模板DNA、MgCl2再分别进行优化,确立最佳反应体系和反应条件,对在此基础上得出的基因分型结果通过测序验证其准确性,从而建立系统的HRM检测CBS基因SNP的方法。结果 HRM检测CBS基因该片段最佳退火温度为62℃,qPCR-HRM最佳反应体系为20μl,引物浓度为0.2μmol/L,Mg2+为2.5μmol/L,模板DNA为60ng。在优化的体系条件下筛选出的突变型样本经测序验证与实验结果一致。结论 HRM可以作为检测SNP准确、经济、高效的方法。

高血压患者CBS基因启动子低甲基化增加缺血性脑卒中的风险

通过比较高血压患者与并发缺血性脑卒中的高血压患者的胱硫醚β合成酶(cystathionine beta-synthase,CBS)基因启动子区域甲基化率,探讨CBS基因启动子甲基化与脑卒中的关系。选取243名高血压患者(高血压组)和132名高血压并发缺血性脑卒中患者(脑卒中组),采用甲基化特异性实时定量聚合酶链反应技术检测CBS基因启动子区域甲基化率。结果发现:脑卒中组的同型半胱氨酸为21.13±18.56μmol/L,高于高血压组的16.97±12.89μmol/L (P=0.01);脑卒中组甲基化率为38.05%,低于高血压组的50.61%(P<0.01)。在校正多种危险因素后,与最低三分位数(Q1)相比, CBS甲基化最高三分位数(Q3)与脑卒中的优势比(odds ratio, OR)在总人群、男性、女性中分别为0.26 (95%CI:0.14～0.47)、0.14 (95%CI:0.06～0.36)、0.48 (95%CI:0.19～1.20)。CBS甲基化率每增加5%对脑卒中的OR (95%CI)在总人群、男性、女性中分别为0.91 (0.86～0.95)、0.87 (0.81～0.93)、0.93(0.86～0.99)。此外,男性高血压患者中CBS甲基化率与缺血性脑卒中的受试者工作特征曲线下的面积为0.69(95%CI:0.62～0.76)。以上结果初步表明脑卒中患者中CBS基因启动子呈低甲基化状态,且高血压人群中CBS低甲基化增加脑卒中的发病风险。

冠心病患者胱硫醚β-合酶基因G919A和C572T突变频率

目的:初步探讨胱硫醚β-合酶(CBS)基因G919A和C572T位点突变与冠心病(CHD)的关系.方法:采用等位基因特异性扩增(ASA)技术对广西64例CHD患者和健康30例健康者进行CBS基因G919A和C572T的检测.结果:CBS基因G919A两组间基因型以及A等位基因频率分布差异均有统计学意义(P<0.01).CBS基因C572T两组间基因型以及T等位基因频率分布差异均无统计学意义(P>0.05).但G919A和C572T复合基因型G/A+C/T型与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:提示CBSG919A突变与广西CHD有重要相关性,而C572T与CHD无明显相关性.

脓毒症休克大鼠下丘脑和延髓中胱硫醚β合酶mRNA的表达

目的研究脓毒症休克大鼠下丘脑和延髓中胱硫醚B合酶（CBS）mRNA的表达状况。方法12只雄性SD大鼠随机分为假手术组（n=6）和脓毒症休克组（n=6），脓毒症休克模型采用盲肠结扎穿孔术（CLP）。术后大鼠测血压、观察一般表现，确定脓毒症休克模型是否成功；逆转录PcR（RT-PCR）和实时荧光定量PCR（real-timePCR）检测下丘脑、延髓中CBS基因表达。结果脓毒症休克组大鼠下丘脑及延髓均有CBS的表达。与假手术组比较，脓毒症休克大鼠延髓CBSmRNA表达明显升高（P〈0．05）；下丘脑未有明显变化（P〉0．05）；与假手术组下丘脑比较，假手术组延髓CBS表达显著降低（P〈0．05）；与脓毒症休克组下丘脑比较，脓毒症休克组延髓CBS表达显著升高（P〈0．05）。结论脓毒症休克大鼠脑组织CBSmRNA表达上调，可能通过延髓或下丘脑机制参与脓毒症休克的发病机制。

硫化氢信号在糖尿病大鼠阴茎海绵体中表达的研究

目的探讨胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)、胱硫醚-β-合成酶(CBS)与硫化氢在糖尿病大鼠阴茎海绵体组织中的表达及与大鼠勃起功能的关系。方法从30只SD雄性大鼠中随机选取15只设为糖尿病组,15只设为对照组。糖尿病组大鼠饲喂高糖、高脂饮食4周,而后腹腔注射链脲佐菌素制备二型糖尿模型,造模成功后继续饲喂高糖、高脂饮食4周。对照组大鼠给予正常饮食4周后,腹腔内注射相同剂量生理盐水,继续正常饮食喂养4周。8周后,分别测定两组大鼠阴茎海绵体内压/平均动脉压(ICP/MAP),采用Elisa检测血浆和阴茎海绵体内源性H_2S含量,采用免疫组化和Western blot分析CSE和CBS在阴茎海绵体内的表达。结果与对照组大鼠相比,糖尿病组大鼠ICP/MAP比值显著降低(P<0.05);血浆H_2S浓度,阴茎海绵体组织H_2S含量显著降低(P<0.05);阴茎组织内CSE和CBS的含量也明显减低(P<0.05)。结论糖尿病组大鼠高血糖可以通过抑制CBS和CSE的表达,降低阴茎海绵体组织内H_2S浓度,引起阴茎海绵体舒张功能障碍,导致阴茎勃起功能受损。

胱硫醚β-合成酶G919A基因多态性与原发性高血压关系的meta分析

目的综合评估胱硫醚β-合成酶（CBS）基因 G919A 多态性与原发性高血压（EH）发生风险的关系。方法全面检索 PubMed 、Embase 、Medline 、万方数据库、中国知网（CNKI）、维普资讯，收集 CBS 基因 G919A 多态性与 EH 发生关系的病例对照研究，优势比（OR）及95％可信区间（CI）评估关联强度，应用 RevMan5.3软件对纳入研究进行异质性检验和效应值 OR 合并，漏斗图评价发表性偏倚；敏感度分析过程，分别以固定效应模型和随机效应模型合并 OR 值，以评估结果的稳定性。结果共纳入4篇文献6组病例－对照研究，共累计 EH 组患者1147例，健康对照组1138例，根据异质性检验结果选取固定效应模型或随机效应模型合并数据。 Meta 分析结果显示：CBS 基因919纯合子模型（AA vs GG）、杂合子模型（GA vs GG）、显性模型（AA ＋ GA vs GG）、隐性模型（AA vs GG ＋ GA）和基因频率（A vs G）与 EH 关系的合并 OR（95％ CI）分别为3.03（1.95～4.72）、1.49（1.10～2.02）、1.61（1.23～2.10）、2.65（1.26～5.57）和1.55（1.35～1.79），均 P＜0.01。漏斗图未检测出显著的发表性偏倚。结论目前 Meta 分析表明 CBS 基因 G919A 多态性与 EH 发病相关联，尤其是在中国人群。

同型半胱氨酸与甲基代谢及其胱硫醚酶基因研究进展

同型半胱氨酸(HCY)水平增高是慢性血管疾病的独立危险因子,但HCY的来源不是从食物中吸取,其由蛋氨酸在甲基(CH3)循环代谢的中间产物。甲基化代谢亢进,再甲基化或转硫化代谢酶基因突变或功能障碍等原因均可造成甲基循环代谢失衡,从而导致HCY推积,患者出现高同型半胱氨酸血症(HHCY),动脉硬化等为特征的临床症状和体征。胱硫醚β-合酶(CBS)基因可将HCY转硫化成为胱硫醚,后者再经过胱硫醚-γ-裂解酶(CTH)裂解成丙酮酸、硫酸和水,达到有效降低HCY水平,降低动脉硬化进展,保障机体健康。本文综述近年来HCY代谢通路及其与心血管疾病的关系等的研究许多新进展。

基于环氧合酶-2通路探讨葛花解酲汤治疗慢性酒精中毒的作用机制

目的:观察基于环氧合酶-2(COX-2)通路葛花解酲汤治疗慢性酒精中毒的作用机制。方法:将60只C57BL/6J小鼠随机分为5组,分别为正常组、模型组、低剂量葛花解酲汤组、中剂量葛花解酲汤组和高剂量葛花解酲汤组,对其建模处理,通过组织学检查、Western Blotting检测、化学比色法测定等对小鼠组织中COX-2蛋白、脑组织δ阿片受体(DOR)mRNA、β-内啡肽、胱硫醚-β-合酶(CBS)活性和H_(2)S水平,肝组织乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)活性和抗氧化指标进行对比。结果:低剂量葛花解酲汤组中COX-2蛋白水平显著低于模型组(P<0.05),高剂量葛花解酲汤组COX-2蛋白水平显著低于中剂量葛花解汤组(P<0.05);低剂量葛花解酲汤组中DOR mRNA和β-内啡肽的水平显著低酲于模型组(P<0.05);高剂量葛花解酲汤组DOR mRNA和β-内啡肽的水平显著低于中剂量葛花解酲汤组(P<0.05);低剂量葛花解酲汤组中CBS活性和H_(2)S水平显著低于模型组(P<0.05),高剂量葛花解酲汤组CBS活性和H_(2)S水平显著低于中剂量葛花解酲汤组(P<0.05),低剂量葛花解酲汤组中的ADH和ALDH活性较模型组比较显著升高(P<0.05),高剂量葛花解酲汤组的ADH活性与中剂量葛花解酲汤组相比明显降低(P<0.05);低剂量葛花解酲汤组中谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽转硫酶(GST)和总抗氧化能力(T-AOC)水平明显高于模型组(P<0.05),高剂量葛花解酲汤组GSH、GST和T-AOC水平显著高于中剂量葛花解酲汤组(P<0.05)。结论:葛花解酲汤可以有效抑制COX-2通路,降低慢性酒精中毒小鼠脑组织中DOR mRNA、β-内啡肽、CBS活性和H_(2)S水平,显著提高慢性酒精中毒小鼠肝脏中的ADH和ALDH的活性,改善氧化应激指标。

低剂量内毒素预处理保护内毒素介导的小鼠急性肝损伤及其机理探讨

目的研究低剂量内毒素(LPS)预处理对LPS介导的小鼠急性肝损伤的影响。方法LPS通过腹腔注射小鼠;丁基亚磺酰亚胺(BSO)处理耗尽小鼠肝脏谷胱苷肽(GSH)含量;血浆天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定用全自动生化分析仪;基因表达测定采用RT-PCR。结果①低剂量LPS预处理降低高剂量LPS诱导的小鼠肝功能损伤;②低剂量LPS刺激肝脏GSH含量升高;LPS预处理组GSH水平显著高于高剂量LPS处理组;③BSO预处理后,LPS预处理组与高剂量LPS组的血浆ALT和AST水平没有差别;④LPS处理导致转硫途径关键酶——胱硫醚β合酶活性以及GSH合成途径关键酶——γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达升高。结论低剂量LPS通过上调肝组织中GSH合成相关基因表达,增加GSH的含量,减轻高剂量LPS诱导的肝脏损伤。

妊高征患者同型半胱氨酸代谢酶基因多态性研究

目的:检测妊高征患者同型半胱氨酸代谢酶N5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)及胱硫醚-β-合成酶(CBS)基因多态性,分析其与妊高征发病的关系,解析遗传因素在该病中的作用地位。方法:孕产妇均抽取空腹外周静脉血4 ml,分离血清,采用循环酶法小分子捕获技术测定同型半胱氨酸浓度,叶酸及Vit B12测量采用发光免疫法,全血提取DNA用于PCR检测MTHFR C677T、PCR扩增及程序采用等位基因特异性扩增(ASA)技术检测CBS G919A和CBSC572T基因型。统计软件分析数据。结果:本次实验发现妊娠高血压患者与正常对照间的MTHFR C677T位点和CBSC572T位点突变频率差别有统计学意义,而CBS G919A位点则无差别。同时发现,两组间的Hcy和叶酸浓度有明显差别,而Vit B浓度差别不明显。结论:妊娠高血压的可能同时是由于遗传因素和叶酸缺乏造成的。