蒜氨酸通过CBS/CSE途径改善小鼠非酒精性脂肪肝病的研究

【目的】研究蒜氨酸对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)小鼠肝脏中胱硫醚-β-裂解酶(cystathionine-β-synthase,CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)表达的影响,阐释蒜氨酸改善NAFLD的作用途径,为临床药物研发提供科学依据。【方法】50只雄性C57/6J小鼠随机分为5组:正常组、模型组、硫氢化钠组、蒜氨酸组和蒜氨酸+PAG组(DL-炔丙基甘氨酸,DL-propargylglycine,PAG),每组10只。正常组饲喂普通饲料,其他4组饲喂高脂饲料。蒜氨酸组灌胃给予蒜氨酸20 mg/kg;蒜氨酸+PAG组灌胃给予蒜氨酸20 mg/kg,同时腹腔注射PAG 15 mg/kg;硫氢化钠组腹腔注射硫氢化钠2 mg/kg;正常组和模型组灌胃给予等剂量的蒸馏水,每天1次,每周称体重1次,预防给药6周后处死,观察肝脏形态学和病理学变化,检测血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL-C)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL-C)的水平,Western blotting检测肝脏组织中CBS和CSE蛋白表达水平。【结果】与正常组相比,模型组小鼠体重显著增加(P<0.05),其他组小鼠体重无显著变化(P>0.05)。形态学观察显示,模型组小鼠肝脏偏黄无光泽,成花斑状,其他组小鼠肝脏表面光滑、质地均匀、颜色与正常组小鼠接近。肝脏病理学HE染色可见,正常组切片正常,模型组出现明显脂肪空泡和脂滴沉积,说明脂肪肝模型建立成功;与模型组相比,硫氢化钠组和蒜氨酸组均有明显好转;与蒜氨酸组相比,蒜氨酸+PAG组抗脂肪变性作用减弱。与正常组相比,模型组小鼠血清中TG、TC、LDL-C均显著升高(P<0.05),各给药组小鼠TC、TG、LDL-C相较于模型组显著降低(P<0.05)。与正常组相比,模型组小鼠CBS和CSE蛋白表达水平显著下降(P<0.05),硫氢化钠组和蒜氨酸组干预后CBS和CSE蛋白表达水平显著或极显著上调(P<0.05;P<0.01);与模型组相相比,蒜氨酸+PAG组小鼠CBS和CSE表达无显著差异(P>0.05)。【结论】蒜氨酸可明显增加高脂饮食诱导的NAFLD小鼠肝脏组织中CBS和CSE表达,改善血清中血脂各项指标,减少小鼠肝细胞脂质沉积,发挥保护肝脏作用。

CBS基因变异与血清同型半胱氨酸水平及先天性心脏病的关系研究

目的探讨核心家庭胱硫脒β-合酶(CBS)基因变异与子代发生先天性心脏病(CHDs)的关系。方法选择辽宁省234名CHDs患者(男116人,女118人)及其生物学父母作为病例组;选取同地区无出生缺陷病史及家族史的136名正常人(男78人,女58人)及其生物学父母作为对照组。所有研究对象均采集血样,提取血凝块DNA,分别以PCR和PCR-ARMS方法检测CBS基因844ins68和G919A位点基因型;对部分家庭的母亲和子代以荧光免疫偏振法检测血清tHcy水平。结果各组人群CBS基因844ins68和G919A位点基因型分布已达到Hardy-Weinberg遗传平衡。CBS 844ins68位点分析表明,与纯合野生型(DD)相比,母亲、父亲、子代杂合子(DI)的比值比[ORs(95%CI)]值分别为14.19(2.21,591.52)、4.37(1.24,23.47)和4.77(1.38,25.37)。CBS基因G919A位点分析表明,与GG基因型相比,杂合子GA和纯合子AA的ORs(95%CI)值分别为0.45(0.23,0.87)和0.34(0.11,1.01);母亲GA、父亲GA和AA基因型携带者其子代罹患先心病的危险性均明显降低,ORs(95%CI)值分别为0.44(0.23,0.84)、0.54(0.29,1.00)和0.24(0.08,0.71)。基因型联合分析表明,与无危险等位基因的基因型组合(0组)相比,母亲、父亲、子代携带2个危险等位基因者(组2)的ORs(95%CI)值分别为4.32(1.07,20.66)、3.43(0.88,13.71)和8.62(1.69,82.72),且均有统计学意义。不同组别血清tHcy水平比较表明,病理组与对照组tHcy水平无明显差异,CBS不同基因型间tHcy水平差异亦无显著性(P>0.05)。结论CBS基因844ins68位点杂合子(DI)以及G919A位点突变等位基因(A)与先心病高危险性有关,但对血清tHcy水平无明显影响。

父母MTHFR基因、CBS基因与子代先天性心脏病关系的研究

目的 探讨父母亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因C677T及胱硫醚β-合酶（CBS）基因T833C与子代先天性心脏病（CHD）发生的关系。方法采用1：1配对病例对照研究方法，分析比较115对CHD患儿与对照儿父母MTHFR及CBS基因型。结果母亲MTHFR基因的C与T等位基因频率比较差异具有统计学意义（P=0．036，OR=1．595，95％CI：1．029～2．471），父母CBS基因型构成及等位基因频率比较差异均无统计学意义。结论 母亲MTHFR基因677TT型可能与子代CHD发生有关。

高分辨率熔解曲线法检测CBS基因SNP的技术优化

目的探索高分辨率熔解曲线法(high resolution melting,HRM)检测胱硫醚β-合酶(CBS)基因SNP位点所需的最佳反应体系和条件,建立快速高效的对CBS基因分型的方法。方法通过普通PCR初步确立引物的退火温度范围,在实时荧光定量PCR(qPCR)-HRM反应中调整确定最佳退火温度。对影响qPCR-HRM的因素包括反应程序、模板DNA、MgCl2再分别进行优化,确立最佳反应体系和反应条件,对在此基础上得出的基因分型结果通过测序验证其准确性,从而建立系统的HRM检测CBS基因SNP的方法。结果 HRM检测CBS基因该片段最佳退火温度为62℃,qPCR-HRM最佳反应体系为20μl,引物浓度为0.2μmol/L,Mg2+为2.5μmol/L,模板DNA为60ng。在优化的体系条件下筛选出的突变型样本经测序验证与实验结果一致。结论 HRM可以作为检测SNP准确、经济、高效的方法。

CBS在小鼠卵泡发育过程中的表达模式及其功能初探

目的:研究调节同型半胱氨酸水平的关键酶——胱硫醚β合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)在卵母细胞和卵泡发生过程中的动态表达模式及潜在的生物学作用。方法:以体外培养的卵泡以及去除卵泡中卵母细胞后培养的颗粒细胞为载体系统,利用半定量RT-PCR的方法,研究不同时期卵泡以及颗粒细胞中CBS的动态表达模式。结果:在各级卵泡的颗粒细胞中均有高水平的CBS表达,用完整卵泡进行的表达研究表明,各级卵泡中也都有CBS高水平的表达,同时期的颗粒细胞与完整卵泡相比,前者具有更高水平的CBS表达;而不同发育阶段的卵母细胞中均未见CBS表达。结论:CBS在卵泡和卵母细胞的生长、发育和成熟过程中起着重要的作用,其中CBS在卵泡和卵细胞中不同的表达模式提示CBS对卵母细胞发育的影响可能是通过卵泡细胞与卵母细胞的相互作用而实现的。

高血压患者CBS基因启动子低甲基化增加缺血性脑卒中的风险

通过比较高血压患者与并发缺血性脑卒中的高血压患者的胱硫醚β合成酶(cystathionine beta-synthase,CBS)基因启动子区域甲基化率,探讨CBS基因启动子甲基化与脑卒中的关系。选取243名高血压患者(高血压组)和132名高血压并发缺血性脑卒中患者(脑卒中组),采用甲基化特异性实时定量聚合酶链反应技术检测CBS基因启动子区域甲基化率。结果发现:脑卒中组的同型半胱氨酸为21.13±18.56μmol/L,高于高血压组的16.97±12.89μmol/L (P=0.01);脑卒中组甲基化率为38.05%,低于高血压组的50.61%(P<0.01)。在校正多种危险因素后,与最低三分位数(Q1)相比, CBS甲基化最高三分位数(Q3)与脑卒中的优势比(odds ratio, OR)在总人群、男性、女性中分别为0.26 (95%CI:0.14～0.47)、0.14 (95%CI:0.06～0.36)、0.48 (95%CI:0.19～1.20)。CBS甲基化率每增加5%对脑卒中的OR (95%CI)在总人群、男性、女性中分别为0.91 (0.86～0.95)、0.87 (0.81～0.93)、0.93(0.86～0.99)。此外,男性高血压患者中CBS甲基化率与缺血性脑卒中的受试者工作特征曲线下的面积为0.69(95%CI:0.62～0.76)。以上结果初步表明脑卒中患者中CBS基因启动子呈低甲基化状态,且高血压人群中CBS低甲基化增加脑卒中的发病风险。

CBS和CSE在成年牦牛子宫中的表达及定位

胱硫醚β-合成酶(cystathionine β-synthase,CBS)通过与胱硫醚γ-裂解酶(cystathionine γ-lyase,CSE)共同作用生成内源性硫化氢(H2S),参与硫氨基酸代谢来调控细胞的生长、增殖、凋亡等正常生理功能。为了解CBS和CSE在成年牦牛子宫中的作用,分别采集妊娠期、黄体期、卵泡期牦牛子宫组织样品,通过qRT-PCR、Western-blot和免疫组织化学等方法检测CBS和CSE基因及其蛋白的相对表达情况。结果显示,CBS mRNA在黄体期牦牛子宫组织中表达量显著高于妊娠期和卵泡期(P<0.05),且妊娠期的表达量显著高于卵泡期(P<0.05);CSE mRNA在妊娠期的表达量最高(P<0.05),黄体期和卵泡期的表达差异性不显著(P>0.05)。CBS蛋白在卵泡期的表达量最高(P<0.05),黄体期和妊娠期的表达差异量不显著(P>0.05);CSE蛋白在卵泡期牦牛子宫组织中表达量显著高于妊娠期和黄体期(P<0.05),且黄体期的表达量显著高于妊娠期(P<0.05)。免疫组织化学定位显示,牦牛子宫内膜组织中有硫化氢合成酶CBS和CSE的表达,并且CBS和CSE在子宫内膜上皮细胞、腺上皮细胞和子宫内膜基质细胞上表达均为阳性。上述结果表明,CBS和CSE在成年牦牛子宫组织中均有表达,且在不同生殖周期CBS和CSE蛋白及其mRNA在牦牛子宫组织中的表达量有明显的变化。

冠心病患者胱硫醚β-合酶基因G919A和C572T突变频率

目的:初步探讨胱硫醚β-合酶(CBS)基因G919A和C572T位点突变与冠心病(CHD)的关系.方法:采用等位基因特异性扩增(ASA)技术对广西64例CHD患者和健康30例健康者进行CBS基因G919A和C572T的检测.结果:CBS基因G919A两组间基因型以及A等位基因频率分布差异均有统计学意义(P<0.01).CBS基因C572T两组间基因型以及T等位基因频率分布差异均无统计学意义(P>0.05).但G919A和C572T复合基因型G/A+C/T型与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:提示CBSG919A突变与广西CHD有重要相关性,而C572T与CHD无明显相关性.

外源性硫化氢保护实验性癫痫持续状态大鼠海马神经元作用的研究

目的:为研究外源性硫化氢(H_2S)对实验性癫痫持续状态(status of epilepticus,SE)大鼠海马神经元的保护作用,我们用供体Na HS对氯化锂-匹罗卡品所致幼鼠SE海马神经元的影响,并对SE引起的脑损伤进行靶点干预。方法:用氯化锂-匹罗卡品建立大鼠SE模型,并分为正常+Na HS组,癫痫组,癫痫+Na HS组和癫痫+羟胺组,另设正常组(对照组),每组6只。用比色法测定血浆和海马H_2S浓度,用Real-Time PCR检测海马胱硫醚-β合酶(CBS)基因mRNA表达,用HE染色和Nissl染色观察海马神经元形态。结果:癫痫组血浆和海马组织H_2S浓度和CBS mRNA表达明显低于正常组(P<0.01),癫痫+Na HS组血浆和海马组织H_2S浓度和CBS mRNA表达明显高于癫痫组(P<0.01),癫痫+羟胺组血浆和海马组织H_2S浓度和CBS mRNA表达显著低于癫痫组(P<0.05)。HE染色显示,癫痫组海马CA3区锥体细胞明显减少,细胞层次紊乱,形态不规则;尼氏染色显示,癫痫组海马CA3区尼氏体明显减少,锥体细胞排列紊乱;与癫痫组比较,癫痫+Na HS组海马尼氏体缺失和锥体细胞排列紊乱明显改善。结论:外源性H_2S对实验性癫痫持续状态大鼠海马组织CBS mRNA表达具有上调作用,并提高血浆和海马组织H_2S含量。同时,外源性H_2S对实验性癫痫大鼠海马组织神经元具有保护作用。

脓毒症休克大鼠下丘脑和延髓中胱硫醚β合酶mRNA的表达

目的研究脓毒症休克大鼠下丘脑和延髓中胱硫醚B合酶（CBS）mRNA的表达状况。方法12只雄性SD大鼠随机分为假手术组（n=6）和脓毒症休克组（n=6），脓毒症休克模型采用盲肠结扎穿孔术（CLP）。术后大鼠测血压、观察一般表现，确定脓毒症休克模型是否成功；逆转录PcR（RT-PCR）和实时荧光定量PCR（real-timePCR）检测下丘脑、延髓中CBS基因表达。结果脓毒症休克组大鼠下丘脑及延髓均有CBS的表达。与假手术组比较，脓毒症休克大鼠延髓CBSmRNA表达明显升高（P〈0．05）；下丘脑未有明显变化（P〉0．05）；与假手术组下丘脑比较，假手术组延髓CBS表达显著降低（P〈0．05）；与脓毒症休克组下丘脑比较，脓毒症休克组延髓CBS表达显著升高（P〈0．05）。结论脓毒症休克大鼠脑组织CBSmRNA表达上调，可能通过延髓或下丘脑机制参与脓毒症休克的发病机制。

硫化氢信号在糖尿病大鼠阴茎海绵体中表达的研究

目的探讨胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)、胱硫醚-β-合成酶(CBS)与硫化氢在糖尿病大鼠阴茎海绵体组织中的表达及与大鼠勃起功能的关系。方法从30只SD雄性大鼠中随机选取15只设为糖尿病组,15只设为对照组。糖尿病组大鼠饲喂高糖、高脂饮食4周,而后腹腔注射链脲佐菌素制备二型糖尿模型,造模成功后继续饲喂高糖、高脂饮食4周。对照组大鼠给予正常饮食4周后,腹腔内注射相同剂量生理盐水,继续正常饮食喂养4周。8周后,分别测定两组大鼠阴茎海绵体内压/平均动脉压(ICP/MAP),采用Elisa检测血浆和阴茎海绵体内源性H_2S含量,采用免疫组化和Western blot分析CSE和CBS在阴茎海绵体内的表达。结果与对照组大鼠相比,糖尿病组大鼠ICP/MAP比值显著降低(P<0.05);血浆H_2S浓度,阴茎海绵体组织H_2S含量显著降低(P<0.05);阴茎组织内CSE和CBS的含量也明显减低(P<0.05)。结论糖尿病组大鼠高血糖可以通过抑制CBS和CSE的表达,降低阴茎海绵体组织内H_2S浓度,引起阴茎海绵体舒张功能障碍,导致阴茎勃起功能受损。

胱硫醚β-合成酶G919A基因多态性与原发性高血压关系的meta分析

目的综合评估胱硫醚β-合成酶（CBS）基因 G919A 多态性与原发性高血压（EH）发生风险的关系。方法全面检索 PubMed 、Embase 、Medline 、万方数据库、中国知网（CNKI）、维普资讯，收集 CBS 基因 G919A 多态性与 EH 发生关系的病例对照研究，优势比（OR）及95％可信区间（CI）评估关联强度，应用 RevMan5.3软件对纳入研究进行异质性检验和效应值 OR 合并，漏斗图评价发表性偏倚；敏感度分析过程，分别以固定效应模型和随机效应模型合并 OR 值，以评估结果的稳定性。结果共纳入4篇文献6组病例－对照研究，共累计 EH 组患者1147例，健康对照组1138例，根据异质性检验结果选取固定效应模型或随机效应模型合并数据。 Meta 分析结果显示：CBS 基因919纯合子模型（AA vs GG）、杂合子模型（GA vs GG）、显性模型（AA ＋ GA vs GG）、隐性模型（AA vs GG ＋ GA）和基因频率（A vs G）与 EH 关系的合并 OR（95％ CI）分别为3.03（1.95～4.72）、1.49（1.10～2.02）、1.61（1.23～2.10）、2.65（1.26～5.57）和1.55（1.35～1.79），均 P＜0.01。漏斗图未检测出显著的发表性偏倚。结论目前 Meta 分析表明 CBS 基因 G919A 多态性与 EH 发病相关联，尤其是在中国人群。

同型半胱氨酸与甲基代谢及其胱硫醚酶基因研究进展

同型半胱氨酸(HCY)水平增高是慢性血管疾病的独立危险因子,但HCY的来源不是从食物中吸取,其由蛋氨酸在甲基(CH3)循环代谢的中间产物。甲基化代谢亢进,再甲基化或转硫化代谢酶基因突变或功能障碍等原因均可造成甲基循环代谢失衡,从而导致HCY推积,患者出现高同型半胱氨酸血症(HHCY),动脉硬化等为特征的临床症状和体征。胱硫醚β-合酶(CBS)基因可将HCY转硫化成为胱硫醚,后者再经过胱硫醚-γ-裂解酶(CTH)裂解成丙酮酸、硫酸和水,达到有效降低HCY水平,降低动脉硬化进展,保障机体健康。本文综述近年来HCY代谢通路及其与心血管疾病的关系等的研究许多新进展。

基于环氧合酶-2通路探讨葛花解酲汤治疗慢性酒精中毒的作用机制

目的:观察基于环氧合酶-2(COX-2)通路葛花解酲汤治疗慢性酒精中毒的作用机制。方法:将60只C57BL/6J小鼠随机分为5组,分别为正常组、模型组、低剂量葛花解酲汤组、中剂量葛花解酲汤组和高剂量葛花解酲汤组,对其建模处理,通过组织学检查、Western Blotting检测、化学比色法测定等对小鼠组织中COX-2蛋白、脑组织δ阿片受体(DOR)mRNA、β-内啡肽、胱硫醚-β-合酶(CBS)活性和H_(2)S水平,肝组织乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)活性和抗氧化指标进行对比。结果:低剂量葛花解酲汤组中COX-2蛋白水平显著低于模型组(P<0.05),高剂量葛花解酲汤组COX-2蛋白水平显著低于中剂量葛花解汤组(P<0.05);低剂量葛花解酲汤组中DOR mRNA和β-内啡肽的水平显著低酲于模型组(P<0.05);高剂量葛花解酲汤组DOR mRNA和β-内啡肽的水平显著低于中剂量葛花解酲汤组(P<0.05);低剂量葛花解酲汤组中CBS活性和H_(2)S水平显著低于模型组(P<0.05),高剂量葛花解酲汤组CBS活性和H_(2)S水平显著低于中剂量葛花解酲汤组(P<0.05),低剂量葛花解酲汤组中的ADH和ALDH活性较模型组比较显著升高(P<0.05),高剂量葛花解酲汤组的ADH活性与中剂量葛花解酲汤组相比明显降低(P<0.05);低剂量葛花解酲汤组中谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽转硫酶(GST)和总抗氧化能力(T-AOC)水平明显高于模型组(P<0.05),高剂量葛花解酲汤组GSH、GST和T-AOC水平显著高于中剂量葛花解酲汤组(P<0.05)。结论:葛花解酲汤可以有效抑制COX-2通路,降低慢性酒精中毒小鼠脑组织中DOR mRNA、β-内啡肽、CBS活性和H_(2)S水平,显著提高慢性酒精中毒小鼠肝脏中的ADH和ALDH的活性,改善氧化应激指标。

胱硫醚合成酶基因突变与同型胱氨酸尿症临床表型关系的探讨

目的 了解由胱硫醚合成酶 (CBS)基因缺陷引起的同型胱氨酸尿症的基因突变类型 ,探讨其基因突变与临床表型的关系 ,确立同型胱氨酸尿症基因诊断方法。方法 对 2 0 0 0年至 2 0 0 2年深圳市儿童医院收集的 6例 ,来自 5个家系的同型胱氨酸尿症患儿进行了分子生物学研究。培养患儿的皮肤成纤维细胞 ,提取总的RNA和genomicDNA ,用PCR法、反转录PCR法、质粒扩增、DNA序列分析、限制性内切酶图谱等技术检测CBS基因的突变 ,并用基因表达和酶活性测定等技术确定致病变异。结果 我们发现了 8个变异 (H6 5R ,G116R ,E14 4K ,G2 5 9S ,K4 4 1X ,Ivs9+1g to a ,Ivs10 +3to +8aagaca to tc ,和 15 90del4 ) ,所有患儿均为杂合子。把这些变异在大肠杆菌细胞中进行基因表达 ,证实它们为致病变异。结论 CBS基因的变异是多样性的。在杂合子状态下 ,基因突变与维生素B6不反应性之间的关系难以确定。即使基因突变相同 ,临床表型也有差异。

浒苔多糖对非酒精性脂肪肝大鼠脂质代谢及多器官H2S生成的影响

目的探讨浒苔多糖(EP)对高脂饲料诱导非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠脂质代谢及多器官内源性硫化氢(H2S)生成的影响。方法 50只成年雌性SD大鼠随机分为5组,每组10只。空白对照组(Normal diet+H2O)、EP对照组[Normal diet+200mg/(kg·bw·d)EP]、模型组(High-fat diet+H2O)、EP干预组[High-fat diet+200mg/(kg·bw·d)EP]、硫氢化钠组[High-fat diet+56μmol/(kg·bw·d)NaHS],持续干预35d。比较各组大鼠体重、肝脏以及血脂、H2S、CSE、CBS的差异。结果与模型组比较,EP可显著改善NAFLD大鼠肝细胞脂肪变,降低高脂饲料喂养大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平(P<0.05),升高血清H2S水平(P<0.05),增加多个脏器中胱硫醚-β-合成酶(CBS)/胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)活性(P<0.05)。Western blot分析显示,与模型组比较,EP干预后,NAFLD大鼠大脑中CBS和CSE蛋白表达水平、脾脏和肝脏中CBS蛋白表达水平、心脏和肾脏中CSE蛋白表达水平增高(P<0.05)。结论 EP可能通过促进大鼠多器官生成内源性H2S,改善脂质代谢。

硫化氢与结直肠癌相关性及其抗肿瘤药物研发的进展

作为最近得到确认的第三个气体信号分子，硫化氢在内环境内具有广泛的生理和病理作用。然而，关于硫化氢在肿瘤、尤其是结直肠癌发生发展中的作用的研究一直存在看似相互矛盾的结果。本文试从硫化氢在低浓度与高浓度作用区间对结直肠癌发生发展的不同作用以及基于硫化氢的抗肿瘤新药研发两个方面，对目前关于硫化氢与结直肠癌的相关研究进展进行综述。目前的研究已经明确了硫化氢在低浓度范围内促进结直肠癌进展以及在高浓度区间抑制肿瘤进展的双相作用模型。针对这种作用特点．硫化氢释放剂、硫化氢合成酶抑制剂以及硫化氢释放基团与NSAID类药物的嵌合体作为抗癌的新型药物得到了广泛研究。综合目前的研究来看，以氨基氧乙酸为代表的硫化氢合成酶抑制剂因其较小的副作用以及较低的作用浓度．相较于其他两类更为有可能发展为新型药物，基于硫化氢与结直肠癌相关性的进一步研究，将为深入揭示结直肠癌的发生机制以及抗肿瘤新药的研发带来新的思路．从而产生巨大的潜在临床价值。

妊高征患者同型半胱氨酸代谢酶基因多态性研究

目的:检测妊高征患者同型半胱氨酸代谢酶N5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)及胱硫醚-β-合成酶(CBS)基因多态性,分析其与妊高征发病的关系,解析遗传因素在该病中的作用地位。方法:孕产妇均抽取空腹外周静脉血4 ml,分离血清,采用循环酶法小分子捕获技术测定同型半胱氨酸浓度,叶酸及Vit B12测量采用发光免疫法,全血提取DNA用于PCR检测MTHFR C677T、PCR扩增及程序采用等位基因特异性扩增(ASA)技术检测CBS G919A和CBSC572T基因型。统计软件分析数据。结果:本次实验发现妊娠高血压患者与正常对照间的MTHFR C677T位点和CBSC572T位点突变频率差别有统计学意义,而CBS G919A位点则无差别。同时发现,两组间的Hcy和叶酸浓度有明显差别,而Vit B浓度差别不明显。结论:妊娠高血压的可能同时是由于遗传因素和叶酸缺乏造成的。

同型半胱氨酸致神经管畸形小鼠模型的建立及其作用机制

目的建立同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)致神经管畸形(neural tube defect,NTD)的小鼠模型,并探讨其作用机制。方法以单独使用同型半胱氨酸硫代内酯(homocysteine thiolactone,HTL)及联合胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)抑制剂氨基氧乙酸(aminooxyacetic acid,AOAA)建立小鼠NTD模型,其中单独使用HTL的剂量为100、300、500、700 mg/(kg·d),联用组中HTL的剂量为400、500、600 mg/(kg·d),AOAA剂量均为30 mg/(kg·d),于小鼠孕6.5~10.5 d连续给药,均经腹腔注射。选择最佳剂量建立NTD小鼠模型(NTD组),同时设正常对照组。ELISA法检测孕鼠血液中Hcy水平及胚胎脑组织中S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)和S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)水平,Click-i T EdU成像试剂盒检测小鼠胚胎神经上皮细胞的增殖情况,Western blot法检测胚胎脑组织中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达水平。结果建立NTD的小鼠模型最佳方案为500 mg/(kg·d)HTL+30 mg/(kg·d)AOAA,该条件下NTD发生率最高,死亡率较低。与正常对照组比较,NTD组Hcy、SAH和SAM含量均显著升高(P<0.01),SAM/SAH比值明显下降(P<0.01);胚胎神经上皮细胞增殖受到显著抑制(P<0.05);PCNA的表达水平显著下降(P<0.05)。结论联合使用HTL与AOAA成功建立了小鼠的NTD模型,抑制细胞增殖可能是导致NTD发生的重要机制。