参附注射液辅助治疗对急性心肌梗死大鼠NOD样受体蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1介导的细胞焦亡信号通路以及炎性因子水平的影响

目的探讨参附注射液辅助治疗对急性心肌梗死(AMI)大鼠NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)介导的细胞焦亡信号通路以及炎性因子水平的影响。方法40只大鼠随机分为假手术组、模型组、倍他乐克组(0.9 mg/kg)和联合组(倍他乐克0.9 mg/kg联合参附注射液6 mL/kg),每组10只,连续灌胃3周。检测造模前、造模后和治疗3周时大鼠血清肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。造模后和治疗3周时,比较各组大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)等心脏彩超参数以及心肌梗死面积。应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)及Western blot检测心肌梗死面积NLRP3、Caspase-1的mRNA及其蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组造模后和治疗3周时cTnI、CK-MB、IL-6、IL-1β、TNF-α、心肌梗死面积、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达量均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,倍他乐克组和联合组治疗3周时cTnI、CK-MB、IL-6、IL-1β、TNF-α、心肌梗死面积、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达量均降低,且联合组上述指标均低于倍他乐克组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论参附注射液辅助治疗AMI能够进一步减轻心肌细胞损伤,缩小梗死面积,抑制炎症反应和细胞焦亡活性。

重组干扰素联合抗生素对宫颈上皮内瘤变LEEP术后HPV-DNA负荷量及Caspase-3、survivin表达的影响

目的观察重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊联合头孢拉定胶囊对宫颈上皮内瘤变(CIN)患者宫颈电环切除术(LEEP)后人乳头状瘤病毒(HPV) DNA负荷量及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 (Caspase-3)、生存素(survivin)蛋白表达的影响。方法选取2016年10月-2018年10月海南省人民医院妇科收治的CIN患者180例作为研究对象,CINⅠ级、CINⅡ级患者各90例,按照随机数字表法将CINⅠ级患者分为CINⅠA组、CINⅠB组、CINⅠC组,CINⅡ级患者分为CINⅡA组、CINⅡB组、CINⅡC组,各30例。CIN患者均接受LEEP治疗,CINⅠA组及CINⅡA组术后均口服抗生素头孢拉定胶囊,CINⅠB组及CINⅡB组术后均给予重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊阴道给药,CINⅠC组及CINⅡC组给予口服头孢拉定胶囊联合重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊阴道给药。观察各组患者临床疗效,术后6个月HPV转阴率,术前、术后6个月HPV-DNA负荷量及宫颈组织中Caspase-3蛋白、survivin蛋白阳性率。结果 CINⅠC组治愈率显著高于CINⅠA组、ⅠB组(χ2=4.216,P=0.040);CINⅡC组治愈率明显高于CINⅡA组、ⅡB组(χ2=6.585,P=0.037)。术后6个月各组患者HPV-DNA负荷量均明显少于术前(P均<0.001),且C组明显少于A组、B组(FCINⅠ=84.294,P<0.001;FCINⅡ=82.601,P<0.001)。术后6个月CINⅠC组患者HPV转阴率为93.3%,明显高于CINⅠA组的73.3%和CINⅠB组的70.0%(χ2=6.634,P=0.036),CINⅡC组为83.3%,显著高于CINⅡA组的60.0%和CINⅡB组的56.7%(χ2=6.104,P=0.047)。术后6个月各组患者Caspase-3、survivin蛋白阳性率均显著低于术前,且C组显著低于A组、B组(Caspase-3蛋白阳性率:χCINⅠ2=5.079,P=0.024;χCINⅡ2=4.286,P=0.038。survivin蛋白阳性率:χCINⅠ2=5.963,P<0.001;χCINⅡ2=4.295,P=0.040)。结论CIN患者LEEP术后联合使用重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊和头孢拉定胶囊效果明显优于单独应用,不仅可有效减少HPV-DNA负荷量,促进HPV转阴,还能明显降低Caspase-3、survivin蛋白阳性率。

电针对脑心综合征大鼠脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的观察电针对脑心综合征(cerebral-cardiac syndrome,CCS)大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达的影响。方法从70只健康SD大鼠中随机选择10只作为假手术组,其余60只用于CCS模型复制。选取造模成功的大鼠30只,分为模型组、电针组和电针非经非穴组,每组10只。采用胶原酶加肝素联合注射大鼠尾状核方法造模,假手术组向大鼠尾状核注入等量0.9%氯化钠注射液。于造模第1天开始电针,电针组选取水沟、风府、内关和心俞穴,电针非经非穴组选取臀部非经非穴点4处,每次20min,每天1次,连续3天。假手术组和模型组仅每天抓空1次。分别采用TUNEL法和免疫组化法检测血肿周围脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达。结果假手术组偶可见TUNEL细胞,Caspase-3少量表达;模型组血肿周围组织出现较多的TUNEL阳性细胞,Caspase-3大量表达;电针组TUNEL阳性细胞和Caspase-3表达均较模型组和电针非经非穴组明显减少(P<0.01)。结论电针可以抑制CCS大鼠脑组织细胞凋亡,其机制可能与下调血肿周围脑组织Caspase-3表达有关。

清心开窍方挥发油对AD大鼠大脑皮层及海马区GFAP及Caspase-3表达的影响

目的探讨清心开窍方及其挥发油对Aβ25-35杏仁核注射诱导痴呆(Alzheimer′s disease,AD)大鼠皮层及海马区胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)、淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,βAPP)及Caspase-3表达的影响。方法选取32只雄性SD大鼠,采用杏仁核注射Aβ25-35诱导AD大鼠模型,造模后随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组[盐酸多奈哌齐片,1.67mg/kg]、清心开窍方组(中药组,清心开窍方煎液12.67mL/kg)和挥发油组(挥发油,3.33mL/kg),另选取8只大鼠作为正常组,正常组、模型组给予等量双蒸水灌胃,各组每天干预1次,连续2周。给药结束后进行Morris水迷宫测试,记录各组大鼠水迷宫测试期间第1～5天逃避潜伏期及跨越平台次数。免疫组织化学法检测各组大鼠大脑皮层与海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3的表达。结果与模型组比较,各用药组大鼠第3～5天逃避潜伏期均缩短,皮层与海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3表达水平降低,跨越平台次数增加,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与西药组比较,中药组皮层及海马区Aβ表达水平降低、βAPP升高,挥发油组皮层及海马区GFAP、βAPP及Caspase-3均升高,挥发油组第3～5天逃避潜伏期明显延长,跨越平台次数减少,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论清心开窍方能明显改善AD大鼠学习记忆能力,其机制可能是通过降低皮层及海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3的表达发生作用。

拉莫三嗪对癫痫大鼠海马组织中Caspase-3和热休克蛋白70表达的影响

目的探讨不同剂量拉莫三嗪对戊四氮所致癫痫大鼠的行为学、海马组织形态学及Caspase-3和热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法选取清洁级健康6周龄雄性Sprague-Dawley大鼠100只,随机分为正常对照组、模型组和拉莫三嗪低、中、高剂量组,每组20只。正常对照组大鼠腹腔注射生理盐水(3.5 m L·kg-1),其余各组大鼠均腹腔注射戊四氮(35 mg·kg-1)并观察其行为学变化。以连续出现3次Ⅳ级及其以上发作作为点燃标准。全部点燃后,模型组和拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠给予戊四氮35 mg·kg-1每日1次腹腔注射维持点燃,拉莫三嗪低、中、高剂量大鼠组分别给予拉莫三嗪20、30、60 mg·kg-1·d-1灌胃,连续2周。在末次灌胃24 h内,对各组大鼠进行心脏灌注固定取海马组织,采用免疫组织化学法检测海马CA3区Caspase-3和HSP70蛋白表达。结果除正常对照组外,其余各组大鼠均有痫性发作。正常对照组大鼠海马结构完整,其他组大鼠海马神经元体积缩小,与周围组织有脱离,细胞核深染,有核分裂及核溶解,具有凋亡特征,多数细胞质呈空泡状,海马区神经元细胞排列散乱,无层次感,尼氏体减少,部分神经元丢失,细胞密度小。与正常对照组比较,模型组大鼠海马CA3区Caspase-3和HSP70阳性细胞数增多(P<0.01);拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3阳性细胞数均少于模型组,HSP70阳性细胞数均多于模型组(P<0.05);拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3阳性细胞数随着剂量的增加而减少,HSP70阳性细胞数随着剂量的增加而增加,拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3、HSP70阳性细胞数两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组大鼠海马CA3区Caspase-3及HSP70蛋白表达均增加(P<0.05)。拉莫三嗪低、中、高剂量组Caspase-3蛋白表达低于模型组(P<0.05),HSP70蛋白表达高于模型组(P<0.05)。拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3蛋白表达随着剂量的增加而降低,HSP70蛋白表达随着剂量的增加而增加,拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3、HSP70蛋白表达两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论拉莫三嗪对戊四氮所致癫痫大鼠的癫痫发作有保护作用,可以减轻大鼠癫痫发作的严重程度,其机制可能是通过降低海马组织中Caspase-3表达、增加HSP70表达来抑制癫痫过程中的神经元凋亡。

靶向shRNA抑制survivin基因对子宫内膜异位症裸鼠模型异位内膜caspase-3表达的影响

目的:利用慢病毒介导特异性短发夹状RNA(LV-shRNA)靶向沉默生存素基因,观察其对子宫内膜异位症裸鼠模型异位病灶中caspase-3表达的影响。方法:建立人子宫内膜裸鼠皮下种植模型,将LVshRNA、空载慢病毒及磷酸盐缓冲液分别注射至裸鼠皮下异位病灶,观察病灶生长情况。分别采用RT-PCR及免疫组化检测异位病灶中生存素、caspase-3 mRNA及蛋白的表达。结果:LV-shRNA处理组病灶体积、重量明显低于两对照组。与两对照组相比,LV-shRNA处理组生存素mRNA及蛋白的表达量明显降低,caspase-3的表达量明显升高,而生存素及caspase-3的表达在两对照组之间相比,差异均无统计学意义。结论:LVshRNA可明显抑制裸鼠异位子宫内膜病灶的生长,其机制可能与其通过下调生存素蛋白、激活下游的caspase-3诱导细胞凋亡有关。

FGF-1对TGF-β_1诱导的H9c2心肌细胞凋亡与Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9表达的关系研究

目的观察酸性成纤维细胞生长因子(FGF-1)对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的H9c2心肌细胞凋亡作用及对半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)表达的影响,并探讨可能机制。方法体外培养H9c2细胞,随机分为5组:模型组,肝素(Heparin)组、FGF-1组、FGF-1/Heparin组和正常对照组。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色分析检测H9c2细胞的存活率,TUNEL染色检测H9c2细胞凋亡指数和Western blot分析检测H9c2细胞Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9的表达。结果模型组H9c2细胞存活率与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),模型组降低;FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞存活率与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),FGF-1组和FGF-1/Heparin组均升高。模型组H9c2细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),模型组升高;FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),FGF-1组和FGF-1/Heparin组降低。结论FGF-1对TGF-β_1诱导的H9c2心肌细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与抑制Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达有关。

脓毒症所致脑功能障碍患者血清caspase-1、NLRP3变化及临床意义

目的探讨脓毒症所致脑功能障碍(SIBD)患者血清半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶-1(caspase-1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)水平变化及临床意义。方法选择2018年1月—2021年1月重庆大学附属涪陵医院神经外科收治SIBD患者60例为SIBD组,未合并脑功能障碍脓毒症患者72例为对照组。检测患者血清caspase-1、NLRP3水平,分析血清caspase-1、NLRP3与SIBD发病的关系及其诊断SIBD的价值。结果SIBD组患者入住ICU第1、3 d血清caspase-1、NLRP3水平均高于对照组(第1 d:t/P=4.233/<0.001、2.292/0.024;第3 d:t/P=9.473/<0.001、15.634/<0.001);脓毒症休克患者入住ICU第1、3 d血清caspase-1、NLRP3水平高于脓毒症患者(第1 d:t/P=8.631/<0.001、2.993/0.003;第3 d:t/P=23.134/<0.001、37.564/<0.001);高SOFA评分、高TNF-α、入住ICU第3 d高caspase-1、入住ICU第3 d高NLRP3是SIBD发病的危险因素[OR(95%CI)=1.385(1.132~1.695)、1.422(1.126~1.795)、1.303(1.078~1.576)、1.365(1.109~1.680)];入住ICU第3 d血清caspase-1、NLRP3及二者联合诊断SIBD的曲线下面积为0.693、0.755、0.884,二者联合高于单独检测(Z/P=3.642/<0.001、2.586/0.010)。结论SIBD患者血清caspase-1、NLRP3水平均明显升高,高水平caspase-1、NLRP3与SIBD发病有关,可作为SIBD诊断的辅助指标。

脑缺血时半乳糖凝集素-3对大鼠脑皮质中bcl-2、BAX及caspase-3表达的影响

目的通过脑缺血/再灌注损伤模型,测定脑缺血时半乳糖凝集素-3(Gal-3)对B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)表达的影响,从而为脑缺血的发病机制提供一定的实验依据。方法雄性SD大鼠18只,建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血1.5 h,再灌注至24 h。采用随机分组法分为假手术组(sham)、缺血/再灌注组(I/R)和Gal-3 RNA干扰组(siRNA)。采用real-time PCR及western blot检测大鼠脑皮质中Gal-3、bcl-2、BAX及caspase-3 mRNA及蛋白表达变化。结果大鼠脑缺血/再灌注损伤后,脑皮质中Gal-3及bcl-2 mRNA及蛋白表达明显下调,分别为0.38、0.47和1.310、1.299;BAX及caspase-3 mRNA及蛋白表达明显上调,分别为1.41、1.55及1.076、1.155。而Gal-3 RNA干扰后,Gal-3及bcl-2 mRNA及蛋白表达明显下调,分别为0.24、0.14及1.014、1.058;BAX及caspase-3 mRNA及蛋白表达明显上调,分别为1.76、1.88及1.480、1.515。结论 Gal-3可能通过上调bcl-2、下调caspase-3及BAX mRNA及蛋白的表达,参与脑缺血/再灌注损伤的病理过程。

VEGF及Caspase-3在早产儿脑室周围-脑室内出血后继发脑损伤中的作用

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)是否参与早产儿脑室周围-脑室内出血(PV-IVH)后的继发性脑损伤。方法采用丙三醇腹腔注射法(Georgiadis P)制作早产兔PV-IVH模型,分为PV-IVH模型组(18只)及对照组(18只)。两组于处理后24、48、72 h 3个时间段分别检测VEGF、Caspase-3阳性细胞、凋亡细胞表达。结果 PV-IVH模型组VEGF阳性细胞数在不同时相均明显多于对照组,PV-IVH模型组VEGF平均阳性细胞表达率在处理后24、48、72 h均高于对照组(P<0.05,P<0.01),组内48、72 h均低于24 h(P<0.01)、72 h低于48 h(P<0.05),对照组VEGF平均阳性细胞表达率在处理后24、48、72 h两两比较,差异无统计学意义(P>0.05);PV-IVH模型组Caspase-3阳性细胞数在不同时相均明显多于对照组,PV-IVH模型组Caspase-3平均阳性细胞表达率在处理后24、48、72 h均高于对照组(P<0.01),组内48 h高于24 h(P<0.01)、72 h低于24、48 h(P<0.01),对照组Caspase-3阳性细胞的表达率在处理后24、48、72 h两两比较,差异无统计学意义(P>0.05);PV-IVH模型组凋亡细胞数在处理后24、48 h明显多于对照组,处理后72 h凋亡细胞数与对照组比较无明显变化,PV-IVH模型组凋亡细胞平均表达率在处理后24、48 h均较高于对照组(P<0.01),处理后72 h与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),组内48 h高于24、72 h(P<0.01)、72 h低于24 h(P<0.01),对照组脑组织凋亡细胞的平均表达率在处理后24、48、72 h两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PV-IVH后,VEGF阳性细胞数目显著增加,提示VEGF参与了PV-IVH后继发性脑损伤,可能发挥了脑保护作用;Caspase-3阳性细胞、凋亡细胞数目明显增多,且Caspase-3阳性细胞与凋亡细胞表达趋势一致,提示Caspase-3参与PV-IVH后继发性脑损伤。

绿原酸通过Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨绿原酸(CGA)对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及对Bcl-2相关X蛋白(Bax)/B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)信号通路的影响。方法:分别用含有0、250、500、750和1 000μmol/L的CGA培养液处理喉癌Hep-2细胞24、48 h,寻找出最适宜CGA的浓度和处理时间;将喉癌Hep-2细胞分为对照组(正常培养的喉癌Hep-2细胞)、CGA低浓度组(750μmol/L CGA培养液)、CGA高浓度组(1 000μmol/L CGA培养液)和CGA高浓度+通路抑制剂组(1 000μmol/L CGA培养液+50μmol/L Bax/Bcl-2/Caspase-3通路抑制剂Bax inhibitor peptide V5)。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定喉癌Hep-2细胞增殖抑制率,通过流式细胞仪检测喉癌Hep-2细胞凋亡率,采用蛋白质印迹法检测喉癌Hep-2细胞中增殖相关蛋白(ki-67)、凋亡相关蛋白(p53)及Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路相关蛋白的表达情况。结果:与对照组相比,CGA低、高浓度组喉癌Hep-2细胞增殖抑制率、细胞凋亡率,p53、Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著升高,ki-67、Bcl-2蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);且CGA高浓度组喉癌Hep-2细胞增殖抑制率、细胞凋亡率,p53、Bax和Caspase-3蛋白表达水平高于CGA低浓度组,ki-67、Bcl-2蛋白表达水平低于CGA低浓度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与CGA高浓度组相比,CGA高浓度+通路抑制剂组喉癌Hep-2细胞增殖抑制率、细胞凋亡率,p53、Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著降低,ki-67、Bcl-2蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:CGA可显著抑制喉癌Hep-2细胞的增殖,并促进其凋亡,可能与Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路激活有关。

黄竹清脑颗粒对痰热腑实证脑出血大鼠急性期脑组织中Caspase-3表达的影响

目的:探讨黄竹清脑颗粒对痰热腑实证脑出血模型大鼠急性期脑组织中半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)表达的影响。方法:采用SD大鼠自体粪便灌胃配合胶原酶Ⅶ-肝素混合液立体定位注射的方法复制痰热腑实证脑出血大鼠模型,免疫组化法测定大鼠脑组织中Caspase-3表达的变化。结果:①黄竹清脑颗粒可明显减轻痰热腑实证脑出血大鼠喉中痰鸣、鼻分泌物多,粪便干结,烦躁等症状,并可改善大鼠脑出血后的神经体征;②黄竹清脑颗粒大、中剂量组明显优于清开灵颗粒组(P<0.05)。结论:黄竹清脑颗粒能降低大鼠脑出血后血肿周围神经元活化caspase-3的表达,阻止神经元的凋亡,可能是其保护脑神经细胞的作用机理之一。

苓桂术甘汤加味联合卡托普利对慢性心力衰竭大鼠BNP、ET-1、Caspase-3水平影响的研究

目的:探讨苓桂术甘汤加味联合卡托普利对心力衰竭大鼠血清B型钠尿肽(BNP)、内皮素-1(ET-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)水平的影响。方法:选取40只SPF级SD大鼠,连续1周腹腔注射异丙肾上腺素,建立慢性心力衰竭大鼠模型,左室射血分数(LVEF)≤60%则造模成功。将造模成功的SD大鼠随机分为心衰组、中药组、西药组、联合组进行观察。结果:光镜下观察各组大鼠心肌病理形态学变化,与心衰组比较,给予药物治疗的三组心肌病理学形态有所改善,血清BNP、ET-1、Caspase-3水平降低,LVEF升高,心脏质量指数下降。结论:苓桂术甘汤加味联合卡托普利能减轻慢性心力衰竭大鼠心肌细胞的病理损伤,降低血清BNP、ET-1、Caspase-3水平及心脏质量指数,提高LVEF水平,改善心功能。

通痹方热奄包外敷对家兔退变颈椎间盘细胞凋亡相关基因Caspase-3和Bcl-2 mRNA的影响

目的:探讨通痹方热奄包外敷对家兔退变椎间盘细胞凋亡相关基因天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA表达的影响。方法:普通级新西兰大白兔18只随机均分为空白组(正常兔,不做任何干预)、模型组(颈椎病模型兔,不予任何治疗)及热敷组(颈椎病模型兔,通痹方热奄包外敷治疗),各组家兔于造模前、造模第30天及治疗结束后拍摄颈椎X线并评分;治疗15次后留取各组家兔C3-4和C4-5椎间盘,采用苏木精-伊红(HE)染色观察C3-4椎间盘组织形态学变化并评分,实时荧光定量法检测C4-5椎间盘Caspase-3和Bcl-2 mRNA相对表达量。结果:模型组和热敷组家兔造模后颈椎X线评分分别较空白组升高,热敷组家兔治疗后颈椎X线积分改善程度较模型组大,差异均有统计学意义(P<0.05);HE染色结果显示,模型组家兔C3-4椎间盘评分比空白组升高,热敷组评分比模型组降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白组相比,模型组家兔C4-5椎间盘内Casepase-3 mRNA表达升高、Bcl-2 mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,热敷组家兔椎间盘内Casepase-3 mRNA表达降低,Bcl-2 mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:通痹方热敷可通过上调Bcl-2 mRNA表达、抑制Casepase-3 mRNA表达减少椎间盘细胞凋亡,延缓椎间盘退变。

caspase-3和caspase-8在铅中毒大鼠心肌细胞中的表达特点研究

目的构建铅中毒大鼠模型,观察心脏中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(cysteinyl aspartate specific proteinase-8,caspase-8)蛋白及mRNA的表达特点。方法 40只SD(Sprague Dawley)大鼠在适应性喂养2周后采用数字表法随机分为正常组(无铅水)、低剂量铅中毒组(0.5g/L醋酸铅水溶液)、中剂量铅中毒组(1g/L醋酸铅水溶液)和高剂量铅中毒组(2g/L醋酸铅水溶液),中毒1个月后处死,收集血液和心脏,检测血铅、心铅、心功能指标[肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)]、血清炎性指标[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)和白介素-8(interleukin-8,IL-8)]和心肌caspase-3和caspase-8蛋白及mRNA的表达特点。结果心肌组织病理学显示,正常组心肌纤维排列整齐,低剂量铅中毒和中剂量铅中毒组有一定紊乱,高剂量铅中毒组则明显排列无序,细胞界限不清晰;与正常组比较,低剂量、中剂量和高剂量铅中毒组血铅、心铅、TNF-α、IL-6和IL-8明显升高(P<0.05),与低剂量铅中毒组比较,中剂量和高剂量铅中毒组血铅、心铅、TNF-α、IL-6和IL-8明显升高(P<0.05),此外高剂量铅中毒组血铅、心铅、TNF-α、IL-6和IL-8也明显高于中剂量铅中毒组(P<0.05);与正常组比较,低剂量和中剂量铅中毒组CK、CK-MB、LDH、caspase-3与caspase-8蛋白和mRNA表达差异无统计学意义,高剂量铅中毒组明显升高(P<0.05),此外高剂量铅中毒组明显高于低剂量和中剂量铅中毒组(P<0.05)。结论 2g/L醋酸铅水溶液中毒大鼠可引起其心肌中caspase-3和caspase-8表达异常,诱发血液炎性介质TNF-α、IL-6和IL-8的升高,最终造成心肌损伤。

血清sST2、Caspase-3、HSP70与ACMP患者病情和迟发性脑病的关系

目的探讨血清可溶性致癌抑制因子2(sST2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、热休克蛋白70(HSP70)与急性一氧化碳中毒(ACMP)患者病情和迟发性脑病(DEACMP)的关系。方法选取2020年10月至2022年1月盘锦市中心医院收治的110例ACMP患者作为ACMP组,根据一氧化碳中毒程度分为轻度组、中度组、重度组;另选取同期52例体检健康志愿者作为对照组。随访6个月后,根据ACMP患者是否发生DEACMP分为DEACMP组和非DEACMP组。收集ACMP患者临床资料,采用酶联免疫吸附试验检测血清sST2、Caspase-3、HSP70水平。采用多因素Logistic回归分析ACMP患者发生DEACMP的影响因素,应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清sST2、Caspase-3、HSP70对ACMP患者发生DEACMP的诊断效能。结果ACMP组血清sST2、Caspase-3、HSP70水平均高于对照组(P<0.05)。重度组血清sST2、Caspase-3、HSP70水平高于中度组、轻度组(P<0.05),中度组血清sST2、Caspase-3、HSP70水平高于轻度组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄增加、高血压、意识障碍时间>48 h、血CO暴露时间延长、血碳氧血红蛋白(COHb)饱和度升高及血清sST2、Caspase-3、HSP70水平升高是ACMP患者发生DEACMP的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清sST2、Caspase-3、HSP70联合检测诊断ACMP患者发生DEACMP的AUC为0.913,大于sST2、Caspase-3、HSP70单项检测诊断ACMP患者发生DEACMP的AUC(分别为0.783、0.788、0.785),差异有统计学意义(P<0.05)。结论ACMP患者血清sST2、Caspase-3、HSP70水平升高,与中毒程度和DEACMP发生有关,血清sST2、Caspase-3、HSP70水平联合检测诊断ACMP患者发生DEACMP的价值较高。

血清UCH-L1、Caspase-3水平对重度脑损伤患者预后的评估价值

目的分析UCH-L1、Caspase-3水平对重度脑损伤(SBI)患者预后的评估价值。方法选取我院收治的115例SBI患者作为SBI组,另选取同期健康者70例作为对照组,检测两组的血清UCH-L1、Caspase-3水平,分析UCH-L1、Caspase-3与SBI患者预后的关系。结果SBI组血清UCH-L1、Caspase-3水平高于对照组(P<0.05)。死亡组的血清UCH-L1、Caspase-3、年龄、中线移位、Marshall CT分级、脑池异常比例高于存活组,而入院GCS评分低于存活组(P<0.05)。Logistic多因素回归分析显示UCH-L1、Caspase-3、Marshall CT分级是SBI患者死亡的高危因素,入院GCS评分是保护因素(P<0.05)。UCH-L1、Caspase-3预测SBI患者死亡的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.775、0.814,低于二者联合诊断的0.893(P<0.05)。结论SBI患者血清UCH-L1、Caspase-3是其短期内死亡的高危因素,二者联合检测有助于预后的早期评估。

大豆异黄酮对阿尔茨海默病大鼠海马RAGE介导的信号转导通路的影响

目的观察大豆异黄酮(soybean isoflavones)对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠高级糖化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)介导的信号转导系统的影响。方法采用β淀粉样蛋白25-35片段(amyloidβ25-35,Aβ25-35)双侧海马注射建立AD大鼠模型,60只大鼠随机分为模型组、大豆异黄酮高剂量组[30mg/(kg·d)]、大豆异黄酮低剂量组[10mg/(kg·d)]、雌激素组[0.4mg/(kg·d)]及假手术组,每组12只。大豆异黄酮高、低剂量组和雌激素组造模后3天灌胃给药(2mL/只),模型组与假手术组给予等体积的0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)灌胃,连续21天。酶联免疫吸附法观察各组大鼠海马组织RAGE、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量。分光光度法检测大鼠海马组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine-containing aspartate-specific protease-3,Caspase-3)活性。免疫组织化学法观察大鼠海马组织磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(phosphorylation extracellular signal-regulatedkinase1/2,P-ERK1/2)的表达。结果与模型组比较,大豆异黄酮可显著降低AD大鼠海马RAGE蛋白、IL-6含量、Caspase-3活性及ERK1/2蛋白磷酸化水平(P<0.01)。结论大豆异黄酮对AD大鼠海马组织RAGE介导的炎症信号通路具有下调作用,减弱炎症反应,降低Aβ的神经毒性,抵抗海马神经元凋亡。

X连锁凋亡抑制蛋白通路在金黄色葡萄球菌α-毒素诱导人外周血单核细胞凋亡过程中的作用

目的研究金黄色葡萄球菌的主要毒力因子α-毒素感染人外周血单核细胞后细胞的凋亡率及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、凋亡抑制蛋白1/2(cIAP1/2)、Survivin、Bcl-2、Bax和半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)等的表达。方法以Annexin V异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染流式细胞仪检测人外周血单核细胞的凋亡率,Western blot法检测XIAP、cIAP1/2、Survivin、Bcl-2、Bax和caspase-3等的表达,采用荧光比色法测定细胞内caspase-3蛋白酶活性。结果α-毒素能够以时间依赖的方式诱导人外周血单核细胞凋亡,α-毒素感染30、60和90 min凋亡率与感染0 min比较,其差异有统计学意义(P<0.05或P<0.001)。随着作用时间的延长,XIAP、cIAP1/2、Survivin和Bcl-2表达逐渐下降,而Bax和caspase-3表达逐渐增加。结论α-毒素可诱导人外周血单核细胞凋亡,XIAP信号通路在金黄色葡萄球菌的致病过程中起重要作用。

CASP 8基因-6526NI/D多态性与2型糖尿病易感性的关系

目的：分析半胱氨酸蛋白酶8（CASP8）基因-6526NI／D多态性与2型糖尿痛（T2DM）易感性的关系。方法：采用PCR—RFLP技术结合DNA测序检测414例正常人和410例2型糖尿患者CASP8基因-6526NI／D的多态性。结果：对照组和糖尿病组I／I、I／D和D／D的基因型频率分别为56．5％、38．9％、4．6％和58．0％、32．9％、9．0％．差异有统计学意义（P〈0．05）。D／D基因型发生T2DM的风险为I／I基因型的1．916倍（95％CI=1．199-3．054，P〈0．05）。D／D基因型的空腹血糖高于I／D和I／I基因型（P〈0．05）。结论：CASP8基因-6526NI／D多态性与2型糖尿病的发生相关。