依托咪酯对视神经损伤成年大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、脑源性神经营养因子蛋白表达的影响

目的:探讨依托咪酯对视神经损伤成年大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达的影响。方法:选择成年雄性SD大鼠40只,随机选8只为正常照组,其余32只采用动脉夹夹持法损伤视神经建立视神经损伤模型并分组,即模型组(视神经损伤大鼠),依托咪酯低、中、高剂量组(依托咪酯腹腔注射),剂量分别为2、4、6 mg/kg。分析比较干预后各组大鼠眼压变化。并行HE染色观察视网膜组织结构,比较各组大鼠视网膜神经节细胞(RCGs)存活数目及存活率,Western blot法检测视网膜组织中Caspase-3、BDNF蛋白表达。结果:模型组、依托咪酯各组眼压高于正常组,依托咪酯各组末次给药后眼压降低,且呈剂量依赖性(均P<0.05)。模型组大鼠视网膜水肿增厚,以神经纤维层最为明显,且有空泡,RGC细胞肿胀,内、外核层细胞数量减少,排列紊乱。依托咪酯各组视网膜病理损伤均有改善,高剂量组好于中剂量组,中剂量组好于低剂量组。与正常组比较,模型组大鼠RCGs存活数目减少(P<0.05),与模型组比较,依托咪酯各组RCGs存活数目增多(P<0.05)。依托咪酯高剂量组RCGs存活数目、相对存活率高于中、低剂量组(均P<0.05)。正常组大鼠视网膜组织中BDNF蛋白表达高于模型组,Caspase-3低于模型组,依托咪酯各组视网膜组织中BDNF升高,Caspase-3下降,均呈剂量依赖性(均P<0.05)。结论:Caspase-3蛋白在大鼠视神经损伤中表达升高,BDNF蛋白表达降低,依托咪酯干预能够促进视网膜RGCs存活,对视神经损伤具有保护作用。

血清白细胞介素1β、半胱胺酸天冬氨酸蛋白水解酶3水平与颅内动脉瘤患者术后发生脑血管痉挛的关系

目的探讨血清白细胞介素1β(IL-1β)、半胱胺酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)水平与颅内动脉瘤患者术后发生脑血管痉挛的关系。方法选取2020年1月至2022年1月于北京市平谷区医院及首都医科大学附属北京天坛医院拟行介入栓塞术手术治疗的80例颅内动脉瘤患者,根据术后脑血管痉挛发生情况将其分为发生组(n=33)和未发生组(n=47)。收集所有患者的基线资料,记录所有患者的实验室指标,采用Pearson相关性检验分析血清IL-1β、Caspase-3之间的相关性,采用Logistic回归模型分析颅内动脉瘤患者术后发生脑血管痉挛的影响因素,绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析血清IL-1β、Caspase-3对颅内动脉瘤患者术后发生脑血管痉挛的预测价值。结果发生组患者血清IL-1β、Caspase-3水平、白细胞计数均高于未发生组患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素分析结果显示,血清IL-1β、Caspase-3及白细胞计数水平升高均是颅内动脉瘤患者术后脑血管痉挛发生的危险因素(OR﹥1,P﹤0.05)。Pearson相关性检验结果显示,血清IL-1β与血清Caspase-3之间呈正相关(r=0.853,P﹤0.01)。血清IL-1β、Caspase-3及两者联合预测颅内动脉瘤患者术后发生脑血管痉挛的曲线下面积(AUC)分别为0.784、0.783、0.845,预测价值均较高,两者联合预测的AUC最大。结论颅内动脉瘤患者术后脑血管痉挛发生风险较高,血清IL-1β、Caspase-3水平升高与颅内动脉瘤患者术后脑血管痉挛发生有关,且两者联合预测术后脑血管痉挛发生的效能较高,可能成为临床预测术后发生脑血管痉挛及治疗靶点的生物学指标。

老年慢性心力衰竭患者血清microRNA-208a、CASP3与心室重构和预后的关系

目的探讨老年慢性心力衰竭(CHF)患者血清microRNA-208a(miR-208a)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(CASP3)与心室重构和预后的关系。方法选取2019年1月—2021年9月新余市中医院收治的155例老年CHF患者为CHF组,另选取同期该院体检健康者57例为对照组,CHF组患者根据预后情况分为预后不良组(58例)和预后良好组(97例)。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-208a mRNA相对表达量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CASP3、B型脑利钠肽(BNP)水平;采用Pearson/Spearman相关系数分析老年CHF患者血清miR-208a、CASP3与BNP、右心室内径(RVD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左室射血分数(LVEF)、左心室质量指数(LVMI)的相关性;多因素Logistic回归分析老年CHF患者预后不良的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-208a、CASP3对老年CHF患者预后不良的预测价值。结果CHF组血清miR-208a、CASP3、BNP水平,LVMI高于对照组,RVD、LVEDD大于对照组,LVFS、LVEF低于对照组(P<0.05)。Pearson/Spearman相关性分析结果显示,老年CHF患者血清miR-208a、CASP3与BNP、RVD、LVEDD、LVMI呈正相关(r/rs=0.577、0.627、0.535、0.619和0.619、0.721、0.601、0.631,均P<0.05),与LVFS、LVEF呈负相关(r/rs=-0.555、-0.568和-0.655、-0.700,均P<0.05),血清miR-208a与CASP3呈正相关(rs=0.638,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,NYHA≥Ⅲ级[OR=3.383(95%CI:1.358,8.423)]、BNP[OR=1.006(95%CI:1.002,1.009)]、LVMI[OR=1.114(95%CI:1.005,1.233)]、miR-208a[OR=1.203(95%CI:1.096,1.321)]、CASP3[OR=1.196(95%CI:1.088,1.315)]为老年CHF患者预后不良的独立危险因素(P<0.05),LVEF[OR=0.867(95%CI:0.753,0.998)]为独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-208a、CASP3单独及联合预测老年CHF患者预后不良的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.785、0.783和0.867。结论血清miR-208a、CASP3与老年CHF患者心室重构和预后密切相关,可能成为老年CHF患者预后不良的辅助预测指标。

一氧化碳中毒后迟发性脑病患者血清Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9水平与病情、预后的关系

目的 探讨急性一氧化碳中毒后迟发性脑病(DEACMP)患者血清B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)水平与病情、预后的关系。方法 选取2019年1月—2022年9月收治的DEACMP 92例作为DEACMP组,急性一氧化碳中毒(ACMP)后未发生DEACMP 50例作为ACMP组,健康体检者50例作为健康体检组。比较DEACMP组、ACMP组和健康体检组3组,DEACMP患者急性期和恢复期,以及预后不良和预后良好DEACMP患者血清Bcl-2和Caspase-3、Caspase-9水平,采用Pearson相关性分析探讨DEACMP患者血清Bcl-2和Caspase-3、Caspase-9与长谷川痴呆量表(HDS)、格拉斯哥预后量表(GOS)的相关性,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估血清Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9单独及联合检测对DEACMP患者预后预测价值。结果 DEACMP组、ACMP组和健康体检组血清Bcl-2和Caspase-3、Caspase-9依次降低(P<0.05)。DEACMP患者血清Bcl-2和Caspase-3、Caspase-9急性期均高于恢复期,预后不良均高于预后良好(P<0.01)。Pearson相关性分析显示,DEACMP患者血清Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9与HDS、GOS均呈负相关(P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,血清Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9单独及联合检测对DEACMP患者预后不良预测的曲线下面积分别为0.859、0.780、0.798和0.921。结论 DEACMP患者血清Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9水平与病情和预后相关,三者联合检测对DEACMP患者预后预测价值较高。

lncRNA MEG3调控NLRP3/caspase-1/GSDMD通路影响三阴性乳腺癌对紫杉醇的敏感性

目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)调控含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLR family,Pyrin domain containing protein 3,NLRP3)/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase 1,caspase-1)/消皮素D(gasdermin D,GSDMD)通路对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)对紫杉醇(paclitaxel,PTX)敏感性的影响。方法:通过逐渐增加PTX剂量间歇作用的方法诱导TNBC耐药细胞MDA-MB-231/R,qRT-PCR检测lncRNA MEG3表达;将MDA-MB-231细胞分为对照组(未转染+PTX)、Vector组(空载体+PTX)、pcDNA3.1-MEG3组(pcDNA3.1-MEG3表达载体+PTX)、pcDNA3.1-MEG3+BAY11-7082组(pcDNA3.1-MEG3表达载体+PTX+5μmol/L NLRP3抑制剂BAY11-7082),qRT-PCR检测转染后lncRNA MEG3表达;CCK-8法检测MDA-MB-231细胞增殖情况;通过免疫荧光染色和扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)观察MDA-MB-231细胞焦亡情况;Western blot检测MDA-MB-231细胞中NLRP3/caspase-1/GSDMD通路蛋白表达;体内成瘤实验检测肿瘤质量。结果:与MDA-MB-231细胞相比,MDA-MB-231/R细胞中lncRNA MEG3表达水平显著降低(P<0.05);与对照组相比,pcDNA3.1-MEG3组细胞增殖抑制率、GSDMD-N+细胞数量、细胞焦亡、细胞凋亡率及NLRP3、cleaved-caspase 1/caspase-1、GSDMD-N/GSDMD表达水平显著增加,IC50、肿瘤质量显著降低(P<0.05);与pcDNA3.1-MEG3组相比,pcDNA3.1-MEG3+BAY11-7082组细胞增殖抑制率、GSDMD-N+细胞数量、细胞焦亡、细胞凋亡率及NLRP3、cleaved-caspase 1/caspase-1、GSDMD-N/GSDMD表达水平显著降低,IC50、肿瘤质量显著增加(P<0.05)。结论:上调lncRNA MEG3表达可通过激活NLRP3/caspase-1/GSDMD通路,促进MDA-MB-231细胞焦亡,以此增加TNBC对PTX的敏感性。

乌鳢半胱氨酸蛋白酶3基因克隆及表达分析

【目的】克隆和表达分析乌鳢(Channa argus)的半胱氨酸蛋白酶(Cysteinyl aspartate specific proteinase)3基因(caspase-3),为探究该基因在乌鳢机体中的免疫应答作用及在其他鱼类免疫上的作用提供理论依据。【方法】根据NCBI公布的乌鳢基因组信息,对乌鳢的caspase-3基因序列进行克隆,对推导的caspase-3氨基酸序列进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR检测caspase-3基因在健康乌鳢各组织中的表达分布及在不同刺激物[鰤鱼(Seriola quinqueradiata)诺卡氏菌(Nocardia seriolae)、脂多糖(LPS)和聚肌胞苷酸(PolyI:C)]刺激下的时序表达情况。【结果】caspase-3基因序列全长855 bp,编码284个氨基酸残基,蛋白分子量为31.069 kD,理论等电点(p I)为6.17。caspase-3蛋白含有1个CASc结构域。多序列比对结果显示,乌鳢的caspase-3氨基酸序列与秘鲁笛鲷(Lutjanus peru)的caspase-3氨基酸序列相似度最高,达81.7%;系统发育进化树分析结果表明,乌鳢的caspase-3氨基酸序列与秘鲁笛鲷的caspase-3氨基酸序列聚为一支。实时荧光定量PCR检测结果表明,乌鳢caspase-3基因在肌肉、皮肤、鳃、心脏、胸腺、脑、头肾、脾脏、肝脏和血液等组织中均有表达,其中在脾脏和头肾的表达量最高;在不同刺激物刺激下,caspase-3基因在乌鳢脾脏、肾脏、血液和肝脏组织中的表达量均发生显著变化(P<0.05);用灭活鰤鱼诺卡氏菌、LPS和PolyI:C孵育乌鳢头肾白细胞后,caspase-3基因表达量均显著升高,且具有明显的时间依赖性。【结论】乌鳢caspase-3基因可能在乌鳢抵御细菌和病毒入侵的免疫反应中发挥着重要作用。

CaMKⅡ对多囊卵巢综合征模型小鼠颗粒细胞中Caspase-3表达的影响

目的:探讨钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在正常小鼠卵巢和多囊卵巢综合征(PCOS)小鼠卵巢组织中的差异表达,阐明CaMKⅡ对PCOS小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法:用蓖麻油溶解脱氢表雄酮(DHEA)皮下注射诱导PCOS小鼠模型(PCOS组),对照组小鼠注射等体积蓖麻油,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测2组小鼠血清中睾酮水平,阴道涂片监测2组小鼠发情周期变化,HE染色观察2组小鼠卵巢组织病理形态表现,免疫荧光染色法检测2组小鼠卵巢组织中CaMKⅡ蛋白定位和荧光强度,Western blotting法检测2组小鼠卵巢组织中CaMKⅡ和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)蛋白表达水平。采用短发夹RNA (sh-RNA)-CaMKⅡ慢病毒转染人卵巢颗粒细胞(KGN细胞)建立稳转体系,分为空白对照组、 sh-CaMKⅡ-1组和sh-CaMKⅡ-2组,Western blotting法检测各组KGN细胞中CaMKⅡ和Caspase-3蛋白表达水平。结果:与对照组比较,PCOS组小鼠血清中总睾酮和游离睾酮水平明显升高(P<0.01),发情周期紊乱,停滞于发情中期,卵巢组织中出现颗粒细胞层数较少的空泡状卵泡,表明PCOS小鼠模型建立成功。CaMKⅡ蛋白在小鼠卵巢组织的卵母细胞、颗粒细胞和间质细胞中均有表达;与对照组比较,PCOS组小鼠卵巢组织中CaMKⅡ荧光强度和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与空白对照组比较,sh-CaMKⅡ-1和sh-CaMKⅡ-2组KGN细胞中CaMKⅡ蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:PCOS小鼠卵巢组织中CaMKⅡ蛋白表达水平降低诱导Caspase-3蛋白表达水平升高,进而促进颗粒细胞凋亡。

麻黄水提物调控ROS/NLRP3/Caspase-1通路对肺炎链球菌肺炎大鼠肺损伤的影响

目的研究麻黄水提物通过调控活性氧(ROS)/Nod样受体蛋白3(NLRP3)/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)通路减轻肺炎链球菌肺炎大鼠肺损伤的作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、麻黄水提物低、中、高剂量(100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg)组、溶剂对照组(110 ml/kg DMSO)、模型+溶剂组、麻黄水提物高剂量+溶剂组、麻黄水提物高剂量+三甲胺N-氧化物(TMAO,110 mg/kg)组。采用气管滴入肺炎链球菌液的方式建立肺炎模型,造模后24 h各组给予药物灌胃、连续10 d。末次灌胃后24 h,检测肺组织病理改变,血清及肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,肺组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量、ROS活力及NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N表达水平。结果模型组大鼠出现肺泡间隔增厚、炎症细胞浸润等肺损伤病理改变,血清及BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α含量、肺组织中MDA含量、ROS活力、NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N表达水平均高于对照组,肺组织中SOD含量低于对照组(P<0.05);麻黄水提物低、中、高剂量组大鼠的肺损伤减轻,血清及BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α含量、肺组织中MDA含量、ROS活力、NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N表达水平均低于模型组,肺组织中SOD含量高于模型组(P<0.05);麻黄水提物高剂量+TMAO组大鼠的肺损伤加重,血清及BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α含量、肺组织中MDA含量、ROS活力、NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N表达水平均高于麻黄水提物高剂量+溶剂组,肺组织中SOD含量低于麻黄水提物高剂量+溶剂组(P<0.05)。结论麻黄水提物通过抑制ROS/NLRP3/Caspase-1通路介导的炎症反应、氧化应激及细胞焦亡减轻肺炎链球菌肺炎大鼠的肺损伤。

心肺复苏后大鼠神经细胞Caspase-3表达与细胞凋亡关系的实验研究

目的探讨心肺复苏后大鼠脑组织Caspase-3表达与细胞凋亡的关系。方法建立窒息联合冰氯化钾致大鼠心脏骤停／心肺复苏（CA／CPR）的动物模型，于各时相点断头留取脑组织，采用免疫组化的方法观察CPR后脑组织Caspase-3蛋白的表达，TUNEL检测神经细胞凋亡。结果对照组脑组织内仅有少量TUNEL阳性细胞；ROSC后3h出现表达阳性细胞，ROSC后6h表达开始增多，ROSC后12h进一步上升（P〈0．05），其后各组均处于高水平表达。Caspase-3表达均在ROSC后24h显著增加，直至ROSC后72h，与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．01），Speamaa等级相关检验Caspase-3表达与细胞凋亡明显相关（r=0．909）。结论CA／CPR后大鼠脑线粒体Caspase-3蛋白高表达可能是细胞凋亡增加的原因之一。

基于死亡受体途径探讨脾肾双补方对离体人早孕绒毛滋养细胞HTR-8凋亡蛋白TNF-α、Caspase-3的影响

目的：探索脾肾双补方对人早孕绒毛滋养细胞中凋亡相关蛋白TNF-α、Caspase-3表达的影响。方法：采用动物含药血清,体外分组培养HTR-8细胞48 h,采用免疫组织化学法检测各组细胞凋亡蛋白TNF-α、Caspase-3表达的情况。结果：与空白对照组比,脾肾双补方高、中剂量组HTR-8细胞凋亡蛋白TNF-α、Caspase-3的表达均降低（P 〈0. 05）,地屈孕酮组HTR-8细胞TNF-α、Caspase-3的表达显著低于空白对照组（P 〈0. 01）;与地屈孕酮组比,脾肾双补方高、中剂量组TNF-α、Caspase-3的表达差异无统计学意义（P〉0. 05）;脾肾双补方高、中剂量组间TNF-α的表达差异无统计学意义（P〉 0. 05）。结论：脾肾双补方含药血清可以促进人早孕绒毛滋养细胞数目增加,其机制可能是：减少人早孕绒毛滋养细胞的凋亡,保护细胞存活,继而有利于早期妊娠的维持,其作用途径可能是：脾肾双补方含药血清通过降低细胞凋亡诱导蛋白TNF-α的表达,抑制死亡受体途径,减少凋亡执行蛋白Caspase-3的表达,从而抑制人早孕绒毛滋养细胞的凋亡,保护细胞存活,维持妊娠。

FGF-1对TGF-β_1诱导的H9c2心肌细胞凋亡与Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9表达的关系研究

目的观察酸性成纤维细胞生长因子(FGF-1)对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的H9c2心肌细胞凋亡作用及对半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)表达的影响,并探讨可能机制。方法体外培养H9c2细胞,随机分为5组:模型组,肝素(Heparin)组、FGF-1组、FGF-1/Heparin组和正常对照组。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色分析检测H9c2细胞的存活率,TUNEL染色检测H9c2细胞凋亡指数和Western blot分析检测H9c2细胞Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9的表达。结果模型组H9c2细胞存活率与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),模型组降低;FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞存活率与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),FGF-1组和FGF-1/Heparin组均升高。模型组H9c2细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),模型组升高;FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),FGF-1组和FGF-1/Heparin组降低。结论FGF-1对TGF-β_1诱导的H9c2心肌细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与抑制Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达有关。

RNA干扰黏着斑激酶表达对宫颈癌细胞增殖、侵袭、迁移能力、细胞凋亡及Caspase-3相对表达量的影响

目的 探讨RNA干扰黏着斑激酶(FAK)表达对宫颈癌细胞增殖、侵袭、迁移能力、细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)相对表达量的影响。方法 将宫颈癌HeLa细胞株分为观察组、阴性对照组和空白对照组,观察组和阴性对照组分别转染RNA干扰FAK质粒和空白载体质粒,空白对照组不进行任何处理。比较3组的细胞增殖活性、凋亡指数、侵袭穿透指数和迁移指数,以及Caspase-3与FAK蛋白的相对表达量。结果 观察组的细胞增殖活性、侵袭穿透指数、细胞迁移指数均低于空白对照组和阴性对照组,细胞凋亡指数高于空白对照组和阴性对照组(均P<0.05),但空白对照组和阴性对照组的上述指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。观察组的Caspase-3相对表达量高于阴性对照组与空白对照组,FAK蛋白相对表达量低于阴性对照组与空白对照组。结论 RNA干扰FAK表达可抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭及迁移能力,促进细胞凋亡和Caspase-3蛋白的表达。

NLRP3、AIM2和CASP1基因在慢性阻塞性肺疾病急性加重发病中的作用

目的:探讨固有免疫中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、黑素瘤缺乏因子2(AIM2)、半胱天冬酶1(CASP1)基因和白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)炎症因子在慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性发作期(AECOPD)患者体内的表达情况,阐明其作用机制。方法:收集健康对照组(12例)和AECOPD患者(20例)的痰液,分别进行痰处理,采用实时荧光定量PCR法检测NLRP3、AIM2和CASP1基因表达水平,通过ELISA法检测痰上清中的IL-1β和IL-18蛋白表达水平。结果:与健康对照组比较,AECOPD组患者NLRP3、AIM2和CASP1基因表达分别上调3.83、1.70和2.42倍,NLRP3、AIM2和CASP1基因表达水平明显增高(P<0.01),AECOPD组患者痰上清中IL-1β和IL-18蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。结论:NLRP3及AIM2炎性体参与AECOPD的病理过程,其作用机制可能与固有免疫活化有关。

染锰大鼠生精细胞半胱氨酸蛋白酶3的表达及锌的保护作用

目的：研究氯化锰对生精细胞半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）表达的影响，探讨锰诱发大鼠生精细胞caspase-3表达的机制及锌的拮抗作用。方法：雄性SD大鼠随机分为空白对照组，ZnCl2对照组，15mg／kg和30mg／kgMnCl2组；15mg／kg和30mg／kgMnCl2＋ZnCl2组。免疫组织化学法检测睾丸caspasc-3表达。结果：各染锰组，染锰补锌组及染锰剂量相同的6周组，染锰时间相同的30mg／kgMnCl2组caspase-3阳性细胞率均显著升高，染锰补锌组显著降低。结论：染锰15mg／kg4周可诱发大鼠生精细胞caspase-3表达，且随染锰时间和剂量的增加而增加，两者存在一定时间-效应和剂量-效应关系；摄入含锌100mg／kg的食物可拮抗锰诱发的生精细胞caspase-3表达。

miR23a促进肺癌细胞株A549细胞凋亡蛋白Caspase-3表达的分子机制

目的研究miR23a通过JNK信号通路促进肺癌细胞株A549细胞凋亡蛋白Caspase-3表达的分子机制。方法利用脂质体转染试剂Lipo2000将mi23a转染到肺癌A549细胞,实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)法检测阴性对照(NC)组和转染mi23a组细胞中miR23a的表达;划痕实验检测肺癌细胞株A549的迁移能力;Western blotting法检测JNK通路中p-JNK水平的变化;RT-PCR法和Western blotting检测肺癌细胞株A549转染miR23a后细胞凋亡蛋白Caspase-3的mRNA和蛋白质水平的表达。结果 Real-time PCR结果显示,转染miR23a组其miR23a表达水平显著高于阴性对照(NC)组(P<0.05),A549细胞转染miR23a后,细胞增殖和扩散能力均显著降低(P<0.05);Western blotting结果显示,转染miR23a组中p-JNK和Caspase-3的水平均有明显升高(P<0.05)。结论 miR23a可通过活化JNK信号通路,进而促进肺癌A549细胞中细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达,从而抑制其肿瘤细胞的增殖和扩散能力。

肝细胞癌癌组织caspase-3和DcR3蛋白及SNHG12 mRNA水平变化及其临床意义探讨

目的研究肝细胞癌(HCC)患者癌组织半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)和诱捕受体3(DcR3)蛋白表达及小分子核仁宿主基因12(SNHG12)mRNA水平变化及其临床意义。方法2016年5月~2019年5月我院收治的68例HCC患者,行肝叶切除术治疗,取癌组织和癌旁肝组织,采用EnVision法检测caspase-3和DcR3蛋白表达,采用RT-qPCR法检测SNHG12 mRNA水平,应用Logistic多元回归分析影响HCC患者死亡的危险因素。结果HCC患者癌组织caspase-3阳性率为47.1%,显著低于癌旁组织的77.9%(P<0.05),而DcR3阳性率为61.8%,SNHG12 mRNA水平为(2.9±0.8),显著高于癌旁组织【分别为33.8%和(1.6±0.5),P<0.05】;18例有淋巴结转移的癌组织caspase-3阳性率为33.3%,显著低于50例无淋巴结转移者的62.0%(P<0.05),而DcR3蛋白阳性率为88.9%,显著高于无淋巴结转移者的50.0%,SNHG12 mRNA水平为(2.6±0.4),显著高于无淋巴结转移者【(1.5±0.3),P<0.05】,45例肿瘤直径>5 cm癌组织SNHG12 mRNA水平为(2.7±0.4),显著高于23例无淋巴结转移者【(1.4±0.3),P<0.05】;随访结束时,本组68例HCC患者生存30例(44.1%),死亡38例(55.9%);多元Logistic回归分析显示,肿瘤直径大、合并肝硬化、存在淋巴结转移、Caspase-3低表达、DcR3高表达和SNHG12高水平是HCC患者死亡的危险因素。结论HCC患者癌组织存在基因水平和蛋白表达的显著变化,了解这些变化并探讨其临床意义,将为肝癌防治提供有价值的线索。

绿原酸通过Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨绿原酸(CGA)对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及对Bcl-2相关X蛋白(Bax)/B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)信号通路的影响。方法:分别用含有0、250、500、750和1 000μmol/L的CGA培养液处理喉癌Hep-2细胞24、48 h,寻找出最适宜CGA的浓度和处理时间;将喉癌Hep-2细胞分为对照组(正常培养的喉癌Hep-2细胞)、CGA低浓度组(750μmol/L CGA培养液)、CGA高浓度组(1 000μmol/L CGA培养液)和CGA高浓度+通路抑制剂组(1 000μmol/L CGA培养液+50μmol/L Bax/Bcl-2/Caspase-3通路抑制剂Bax inhibitor peptide V5)。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定喉癌Hep-2细胞增殖抑制率,通过流式细胞仪检测喉癌Hep-2细胞凋亡率,采用蛋白质印迹法检测喉癌Hep-2细胞中增殖相关蛋白(ki-67)、凋亡相关蛋白(p53)及Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路相关蛋白的表达情况。结果:与对照组相比,CGA低、高浓度组喉癌Hep-2细胞增殖抑制率、细胞凋亡率,p53、Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著升高,ki-67、Bcl-2蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);且CGA高浓度组喉癌Hep-2细胞增殖抑制率、细胞凋亡率,p53、Bax和Caspase-3蛋白表达水平高于CGA低浓度组,ki-67、Bcl-2蛋白表达水平低于CGA低浓度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与CGA高浓度组相比,CGA高浓度+通路抑制剂组喉癌Hep-2细胞增殖抑制率、细胞凋亡率,p53、Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著降低,ki-67、Bcl-2蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:CGA可显著抑制喉癌Hep-2细胞的增殖,并促进其凋亡,可能与Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路激活有关。

子宫内膜腺癌组织Ki-67蛋白和caspase-3表达及意义

目的 探讨增殖细胞核抗原（Ki-67）蛋白及门冬氨酸特异的胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）在子宫内膜腺癌组织中的表达及其与临床病理参数间的关系，进而阐明它们在子宫内膜腺癌发生发展中的作用及其之间可能存在的关系。方法 应用免疫组化EnviSion法检测20例正常子宫内膜和70例子宫内膜腺癌组织中Ki-67蛋白及caspase-3的表达情况。结果 Ki-67蛋白在子宫内膜腺癌组织中的阳性表达率明显高于正常子宫内膜组织（Hc=27．81，P〈0．01）；caspase-3在子宫内膜腺癌组织中的阳性表达率明显低于正常子宫内膜组织（uc=5．097，P〈0．01）；Ki-67蛋白表达与病人年龄及手术-临床分期无关（Hc=3．590、5．888，P〉0．05），而与病理分级、子宫肌层浸润深度及淋巴结转移有关（Hc=8．504、4．778，P〈0．05；uc=2．963，P〈0．01）；caspase-3表达与病人年龄、手术-临床分期、子宫肌层浸润深度及淋巴结转移均无关（Hc=4．371，uc=1．077～1．374，P均〉0．05），而与病理分级有关（Hc=7．320，P〈0．05）；子宫内膜腺癌组织Ki-67的表达与caspase-3呈负相关（rs=-0．241，P〈0．01）。结论 Ki-67蛋白与子宫内膜腺癌侵袭和转移关系密切；Ki-67蛋白和caspase-3可能呈负反馈调节，共同参与子宫内膜腺癌的发生、发展以及细胞凋亡与增殖的病理过程。

鼻用激素治疗鼻息肉对髓样细胞白血病1基因和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3基因表达的影响

目的探讨鼻用激素治疗鼻息肉的机制及对其髓样细胞白血病1(MCL-1)基因和半胱氨酸天冬氨酸酶蛋白-3(Caspase-3)基因表达的影响。方法选取35例鼻息肉患者作为观察组,均在接受丙酸氟替卡松鼻喷剂治疗14 d后行内镜下鼻息肉切除术治疗,分别留取治疗前后鼻息肉组织,将激素治疗前采集的鼻息肉组织作为单纯鼻息肉组,将激素联合手术切除术后采集的鼻息肉组织作为鼻息肉激素组;另选取35例同期单纯鼻中隔偏曲患者作为对照组,采集其正常的中鼻甲组织作为鼻腔黏膜组。3组标本均行常规苏木精-伊红(HE)染色和免疫组化染色。记录10个高倍视野中的嗜酸性粒细胞(EOS)数量,比较3组MCL-1、Caspase-3表达水平。结果单纯鼻息肉组、鼻息肉激素组的EOS数量均多于鼻腔黏膜组,且单纯鼻息肉组的EOS数量多于鼻息肉激素组(P<0.05)。单纯鼻息肉组、鼻息肉激素组和鼻腔黏膜组的MCL-1阳性率依次降低(均P<0.05);单纯鼻息肉组、鼻息肉激素组和鼻腔黏膜组的Caspase-3阳性率依次升高(均P<0.05)。单纯鼻息肉组和鼻息肉激素组的MCL-1表达与EOS浸润程度呈正相关,Caspase-3表达与EOS浸润程度呈负相关(P<0.05)。结论丙酸氟替卡松鼻喷雾剂作为经典的鼻用人工合成类固醇激素,可有效治疗鼻息肉,其作用机制可能与下调MCL-1表达和促进Caspase-3活化有关。

基于网络药理学和分子对接研究高山金莲花素对颞下颌关节骨关节炎细胞模型的作用机制

目的运用网络药理学与分子对接方法探讨高山金莲花素(alpinumisoflavone,AIF)对颞下颌关节骨关节炎(temporomandibular joint osteoarthritis,TMJOA)细胞模型的作用机制,为AIF治疗TMJOA提供研究基础。方法运用GeneCards、OMIM、DisGeNET和PharmGKB数据库获取TMJOA疾病靶点,PharmMapper和HERB获取AIF作用靶点,取化合物与疾病交集靶点上传至STRING数据库得到关键靶点后做GO和KEGG富集分析,分子对接评估相关信号通路中关键靶点。获得医院伦理委员会的审批,提取3周龄SD大鼠髁突软骨细胞。CCK8检测AIF对髁突软骨细胞的毒性。用10 ng/mL白细胞介素⁃1β(interleukin 1β,IL⁃1β)诱导髁突软骨细胞24 h构建TMJOA细胞模型。实验分为3组,其中,对照组:DMEM培养基培养髁突软骨细胞48 h;IL⁃1β组(TMJOA细胞模型):预使用DMEM培养基培养髁突软骨细胞24 h后,保留原培养基的情况下加入IL⁃1β使终浓度达10 ng/mL继续培养24 h;IL⁃1β+10μmol/L AIF组:预使用含10μmol/L AIF的DMEM培养基培养髁突软骨细胞24 h,保留原培养基情况下加入IL⁃1β使终浓度达10 ng/mL继续培养24 h,流式细胞术检测AIF对TM⁃JOA细胞模型中的髁突软骨细胞凋亡的影响。进一步,实验分为对照组、IL⁃1β组、IL⁃1β+10μmol/L AIF组和IL⁃1β+30μmol/L AIF组共4组,其中,IL⁃1β+30μmol/L AIF组:预使用含30μmol/L AIF的DMEM培养基培养24 h,保留原培养基情况下加入IL⁃1β使终浓度达10 ng/mL继续培养24 h;其余3组方法同前。以qPCR与Western blot分别检测AIF对TMJOA细胞模型中与细胞凋亡相关的B淋巴细胞瘤2(B⁃cell leukemia/lymphoma⁃2,Bcl2)、天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific protease 3,Caspase⁃3)及基质降解相关的解聚蛋白样金属蛋白酶4(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 4,ADAMTS4)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP3)和基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP13)mRNA和蛋白的表达。结果PharmMapper与HERB数据库检索得到AIF化合物靶点300个,GeneCards、OMIM、DisGeNET和PharmGKB数据库检索得到TMJOA疾病靶点378个,将化合物与疾病靶点交集得33个潜在靶点,将其上传至STRING数据库得31个关键靶点,主要与细胞凋亡和细胞外基质降解相关。这一过程可能涉及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen⁃activated protein kinase,MAPK)、雌激素及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)等信号通路。分子对接结果表明AIF与MAPK和雌激素信号通路中的关键靶点细胞外信号调节激酶1/2(extracellular sig⁃nal⁃regulated kinase 1/2,ERK1/2)和雌激素受体基因1/2(estrogen receptor gene 1/2,ESR1/2)具有较好的结合活性。CCK8结果表明AIF对髁突软骨细胞无明显细胞毒性。与IL⁃1β组相比,IL⁃1β+10μmol/L AIF组中AIF可抑制髁突软骨细胞凋亡;与IL⁃1β组相比,IL⁃1β+10μmol/L AIF组和IL⁃1β+30μmol/L AIF组中AIF可上调Bcl2和下调Caspase⁃3 mRNA和蛋白表达,抑制ADAMTS4、MMP3和MMP13 mRNA和蛋白表达。结论AIF可通过上调Bcl2与下调Caspase⁃3 mRNA和蛋白表达抑制TMJOA细胞模型中髁突软骨细胞凋亡,同时抑制由IL⁃1β诱导的细胞外基质降解,延缓TMJOA进展。