缺氧缺血性脑病新生大鼠心肌Caspase-3、Cyt C蛋白表达与心肌细胞凋亡的关系

目的：探讨缺氧缺血性脑病（HIE）新生大鼠心肌Caspase-3、Cyt C蛋白的表达及其与心肌细胞凋亡的关系。方法：7日龄新生大鼠制备HIE经典模型。分为HIE组和假手术对照（NC）组,两组分别于HIE后1小时、4小时、12小时、24小时、48小时、72小时、7天取心脏组织,应用免疫组织化学法检测心肌组织Caspase-3、Cyt C蛋白的表达;应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果：HIE组24小时Caspase-3出现阳性细胞表达增多,48小时达高峰,24小时~7天Caspase-3的表达均明显高于NC组（P〈0.05）。HIE组24小时Cyt C出现较多的阳性细胞表达,72小时达高峰,至7天时仍高于NC组（P〈0.05）。HIE组12小时心肌阳性凋亡细胞开始增多,72小时达高峰,12~72小时各时间点阳性凋亡细胞明显高于NC组（P〈0.05）。Cas-pase-3、Cyt C蛋白表达与凋亡细胞数二者之间均呈直线正相关。结论：HIE新生大鼠心肌细胞Caspase-3、Cyt C蛋白表达增加,提示Caspase-3、Cyt C蛋白表达对心肌细胞凋亡起促进作用。

通精灵对精索静脉曲张模型大鼠生精细胞凋亡及凋亡因子Cyt C、caspase-9的影响

[目的]探讨通精灵对精索静脉曲张模型大鼠睾丸组织的保护作用及与凋亡因子细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)、半胱氨酸蛋白酶-9(cysteine aspartic acid specific protease-9,caspase-9)表达的关系。[方法]72只SPF级Wistar大鼠,随机分成假手术组、模型组、通精灵低、中、高剂量组及左卡尼汀组。采用左肾静脉部分结扎法联合"夹尾激怒法"建立实验性精索静脉曲张合并中医肝气郁结证候复合大鼠模型。模型建立后,通精灵低、中、高剂量组分别给予浓度为1.6、3.2、6.4g·m L-1通精灵生药水煎液灌胃,假手术组和模型组予以0.9%氯化钠溶液灌胃,左卡尼汀组则予0.021g·mL-1左卡尼汀口服液灌胃,以上各组灌胃体积均为1mL/100g体质量,1次/d,持续8周。以HE染色观察睾丸组织结构;TUNEL染色和Annexin V-FITC法检测生精细胞凋亡情况;Western blot检测睾丸组织中Cyt C、caspase-9的表达。[结果]模型组中睾丸组织发生明显病理损伤,而通精灵各剂量组及左卡尼汀组中睾丸的病理损伤有不同程度改善。模型组中睾丸生精细胞凋亡率明显高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05),通精灵中、高剂量组及左卡尼汀剂量组中生精细胞凋亡率明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。Western blot提示,模型组大鼠睾丸组织中Cyt C、caspase-9蛋白表达显著高于假手术组(P<0.01);通精灵中、高剂量组及左卡尼汀组中Cyt C、caspase-9表达低于模型组(P<0.05或P<0.01);高剂量组中Cyt C、caspase-9蛋白表达明显低于左卡尼汀组(P<0.05,P<0.01)。[结论]通精灵可以有效改善精索静脉曲张大鼠睾丸组织损伤,降低Cyt C和caspase-9的表达,从而调控生精细胞的凋亡。这可能是通精灵改善精索静脉曲张患者生育能力的机制之一。

Cyt C和Caspase 3在STZ诱导糖尿病大鼠晶状体上皮细胞中的表达

目的研究Cyt C和Caspase 3在STZ诱导糖尿病大鼠晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)中的表达,为糖尿病性白内障的发生机制提供新的线索。方法 60只健康雄性SD大鼠分为实验组和对照组,每组各30只,实验组大鼠腹腔注射STZ溶液,对照组腹腔注射柠檬酸缓冲液。每4周监测大鼠血糖并用裂隙灯观察大鼠晶状体混浊情况,12周末取大鼠晶状体前囊膜,应用免疫组织化学和Western blot检测LEC中Cyt C和Caspase 3的表达。结果 12周末实验组大鼠空腹血糖为(24.04±2.40)mmol·L-1,对照组为(5.13±0.37)mmol·L-1。裂隙灯观察显示实验过程中实验组大鼠晶状体出现混浊,而对照组大鼠晶状体均透明。免疫组织化学结果显示:实验组大鼠LEC中Cyt C和Caspase 3表达呈阳性,而对照组则为阴性。Western blot结果显示实验组胞浆内Cyt C含量(0.928 0±0.029 7)大幅度上升,远高于对照组(0.525 0±0.025 8),差异有统计学意义(P<0.05),而实验组大鼠线粒体内Cyt C含量(0.510 5±0.026 4)则大幅度下降,远低于对照组(0.846 0±0.033 5),差异有统计学意义(P<0.05);实验组大鼠LEC中Caspase 3的表达量(0.906 0±0.027 6)明显高于对照组(0.430 5±0.025 2),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 STZ诱导糖尿病大鼠LEC中Cyt C由线粒体释放入胞浆且Caspase 3表达量增加,高血糖可能通过刺激LEC释放Cyt C和激活Caspase 3,诱导LEC凋亡从而形成白内障。

慢性高原病患者骨髓Cyt C和Caspase-3表达及意义研究

目的探讨细胞凋亡在慢性高原病(CMS)发生发展过程中的作用,从而寻求新的诊断和治疗途径。方法选取CMS患者20例为研究对象,健康人群14例为对照组,采用固相双抗体夹心ELISA方法测定CMS组及对照组骨髓上清液Cyt C和Caspase-3水平。结果 CMS患者骨髓上清液中Cyt C水平[(21.43±8.92)ng/ml]水平与对照组[(10.36±3.55)ng/ml]比较差异有统计学意义(P<0.05);CMS患者骨髓上清液中Caspase-3水平[(15.45±4.73)ng/ml]水平与对照组[(7.14±1.93)ng/ml]比较差异有统计学意义(P<0.05);CMS患者骨髓上清液中Cyt C与Caspase-3水平呈正相关(r=0.706,P<0.01);CMS患者骨髓上清液中Cyt C和Caspase-3表达水平均与血红蛋白(Hb)浓度呈正相关(r=0.524,P<0.01;r=0.577,P<0.01),与血氧饱和度(SaO2)呈负相关(r=-0.505,P<0.05;r=-0.554,P<0.01)。结论推测细胞凋亡可能在CMS病理生理过程中发挥着重要作用。

西洋参总皂苷(PQS)对鼠模拟缺血-再灌注心肌细胞Bcl-2及Cyt c表达的影响

本文探讨西洋参总皂苷(PQS)对缺血再灌注(I/R)心肌细胞凋亡的抑制机制。试验采用原代培养乳鼠心肌细胞,模拟心肌缺血-再灌注损伤模型,并给予PQS干预。应用RT-PCR、Westernblot方法和免疫荧光方法观察Bcl-2的表达,并检测细胞色素c(Cytc)的表达。结果I/R组与对照组比较Bcl-2和Cyt c的表达明显增加(P<0.05);PQS干预组较I/R组Bcl-2的表达增加,而Cyt c表达减少(P<0.05)。结论得出PQS可上调心肌细胞Bcl-2并减少Cyt c表达,从而抑制心肌细胞凋亡。

蛇苔细胞色素C(Cyt C)的序列分析及功能预测

通过核酸序列比对,在蛇苔cDNA文库中获得细胞色素C(Cyt C)基因序列,并对其编码的蛋白质产物从同源性、氨基酸组成、理化性质、亚细胞位点、结构和功能等进行生物信息学分析和预测。结果表明,该cDNA序列具有完整的开放阅读框(ORF,104～442bp),推测编码蛋白为112个氨基酸,与向日葵、荞麦、玉米等Cyt C存在着较高的保守性(相似性分别为84%、85%和84%),同属于细胞色素C超家族;蛇苔Cyt C蛋白的分子量为11998.7Da,不含信号肽,成熟的Cyt C起始于Ala2,其活性位点为Cys23、Cys26、His27和Met89;对蛋白质的翻译后修饰预测表明Ala2存在乙酰化修饰,Lys81和Lys95分别进行三甲基赖氨酸修饰。这些特点与其他植物Cyt C保持一致,表明该基因为蛇苔cyt c基因,在进化上相对保守。

Cyt c与NO配位反应及环境因素对其反应的影响

本文采用光谱法研究NO与细胞色素C(Cytochrome c,Cyt c)的配位过程,并考察不同外界环境,如O2、离子强度、pH、温度、缓冲溶液、拥挤试剂和光照等因素对Cyt c与NO结合与解离反应的影响。结果显示:溶液中微量O_2的存在会阻碍Cyt c与NO的结合;随离子强度的增大,其结合反应速率下降;温度过高过低都不利于Cyt c与NO的结合;酸性缓冲溶液中反应速率较碱性快;拥挤试剂的添加对稳定蛋白结构有较好的作用,降低Cyt c与NO的反应速度,其中Ficoll 70拥挤环境二者结合最慢;光照会促进Cyt c-NO的解离,光照使Cyt c-NO的解离速率增加一倍。本文结果对于进一步研究NO等活性气体与血红素类蛋白质的相互作用,以及NO在生物体内功能的发挥具有重要的指导意义。

电针对慢性疼痛抑郁共病大鼠海马组织Cyt-C、Caspase-9表达的影响

目的 观察电针“合谷”“太冲”对慢性疼痛抑郁共病(CPDC)大鼠海马组织细胞色素C(Cyt-C)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)表达的影响,探讨电针治疗CPDC的可能机制。方法 60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、药物组和电针组,每组15只。采用左后足足底2次注射完全弗氏佐剂复制CPDC模型。电针组于双侧“合谷”“太冲”行电针干预,20 min/次,药物组予10 mg/kg度洛西汀混悬液灌胃,连续14 d。分别于首次注射后7、14、21、28 d检测机械缩足阈值及热缩足潜伏期,14、28 d检测悬尾不动时间和糖水偏好率,尼氏染色观察海马神经元形态及尼氏体数量,Western blot、免疫组化检测海马组织Cyt-C、Caspase-9蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠机械缩足阈值、热缩足潜伏期减少(P<0.01),悬尾不动时间增加(P<0.01),糖水偏好率下降(P<0.01),海马神经元排列稀松,神经元受损、丢失,尼氏体数量减少(P<0.01),海马神经元细胞凋亡率升高(P<0.01),海马组织Cyt-C、Caspase-9表达及cleaved-Caspase-9/Caspase-9比值升高(P<0.01);与模型组比较,药物组和电针组大鼠机械缩足阈值、热缩足潜伏期增加(P<0.01),悬尾不动时间减少(P<0.01),糖水偏好率升高(P<0.01),海马神经元丢失减少,细胞排列较整齐,核仁清晰,尼氏体数量增加(P<0.01),海马神经元细胞凋亡率降低(P<0.01),海马组织Cyt-C、Caspase-9表达及cleaved-Caspase-9/Caspase-9比值降低(P<0.01)。结论 电针“合谷”“太冲”可减轻CPDC模型大鼠疼痛及抑郁行为,发挥神经保护作用,其机制可能与抑制海马组织Cyt-C、Caspase-9蛋白表达,抑制海马神经元凋亡有关。

基于Cyt C调节细胞凋亡途径探讨安寐丹改善老年睡眠剥夺模型致认知损伤的作用机制

目的:探讨安寐丹(AMD)对老年睡眠剥夺模型的认知功能及细胞色素C(Cyt C)信号通路蛋白表达和细胞凋亡影响。方法:60只老年C57小鼠随机分为空白组、模型组、安寐丹高、中、低剂量组(26.26、13.13、6.565 g·kg^(-1)·d^(-1))和褪黑素组(1.3 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只。通过自制睡眠剥夺箱进行连续性睡眠剥夺4周。以Morris水迷宫检测小鼠的认知功能水平,苏木素-伊红(HE)染色和尼氏染色观察海马CA1区的锥体细胞形态学改变。透射电镜观察海马神经元线粒体形态结构;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马中Cyt C、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、脑源性神经营养因子(BDNF)、线粒体转录因子A(TFAM)、电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)蛋白表达。免疫组化检测Cyt C、Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达水平。免疫荧光检测海马B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组上平台潜伏期延长(P<0.01),穿越平台次数,目标象限活动时间和路程显著减少(P<0.01),线粒体结构损坏,嵴消失或断裂,肿胀变形;Cyt C、Caspase-3、Caspase-9、Bax、VDAC1蛋白表达显著增加(P<0.01),BDNF、TFAM、Bcl-2蛋白表达显著减少(P<0.01)。与模型组比较,安寐丹高、中、低剂量组改善老年睡眠剥夺模型小鼠空间探索和定位航行水平(P<0.05,P<0.01);缓解线粒体损伤,增加尼氏小体数量;Cyt C、Caspase-3、Caspase-9、Bax、VDAC1蛋白表达明显减少(P<0.05,P<0.01),BDNF、TFAM、Bcl-2蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论:安寐丹能够改善老年睡眠剥夺模型小鼠认知功能,其作用可能与降低Cyt C信号通路介导的细胞凋亡途径有关。

首乌丸对卵巢早衰模型大鼠SIRT1/PGC-1α/Cytochrome C通路的影响

目的探讨首乌丸是否通过调控线粒体介导的细胞凋亡通路抑制卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)进展。方法60只SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、首乌丸4周组、首乌丸6周组、首乌丸预防组、补佳乐组。腹腔注射去氧乙烯基环己烯(deoxyvinylcyclohexene,VCD)建立POF大鼠模型,予相应药物灌胃治疗后,采用Elisa法检测各组大鼠血清性激素水平,HE染色观察卵巢组织结构变化,电镜观察卵巢超微结构变化,荧光标记TUNEL法检测卵巢细胞凋亡水平,荧光定量PCR及Western blot检测大鼠卵巢组织中沉默信息调节因子2相关酶1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)、过氧化物酶增殖活化受体γ辅助活化因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator1α,PGC-1α)、抑凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(b-cell lymphoma-2,Bcl-2)、促凋亡因子细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)及Bcl-2相关X蛋白(bcl2-associated X protein,Bax)的mRNA及蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠血清促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)和黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平显著升高(P<0.01),抗缪勒氏管激素(anti-mullerian hormone,AMH)、雌激素(estradiol,E2)水平显著降低(P<0.01);大鼠卵巢组织结构被破坏,各级卵泡减少,卵巢颗粒细胞(granulosa cells,GCs)内线粒体减少;细胞凋亡指数显著升高(P<0.01);SIRT1、PGC-1α及Bcl-2的mRNA及蛋白表达均显著下降(P<0.01),Cyt C及Bax的mRNA及蛋白表达均显著上升(P<0.01)。与模型组比较,首乌丸各治疗组血清性激素水平均显著改善(P<0.01,P<0.05);大鼠卵巢萎缩减轻,各级卵泡增多;卵巢超微结构改善,线粒体数量增加,嵴增多;细胞凋亡指数显著下降(P<0.05);SIRT1、PGC-1α及Bcl-2的mRNA及蛋白表达均显著上升(P<0.05),Cyt C及Bax的mRNA及蛋白表达均显著下降(P<0.05),其中首乌丸预防组的作用最明显。结论首乌丸可以延缓POF进展,早期预防作用更显著;其具体机制可能与调节线粒体介导的SIRT1/PGC-1α/Cyt C细胞凋亡通路,减少卵巢GCs凋亡有关。

黄芪有效成分对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元cyt-c、CcO表达的影响

目的观察黄芪有效成分对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元cyt-c及CcO表达的影响,探讨黄芪有效成分防治海马神经元凋亡可能的作用机制。方法取培养8 d的大鼠海马神经元,进行缺氧缺糖0.5 h,再分别复氧复糖0、0.5、2、6、24、72和120 h。实验分4组:正常对照组、模型组(缺氧缺糖/复氧复糖组)、黄芪注射液溶剂对照组和黄芪注射液组。分别采用细胞免疫化学法、Western blot法检测海马神经元cyt-c蛋白的表达、RT-PCR法检测CcO mRNA的表达。结果模型组在各个时间点cyt-c蛋白和CcO mRNA表达均较正常对照组增加(P<0.05);与模型组相比,黄芪有效成分组在各个时间点cyt-c蛋白和CcO mRNA表达均降低(P<0.05),而黄芪注射液溶剂对照组则无变化(P>0.05)。结论黄芪注射液可抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元cyt-c、CcO的表达,从而抑制缺氧缺糖/复氧复糖后大鼠海马神经元的凋亡。

线粒体信号通路Cyt-c和Apaf-1表达及艾灸足阳明经穴保护胃黏膜损伤机制的研究

目的:通过观察急性胃黏膜损伤后细胞凋亡线粒体信号转导途径中关键物质细胞色素C(Cyt-c)、凋亡激活因子-1(Apaf-1)表达及艾灸"足三里"、"梁门"穴对胃黏膜细胞凋亡的影响,探讨艾灸预处理保护胃黏膜损伤作用的内在机制。方法:24只wister健康大鼠随机分为3组,8只/组,即捆绑对照组、模型对照组和艾灸穴位组。采用Western-blot方法检测大鼠胃黏膜Cyt-c的表达,免疫组化方法检测大鼠胃黏膜细胞凋亡指数(AI)、Apaf-1表达。结果:模型对照组AI、Cyt-c和Apaf-1表达上调,与捆绑对照组相比具有非常显著性差异(P<0.01);艾灸穴位组AI、Cyt-c和Apaf-1表达降低,与模型对照组比较具有显著性或非常显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:无水乙醇灌胃可引发急性胃黏膜损,经线粒体Cyt-c→Apaf-1信号转导途径启动细胞凋亡程序,而艾灸足阳明胃经"足三里"、"梁门"穴预处理可以抑制细胞凋亡,其保护胃黏膜损伤作用的内在机制可能与下调线粒体凋亡通路Cyt-c和Apaf-1表达有关。

温度突变和非离子氨胁迫对淡水养殖凡纳滨对虾cyt-C和caspase-3的影响

采用酶联免疫吸附(ELISA)法,研究了温度突变(16℃←22℃→28℃)和非离子氨胁迫(0.1 mg·L–1←0→0.5 mg·L–1)后,淡水养殖凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)细胞色素C(cyt-C)含量和天冬氨酸–半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性的变化规律,并与海水养殖条件下的相关指标进行了比较。结果显示:(1)温度突变5 d,淡水和海水养殖凡纳滨对虾血淋巴和肝胰腺cyt-C含量均显著高于突变前的水平(P<0.05)。(2)温度突变后,淡水养殖对虾血淋巴caspase-3活性显著升高(P<0.05),而海水养殖对虾血淋巴caspase-3活性在低温突变后无显著变化(P>0.05),在高温突变后显著升高(P<0.05);淡水养殖对虾肝胰腺caspase-3活性在低温突变后显著升高(P<0.05),在高温突变后呈无规则波动,海水养殖对虾肝胰腺caspase-3活性在温度突变后无显著变化(P>0.05)。(3)淡水和海水养殖对虾血淋巴和肝胰腺cyt-C在0.1 mg·L–1非离子氨胁迫后显著升高(P<0.05),而在0.5 mg·L–1非离子氨胁迫后则呈现先升高后下降的趋势。(4)0.1 mg·L–1非离子氨胁迫后,淡水和海水养殖对虾血淋巴和肝胰腺caspase-3活性均显著升高(P<0.05);0.5 mg·L–1非离子氨胁迫后,淡水和海水养殖对虾血淋巴caspase-3活性先升高后显著降低,而肝胰腺caspase-3活性则持续升高。实验结果表明,温度和非离子氨胁迫对淡水养殖凡纳滨对虾cyt-C和caspase-3均有显著影响;与海水养殖条件相比,淡水养殖凡纳滨对虾cyt-C和caspase-3受低温突变的影响更加显著,而两种养殖条件对虾对非离子氨胁迫的响应规律基本相似。

新型阴离子表面活性剂的合成及其反胶束体系对cyt-C的提取

合成了未见报道的阴离子型表面活性剂二 ( 2 -乙基己基 )羟基丁二酸酯磺酸钠 (AHOT) ,并对其结构进行了表征 .考察了AHOT/异辛烷反胶束体系提取细胞色素C(cyt-C)的性能 ,并与目前公认的优良的表面活性剂AOT进行了比较 .结果表明 ,AHOT与AOT具有相似的表面活性 ,AHOT反胶束体系的综合性能优于AOT反胶束体系 .

黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元bcl-2、bax及cyt-c蛋白形态学表达的影响

目的观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元bcl-2、bax及cyt-c蛋白表达的影响,探讨黄芪注射液防治海马神经元凋亡的作用机制。方法取原代培养8 d的大鼠海马神经元,随机分为4组:正常对照组、模型组(缺氧缺糖/复氧复糖组)、黄芪注射液溶剂对照组和黄芪注射液组。除正常对照组外,各组均进行缺糖缺氧0.5h,再分别于复氧复糖后0、0.5、2、6、24、72和120h采用细胞免疫化学法检测海马神经元bcl-2、bax、cyt-c蛋白的表达。结果与正常对照组比,模型组bcl-2、bax、cyt-c蛋白表达明显升高,而bcl-2/bax比值下调(P<0.05)。与模型组相比,黄芪注射液组bcl-2蛋白表达及bcl-2/bax比值升高,cyt-c、bax蛋白表达明显降低(P<0.05);而黄芪注射液溶剂对照组bcl-2、bax、cyt-c蛋白表达及bcl-2/bax比值则无显著变化(P>0.05)。结论黄芪注射液可提高缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元bcl-2蛋白表达及bcl-2/bax比值,抑制bax、cyt-c蛋白表达,从而抑制缺氧缺糖/复氧复糖引起的海马神经元凋亡。

熟地黄多糖对荷瘤小鼠肿瘤组织Cyt-C及Caspase-3基因表达的影响

目的:探讨熟地黄多糖对荷瘤小鼠肿瘤组织细胞色素C(Cytochrome C,Cyt-C)及天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinases,Caspase-3)基因表达的影响。方法:采用Real-time PCR法检测肿瘤组织中Cyt-C m RNA及Caspase-3 m RNA的表达情况,采用Western blot法检测Cyt-C及Caspase-3蛋白质的表达情况。结果:熟地黄多糖低剂量组、中剂量组、高剂量组、阳性对照组和联合用药组肿瘤组织中Cyt-C和Caspase-3 m RNA的表达量分别是模型对照组的0.46、0.76;4.82、1.26;0.43、0.60;13.91、4.65;20.17、9.23倍。Cyt-C和Caspase-3蛋白质的表达量分别是模型对照组的0.31、0.90;1.82、1.46;0.62、0.87;2.60、1.54;2.80、1.60倍。结论:熟地黄多糖能促进肿瘤组织中Cyt-C和Caspase-3基因的表达。

平阳霉素诱导人血管瘤内皮细胞凋亡过程中PARP-1和Cyt-C的表达及意义

目的:探讨平阳霉素诱导人血管瘤内皮细胞凋亡过程中PARP-1、Cyt-C的表达及可能机制。方法:在体外培养人血管瘤内皮细胞,设立两组:A组为平阳霉素组,其中加入平阳霉素(200μg/ml),诱导血管瘤内皮细胞凋亡,B组为空白对照组。对两组血管瘤内皮细胞通过倒置显微镜、电镜观察其形态学变化,采用流式细胞仪检测平阳霉素诱导血管瘤内皮细胞的凋亡率。利用基因芯片技术筛选出差异表达的基因,从中选定PARP-1及Cyt-C表达基因,对其进行RT-PCR验证。结果:平阳霉素(200μg/ml)可以诱导体外培养的人血管瘤内皮细胞凋亡,加药24h后,在倒置显微镜和电镜下观察到明显的细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪检测凋亡率可达13.11%。空白对照组血管瘤内皮细胞倒置显微镜下观察无明显形态学变化,流式细胞仪检测凋亡率为3.56%。利用基因芯片技术筛选出两组差异基因4752个,其中2543个上调,2209个下调。应用DAVI D软件对鉴定出来的差异基因进行生物信息学分析,从中选出与线粒体凋亡途径直接相关的蛋白表达基因:PARP-1、Cyt-C。对其进行RT-PCR检测得到的CT值显示:平阳霉素药物组相对于空白组PARP-1及Cyt-C蛋白基因呈高表达状态。结论:平阳霉素在体外可以通过多种途径诱导血管瘤内皮细胞发生凋亡,其中PARP-1及Cyt-C参与了线粒体途径调控的凋亡。

靳三针对宫内窘迫HIBD大鼠大脑皮质Cyt-c和Caspase-3表达的影响

目的探讨靳三针对宫内窘迫HIBD大鼠大脑皮质Cyt-c和Caspase-3表达的影响,揭示靳三针对大脑的保护机制。方法 SD雌性大鼠妊娠21 d时剖腹,用止血钳夹闭双侧子宫角血管5 min,剖宫产取出幼鼠经行为学及脑组织切片确认缺氧缺血性脑损伤的为模型大鼠,随机分为模型组、针刺组。模型组不针刺;针刺1组、针刺2组、针刺3组、针刺4组分别于出生后第3、5、7、14天开始针刺,连续7 d;正常对照组自然分娩,不造模不针刺。所有组别大鼠均于出生后21 d断头取脑组织,检测大脑皮质中Cyt-c和Caspase-3的表达。结果 4个针刺组的Cyt-c光密度值都有所下降,其中针刺1组、针刺2组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。针刺1组Caspase-3的表达被明显下调,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论出生后第3天开始针刺对宫内窘迫HIBD大鼠脑的保护作用与Cyt-c和Caspase-3表达的下调有关。

脑出血后血肿周围神经元Cyt-c与Caspase-3的表达及不同中医治法的干预

目的观察大鼠脑出血后血肿周围神经元Cyt-c与活化Caspase-3的表达情况及不同中医治法的干预作用。方法用Ⅶ胶原酶脑内立体定位注射诱导大鼠脑出血模型,免疫组化检测血肿周围神经元Cyt-c的释放情况与活化Caspase-3的表达,同时用直尺测量不同时间点血肿的最大直径。结果大鼠脑出血后血肿周围神经元于6h即有Cyt-c释放;1d后阳性细胞表达最多;3d后阳性细胞数减少;5d后阳性细胞继续减少,与假手术组比较差异明显(P<0.01);血肿周围于6h出现Caspase-3阳性表达细胞,1d阳性细胞计数达高峰,3d出现轻度下降,5d明显下降,与假手术组比较差异明显(P<0.01);采取不同中医治法治疗后Cyt-c与Caspase-3均有所下降,与其他各组比较,平肝熄风汤组治疗后下降最明显(P<0.01)。结论脑出血后血肿周围神经元Cyt-c与活化Caspase-3表达明显上调,采取熄风、泻火、祛痰、化瘀以及风火痰瘀同治等治法均能抑制Cyt-c与Caspase-3的表达,阻止神经元的凋亡,以平肝熄风汤组最为明显。

电针对老年性痴呆模型大鼠海马神经元凋亡蛋白Bcl-2和Cyt-c的影响

目的:研究电针对老年性痴呆(AD)模型大鼠海马区神经元中Bcl-2和Cyt-c的影响,从细胞凋亡的角度探讨电针治疗AD的部分作用机制。方法:以D-半乳糖腹腔注射和Aβ1-40海马注射诱导形成的AD模型大鼠为研究对象,电针"百会"、"涌泉"二穴,每日1次,连续20d。以通道式水迷宫测试学习记忆能力的变化,评价电针对AD的治疗效应;以免疫组化SP法检测海马神经元中Bcl-2和Ccy-c的表达。结果:与模型组大鼠相比,进入盲端的错误次数和平均逃避潜伏期明显减少(P<0.05),海马神经元中Bcl-2的阳性细胞数、积分光密度总和显著减少(P<0.05),而模针组大鼠海马神经元细胞色素C的阳性细胞数、积分光密度总和显著增加(P<0.05)。结论:电针能有效改善AD大鼠的学习记忆障碍,可能是通过促进AD大鼠海马神经元Bcl-2的表达,降低Cyt-c的表达,抑制细胞的凋亡,减少神经元的丢失来实现的。