我国五大淡水湖日本沼虾线粒体COI基因部分片段序列比较

对我国五大淡水湖日本沼虾100个野生个体的线粒体细胞色素氧化酶亚基I(COI)部分序列进行了测定和分析,经比对获得578bp核苷酸片段,发现49个变异位点,得到35个单倍型,包括7个共享单倍型,各群体都具有较好的单倍型多态性和核苷酸多态性,其中鄱阳湖群体遗传多样性相对最高。AMOVA分析表明,五群体间总遗传分化系数Fst=0.3187(P<0.05),群体间具有较高的遗传分化。MEGA3.1软件计算五群体的Kimura2-paramter遗传距离,洞庭湖群体和巢湖群体之间的遗传距离最远为0.0191,巢湖群体和洪泽湖群体之间的遗传距离最近为0.0051。以同属胖掌沼虾(Macrobrachium inflatum)为外群分别构建了NJ和UPGMA系统树,结果显示洞庭湖和鄱阳湖为一族群,太湖、巢湖和洪泽湖为一族群。

过氧化氢导致线粒体DNA编码细胞色素C氧化酶基因突变与其编码蛋白结构与功能关系的研究

目的 探讨过氧化氢 (H2 O2 )导致线粒体DNA(mtDNA)编码细胞色素C氧化酶 (COX)基因损伤(突变 )后对其编码蛋白结构与功能的影响及两者之间的关系。方法 采用生物信息学技术 ,运用计算机同源模建的方法模拟人天然COX亚单位和其突变体的空间结构 ,并利用已有的实验数据 ,结合模建的结果进行了结构、功能的分析、研究。结果 在COXⅠ的三维结构中突变的部位 (残基 2 97～ 30 6 )位于分子的最外部 ,而该区域参与了与B亚基 (相当于COXⅡ亚基 )的作用 ,该部位的突变使突变部位附近残基的侧链结构环境发生了极大的变化 ,导致附近的电荷性质、亲疏水性质和空间特性出现变化 ,这些变化对酶复合物的形成有直接的影响 ;COXⅡ突变后 ,组成分子结构的“椅靠”部分和“椅面”部分之间的夹角略有增大 ,而“椅靠”和“椅面”之间的夹角的变化将会影响整个酶分子的稳定性。结论 H2 O2 导致的mtDNA编码COXⅠ、COXⅡ亚基基因突变使其编码的COX蛋白空间结构发生改变 ,这种改变是其功能改变 (如酶蛋白活性下降 )的主要原因。

基于COI序列的DNA微条形码技术鉴别熟肉制品中11种肉掺假的研究

建立并优化了基于COI序列的DNA微条形码技术(mini-barcoding)检测熟肉制品中11种常见肉类掺假的方法。样品经超声与真空冷冻干燥处理,提取DNA模板和PCR扩增后,目标扩增物经切胶纯化后进行克隆测序,并将测序结果提交GenBank数据库Blast比对。筛选出适合猪、牛、羊、鸡、鸭、鸽子、马、驴、鹅、兔、鼠11种肉类的扩增的通用引物COI-A,对PCR扩增条件进行优化,并建立18个掺假模式,对低经济价值肉类(猪、鸡、鸭、马、驴、鼠)的掺入的最低比例进行考察。结果表明:11种熟肉的DNA经通用引物COI-A扩增后,其扩增效率均为100%,18个掺假模式中,牛肉和羊肉中掺入6种低经济价值肉类的最低检出比例为5%,而掺入鸡肉的最低检出比例为10%,而鹅肉、鸽子肉和兔肉的掺假模式中最低检出比例为10%;利用本方法检测30批次市售样品,发现有18批次的熟肉制品存在掺假情况。该方法前处理简单,灵敏度合适,重现性好,可作为高经济价值熟肉制品中掺假低经济价值肉类的有效检测方法。

锰中毒对小鼠海马区NSCs的影响及其维生素E的干预作用

目的:探讨锰中毒小鼠海马区NSCs的影响及维生素E(VE)对其干预作用。方法:将60只成年雄性昆明小鼠按体重随机分为四组,即对照组(CG)、锰中毒组(MG)、维生素E组(VG)、锰中毒加维生素E组(MVG),每组15只。用腹腔注射氯化锰的方法制作锰中毒模型,采用灌胃法进行VE给药。通过Morris水迷宫实验观察小鼠的空间学习、记忆能力,用免疫组织化学检测各组小鼠海马CA1区、DG区细胞色素c(cyt c)及齿状回颗粒下层(SGZ)(巢蛋白,nestin)的表达。结果:(1)Morris水迷宫定位航行结果:MG组的逃避潜伏期比CG组明显延长(P<0.05),MVG组的逃避潜伏期比MG组明显缩短(P<0.05),MVG、VG和CG三组间未见显著性差异。(2)空间探索结果:MG组穿越平台的次数比CG组明显减少(P<0.05),MVG穿越平台的次数比MG明显增多(P<0.05),MVG、VG和CG三组间未见显著性差异。(3)免疫组织化学结果:MG组DG区nestin的阳性表达比CG组明显减少(P<0.05),MVG组的阳性表达比MG组明显增多(P<0.05),MVG、VG和CG三组间未见显著性差异。MG组CA1区、DG区cyt c的阳性表达均比CG组显著增多(P<0.05),MVG组的阳性表达比MG组明显减少(P<0.05),MVG、VG和CG三组之间未见显著性差异。结论:锰中毒可以损害神经干细胞(NSCs),降低学习记忆能力,而VE干预可减少锰对NSCs的损害作用,可能与VE可以降低cyt c的表达有关。

Bax在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

背景与目的:探讨Bax蛋白在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用。材料与方法:用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色观察细胞凋亡的形态学改变;Western Blot法检测不同剂量VES对人胃癌SGC-7901细胞中Bax蛋白表达量的影响和VES对Bax蛋白与细胞色素c(cytochrome c,Cyt c)蛋白在细胞内分布的影响;用Mito Tracker Red CMXRos荧光染色观察线粒体膜电位(ΔΨm)的变化。结果:VES可引起SGC-7901细胞发生凋亡,提高Bax蛋白表达水平,并使Bax蛋白从胞浆转移到线粒体;VES作用后发生线粒体膜电位下降,Cyt c从线粒体释放到胞浆。结论:VES可能通过Bax蛋白来启动线粒体凋亡途径,诱导SGC-7901细胞发生凋亡。

猪心细胞色素C的反胶团萃取研究

本文研究了AOT/异辛烷对猪心CytC的萃取,分析了不同AOT浓度、pH值条件、体积比、阳离子种类以及离子浓度对反胶团萃取猪心CytC的影响,结果表明;AOT浓度增加,对CytC的萃取率提高;在pH6～9之间对CytC有较好的萃取效果;Mg^(2+)、Na^+、K^+、Ca^(2+)”、Mn^(2+)、Li^+离子中以Li^+和Mg^(2+)的效果最好,其顺序为:Li^+>Mg^(2+)>Na^+>Ca^(2+)>K^+,而 Mg^(2+)在0.025mol/L时萃取率最好,可达96.5％;当油:水体积比增大时,萃取率也增大。

芸香诱导K562细胞凋亡时细胞色素C表达变化

【目的】研究芸香诱导白血病K562细胞凋亡过程中细胞色素C的表达。【方法】体外培养K562细胞,Hoechst33342/PI双荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态,分离细胞线粒体和胞浆,经SDS-PAGE电泳分离蛋白,Western Bloting检测线粒体、细胞浆细胞色素C表达。【结果】芸香浓度为2×10-5、4×10-5、8×10-5mol/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;Hoechest33342/PI双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现,Western Bloting检测4×10-5mol/L药物处理细胞后线粒体细胞色素C表达水平下调,细胞浆出现明显细胞色素C蛋白条带。【结论】芸香诱导白血病细胞发生凋亡,可能与线粒体途径有关。

蛋白质印迹法检测小鼠不同器官中细胞色素C的含量

目的探讨细胞色素C在不同脏器中的差异。方法采用蛋白质印迹法(Western Blot)测定小鼠肝、肾、心中细胞色素C的含量。结果细胞色素C含量在肝组织中最高,心肌组织中最低。结论细胞色素C含量具有组织器官差异性。

老年性聋大鼠耳蜗COX活性的研究

目的 :探讨线粒体呼吸链细胞色素 C氧化酶 ( COX)活性异常在老年性聋发病中的作用机制。方法 :免疫组化法检测老年性聋大鼠耳蜗 COX活性。结果 :与正常对照组相比 ,实验组老年性聋大鼠耳蜗中 COX活性降低。结论 :耳蜗组织中

非双层脂对辅酶Q-细胞色素c还原酶呼吸控制率的影响

分离提纯的辅酶Q细胞色素c还原酶经胆酸盐透析法重组于各种脂质体上,发现脂质体中PE含量的升高可显著提高辅酶Q-细胞色素c还原酶的呼吸控制率.在PE含量为60%-80%时达到最高值,DOPE的L_x—H_Ⅱ的相变温度显著低于DEPE,脂酶体中DOPE含量的提高,可显著提高酶的呼吸控制率,而DEPE的影响很小,改变脂酶体中心磷脂的含量对呼吸控制率的影响较小.含有PE脂酶体中酶的CD谱419nm处的正峰,随PE含量的增大而增强,表明酶蛋白中血红素辅基的微环境有所改变.NBD-DOPE标记脂酶体研究了不同脂酶体的 L_x-H_Ⅱ的相变性质,表明PE含量的降低脂质体的相变温度上升甚至消失.

细胞色素C在葡聚糖修饰金电极上的直接电化学(英文)

本文对细胞色素C在葡聚糖修饰金电极上的直接电化学进行了研究,发现萄聚糖是细胞色素C电化学反应的有效促进剂,并对影响萄聚糖修饰金电极的稳定性的因素作了探讨.

细胞色素c介导的半胱天冬氨酸蛋白酶-3活性改变与人卵巢癌顺铂耐药的关系

目的 探讨人卵巢癌顺铂耐药细胞株A2 780 DDP、COC1 DDP中抗凋亡基因bcl XL、细胞色素c的表达和半胱天冬氨酸蛋白酶 3(caspase 3)活性对人卵巢癌顺铂耐药的影响。方法 采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和Westernblot检测人卵巢癌顺铂敏感细胞株A2 780、COC1和顺铂耐药株A2 780 DDP、COC1 DDP中bcl XL 的表达 ,以及顺铂作用后细胞色素c的含量和caspase 3活性的变化 ,并应用流式细胞仪测定顺铂作用后A2 780、COC1、A2 780 DDP、COC1 DDP细胞的凋亡率。结果bcl XL 在A2 780 DDP、COC1 DDP细胞中的表达明显高于A2 780、COC1细胞 ;顺铂作用后 ,细胞色素c在A2 780 DDP、COC1 DDP细胞中的表达明显减少 ,caspase 3活性和凋亡率也较A2 780和COC1细胞明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 人卵巢癌细胞对顺铂产生耐药可能与细胞内bcl XL 过度表达、细胞色素c释放受抑制和caspase 3活性下降有关。

人颗粒溶素对肝癌细胞SMMC-7721凋亡、线粒体跨膜电位及细胞色素C释放的影响

目的构建携带人颗粒溶素（GLS）的真核表达质粒pBudCE4．1／GLS并研究其表达后对肝癌细胞SMMC-7721凋亡，线粒体跨膜电位与细胞色素C转位的影响。方法将RT—PCR扩增出的人GLS编码基因克隆入pBudCE4．1载体中构建真核表达质粒pBudCE4．1／GLS并将其转染肝癌细胞株SMMC一7721，用RTPCR、免疫细胞化学检测GLS的表达；用Hoechst法及电镜检测细胞的凋亡状况；用荧光染料Mitocapture^TM检测线粒体跨膜电位、用Western blot法检测细胞色素C从线粒体的释放。结果成功构建了携带GLS的真核表达质粒pBudCE4．1／GLS；在转染的肝癌细胞株SMMC-7721中，从转录和翻译水平都检测到了目标基因GLS的表达产物；重组质粒转染SMMC-7721细胞后，细胞核染色质固缩，呈致密浓染的凋亡状态，线粒体膜跨电位下降并伴随有细胞色素C从线粒体至细胞质的释放。结论携带人GLS的真核表达质粒在肝癌细胞SMMC-7721中表达后有致细胞凋亡作用，引起线粒体跨膜电位下降与细胞色素C的释放可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的途径之一。

小麦COXVIIa基因克隆及其蛋白序列分析

为研究小麦(Triticum aestivum L.)细胞色素C氧化酶复合蛋白结构与功能关系,本研究采用电子克隆和RT-PCR技术克隆了一个小麦细胞色素C氧化酶7a亚基(COXVIIa)基因的c DNA序列,并以生物信息学方法对其翻译的蛋白质及相应垂直同源蛋白质序列进行了比较和鉴定,模建了其三级结构,分析了其与被子植物中同源蛋白质之间的进化关系。结果表明,小麦COXVIIa基因的c DNA序列长494 bp,包含一个210 bp长的开放阅读框,编码69个氨基酸组成的多肽。亚细胞定位预测结果表明,该蛋白与其垂直同源蛋白均定位于线粒体中。在小麦COXⅦa蛋白序列中,36~58 aa形成一个跨膜螺旋区,且1~35 AA(N端)位于膜外,59~69AA(C端)位于线粒体内部;模建的三级结构主要由2段α螺旋结构组成,属于全α型蛋白,与其二级结构预测结果一致。基因表达分析表明该基因在叶鞘中不表达,而在其他组织中均不同程度的表达;在花、花冠和花序组织中具有较高的表达量。进化分析表明,小麦COXⅦa蛋白与乌拉尔图小麦(Triticum urartu)、大麦、二穗短柄草(Brachypodium distachyon)和玉米等单子叶植物进化距离较近,与油菜、玉山筷子芥(Arabidopsis lyrata subsp.Lyrata)、大豆、杨树、蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)等双子叶植物的进化距离较远,COXⅦa在这些被子植物中具有较强的保守性。本研究为揭示小麦COX蛋白复合物的结构和功能提供了理论依据。

线粒体脑肌病伴高乳酸血症及卒中样发作的发病机制及临床研究进展

线粒体脑肌病伴高乳酸血症及脑卒中样发作(MELAS)是在1984年前首次被提出的,该病主要是由线粒体基因组第3243号位点的腺嘌呤突变为鸟嘌呤(m.3243A>G)行导致。MELAS主要的神经系统表现为抽搐、脑卒中样发作和脑病,还包括一些其他症状如身材矮小、认知功能障碍、偏头痛、痴呆、心肌病、心脏传导阻滞和糖尿病等。本文主要从分子生物学角度讨论MELAS病的病因、诊断方式以及治疗手段的研究进展,着重阐述了细胞色素C氧化酶(COX)失调假说在MELAS病的发病机制中的作用。虽然MELAS病的治疗方法仍然有限,但是现有的和潜在的治疗方式值得探讨。

成都机场口岸常见媒介蝇类的分子鉴定

目的:建立以线粒体COI基因作为分子标记的蝇类分子鉴定方法。方法:设计COI基因引物对成都双流机场口岸常见4科10属14种卫生蝇类进行PCR扩增和序列测定,并与不同地区蝇类的COI基因片段比较,分析其碱基差异和系统发育关系。结果:部分不同地理来源的种类种内碱基差异变化较大,中国四川与马来西亚棕尾别麻蝇碱基差异为3.4%,中国四川与中国广东巴浦绿蝇碱基差异为3.3%;其他种类种内碱基差异较小(<1.0%)。系统发育分析显示所有种类的COI基因分子鉴定结果和形态学结果相一致。麻蝇科种类聚为一个分支,而丽蝇科、花蝇科和蝇科种类没有聚集形成单系。结论:可以将COI基因片段作为分子标记,建立一种适用于口岸的蝇类种类之间分子鉴定方法。

MCD STUDY OF CARDIOLIPIN-CYTOCHROME C SYSTEM

Cardiolipin (CL) with two negative charges and four unsaturated fatty acyl chains is a phosphalipid specific to mitochondrial inner membrane. With the static interaction cytochrome c can be bound to CL. Because of the activity of cytochrome c oxidase, CL is required to be tightly bound to this enzyme. However, the effect of CL on the

高效毛细管电泳法研究重瓣榆叶梅花中蛋白质的动态变化

为验证毛细管电泳方法,研究测定重瓣榆叶梅花朵生长过程中的DNA酶、RNA酶和细胞色素C含量及动态变化的有效性,以磷酸氢二钠溶液为提取液,超声提取重瓣榆叶梅花朵中的蛋白质作为待测液,考察缓冲溶液种类、浓度、pH、分离电压、分离温度及进样时间等因素对HPCE分离检测蛋白质的影响。确定了HPCE最佳测定条件为:运行缓冲液为pH为2.5、浓度为30mmol/L的磷酸氢二钠溶液,0.5MPa压力进样5s,分离电压为8kV,电泳温度为25℃,检测波长为254nm。在最佳条件下,样品可在20min内完全分离,线性关系良好。该方法准确、快速、简便,可同时检测样品中的DNA酶、RNA酶和细胞色素C。