O-去甲基文拉法辛对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶含量及CYP2D6、CYP3A4活性的影响

目的研究O-去甲基文拉法辛对大鼠肝微粒体内细胞色素P450(CYP450)含量及CYP2D6、CYP3A4活性的影响。方法生理盐水为对照,大鼠灌胃22.90mg.kg-1.d-1的O-去甲基文拉法辛琥珀酸盐一水合物,连续7d,然后测定其肝微体中CYP450含量及CYP2D6、CYP3A4活性。结果与生理盐水组比较,ODV组CYP450含量和CYP3A4活性无变化(P>0.05),CYP2D6活性明显被抑制(P<0.01)。结论ODV对CYP450含量和CYP3A4活性无影响,但对CYP2D6活性有抑制作用。

细胞色素P450异构体CYP3A4^(*)1G基因多态性对老年直肠癌手术患者芬太尼用药量及术后镇痛效果的影响

目的探讨细胞色素P450异构体CYP3A4~*1G基因多态性对老年直肠癌手术患者芬太尼用药量及术后镇痛效果的影响。方法选取2016年2月至2018年5月于我院行直肠癌根治术的老年患者共173例,通过术前外周血PCR和测序评估CYP3A4~*1G的基因分型,对比CYP3A4~*1G突变(突变组)和野生型(野生组)患者其术中芬太尼用药量,采用视觉模拟评分(VAS)用于在术后不同时间点评估患者的疼痛程度,对比患者自控镇痛(PCA)的初次镇痛时间和术后24 h芬太尼使用量。结果在所有173例患者中,CYP3A4~*1G变异等位基因的频率为0.191,其中突变组共61例,野生组共112例。其中突变组术中使用的平均芬太尼药物总量显著低于野生组,差异具有统计学意义(t=7.662,P <0.001),突变组患者术后初次追加镇痛时间显著高于野生组(t=7.279,P <0.001),且突变组术后24 h芬太尼用量显著低于野生组(t=13.847,P <0.001),突变组在术后2、4和8 h的疼痛VAS评分均显著低于野生组(P <0.05)。结论 CYP3A4~*1G基因多态性在老年直肠癌手术麻醉中与芬太尼的药代动力学密切相关,CYP3A4~*1G遗传多态性可能是导致患者对芬太尼镇痛反应的个体差异的重要因素之一。

人细胞色素P450 3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18重组酶的异源表达与活性

目的重组表达人细胞色素P450(CYP)3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18蛋白,为CYP3A4代谢活性的体外研究提供单一酶源。方法应用杆状病毒表达系统构建含有上述各CYP3A4突变体基因序列的重组病毒,将其连同含人源还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-P450氧化还原酶(POR)和细胞色素b5基因的重组病毒共同感染昆虫草地夜蛾细胞Sf9得到CYP3A4突变体与POR和细胞色素b5共表达的重组蛋白,分别以高效液相色谱法和荧光分析法测定各重组酶对睾酮和7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素的代谢活性。结果在mRNA分子水平上验证了CYP3A4突变体CYP3A4*3,CYP3A4*4,CYP3A4*5和CYP3A4*18基因在Sf9细胞中的转录。感染了各重组病毒的Sf9细胞裂解液对睾酮和7-苄氧基-4-三氟甲基香豆素有明显代谢。结论应用杆状病毒-昆虫细胞表达系统在体外成功表达了具有催化活性的人CYP3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18蛋白,其中CYP3A4.5活性显著低于野生型蛋白,CYP3A4.18活性显著高于野生型蛋白,而CYP3A4.3和CYP3A4.4与野生型蛋白活性近似。

氯吡格雷对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶含量及CYP3A4活性的影响

目的探讨氯吡格雷对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)含量及CYP3A4活性的影响。方法以生理盐水为对照,对照组大鼠灌胃给予1 ml生理盐水,氯吡格雷组大鼠每日灌胃给予6.75 mg/kg的氯吡格雷,连续7 d,然后测定大鼠肝微体中CYP450含量及CYP3A4活性。结果与对照组比较,氯吡格雷组的肝微粒体CYP450含量无变化(P>0.05),CYP3A4活性明显降低(P<0.01)。结论氯吡格雷对CYP450含量无影响,但对CYP3A4活性有抑制作用。

褪黑素对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶亚型CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4活性的影响

目的观察褪黑素对大鼠肝微粒体内细胞色素P450(CYP450)酶亚型CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4活性的影响。方法以生理盐水为对照,大鼠灌胃0.54 mg.kg-1.d-1的褪黑素,连续7 d,然后测定其肝微体中CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4活性。结果与对照组比较,褪黑素组CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4的活性无变化(P>0.05)。结论褪黑素对CYP450酶CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4活性无影响。

三七总皂苷对细胞色素P450酶CYP3A4和CYP2C9的影响

目的探讨三七总皂苷对Chang Liver细胞P450酶(CYP450) CYP3A4和CYP2C9表达的影响。方法采用CCK-8法考察三七总皂苷对Chang Liver细胞活力的影响,确定给药剂量范围;采用定量RT-PCR法考察三七总皂苷在给药后4,8,24,48 h对Chang Liver细胞中CYP3A4和CYP2C9 mRNA表达的影响;通过蛋白质印迹(Western Blot)法考察三七总皂苷在给药后4,8,24,48 h对Chang Liver细胞中CYP3A4和CYP2C9蛋白表达的影响。结果 100μg/m L三七总皂苷干预Chang Liver细胞4,8,24,48 h后,各干预组CYP2C9蛋白表达量明显高于空白对照组(P <0. 05),各组诱导水平随着作用时间的延长相应增加。8 h组、24 h组、48 h组CYP3A4蛋白表达量明显高于空白对照组(P <0. 05),各组的相对蛋白表达量呈时间依赖性,8 h组、24 h组、48 h组CYP2C9和CYP3A4的mRNA表达量均明显高于空白对照组(P <0. 05),且各组的诱导水平随着作用时间的延长相应增加。结论三七总皂苷可诱导CYP3A4和CYP2C9的mRNA及蛋白的表达,临床在使用三七总皂苷时,需要关注其与CYP3A4和CYP2C9底物药物之间可能的相互作用。

Cocktail探针药物法评价生、醋莪术对CYP450酶亚型的影响

目的用Cocktail探针药物法,研究生、醋莪术对大鼠CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响并进行比较,探讨其通过炮制增强或改变作用的趋向性。方法将SD大鼠随机分组,生、醋莪术组分别给予生、醋莪术提取液(9 g.kg-1),以生理盐水为空白对照,在一定时间点采集血样,用HPLC检测探针药物在大鼠体内的代谢情况,以评价生、醋莪术对CYP450酶的影响。结果生莪术的茶碱、氨苯酚和氯唑沙宗的代谢情况与空白组相比差异无显著性;但醋莪术与空白组相比,茶碱和氯唑沙宗的T12、Tmax和AUC明显增加,CL/F明显降低;氨苯酚的T12变化不明显,AUC明显降低,CL/F明显增加;氯唑沙宗的T12、Tmax、AUC明显增加,CL/F明显降低。结论单次给予大鼠生、醋莪术后,生莪术对CYP450酶的作用不明显,醋莪术对CYP1A2和CYP2E1具有抑制作用,对CYP3A4具有诱导作用。

细胞色素P450(CYP450)遗传多态性研究进展

近年来对CYP450基因型和表型相关性的研究越来越受到重视,从临床合理用药方面来说,人们希望利用基因型分析来了解个体中药物代谢酶的活性,期望既能提高药物治疗水平同时又降低不良反应的发生;从新药研发角度来说,研究药物的代谢酶CYP450的功能能够指导新药的设计、筛选及优化。该文通过查阅国内外相关文献综述了近年来关于CYP450遗传多态性研究的进展,分别介绍了CYP2C19、CYP2C9、CYP3A4、CYP2D6、CYP1A2和CYP2E1这6种主要的药物代谢酶。研究CYP450对新药设计、筛选、评价及优化有重要意义。

人参皂苷Re对H9c2心肌细胞CYP450酶的影响

目的观察人参皂苷Re对H9c2心肌细胞色素P450酶的影响,旨在发现人参皂苷Re对心肌细胞作用的分子机制。方法实验分对照组、人参皂苷Re各剂量组(1、5、10、50、100μmol·L^(-1))处理组,人参皂苷Re作用6、24、36、48及60 h后提取RNA或蛋白进行测定。利用实时定量PCR法检测H9c2心肌细胞CYP2C11、CYP2J3、CYP4A1、CYP4A3、CYP4F4及ANP mRNA的表达;采用Western blot法检测心肌细胞CYP4A1和CYP2J3蛋白的表达。结果人参皂苷Re明显上调心肌细胞CYP2C11、CYP2J3 mRNA的表达至正常对照的1.6、1.8倍,明显下调CYP4A1、CYP4A3及CYP4F4 mRNA的表达至正常对照的0.4、0.15、0.3倍。人参皂苷Re明显上调ANP基因表达水平至正常对照的3.2倍。随着药物浓度的增加,人参皂苷Re对CYP4A1蛋白表达产生明显的下调作用,而对CYP2J3蛋白产生明显的上调作用。结论人参皂苷Re可影响心肌细胞的CYP450酶和ANP基因的表达。

酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4、1A2活性的作用

目的观察酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4、1A2活性的作用,为临床上安全有效地联合用药提供实验依据。方法采用健康成人肝细胞微粒体,分为对照组和处理组。酮康唑处理组分别加入不同浓度的酮康唑1 ml,对照组仅加入培养液,孵育15 min后再加入CYP450同工酶3A4和1A2的相应底物(分别为睾酮和非那西丁)再孵育20 min。反应终止后用高效液相色谱仪测量代谢产物(分别为6β-羟基睾酮与对乙酰氨基酚)的生成量,分别代表3A4和1A2的活性。结果细胞色素P450同工酶3A4的相对活性百分比减小到对照组50%时(IC50)酮康唑的质量浓度为0.16 mg/L。而同工酶3A4的相对活性百分比随质量浓度酮康唑增加逐渐减小,各处理组与对照组比较差异均有显著性意义(P<0.05)。低剂量细胞色素P450同工酶1A2的相对活性百分比处理组与对照组比较明显降低(P<0.05),高剂量细胞色素P450同工酶1A2的相对活性百分比处理组与对照组比较则明显升高(P<0.05)。结论酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4的活性有抑制作用,然而对细胞色素P450同工酶1A2的活性则是低剂量有抑制作用,而高剂量有诱导作用。

细胞色素P450-3A4相关的药物相互作用

目的：综述与细胞色素Ｐ４５０ ３Ａ４相关的药物相互作用。方法：检索Ｍｅｄｌｉｎｅ 和中国药学文摘。结果：发现多种由ＣＹＰ３Ａ４催化代谢的药物之间可以竞争药物代谢酶，引起药物相互作用，ＣＹＰ３Ａ４的抑制剂和诱导剂均可以抑制或诱导ＣＹＰ３Ａ４催化代谢的药物代谢，导致有益或不良的药物相互作用。结论：ＣＹＰ３Ａ４催化代谢的药物联合使用，特别是ＣＹＰ３Ａ４抑制剂与底物联合使用时，可能因为抑制了药物的代谢而导致严重的药物不良反应。

己烯雌酚对人肝微粒体内CYP3A4和CYP2C9酶的抑制作用

目的体外实验考察己烯雌酚(DES)对细胞色素P450 3A4(CYP3A4)和细胞色素P450 2C9(CYP2C9)活性的抑制作用,以评估DES通过抑制这两个重要的细胞色素P450(CYP)亚型而引发药物-药物相互作用的可能性。方法混合人肝微粒体与不同浓度的DES(或阳性抑制剂)、CYP3A4或CYP2C9的探针底物在37℃条件下孵育相应的反应时间后,用高效液相色谱-紫外吸收法观察探针底物的代谢产物的生成率,计算IC50值。选取不同的探针底物浓度(覆盖Km值)和DES浓度(覆盖IC50值)测定出相应的代谢速率,用Lineweaver-Burk作图和Dixon作图来判断可逆抑制类型,计算抑制动力学参数Ki。单点失活法测定DES对CYP3A4和CYP2C9是否有基于机制的抑制。结合Ki值和DES的最大血药浓度(cmax)预测体内产生的药物-药物相互作用。结果 DES对CYP3A4和CYP2C9体现出浓度依赖型的抑制,相应的IC50值分别为7.4±1.0和(3.8±0.1)μmol.L-1。DES对CYP3A4和CYP2C9抑制的Dixon作图的交点都在第二象限,而Lineweaver-Burk作图的交点都在纵轴上,这两方面证据共同证实DES对CYP3A4和CYP2C9抑制属于竞争型抑制。CYP3A4和CYP2C9的Ki值分别为4.4和3.0μmol.L-1。DES对CYP3A4和CYP2C9不存在基于机制的抑制。利用DES的cmax计算出对CYP3A4和CYP2C9代谢底物AUC变化倍数分别为4.3和6.2。结论 DES对CYP3A4和CYP2C9的活性有较强的抑制作用,在临床常用的剂量条件下,很容易诱导药物-药物相互作用。

注射用盐酸头孢他美对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响

目的研究注射用盐酸头孢他美对大鼠肝微粒体细胞色素P450（CYP450）酶系CYPlA2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响。方法将SD大鼠分成盐酸头孢他美给药组和生理盐水空白组，每组6只，雌雄各半，给药组尾静脉注射盐酸头孢他美50mg／（kg·d），连续给药7d，每天2次。HPLC法同时测定CYP450的3种同工酶特异性探针底物在SD大鼠肝微粒体内代谢产物生成量和原型探针底物降解量，判断酶亚型活性变化。分析柱DiamonsilC，s（150mm×4．6mm，5／tm），流速1．0mL／min。CYPlA2代谢样品测定条件为甲醇（O．1％甲酸）（A）一水（0．1％甲酸）（B），0～5min：18VooA，5～10min：18％～60％A，10～15min：60oAA，检测波长为247nm；CYP3A4代谢样品测定条件为甲醇（A）-水（0．02％甲酸）（B），0～11min：40％～60％A，检测波长为223nm；CYP2E1代谢样品测定条件为甲醇（A）-水（B），0～10min：37oA～75％A，检测波长为287nm。结果探针底物及其代谢产物在测定浓度范围内线性关系良好（r≥0．9997），精密度RSD〈6％（n=5），提取回收率83．2％～97．5％。SD大鼠连续注射给予盐酸头孢他美后，CYP3A4的活性与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），可能存在诱导作用；CYPlA2和CYP2E1的活性与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论静注给予盐酸头孢他美能诱导SD大鼠肝微粒体CYP3A4，对CYPlA2和CYP2E1没有诱导或抑制作用。提示经CYP3A4代谢的药物在临床上与注射用盐酸头孢他美合用时，可能存在潜在药物一药物相互作用。

人肝微粒体中CYP3A4对氯胺酮代谢的催化作用

目的研究人肝脏微粒体中细胞色素P4503A4(CYP3A4)对氯胺酮代谢的催化作用。方法用高效液相色谱法测定氯胺酮在人肝脏微粒体孵育液中的浓度变化,计算其代谢速率;分析该代谢速率与CYP3A4特异性底物硝苯地平代谢速率的相关性;并应用CYP3A4特异性抑制剂孕二烯酮检测CYP3A4对氯胺酮代谢的催化作用。结果 20例人肝脏微粒体中氯胺酮的代谢速率均值为(12.6±3.8)μmol·min-1·g-1protein。该速率与CYP3A4活性探针硝苯地平代谢速率呈明显正相关(r=0.917,P<0.01)。加入特异性抑制剂孕二烯酮组,氯胺酮的平均代谢速率明显低于正常孵育组,为(4.7±1.6)μmol·min-1·g-1protein(P<0.01),抑制率为62.7%。结论人肝微粒体中CYP3A4对氯胺酮代谢具有催化作用。

细胞色素氧化酶CYP3A4基因多态性研究进展

CYP3A4是人类肝脏及肠道中一种主要的细胞色素P450酶,约占成人肝脏P450酶总量的25%,体内许多药物、内源性化合物和环境污染物都由它代谢,大约有38个类别共150多种药物是它的底物,涉及抗癫痫药、抗精神病药。

中国华东汉族人群细胞色素酶CYP3A4新基因型的发现与序列分析

目的:探讨中国华东地区汉族人群细胞色素P4503A4基因的基因型差异。方法:采用RT-PCR与DNA测序技术相结合的方法对来自华东地区的6份汉族成人肝组织P4503A4基因的cD-NA进行了扩增与序列分析。结果:本研究从6份汉族人肝组织中首次检测到了一种新的基因型,该基因型存在三处氨基酸突变和一处核苷酸缺失,即第71位氨基酸发生V(GTG)→A(GCG)突变;第225位氨基酸发生V(GTC)→I(AIC)的突变;第393位氨基酸发生W(TGG)→V(GTG)突变;第671～673位核苷酸CAG发生缺失。结论:本研究首次发现中国华东地区汉族人群存在一种CYP3A4新基因型。

伊曲康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶1A2、3A4活性的作用

目的观察伊曲康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶1A23、A4活性的作用,为临床上安全有效地联合用药提供实验依据。方法采用健康成人肝细胞微粒体,分为对照组和伊曲康唑处理组。处理组分别加入0.1、0.2、1.0、2.0、10.0、20.0 mg.L-1的伊曲康唑1mL,对照组仅加入培养液,孵育15 min后再加入CYP450同工酶1A2和3A4的相应底物(分别为非那西丁和睾酮)再孵育20min。反应终止后用高效液相色谱仪测量代谢产物(分别为对乙酰氨基酚与6β-羟基睾酮)的生成量代表1A2和3A4的活性。结果细胞色素P450同工酶1A2的相对活性百分比各处理组与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05),而同工酶3A4的相对活性百分比随伊曲康唑质量浓度增加逐渐减小,各处理组与对照组比较差异均有显著性意义(P<0.05)。细胞色素P450同工酶3A4的相对活性百分比减小到对照组50%时(IC50)伊曲康唑的质量浓度为0.16 mg.L-1。结论伊曲康唑在临床应用血药质量浓度范围内,对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶1A2的活性无显著影响,然而对细胞色素P450同工酶3A4的活性有抑制作用。

CYP3A4高表达肝细胞株建立及其对三氯乙烯毒性的影响

目的建立CYP3A4高表达肝细胞株并观察其对三氯乙烯毒性的影响。方法 PCR扩增CYP3A4基因并将其克隆到慢病毒高表达载体中,将已经构建的慢病毒载体进行转染后,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞。用嘌罗霉素进行筛选得到CYP3A4高表达肝细胞株,通过荧光定量PCR和Western蛋白质印迹法鉴定细胞株。用三氯乙烯0,0.25,0.5,1.0,2.0和4.0mmol·L-1对正常肝肝细胞和CYP3A4高表达肝细胞进行染毒12h,实时定量PCR检测凋亡基因bcl-2,胱天蛋白酶3,胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9以及癌基因c-fos,c-myc,K-ras和p53的表达。结果测序证明重组慢病毒高表达载体CYP3A4基因序列正确,荧光定量PCR检测CYP3A4高表达肝细胞株比正常肝细胞CYP3A4基因表达提高94倍。Western蛋白质印迹结果显示,CYP3A4高表达肝细胞株CYP3A4蛋白表达水平是正常肝细胞的2.36倍。CYP3A4高表达肝细胞bcl-2mRNA表达水平随三氯乙烯浓度增加呈下降趋势,与正常细胞相比,三氯乙烯0.25和0.5mmol·L-1使CYP3A4高表达肝细胞中的bcl-2mRNA明显升高(P<0.01);三氯乙烯0.5,1.0,2.0和4.0mmol·L-1处理使CYP3A4高表达肝细胞组的凋亡基因胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9的mRNA表达水平明显升高(P<0.05);三氯乙烯0.5,1.0,2.0和4.0mmol·L-1处理的CYP3A4高表达肝细胞c-fos、c-myc和k-ras基因的表达显著升高(P<0.01),p53表达水平明显下降(P<0.01)。结论三氯乙烯对CYP3A4高表达肝细胞株中的凋亡基因和癌基因表达具有明显促进作用,说明CYP3A4是三氯乙烯在体内代谢的重要因素。

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯对细胞色素P450酶活性的影响

目的研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)对人肝微粒体中细胞色素P450(CYP450)酶活性的影响。方法以未处理的肝微粒体作为阴性对照组,CYP450酶各亚型的特异性抑制剂作为阳性对照组,通过EGCG或特异性抑制剂与探针底物共同孵育,高效液相色谱法定量分析特异性底物的代谢产物,分析EGCG对CYP450酶各亚型活性的影响,并通过统计学分析拟合获得相应的动力学参数。结果与阴性对照组相比,EGCG显著抑制了CYP1A2酶和CYP3A4酶的活性,但抑制作用远小于阳性抑制剂的抑制作用。EGCG对CYP1A2酶和CYP3A4酶的抑制作用受EGCG浓度的影响,IC50值分别为8.69和14.07μmol/L。EGCG能够竞争性抑制CYP1A2酶的活性,而对CYP3A4酶为非竞争性抑制作用。此外,EGCG对CYP3A4酶的抑制作用具有时间依赖性,随着培养时间的延长,抑制作用逐渐增强。结论EGCG可显著抑制CYP1A2酶及CYP3A4酶的活性。因此,在EGCG的应用中应充分考虑可能出现的药物相互作用及潜在风险。

用于药物研发的细胞色素P450酶3A4体外肝细胞模型的研究进展

药物研发中生理性功能的体外细胞模型是非常重要的。细胞色素P450酶3A4(CYP3A4)是最重要的临床药物代谢酶之一,其作用底物谱广泛。相应地由这些底物作用于CYP3A4酶而产生的酶活性被抑制或诱导,直观表现为复杂化的药物代谢相互作用。因此,CYP3A4体外细胞模型在药物研发过程中具有重要应用价值。目前常用CYP3A4表达的一些体外模型,相比体内有不同程度的差距。这些差距有望通过加深机制了解、基因工程学技术以及体外微环境模拟功能单元构建组织工程技术的进步,而逐步得以缩减或消除。如何构建接近生理性表达的体外CYP3A4细胞模型是本研究领域一直探索的热点。本文就目前已知的CYP3A4生理功能特征、表达调控机制以及基于已知相关机制研究进行体外细胞模型构建的细胞种类、构建策略和方式进行综述。