葡萄糖转运蛋白介导孕酮对于氧糖剥夺PC12细胞的防护作用

目的探讨葡萄糖转运蛋白抑制剂细胞松弛素B(CB)对孕酮抗氧糖剥夺(OGD)防护PC12细胞的作用及机制。方法选取生长状态良好及诱导分化均一的PC12细胞随机分为5组:正常(normal)组、氧糖剥夺(OGD)组、孕酮(PROG)组、孕酮+细胞松弛素B(PROG+CB)组、细胞松弛素B(CB)组,后4组均行氧糖剥夺。XTT检测细胞活力,胎盘蓝染色法计数活细胞,氧化酶法测定培养基中糖含量。上述检测在OGD后24h进行。结果 OGD后PC12细胞肿胀变圆,突起减少或消失,细胞活力(P<0.01)和活细胞数(P<0.05)降低,培养液葡萄糖含量明显升高(P<0.05)。PROG减轻胞体水肿,增加细胞活力(P<0.01)和活细胞数(P<0.05),降低培养液葡萄糖含量(P<0.05)。先用CB抑制葡萄糖转运蛋白,再给PROG(PROG+CB组)则抵消PROG的防护作用。单用CB(CB组)则细胞活力仅为1.8%,活细胞数为2.9%,培养液中葡萄糖含量明显升高。可见,孕酮对氧糖剥夺PC12细胞防护作用可被葡萄糖转运蛋白的抑制剂抵消。结论葡萄糖转运蛋白可能是介导孕酮防护氧糖剥夺PC12细胞的重要分子靶标。

酪氨酸蛋白激酶抑制剂和细胞松弛素D对应力下成骨细胞ERK1/2早期变化的调控

目的观察机械应力下酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂和细胞松弛素D对体外培养的成骨样细胞细胞外信号调节激酶(ERK)1/2早期表达变化的影响。方法采用四点弯曲细胞力学加载装置系统,对人成骨样细胞进行加力:频率0.5Hz,加力板变形量4000 μstrain牵张应力作用成骨样细胞(MG-63)5min时,使细胞发生单轴牵张和压缩应变。运用Western免疫印迹检测不同方向应力应变下TPK抑制剂和细胞松弛素D对ERK1/2表达变化的影响。结果TPK抑制剂预处理后,牵张应力激活ERK的作用被明显阻断,与单纯张力组相比差异有统计学意义(P<0.01);而压缩应力的诱导作用未受影响(P>0.05);低剂量的细胞松弛素D处理后,压应力的诱导作用被明显阻断,ERK的磷酸化水平甚至低于基态,与单纯压力组相比差异有统计学意义(P<0.01),而牵张应力对ERK的激活仅受到一定程度的影响,与单纯张应力组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论力学信号可同时激活细胞内的细胞骨架、TPK转导通道,但各自主要激活的部分存在差别,无论是牵张还是压缩,成骨细胞对力学信号的感知和转导都与微丝细胞骨架密切相关,TPK的活化可能是牵张应力引起黏附斑复合物形成后的主要后续反应,压缩应力的主要后续反应与之关系不大。