基质金属蛋白酶组织抑制剂1对细胞因子诱导的胰岛β细胞凋亡的保护作用

目的探讨基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)对细胞因子IL-1β、TNF-α和干扰素γ(IFN-γ)诱导的胰岛β细胞凋亡的保护作用及其可能机制。方法实验分TIMP-1干预组、细胞因子刺激组和对照组。细胞因子刺激组应用细胞因子(IL-1β 10μg/L,TNF-α 50μg/L,IFN-γ 50μg/L)诱导大鼠胰岛瘤细胞株RINm5F细胞凋亡;TIMP-1干预组在细胞因子刺激前予以TIMP-1(50μg/L)预处理1 h;对照组采用无血清培养基同步培养。应用四甲基偶氮唑盐比色法和Caspase-3分光光度法检测各组细胞活力和Caspase-3活性,采用DNALadder进行凋亡鉴定。结果与对照组比较,细胞因子IL-1β、TNF-α和IFN-γ联合刺激组细胞活力明显降低,并呈时间依赖性(Pa<0.05,0.001);TIMP-1干预组较细胞因子刺激组细胞活力上升约14%,Caspase-3活性下降约38%,二组比较差异有显著性意义(Pa<0.001)。DNA Ladder检测,细胞因子刺激组可见特征性的梯状条带,TIMP-1干预组梯状条带不明显,出现与对照组相似的2条基因组大分子条带。结论IL-1β、TNF-α和IFN-γ联合刺激可诱导RINm5F细胞凋亡,TIMP-1对细胞因子诱导的RINm5F细胞的凋亡有一定的保护作用,此作用可能与其抑制Caspase-3活性有关。

CIAPIN1基因在结肠癌组织的表达及其相关性研究

目的检测CIAPIN1基因在结肠癌组织的表达水平与结肠癌患者临床特征的相关性,研究CIAPIN1基因与结肠癌发生的相关性.方法收集28例结肠癌患者手术后的癌组织及癌旁组织标本(术前未行放化疗),采用Western blot法检测28例结肠癌患者结肠癌组织、癌旁组织的CIAPIN1基因蛋白表达水平,探讨CIAPIN1基因与结肠癌发生的相关性;统计患者临床资料,分析CIAPIN1基因表达与结肠癌患者临床特征及肿瘤标志蛋白的关系.结果 Western bloting法检测28例结肠癌患者结肠癌组织CIAPIN1的表达明显低于癌旁组织,分别为17.9%与85.7%,差异有统计学意义(P<0.01).CIAPIN1基因的表达与患者肿瘤大小、肿瘤分期呈负相关(P=0.020);CIAPIN1与结肠癌患者性别、肿瘤发生部位、CEA、CA50、CA199、CA242、CA724的表达无相关性(P>0.05).结论 CIAPIN1在结肠癌组织的表达缺失或降低可能与结肠癌的发生密切相关,与肿瘤大小、分期呈负相关.与患者的性别、肿瘤发生部位、肿瘤标记蛋白(CEA、CA50、CA199、CA242、CA724)无相关性.

CIAPIN1对HepG2细胞增殖和细胞周期的影响

目的观察调控细胞因子诱导的凋亡抑制分子1(CIAPIN1)基因表达对肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响,并分析其作用机制。方法分别构建重组慢病毒CIAPIN1表达载体和CIAPIN1沉默载体,感染HepG2细胞,获得稳定高表达和低表达CIAPIN1基因的细胞后,实验分为4组,即CIAPIN1高表达组、CIAPIN1低表达组、无关沉默RNA(si RNA)干扰组和空白对照组,检测各组细胞增殖及CIAPIN1基因和蛋白表达,使用流式细胞仪检测细胞周期,采用Western blotting法检测cyclin D1、CDK4、cyclin E、CDK2水平以及总蛋白中IKKβ、磷酸化IKBα、p65和磷酸化p65水平。结果 CIAPIN1低表达组细胞增殖受到明显抑制,G0/G1期细胞比例为(73.2±2.5)%,明显高于GIAPIN1高表达组【(58.8±2.2)%,P<0.05】、无关si RNA干扰组【(62.4±1.8)%,P<0.05】或空白对照组【(63.2±2.6)%,P<0.05】;CIAPIN1高表达组cyclin D1、CDK4、CDK2、cyclin E相对表达量明显高于其它各组,差异有统计学意义(P<0.05);CIAPIN1高表达组磷酸化IKBα、磷酸化P65相对表达量分别为(1.335±0.182)和(0.731±0.106),明显高于GIAPIN1低表达组【(0.108±0.035)和(0.028±0.010),P均<0.05】、无关si RNA干扰组【(0.251±0.082)和(0.318±0.058),P均<0.05】或空白对照组【(0.238±0.067)和(0.322±0.061),P均<0.05】。结论 CIAPIN1对肝癌细胞增殖有促进作用,可能与其对NF-кB信号通路的激活作用有关。

结肠癌组织中CIAPIN1 mRNA表达及意义

目的检测CIAPIN1mRNA在结肠癌组织及正常结肠粘膜组织中的表达水平,研究CIAPIN1基因与结肠癌发生的相关性。方法收集28例结肠癌患者手术后的癌组织及切缘旁>5cm的正常粘膜组织标本(术前未行放化疗),采用反转录PCR法检测28例结肠癌患者结肠癌组织、正常结肠粘膜组织的CIAPIN1mRNA表达水平。结果 28例结肠癌患者癌组织CIAPIN1mRNA阳性表达率为10.7%,正常结肠粘膜组织阳性表达率为100%,差异有统计学意义(P=0.000)。结论 CIAPIN1mRNA在结肠癌组织的表达缺失或降低可能与结肠癌的发生相关。

CIAPIN1在胃癌细胞发生内质网应激时的表达

目的：观察胃癌细胞系BGC823和SGC7901细胞发生内质网应激时CIAPIN1的表达水平.方法：5μg/ml的衣霉素作用细胞6、12和24 h后,采用CCK-8和流式细胞术检测2组细胞的生长抑制;5μg/ml的衣霉素作用24 h后,TUNEL法检测2组细胞的凋亡情况,RT-PCR和免疫印迹检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和CIAPIN1的表达水平.结果：衣霉素可以诱导2组细胞发生内质网应激及其介导的细胞凋亡;GRP78的表达显著升高,同时CIAPIN1的表达显著降低,且在BGC823和SGC7901细胞间差异均没有统计学意义.结论：CIAPIN1的表达在胃癌细胞发生内质网应激时降低,可能在胃癌的发生及增殖凋亡过程中起到重要作用.

敲除CIAPIN1基因提高白血病K562细胞对伊马替尼的敏感性

目的:探讨靶向干扰细胞因子诱导凋亡抑制因子1(cytokine induced apoptosis inhibitor 1,CIAPIN1)基因表达后慢性粒细胞性白血病K562细胞对伊马替尼的敏感性。方法:构建靶向CIAPIN1基因的shRNA干扰载体;使用实时定量PCR、Western blotting以及免疫荧光评价CIAPIN1-shRNA组(CIAPIN1-shRNA转染)和scramble-shRNA组(scramble-shRNA转染K562细胞)干扰效率;伊马替尼(imatinib)处理两组K562细胞后,MTT法检测其增殖能力,集落形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术和Western blotting检测细胞周期、凋亡及凋亡相关蛋白的变化。结果:shRNA干扰可有效抑制CIAPIN1表达,CIAPIN1-shRNA组的CIAPIN1 mRNA表达量为scramble-shRNA组的(29.74±4.03)%、CIAPIN1蛋白表达量前者为后者的(21.57±2.18)%。CIAPIN1表达下调能显著抑制伊马替尼对K562细胞的增殖和克隆形成,CIAPIN1-shRNA+imatinib组的细胞克隆形成数为(15.60±1.03)个/视野,克隆半径为(2.63±0.55)μm,均小于scramble-shRNA+imatinib组(P<0.05或P<0.01)。CIAPIN1-shRNA+imatinib组的细胞G1期细胞比例比scramble-shRNA+imatinib组明显增多,S期细胞比例较scramble-shRNA+imatinib组明显减少(均P<0.01)。CIAPIN1-shRNA+imatinib组K562细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。敲除CIAPIN1能抑制细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Bcl-xl、Bcl-2、Mcl-1表达,诱导细胞内细胞凋亡相关蛋白p21、Bid、Bim表达,且与伊马替尼具有协同作用。结论:CIAPIN1表达下调可明显提高K562细胞对伊马替尼的敏感性,该作用主要通过阻滞K562细胞周期及诱导凋亡相关蛋白表达实现。

CIAPIN1基因与肿瘤的相关性研究进展

CIAPIN1是新近被证实与凋亡相关的分子,在胚胎及成人组织内有广泛的分布,但在不同组织来源的恶性肿瘤,CIAPIN1的阳性表达水平存在明显差异。通过基因转染技术,CIAPIN1能使自身呈低表达的肿瘤细胞发生凋亡;通过siRNA技术,CIAPIN1可使自身呈高表达的肿瘤细胞增殖受抑制。体外实验研究发现,CIAPIN1通过上调多药耐药基因1和多药耐药相关蛋白1参与胃癌细胞多药耐药的发生。

CIAPIN1和P-gp蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨细胞因子诱导的凋亡抑制因子1(CIAPIN1)和P糖蛋白(P-gp)蛋白在胃癌组织中的表达,分析二者对胃癌诊断的临床意义。方法回顾性分析2017年8月至2019年3月于本院行手术切除治疗的60例胃癌患者的临床资料,分析CIAPIN1、P-gp蛋白在胃癌及癌旁组织中的阳性率,分析临床分期、淋巴结转移情况对胃癌组织CIAPIN1、P-gp蛋白表达的影响。结果CIAPIN1、P-gp蛋白在胃癌组织中的阳性率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);临床分期Ⅲ~Ⅳ期患者胃癌组织CIAPIN1、P-gp阳性率高于Ⅰ~Ⅱ期,淋巴结转移患者胃癌组织CIAPIN1、P-gp阳性率高于未转移,差异有统计学意义(P<0.05);经线性回归分析检验显示,CIAPIN1、P-gp蛋白与胃癌临床分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。结论CIAPIN1、P-gp蛋白在胃癌组织与癌旁组织表达存在差异,其表达与临床分期、淋巴结转移情况相关,CIAPIN1、P-gp蛋白表达对临床分期、淋巴结转移的诊断具有一定意义。

miRNA765高表达对胃癌耐药细胞株BGC-823/CDDP耐药性的影响

目的观察miRNA765高表达对胃癌顺铂(CDDP)耐药细胞株BGC-823/CDDP耐药性的影响。方法将PCR扩增的包含miRNA765前体的基因序列克隆至真核表达载体,构建miRNA重组表达载体;阳离子脂质体转染重组质粒到BGC-823/CDDP细胞。转染后48 h,Real-Time PCR和Western blotting法分别检测细胞中miRNA765和细胞因子诱导的凋亡抑制因子1(CIAPIN1)蛋白的相对表达量;采用不同浓度CDDP处理转染后48 h的BGC-823/CDDP细胞,24和48 h后MTT法检测细胞活性并计算细胞对于CDDP的半抑制浓度(IC50)。采用终质量浓度为1μg/mL的CDDP处理基因干预后的BGC-823/CDDP细胞,双染法检测细胞凋亡率。结果 BGC-823/CDDP细胞内miRNA765的相对表达量明显低于其亲本细胞BGC-823,CIAPIN1蛋白相对表达量则明显高于其亲本细胞株(均P<0.01)。在BGC-823/CDDP细胞内高表达miRNA765可明显抑制CIAPIN1蛋白的表达,转染后48 h的CIAPIN1蛋白表达量明显低于未转染组(P<0.01);miRNA765高表达可明显降低BGC-823/CDDP细胞的耐药能力,48 h后IC50值从(18.27±3.92)μg/mL降至(1.50±0.43)μg/mL(P<0.05)。转染48 h后,BGC-823/CDDP细胞的凋亡率从(10.1±1.7)%上升至(53.4±7.9)%(P<0.01)。结论 miRNA765高表达可以明显降低胃癌耐药细胞株BGC-823/CDDP的耐药能力。

细胞因子诱导的凋亡抑制因子1在胃癌中的表达及对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的：探讨细胞因子诱导的凋亡抑制因子1（CIAPIN1）在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达及对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法应用免疫组织化学方法检测CIAPIN1蛋白在15例正常胃黏膜组织、148例胃癌组织（42非转移性胃癌组织、106例转移性胃癌组织）及37例转移性淋巴结组织中的表达。建立高表达和低表达CIAPIN1的胃癌SGC-7901细胞系，通过Transwell实验比较CIAPIN1不同表达水平细胞的迁移和侵袭能力。结果 CIAPIN1在胃癌组织中的表达阳性率显著低于正常胃黏膜组织（41．2％比86．7％，P＝0．0008）；在转移性胃癌组织中的表达阳性率明显低于非转移性胃癌组织（34．9％比71．4％，P＝0．0000）；在TNM分期较早组织中表达的阳性率明显高于分期较晚者（Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期分别为55．0％、53．5％和24．4％，P＝0．0037）；而转移性胃癌组织和转移性淋巴结组织中CIAPIN1表达阳性率的差异无统计学意义（34．9％比21．6％，P＝0．3700）。Transwell实验结果显示，与普通胃癌SGC-7901细胞相比，高表达CIAPIN1可显著抑制细胞迁移和侵袭，而低表达CIAPIN1可显著促进细胞的迁移和侵袭（均P＜0．05）。结论 CIAPIN1在胃癌组织中表达阳性率低，可抑制胃癌的迁移和侵袭。

腺病毒介导的CIAPIN1基因对肺癌细胞生长和细胞周期的影响

目的以重组腺病毒载体介导细胞因子诱导的凋亡抑制分子1（cytokine induced apoptosis inhibitor 1，CIAPIN1）基因转染人肺腺癌细胞系A549，观察并鉴定该基因在腺癌细胞中的表达及其对细胞生长和细胞周期的影响。方法构建腺病毒载体介导CIAPIN1基因（Ad—CIAPIN1），转染到低水平表达CIAPIN1的人肺腺癌细胞系A549，采用Western blot检测目的蛋白的表达；台盼蓝染色计数活细胞数，绘制细胞生长曲线；流式细胞术（FCM）分析细胞周期及细胞凋亡的变化。结果外源性CIAPIN1基因在A549肺癌细胞获得高水平的表达；CIAPIN1能显著抑制A549的生长（P〈0．01）；流式细胞仪检测显示肺癌细胞发生凋亡，并出现明显的Gt／s期阻滞现象。结论以腺病毒为载体介导CIAPIN1基因在A549细胞内表达，可发挥抑制细胞生长、诱发细胞凋亡及参与细胞周期调控的作用。提示Ad—CIAPIN1基因可能在人肺癌基因治疗中发挥重要作用。

CIAPIN1在卵巢癌中的表达及对卵巢癌细胞凋亡的影响研究

目的探讨细胞因子诱导凋亡抑制因子(CIAPIN1)在卵巢癌中的表达及对卵巢癌细胞凋亡的影响。方法 RT-PCR和Western blot检测50例卵巢癌组织和对应的癌旁组织中CIAPIN1 mRNA和蛋白水平。以卵巢癌细胞为研究对象,细胞转染CIAPIN1小干扰RNA。RT-PCR和Western blot检测转染后细胞中CIAPIN1mRNA和蛋白水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果卵巢癌组织中CIAPIN1表达水平高于癌旁组织(P <0.05)。CIAPIN1小干扰RNA可以降低卵巢癌细胞中CIAPIN1表达水平,降低细胞存活率,促进细胞凋亡。结论 CIAPIN1在卵巢癌组织中表达上调,干扰CIAPIN1能够抑制卵巢癌细胞增殖,促进卵巢癌细胞凋亡,作用机制可能与Akt信号通路有关。

CIAPIN1蛋白在结肠癌中的表达及其与肿瘤病理学特征的关系

目的探讨细胞因子诱导的凋亡抑制因子1（CIAPIN1）蛋白在结肠癌组织中的表达及其与肿瘤病理学特征的关系。方法选取我院手术后收集的结肠癌组织标本80例、癌旁组织40例，收集时间2014年1月至2017年1月。采用免疫组织化学染色、Western blotting技术检测两类标本中的CIAPIN1蛋白表达水平，并分析CIAPIN1蛋白与结肠癌发生发展的关系。结果结肠癌组织中CIAPINl蛋白阳性表达率（30．0％）显著低于癌旁组织（85．0％），差异有统计学意义（χ^2=32．303，P〈0．001）。结肠癌组织中的CIAPIN1蛋白相对表达水平（0．507±0．183）显著低于癌旁组织（1．874±0．361），差异有统计学意义（t=22．513，P〈0．001）。结肠癌组织中的CIAPINl蛋白阳性表达率与患者年龄（χ^2=0．086，P=0．769）、性别（χ^2=0．779，P=0．377）、肿瘤浸润深度（χ^2=0．879，P=0．348）、肿瘤部位（χ^2=0．725，P=0．395）、肿瘤大小（χ^2=2．241，P=0．134）、分化程度（χ^2=1．372，P=0．241）、病理学类型（P=0．715）无关；与患者淋巴结转移（χ^2=10．813，P=0．001）、临床分期（χ^2=5．610，P=0．018）具有相关性。结论结肠癌组织中的CIAPINl蛋白呈显著低表达，并且与患者临床分期、淋巴结转移有关。