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CTP-HBcAg_(18-27)-Tapasin诱导C57BL/6小鼠HBV特异性CTL反应的机制 被引量:1
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作者 吴姗姗 唐余燕 +5 位作者 王洁玲 陈小华 张毅 汤正好 臧国庆 余永胜 《世界华人消化杂志》 CAS 2016年第17期2688-2695,共8页
目的:观察融合蛋白胞质转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)-HBcAg_(18-27)-Tapasin通过介导JAK/STAT通路诱导近交系C57BL/6小鼠HBV特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)反应.方法:C57BL/6小鼠随机分为4组:CT... 目的:观察融合蛋白胞质转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)-HBcAg_(18-27)-Tapasin通过介导JAK/STAT通路诱导近交系C57BL/6小鼠HBV特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)反应.方法:C57BL/6小鼠随机分为4组:CTPHBcAg_(18-27)-Tapasin实验组、CTP-HBcAg_(18-27)-Tapasin+AG490对照组、AG490对照组、PBS空白组.融合蛋白经肌肉注射免疫小鼠,腹腔注射AG490阻断JAK/STAT通路,CCK-8比色法检测T淋巴细胞增殖活性;流式细胞术检测T淋巴细胞内的的细胞因子;ELISA检测T淋巴细胞分泌细胞因子,Real-time PCR检测JAK/STAT通路信号分子表达水平.结果:CTP-HBcAg_(18-27)-Tapasin组相比CTPHBcAg_(18-27)-Tapasin+AG490组CD8^+IFN-γ^+T双阳性细胞百分比显著增加(P<0.01),淋巴细胞增殖活性差异具有显著性(P<0.01),Th1型细胞因子分泌水平显著增加(P<0.01),其他各组之间没有显著性差异,JAK/STAT信号通路信号中Jak2,STAT4 mRNA分子表达水平CTP-HBcAg_(18-27)-Tapasin组相比其他对照组表达水平差异具有显著性(P<0.05),CTP-HBcAg_(18-27)-Tapasin组Tyk2、STAT1mRNA的分子表达水平相比其他对照组表达水平具有显著性差异(P<0.01).结论:本研究表明CTP-HBcAg_(18-27)-Tapasin通过JAK/STAT信号通路促进Th1型细胞因子的分泌而促进特异性CTL反应. 展开更多
关键词 ctp-HBcAg_(18-27)-Tapasin HBV特异性CTL反应 JAK/STAT信号通路
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胞质转导肽-HBcAg_(18-27)-Tapasin诱导C57BL/6小鼠T淋巴细胞分泌Th1型细胞因子及HBV特异性CTL的表达 被引量:4
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作者 唐余燕 陈小华 +2 位作者 汤正好 臧国庆 余永胜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期229-232,共4页
目的观察融合蛋白胞质转导肽(CTP)-HBcAg18-27-Tapasin诱导C57BL/6小鼠T淋巴细胞分泌Th1型细胞因子及HBV特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)的表达。方法 C57BL/6小鼠随机分为实验组CTP-HBcAg18-27-Tapasin、对照组CTP-HBcAg18-27、HBcAg18-27-... 目的观察融合蛋白胞质转导肽(CTP)-HBcAg18-27-Tapasin诱导C57BL/6小鼠T淋巴细胞分泌Th1型细胞因子及HBV特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)的表达。方法 C57BL/6小鼠随机分为实验组CTP-HBcAg18-27-Tapasin、对照组CTP-HBcAg18-27、HBcAg18-27-Tapasin及空白组(生理盐水)。经肌肉免疫小鼠,ELISA检测T淋巴细胞分泌细胞因子;流式细胞术(FCM)检测T淋巴细胞内的细胞因子;CCK-8法检测T淋巴细胞增殖活性。结果实验组能有效刺激小鼠T细胞分泌Th1型细胞因子;FCM检测实验组融合蛋白诱导的CTL水平明显高于其他组;且实验组T淋巴细胞增殖活性明显高于对照组及空白组。结论 CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白免疫C57BL/6小鼠后,能提高T淋巴细胞增殖活性,能有效刺激T淋巴细胞分泌Th1型细胞因子及增加CTLs的表达。 展开更多
关键词 胞质转导肽 TAPASIN T细胞增殖 细胞毒T淋巴细胞
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细胞质膜微囊-微囊蛋白及其相关信号分子 被引量:1
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作者 姚康 徐标 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期370-372,共3页
Caveolae, specialized vesicular invaginations of the plasma membrane ,have attracted increasing attentions to those who are studing siginal transduction .Many proteins involved in signal transduction have been found e... Caveolae, specialized vesicular invaginations of the plasma membrane ,have attracted increasing attentions to those who are studing siginal transduction .Many proteins involved in signal transduction have been found enriched in these microdomains.Caveolins,as marker proteins of caveolae,form a scaffold onto which many classes of signaling molecules can assemble at steady state or after ligand-induced activiton .In addition to concentrating these signal transducers within a distinct region of the plasma membrane ,caveolin binding may functionally regulate the activation state of caveolae-associated signaling molecules.Thus,an emerging notion is that caveolae are signaling processing centers which orchestrate signaling events at the cell surface that influence cell function . 展开更多
关键词 细胞质膜微表 微表蛋白 信号肽类 信号转导 受体
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胞质转导肽-HBcAg_(18-27)-Tapasin体外诱导HBV转基因小鼠髓源性树突状细胞成熟及在T淋巴细胞增殖中的作用
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作者 唐余燕 余永胜 +3 位作者 卓萌 臧国庆 汤正好 陈小华 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2013年第2期122-129,共8页
目的:观察融合蛋白胞质转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)-HBcAg18-27-Tapasin体外诱导HBV转基因小鼠髓源性树突状细胞(dendritic cell,DC)成熟和对T淋巴细胞增殖的作用.方法:体外分离、培养HBV转基因小鼠及近交系C57BL/6... 目的:观察融合蛋白胞质转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)-HBcAg18-27-Tapasin体外诱导HBV转基因小鼠髓源性树突状细胞(dendritic cell,DC)成熟和对T淋巴细胞增殖的作用.方法:体外分离、培养HBV转基因小鼠及近交系C57BL/6小鼠髓源性DC,加入重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白介素(interleukin,IL)-4培养5d,再加入实验组10μg/mL CTP-HBcAg18-27-Tapasin、对照组10μg/mL CTP-HBcAg18-27、10μg/mL HBcAg18-27-Tapasin及空白组RPMI1640完全培养液.流式细胞术测定DC表面分子CD80、CD83、MHC-1的表达,ELISA法测定DC培养上清液中的IL-12p70的水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测T淋巴细胞增殖反应,流式细胞仪检测增殖的T淋巴细胞内的细胞因子.结果:体外成功诱导小鼠髓源性DC;CTP-HBcAg18-27-Tapasin能明显上调DC表面分子CD80、CD83、MHC-1的表达;并且CTP-HBcAg18-27-Tapasin组诱导DC分泌的IL-12p70水平及诱导DC增殖T淋巴细胞增殖能力明显高于对照组及空白组[IL-12p70转基因小鼠(F=205.85,P=0.000);C57BL/6小鼠(F=406.20,P=0.000)];流式细胞仪检测实验组融合蛋白诱导的CTL水平也高于对照组[转基因小鼠(F=155.45,P=0.000);C57BL/6小鼠(F=392.90,P=0.000)],同时HBV转基因小鼠DC表面分子及在T淋巴细胞增殖中的作用要比C57BL/6小鼠低.结论:分子伴侣Tapasin修饰胞内化抗原肽能促进HBV转基因小鼠髓源性DC的分化、成熟,并能增强DC刺激T淋巴细胞增殖能力及诱导CTL的产生. 展开更多
关键词 胞质转导肽 HBcAg18-27 TAPASIN 树突细胞 T淋巴细胞
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细胞穿透肽转运机制、分子改造及相关免疫治疗
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作者 孔祥军 吴玢 +1 位作者 任勇刚 吕凤林 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期901-905,共5页
细胞穿透肽(cell penetrating peptides,CPPs)也称为蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)是一类具有较强的穿膜活性的多肽,可以携带各种生物分子转运到细胞内,这一特点使其在药物转运系统及疾病治疗等领域有着广泛的研究,... 细胞穿透肽(cell penetrating peptides,CPPs)也称为蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)是一类具有较强的穿膜活性的多肽,可以携带各种生物分子转运到细胞内,这一特点使其在药物转运系统及疾病治疗等领域有着广泛的研究,但是其穿膜转运机制尚不清楚。CPPs的穿膜过程可以分为3步,首先CPPs特殊的生化性质使其与细胞表面相互作用,形成空间优势,然后通过不同的方式进行跨膜转运,之后在CPPs在细胞内有不同的转运路径与定位。这种特性使其在免疫治疗方面有广阔的应用前景。本文就其运转过程的研究做一概括总结。随着研究不断深入,需要对传统的PTD进行改建、开发或者构建新的仿CPPs分子达到提高其运转效率、细胞内特异性定位及靶向不同种类细胞的目的,优化CPPs运转系统,为疫苗设计提供新的思路,并满足基础研究的需要。 展开更多
关键词 细胞穿透肽 跨膜转运 胞浆转导肽 分子改造 免疫治疗
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CTP-OD-HA融合蛋白的原核表达及其活性鉴定 被引量:4
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作者 刘钉宾 黄世峰 +6 位作者 曾建明 袁颖 陶昆 温健萍 曹唯希 黄宗干 冯文莉 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期115-119,共5页
目的构建CTP-OD-HA融合基因原核表达质粒,表达并纯化融合蛋白,并检测其在人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞株中的转导活性及胞浆定位。方法分别将胞浆转导肽(CTP)、寡聚化区域(OD)基因和流感病毒血凝素抗原表位(HA)片段依次连接入pET32a... 目的构建CTP-OD-HA融合基因原核表达质粒,表达并纯化融合蛋白,并检测其在人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞株中的转导活性及胞浆定位。方法分别将胞浆转导肽(CTP)、寡聚化区域(OD)基因和流感病毒血凝素抗原表位(HA)片段依次连接入pET32a(+)质粒,构建重组原核表达质粒pCTP-OD-HA,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经亲和纯化、Western blot验证、肠激酶切割、目的蛋白回收和FITC标记后,将FITC-CTP-OD-HA融合蛋白作用于K562细胞,观察其转导活性及细胞定位。结果重组原核表达质粒pCTP-OD-HA经酶切及测序鉴定,证明构建正确。37℃,1 mmol/LIPTG诱导4h,目的蛋白的表达量最高,约占菌体总蛋白的35%,纯化后纯度达95%以上。FITC-CTP-OD-HA融合蛋白在K562细胞中具有高转导活性和显著的胞浆定位特性。结论已成功构建CTP-OD-HA融合基因原核表达质粒,并高效表达了目的蛋白,为进一步研究其在CML信号转导通路中的作用,阐明CML的发病机制及探讨蛋白肽在CML中的治疗策略奠定了基础。 展开更多
关键词 胞浆转导肽 寡聚化区域 血凝素 慢性粒细胞白血病 原核表达 转导活性 胞浆定位
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CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA融合肽对白血病K562细胞裸鼠皮下移植瘤的作用 被引量:1
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作者 肖恒 王海霞 +3 位作者 陶崑 钟梁 黄世峰 冯文莉 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期954-958,共5页
目的:探讨细胞质转导肽-寡聚化结构域1-血凝素(cytoplasmic transduction peptide-oligomerization domain 1-hemagglutinin,CTP-OD1-HA)和CTP-OD2-HA融合肽对白血病K562细胞裸鼠皮下移植瘤的作用。方法:CTP-OD-HA(阳性对照)、CTP-HA(... 目的:探讨细胞质转导肽-寡聚化结构域1-血凝素(cytoplasmic transduction peptide-oligomerization domain 1-hemagglutinin,CTP-OD1-HA)和CTP-OD2-HA融合肽对白血病K562细胞裸鼠皮下移植瘤的作用。方法:CTP-OD-HA(阳性对照)、CTP-HA(阴性对照)、PBS(空白对照)、CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA分别预处理K562细胞,并将其分别注射入裸鼠皮下,观察裸鼠皮下移植瘤的生长情况,TUNEL法检测移植瘤组织中肿瘤细胞的凋亡,免疫组织化学法检测肿瘤组织中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况。结果:CTPOD1-HA和CTP-OD2-HA处理组移植瘤体积明显小于CTP-HA组(P<0.05),且肿瘤细胞内出现空泡样凋亡改变。TUNEL法检测结果显示,CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA处理组肿瘤细胞的凋亡改变比CTP-HA组更明显(P<0.05)。CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA处理组肿瘤组织中凋亡相关蛋白Bax蛋白的表达水平明显高于CTP-HA组(P<0.05),而Bcl-2蛋白的表达水平明显低于CTP-HA组(P<0.05)。结论:CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA融合肽能够抑制K562细胞在裸鼠体内的致瘤能力,并促进肿瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 白血病 融合蛋白类 bcr—abl 小鼠 细胞质转导肽
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真核重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN的构建及其在HEK 293-6E细胞中的表达
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作者 喻备 黄媛 +4 位作者 胡海峰 易炜 王云汉 陈林 杨进 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第4期377-380,共4页
目的构建真核重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN,并在HEK 293-6E细胞中进行表达。方法合成融合基因CTP-PTEN,定向克隆至真核表达载体pTT5中,构建重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒,进行双酶切及测序鉴定。在Lipofecta... 目的构建真核重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN,并在HEK 293-6E细胞中进行表达。方法合成融合基因CTP-PTEN,定向克隆至真核表达载体pTT5中,构建重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒,进行双酶切及测序鉴定。在Lipofectamine 2000的介导下,将鉴定正确的重组表达质粒转染至HEK 293-6E细胞,Western blot法检测细胞中融合蛋白CTP-PTEN的表达。结果经双酶切及测序鉴定,证明重组表达质粒pTT5-CTPPTEN构建正确。转染48 h后,HEK 293-6E细胞中可见相对分子质量约49 700的CTP-PTEN融合蛋白条带。结论成功构建了重组质粒pTT5-CTP-PTEN,并于HEK 293-6E细胞中表达了CTP-PTEN融合蛋白。 展开更多
关键词 PTEN基因 胞浆转导肽 基因表达 真核细胞 HEK 293-6E细胞
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融合蛋白CTP-FoxM1诱导C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞的活化
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作者 郑兰 王海霞 +1 位作者 唐翌姝 张莉萍 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2015年第5期638-647,共10页
树突状细胞(dendritic cells,DCs)疫苗负载的肿瘤抗原可以使DCs大量表达表面分子II类组织相容性抗原(major histocompatibility complex class-II,MHC-II)及共刺激分子CD40、CD80、CD86,促进Th1(T helper 1)型细胞因子的分泌,从而可以... 树突状细胞(dendritic cells,DCs)疫苗负载的肿瘤抗原可以使DCs大量表达表面分子II类组织相容性抗原(major histocompatibility complex class-II,MHC-II)及共刺激分子CD40、CD80、CD86,促进Th1(T helper 1)型细胞因子的分泌,从而可以将肿瘤抗原充分递呈给T淋巴细胞,诱导机体产生杀伤肿瘤细胞的免疫应答。其中,肿瘤抗原是否能充分活化DCs是机体发挥抗肿瘤免疫应答的关键。该研究以融合蛋白CTP-Fox M1(cytoplasmic transduction peptide-forkhead box M1)为研究对象,探讨其对C57BL/6小鼠骨髓来源DCs的活化作用。首先,分别将胞质转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)、Fox M1(forkhead box M1)抗原相关基因连接入p COLD-TF-DNA,构建重组原核表达质粒p COLD-TF-CTP-Fox M1,转化感受态大肠杆菌BL21,IPTG(isopropylβ-Dl-thiogalactopyranoside)诱导表达,经亲和纯化、Western blot验证得到融合蛋白CTP-Fox M1。然后,用CCK-8试剂盒检测经不同浓度的融合蛋白CTP-Fox M1处理48 h后的DCs的存活率;用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白CTP-Fox M1在DCs的定位情况;流式细胞仪检测DCs表面MHC-II类分子和共刺激分子CD40、CD80、CD86的表达情况;ELISA法检测DCs培养上清中细胞因子白介素-12(interleukin-12,IL-12)的分泌水平。结果显示:CTP-Fox M1对DCs的生长有一定的抑制作用,且与其浓度有关,浓度为1μg/m L的融合蛋白CTP-Fox M1处理组的DCs存活率(80.93%±8.36%)明显高于浓度为2μg/m L融合蛋白CTP-Fox M1处理组DCs的存活率(70.13%±5.38%,P<0.001)和4μg/m L融合蛋白CTP-Fox M1处理组DCs的存活率(62.97%±4.06%,P<0.001)。在激光共聚焦显微镜下可以观察到该融合蛋白能够在DCs胞质内定位,与对照组相比,该融合蛋白可以上调DCs表面MHCII类分子和共刺激分子CD40、CD80、CD86的表达量(P<0.01,P<0.05)及细胞因子IL-12的分泌量(P<0.001)。结果提示,融合蛋白CTP-Fox M1能促进DCs的活化,对肝癌的免疫治疗有一定的潜能,为下一步探索融合蛋白CTP-Fox M1负载的DCs是否能够在体内发挥免疫效应奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 胞质转导肽 原核表达 蛋白纯化 树突状细胞 疫苗 肿瘤免疫
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融合蛋白CTP-SOD在毕赤酵母中的表达、纯化及抗氧化能力 被引量:2
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作者 李沛志 任军乐 +1 位作者 安婷 刘堰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期324-329,共6页
超氧化物歧化酶(SOD)是一种在生物界广泛存在的抗氧化酶,在抗衰老、抗肿瘤、抗免疫疾病和电磁辐射上都起着重要的作用。本实验利用含有细胞质转导肽(CTP,一种能够携带外源大分子穿过细胞膜,定位于细胞质的短肽)基因序列的特异引物,以人... 超氧化物歧化酶(SOD)是一种在生物界广泛存在的抗氧化酶,在抗衰老、抗肿瘤、抗免疫疾病和电磁辐射上都起着重要的作用。本实验利用含有细胞质转导肽(CTP,一种能够携带外源大分子穿过细胞膜,定位于细胞质的短肽)基因序列的特异引物,以人总RNA反转录产物为模板,扩增出了CTP和人铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn SOD)的融合基因。运用毕赤酵母表达系统成功表达了具有活性的CTP-SOD融合蛋白。CTP-SOD预处理HeLa细胞后,明显提高了邻苯三酚(Progallol)诱导氧化胁迫下HeLa细胞的存活率,和对照组野生型SOD相比具有显著性差异。结果表明,CTP-SOD融合蛋白比野生型SOD更容易进入细胞,具有更高效的抗氧化功能。 展开更多
关键词 细胞质转导肽 毕赤酵母 分泌表达 氧化胁迫
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双歧杆菌介导CTP-NPRL2对裸鼠肾癌生长及凋亡的影响
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作者 邓正国 唐伟 +1 位作者 陈欣 史晓博 《重庆医学》 CAS 北大核心 2017年第18期2464-2467,共4页
目的探讨双歧杆菌介导CTP-NPRL2对裸鼠肾癌生长及凋亡的影响。方法构建pET15b-CTP-NPRL2并电转双歧杆菌,Western blot验证蛋白表达。采用肾癌细胞悬液皮下注射法建立裸鼠肾癌模型,并分为观察组与对照组(每组8只),分别经尾静脉注射携带pE... 目的探讨双歧杆菌介导CTP-NPRL2对裸鼠肾癌生长及凋亡的影响。方法构建pET15b-CTP-NPRL2并电转双歧杆菌,Western blot验证蛋白表达。采用肾癌细胞悬液皮下注射法建立裸鼠肾癌模型,并分为观察组与对照组(每组8只),分别经尾静脉注射携带pET15b-CTP-NPRL2的双歧杆菌与生理盐水,每周1次,4周后处死裸鼠,称取裸鼠及荷瘤质量,TUNEL法检测肾癌组织凋亡。结果观察组与对照组裸鼠质量分别为(26.24±1.98)g、(23.28±2.17)g,荷瘤质量分别为(1.37±0.12)g、(1.68±0.18)g,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。TUNEL检测显示观察组凋亡指数(23.27±5.14)%明显高于对照组(10.37±2.58)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论双歧杆菌介导CTP-NPRL2对裸鼠肾癌生长具有抑制功能,并明显增加了肾癌细胞的凋亡。 展开更多
关键词 肾肿瘤 双歧杆菌 基因治疗 NPRL2 细胞质转导肽
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CTP-BCR-ABL抗原肽负载树突状细胞体外致敏T淋巴细胞靶向杀伤CML细胞
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作者 王旭 曾大川 +2 位作者 郑忍忍 黄峥兰 高淼 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2021年第2期353-362,共10页
BCR-ABL为慢性髓细胞白血病特异胞质抗原,为良好的免疫治疗靶标。该研究选择BCR-ABL融合位点的两段抗原肽SSKALQRPV(SS)、GFKQSSKAL(GF)为靶点,与胞质转导肽融合表达,负载小鼠骨髓源性树突状细胞。在胞质转导肽介导下,SS、GF短肽进入树... BCR-ABL为慢性髓细胞白血病特异胞质抗原,为良好的免疫治疗靶标。该研究选择BCR-ABL融合位点的两段抗原肽SSKALQRPV(SS)、GFKQSSKAL(GF)为靶点,与胞质转导肽融合表达,负载小鼠骨髓源性树突状细胞。在胞质转导肽介导下,SS、GF短肽进入树突状细胞并定位于内质网,具备了被树突状细胞识别为内源性抗原并以MHC I类分子递呈的条件。在体外培养中,用致敏的树突状细胞刺激脾脏CD8^(+)T淋巴细胞,获得针对CML的细胞毒性T淋巴细胞,同时检测该细胞毒性T淋巴细胞体外抗CML的效应。结果证实,胞质转导肽介导的GF抗原短肽负载的树突状细胞能够诱导CD8^(+)T淋巴细胞增殖活化并产生针对CML的细胞毒性杀伤效应。因此,GF抗原肽有望作为CML免疫治疗的靶点。该研究为鉴定出靶向CML细胞的T淋巴细胞表面的特异TCR序列准备了条件,进而为后续制备靶向CML的TCR-T细胞奠定了基础。 展开更多
关键词 树突状细胞 细胞毒性T淋巴细胞 BCR-ABL 慢性髓细胞白血病 胞质转导肽
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胞质转导肽-HBcAg18-27-Tapasin体外诱导小鼠髓源性树突状细胞成熟及在T淋巴细胞增殖中的作用 被引量:5
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作者 刘红红 陈小华 +4 位作者 周丽芹 刘雪妮 余永胜 臧国庆 汤正好 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期593-597,共5页
目的观察融合蛋白胞质转导肽(CTP)-HBcAg18-27-Tapasin诱导体外培养的小鼠髓源性树突状细胞(Dc)成熟和对T淋巴细胞增殖的作用。方法体外分离、培养近交系BALB/c小鼠髓源性DC,加入重组粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子和IL-4培养5d,... 目的观察融合蛋白胞质转导肽(CTP)-HBcAg18-27-Tapasin诱导体外培养的小鼠髓源性树突状细胞(Dc)成熟和对T淋巴细胞增殖的作用。方法体外分离、培养近交系BALB/c小鼠髓源性DC,加入重组粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子和IL-4培养5d,再加入脂多糖诱导成熟。10,ug/LCTP—HBcAg18-27-Tapasin、50,ag/LCTP—HBcAg18-27-Tapasin、10p.g/LCTP-HBcAg18-27及RPMI-1640培养液加入培养介质。流式细胞术测定DC表面分子表达,EusA法测定DC培养上清液中的IL-12p70的水平,细胞计数试剂盒检测T淋巴细胞增殖反应,流式细胞术检测增殖的T淋巴细胞内的细胞因子。多个样本均数间的比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD法。结果成功体外诱导小鼠髓源性DC;CTP—HBcAg18-27-Tapasin能明显上调DC表面分子CD80、CD86及主要组织相容性复合体-1分子的表达;509g/LCTP—HBcAg18-27-Tapasin组诱导DC分泌的IL-12p70水平为(61.12±10.25)pg/mL,依次高于10/xg/LCTP-HBcAg18-27-Tapasin组的(50.43±10.42)pg/mL、10〉g/LCTP-HBcAgl8m组的(40.17±8.54)pg/mL和空白组的(30.51±8.03)pg/mL(F=15.85,P=0.030和P=0.037);CTP—HBcAg18-27-Tapasin诱导DC刺激T淋巴细胞增值能力明显高于对照组;流式细胞仪检测融合蛋白诱导的CTL水平50μg/LCTP-HBcAg18-27-Tapasin组为(2.05±0.41)%、10μg/LCTP-HBcAg18-27-Tapasin组为(1.06±0.10)%,高于10〉g/LCTP-HBcAg18-27组的(O.45±0.11)%和空白组的(O.09±0.02)%(F=60.22,P=0.003)。结论CTP-HBcAg18-27-Tapasin可以促进DC的分化、成熟,增强DC刺激T淋巴细胞增殖能力并能增加CTL的表达。 展开更多
关键词 胞质转导肽 HBcAg18-27 Tapasin树突细胞 T淋巴细胞 细胞分裂
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