江西吉安龙脑樟资源开发与利用前景

龙脑樟是江西省吉安市20世纪80年代发现并发展起来的一个特有的樟树新化学类型,到目前为止,在吉安市青原山区及临近各县已经栽培了360hm2。着重介绍了龙脑樟树的繁育、天然d-龙脑的提取及其应用等问题。龙脑樟作为一种珍贵的药材和香料原料,具有广阔的开发利用前景。

龙脑樟鲜叶挥发油成分及其抗菌活性的研究

目的:研究龙脑樟鲜叶中挥发油的化学成分和抗菌活性。方法:采用水蒸汽蒸馏法提取龙脑樟叶中挥发油;通过气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分析挥发油化学成分;采用K-B纸片琼脂扩散法和微量肉汤稀释法分别测其对细菌、酵母菌和霉菌的抑菌圈直径和最小抑菌浓度(MIC值),以评估挥发油的抑菌性能。结果:GC-MS结果表明该挥发油有27种组成成分,占整个挥发油的98.14%,其中以右旋龙脑(81.58%)、樟脑油(2.96%)和α-蒎烯(2.03%)为主要成分;该挥发油及其主要成分右旋龙脑对实验所选的细菌、酵母菌和霉菌三类微生物均表现出一定的抗菌效果。其中,挥发油对所测菌的抑菌直径范围为(9.21±0.6)～(22.12±1.30)mm,而右旋龙脑组分对所测菌的抑菌直径范围为(7.32±0.5)～(20.42±1.40)mm;对应两种物质对所测菌的最低抑菌浓度(MIC值)范围分别为(31.25～125)μg/mL和(62.5～125)μg/mL。结论:该研究为龙脑樟叶的综合利用及天然右旋龙脑药用资源的研究开发提供参考依据。

GC法测定止痒氧化锌洗剂中樟脑、薄荷脑和苯酚的含量

目的建立GC法测定止痒氧化锌洗剂中樟脑、薄荷脑及苯酚含量的方法。方法 GC色谱条件为Zebron ZB-Wax(30 m×0.32 mm,0.50μm)毛细管柱;进样口温度180℃;检测器温度150℃;FID检测器;柱温初始温度为160℃,以30℃·min^(-1)速率升温至200℃;载气为氮气。结果樟脑、薄荷脑及苯酚的线性均为25~500 mg·L^(-1)(r≥0.998 3)。樟脑、薄荷脑和苯酚的平均回收率分别为100.28%(RSD=1.63%,n=9)、99.61%(RSD=1.42%,n=9)和101.94%(RSD=1.56%,n=9)。结论该方法可用于止痒氧化锌洗剂中樟脑、薄荷脑和苯酚的含量测定。

龙脑樟开发利用产业的标准化研究

文章针对龙脑樟(Cinnamomum camphora)开发利用产业尚未形成技术标准体系的现状,系统研究了龙脑樟资源培育与开发利用标准化技术,编制了龙脑樟开发利用产业的标准化体系,阐明了产业涉及的标准,主要包括:种苗生产标准、栽培管理标准、加工技术标准和产品质量标准。

气相色谱法同时测定龙脑樟鲜叶中右旋龙脑、樟脑及乙酸龙脑酯的含量

建立了气相色谱法同时测定龙脑樟鲜叶中右旋龙脑、樟脑及乙酸龙脑酯含量的方法。采用水蒸气蒸馏法提取龙脑樟鲜叶中的天然冰片,硅胶柱层析法精制天然冰片粗品,GC法测定其中右旋龙脑、樟脑及乙酸龙脑酯的含量。色谱条件:色谱柱为DB-5MS(30.00 m×250.00μm×0.25μm),进样量1μL,柱温从90℃开始程序升温,流速1 mL/min,进样口温度280℃。右旋龙脑、樟脑及乙酸龙脑酯的回归方程分别为y=3.4462x-7.4057(r=0.9998);y=3.4881x-0.0026(r=0.9999);y=2.8657x-0.0914(r=1.0000),表明三者分别在99.14~991.37μg/mL、1.92~19.18μg/mL及2.01~20.01μg/mL范围内线性关系良好。三者的平均回收率分别为100.86%、98.36%和101.66%,相对标准偏差(RSD)分别为1.94%、2.88%和2.18%。从龙脑樟鲜叶中提取纯化后的天然冰片中右旋龙脑质量分数均在98.45%以上,樟脑及乙酸龙脑酯质量分数较低,不含异龙脑,说明龙脑樟鲜叶质量较佳。该法操作简便、准确、精密度高、分离度好,分析时间短,可为龙脑樟药材的质量控制提供参考。

龙脑樟叶部精油在不同蒸馏时段的出油率和化学成分

考察龙脑樟叶在不同蒸馏时段的出油率和化学成分。采用水蒸汽蒸馏的方法、水中蒸馏的方式,将2 h的蒸馏过程分成4个阶段,收集相应的馏分,分别进行计量和GC-MS分析,结果表明,总出油率达到2.81%,蒸馏一开始就产生大量的馏分,96.53%的馏分集中在前60 min内蒸出。通过GC-MS分析鉴定,发现龙脑樟叶挥发油中主成分为右旋龙脑(天然冰片),其含量高达81.78%,其余还有樟脑、1,8-桉叶油素、黄樟油素、α-蒎烯、芳樟醇、乙酸龙脑酯等31个化学成分。

GC-MS测定龙脑樟植物不同部位右旋龙脑的含量

目的：用GC-MS测定龙脑樟植物不同部位右旋龙脑的含量。方法：水蒸气蒸馏法提取，气质联用法测定；色谱柱：Rtx-5ms（0．25mm×30m，0．25um）；色谱条件：柱温从80℃开始，以10℃·min^-1升至120℃，并保持4min，再以20℃·min^-1升至140℃；汽化温度250℃；载气为高纯度氦气；流速1．00mL·min^-1。质谱条件：EI离子源，电子能量70eV，离子源温度200℃，接口温度250℃；进样量1uL；内标法。结果：d-龙脑在0．4～2．8峭呈良好的线性关系，r=0．9999，平均回收率为95．40％，RSD为0．56％。结论：本实验方法操作简便、准确、回收率好，右旋龙脑含量以阴干后叶较高，其含量为63．97％，为龙脑樟的合理开发和综合利用提供了科学依据。

香樟1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因CcDXR1的克隆和表达分析

1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate reductoisomerase,DXR)是萜类甲基赤藓醇-4-磷酸途径(methylerythritol-4-phosphate pathway,DXP/MEP)上的第二个限速酶。本研究以5种化学型的香樟(Cinnamomum camphora)作为实验材料,基于转录组数据,运用快速扩增c DNA末端技术(RACE),从香樟中克隆出DXR基因的c DNA,命名为Cc DXR1(Gen Bank登录号:KU886266)。该基因开放阅读框(ORF)长1 413 bp,编码470个氨基酸残基,生物信息学分析推测其分子质量为51.1 k D,等电点(Theoretical p I)为6.62,不含信号肽,不存在跨膜结构。结合蛋白质保守区以及进化树分析,证实该基因确为DXR家族基因。利用实时荧光定量PCR检测得出香樟中CcDXR1基因在成熟叶片表达量高于幼嫩叶片,根与叶中表达量相当,枝中最低。Cc DXR1在香樟5种化学型中的表达量不同,在龙脑樟中的表达量要高于油樟、芳樟、脑樟和异樟4种化学型。本研究首次从香樟中克隆出了Cc DXR1序列全长,并揭示了Cc DXR1在不同组织、生长时期及5种化学型中的差异表达,为香樟萜类化合物生物合成途径关键酶基因的挖掘提供研究基础。

不同产地龙脑樟叶挥发油成分的GC-MS分析

目的:分析比较江西吉安、湖南新晃、浙江淳安、福建厦门4个产地龙脑樟叶挥发油的化学成分。方法:采用水蒸气蒸馏法提取龙脑樟叶挥发油,运用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对其化学成分进行分析。结果:江西吉安产龙脑樟叶挥发油共鉴定出44种成分,占总含量的99.16%,其中右旋龙脑占53.17%;湖南新晃产龙脑樟叶挥发油共鉴定出33种成分,占总含量的97.84%,其中右旋龙脑占32.71%;浙江淳安产龙脑樟叶挥发油共鉴定出34种成分,占总含量的98.1%,其中右旋龙脑占41.89%;福建厦门产龙脑樟叶挥发油共鉴定出25种成分,占总含量的99.58%,其中右旋龙脑占60.74%。结论:不同产地龙脑樟叶挥发油成分在组成和含量上有一定的差异。

樟树4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶基因的克隆及表达分析

4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶(4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol kinase,CMK)是植物萜类化合物生物合成途径甲基赤藓醇-4-磷酸途径(methylerythritol-4-phosphate pathway,DXP/MEP)上的第4个关键酶。该研究根据樟树转录组数据,利用RT-PCR(reverse transcription-PCR)方法从药用植物樟树Cinnamomum camphora中克隆得到4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶基因,命名为Cc CMK1(Gene Bank登录号Ku376098),对其序列进行生物信息学分析,结果表明该基因开放阅读框(ORF)为1 212 bp,编码403个氨基酸,推测其相对分子质量为44.46 k Da,等电点(theoretical p I)为4.99。跨膜结构分析表明CMK蛋白不存在跨膜结构。信号肽分析表明其为非分泌蛋白,不存在信号肽。亚细胞定位表明其定位于叶绿体中。利用荧光实时PCR检测了龙脑樟、油樟、芳樟、脑樟和异樟5种化学型樟树中Cc CMK1基因的表达量,结果表明Cc CMK1基因在油樟中的表达量最高,龙脑樟中表达量最低,为樟树萜类化合物生物合成途径关键酶基因元件挖掘提供研究基础。

气相色谱-质谱联用同时测定龙脑樟鲜叶中右旋龙脑、樟脑及异龙脑的含量

目的建立气相色谱-质谱(GC-MS)联用同时测定龙脑樟鲜叶中右旋龙脑、樟脑及异龙脑含量的方法。方法采用超声辅助水蒸气蒸馏法提取龙脑樟鲜叶,60%乙醇重结晶,GC-MS法测定右旋龙脑、樟脑及异龙脑的含量。色谱条件:色谱柱为石英毛细管柱(30.00 m×250.00μm×0.25μm),载气为高纯氦气,纯度≥99.999%,进样量1μL,柱温从60℃开始程序升温,流速1 mL/min,进样口温度280℃。质谱条件:电子能量70 eV,离子源温度230℃,溶剂切除时间5.0 min,扫描范围50～650 m/z,扫描模式为全扫描。结果右旋龙脑、樟脑及异龙脑的回归方程分别为Y=2.0×10~8X+1.0×10~8(r=0.999 9),Y=7.0×107X-3.0×107(r=0.999 9),Y=8.0×107X-8. 0×107(r=0.999 9),表明三者分别在0.03～0.27μg,0.06～0.48μg,0.05～0.36μg范围内线性关系良好。三者的平均回收率分别为96. 32%,95. 49%和97. 51%,RSD分别为1. 92%,0.85%和1.87%。从龙脑樟鲜叶中提取纯化后的右旋龙脑含量百分比均在98.09%以上,樟脑含量百分比较低,不含异龙脑。结论该法操作简便、准确,灵敏度、精密度高,分析速度快,可作为龙脑樟药材的质量控制,并为龙脑樟药材的综合利用提供了科学依据。