诱导型衰老细胞模型的建立及Klotho启动子截短型突变体的构建和活性检测

目的:建立诱导型衰老细胞模型并检测抗衰老相关的Klotho基因启动子的不同截短型突变体的活性,为下一步研究奠定基础.方法:原代的人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)经过流式细胞术分离鉴定后,通过设置不同过氧化氢的浓度,按时间梯度摸索诱导原代HUVEC细胞衰老的条件并最终通过SA-β-gal染色及定量PCR技术来确定其诱导条件.以全长的Klotho启动子为模版,通过PCR的方法,获得不同长度的Klotho启动子截短型突变体,并通过双萤光素酶报告基因系统检测试剂盒检测不同的启动子截短型突变体在诱导型衰老细胞内的激活程度.结果:培养基中过氧化氢浓度为600μM,处理96 h后,成功构建了诱导型衰老细胞模型;通过PCR的方法成功构建了长度分别为1 711 bp、1 262 bp、785 bp和735 bp的4个长度截短型突变体,并发现735 bp的截短型突变体在诱导型衰老细胞内的激活程度存在明显差异.结论:成功建立了诱导型衰老细胞模型,并成功构建了Klotho基因的启动子截短型突变体,检测和发现这些突变子在诱导型衰老细胞内的激活程度存在明显差异,为下一步治疗衰老相关疾病奠定了良好的工作基础.

竹茶酒对D-半乳糖衰老模型小鼠抗衰老作用的研究

为了研究竹茶酒的抗衰老作用,将60只小鼠随机分成正常对照组,衰老模型组,阳性对照组,竹茶酒高、中、低剂量组,除正常对照组外,其余各组均通过腹腔注射300mg/(kg·d)D-半乳糖建立衰老小鼠模型,在建模的同时,给药组分别灌胃相应剂量的竹茶酒,其余组灌胃等量的生理盐水,连续6周灌胃后测定其血清及肝脏的抗氧化指标,实验结果显示不同剂量的竹茶酒均能显著提高小鼠肝脏、血清中超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶的活性,并有效降低丙二醛的含量,由此认为竹茶酒可提高自由基的清除率,减少自由基对机体产生的损伤,具有抗衰老作用。