甘肃小麦禾谷孢囊线虫rDNA-ITS和28SrDNA-D2/D3区序列特征及ITS-RFLP分析

禾谷孢囊线虫是危害禾谷类作物的重要病原,严重威胁我国小麦主产区的小麦产量和品质。利用通用引物对甘肃、河南、安徽禾谷孢囊线虫群体28SrDNA-D2/D3区和rDNA-ITS区进行PCR扩增和序列测定,利用UPG-MA方法分析了甘肃省7个种群、河南1个种群、安徽1个种群的禾谷孢囊线虫群体D2/D3区和ITS区的系统发育关系;用9种限制性内切酶对7个甘肃禾谷孢囊线虫群体的rDNA-ITS区进行了RFLP分析。结果表明:中国甘肃的禾谷孢囊线虫rDNA-D2/D3区片段长度约为780bp,rDNA-ITS片段长度约为1040bp。7个甘肃禾谷孢囊线虫群体、1个河南安阳群体、1个安徽蚌埠群体的D2/D3区和新西兰的H.aucklandica群体亲缘关系很近;其ITS区同澳大利亚的H.australis、北京通州的H.avenae(AY148382)的亲缘关系很接近。RFLP分析表明,9种限制性内切酶酶切禾谷孢囊线虫群体的rDNA-ITS共产生了22个酶切片段,不同酶切的RFLP分布型在7个种群间没有差异。甘肃省禾谷孢囊线虫群体的rDNA-ITS区具有高度的保守性,与中国的C型群体相近,但不同于欧洲的A型群体和印度的B型群体。这是首次报道甘肃CCN种群分子特征。

CyclinD1/D2/D3在大鼠脑胶质瘤组织中的表达

目的 探讨细胞周期素 (cyclin )D1/D2 /D3在大鼠脑胶质瘤动物模型肿瘤组织中的表达。方法 将体外培养大鼠C6胶质瘤细胞 (细胞数为 3× 10 5个 ) ,借助动物立体定向仪接种于Wistar大鼠左侧尾状核区 ,解剖标本 ,行组织病理学检查 ,胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)免疫组化定性监测。随后检测肿瘤组织中cyclinD1/D2 /D3蛋白表达。结果 cyclinD1/D2 /D3均呈阳性表达。cyclinD1/D3主要在细胞核表达 ;cyclinD2则主要在胞浆表达 ,部分细胞核呈阳性 ,不同存活期荷瘤鼠其瘤组织中cyclinD1/D2 /D3表达量不同。结论 cyclinD1/D2 /D3的过分表达 ,对大鼠脑胶质瘤细胞增殖的失控起着一定的调节作用。荷瘤鼠生存期与cyclinD族的表达量呈负相关关系。

CyclinD1/D2/D3在大鼠脑胶质瘤组织中的表达(英文)

目的探讨cyclinD1/D2/D3在大鼠脑胶质瘤组织中的表达。方法将体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞(细胞数为3×105个)借助动物立体定向仪接种于Wistar大鼠左侧尾状核区,解剖标本,行组织病理学检查及GFAP、cyclinD1/D2/D3免疫组化检测。结果cyclinD1/D2/D3均呈阳性表达。cyclinD1/D3主要在细胞胞核表达,cyclinD2主要在胞浆表达,部分在胞核表达,不同存活期荷瘤鼠瘤组织中cyclinD1/D2/D3表达量不同。结论cyclinD1/D2/D3过分表达参与调节大鼠脑胶质瘤增殖。荷瘤鼠生存期与cyclinD家族蛋白的表达呈负相关关系。

马铃薯腐烂茎线虫28S rDNA-D2/D3区序列分析

我国危害甘薯的马铃薯腐烂茎线虫rDNA-ITS基因片段长度存在A型(900bp)和B型(1100bp)2个类型,A型腐烂茎线虫群体的ITS片段比B型群体少200bp。为了进一步研究这2种类型群体的发育关系,本文用线虫通用引物D2A和D3B对来自国内的21个马铃薯腐烂茎线虫群体和1个韩国的马铃薯腐烂茎线虫28SrDNA-D2/D3区进行了PCR扩增,均产生大小一致的片段,长度约为780bp,克隆、测序后用DNAMAN5.2软件和MEGA4软件进行分析比对,结果表明我国21个马铃薯腐烂茎线虫群体28SrDNA-D2/D3区只有20余个碱基的差异,相似率达97.2%。基于UPGMA构建的系统发育树很好地区分了马铃薯腐烂茎线虫A型和B型群体,展现出了群体的来源及发育关系。

香蕉穿孔线虫28S rRNA基因的D2／D3区序列分析

采用线虫通用引物D2A和D3B对9个香蕉穿孔线虫种群的核糖体DNA28S大亚基的D2/D3区进行了扩增,获得的片段长度约为780bp,克隆测序后使用UPGMA法进行聚类分析和构建系统发育树。结果表明9个线虫种群D2/D3区核苷酸序列相似性为99.13%,其中8个群体的序列与越南报道的香蕉穿孔线虫近源种(Radopholus sp.7B VietNam)的D2/D3区核苷酸序列(DQ328712)相似性为97.46%,说明香蕉穿孔线虫D2/D3区具有较大的保守性。聚类分析结果表明,RSHN12r、RSSH、RSHL、RSHK、RSLZ、RSSZ、RSHN13、RSHN12p等8个种群聚为一类,亲缘关系很近,RSHN3群体与以上8个群体亲缘关系较远,说明RSHN12r、RSSH、RSHL、RSHK、RSLZ、RSSZ、RSHN13、RSHN12p这8个香蕉穿孔线虫种群可能来源于同一地理种群,而RSHN3种群可能来源于另一个地理种群。

反相高效液相色谱法测定维生素D_2和维生素D_3

提出了用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)分离和测定胶囊、油状试剂中维生素D2及维生素D3的含量。样品用甲醇超声提取,提取液用甲醇定容至100mL,经0.45μm滤膜过滤后供HPLC分析。采用Zorbax SB-C18反相色谱柱及C18保护柱作为分离柱,乙腈作为流动相,流量为1.0mL.min-1,在波长265nm处作紫外检测,进样量为20μL。维生素D2和维生素D3的质量浓度在0.50～20mg.L-1范围内与相应的峰面积呈线性关系,测得检出限(3S/N)依次为0.030,0.026mg.L-1。此方法应用于实样分析并在此基础用标准加入法做回收试验,同时进行精密度试验,测得回收率在95.0%～99.4%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)在1.2%～2.6%之间。

HPLC法测定保健食品中维生素D_2、D_3的含量

目的:建立保健食品中维生素 D_2、D_3的测定方法。方法:采用60%的乙醇进行涡旋振摇,再用60%的乙醇+正己烷(1:1)进行萃取,色谱柱 Alltima C_(18)(250 mm ×4.6 mm,5 μm),流动相甲醇-乙腈(9:1);检测波长为265 nm。结果:维生素 D_2、D_3的进样量和峰面积呈良好的线性关系,线性范围为:0.25～5.0μg,r=1.000(n=5);维生素 D_2、D_3的回收率分别为95.5%和94.9%,RSD 为1.0%和0.98%(n=4)。结论:该方法简便快捷,准确度高,能满足部分含维生素 D 保健食品的含量测定要求。

化妆品中维生素D_2、维生素D_3的高效液相色谱测定

目的建立化妆品中维生素D2、维生素D3的高效液相色谱检测方法,用于监测化妆品中维生素D2、维生素D3的使用情况.方法通过考察不同型号液相色谱柱、不同类型流动相及配比,确定了最佳色谱条件,并进行了线性范围、检出限、精密度、准确度试验.结果在Alltima C18(250mm×4.6mm I.D.,5μμm)色谱柱;流动相为甲醇:乙腈=90:10;流速为1.0 ml/min;检测波长为265nm;柱温为25℃时,维生素D2、维生素D3在0.5～100mg/L浓度范围内具有良好的线性关系,检出限分别为0.12mg/L和0.06mg/L;不同浓度维生素D2、维生素D3的变异系数分别小于3.8%和3.5%;加标量为20μg/g时,维生素D2、维生素D3的加标回收率分别在94.2%～101.4%和91.6%～97.2%之间.结论该方法具有操作简便、准确、快速等特点,适于同时测定化妆品中的维生素d2、维生素D3.

D2淋巴结清扫术与D3淋巴结清扫术治疗胃癌的Meta分析

目的:系统评价D2淋巴结清扫术式和D3淋巴结清扫术式(后简称D2术式和D3术式)在胃癌根治术中的安全性和有效性。方法:计算机检索PubMed、Cochrane Library、中国生物医学文献数据库、中文科技期刊数据库、中国期刊全文数据、万方数据库,此外,手工检索了本领域的相关杂志,全面检索D2术式和D3术式治疗胃癌的随机对照试验(randomized controlled trials,RCTs)。对纳入文献进行方法学质量评价,用RevMan 5.1软件进行统计分析。结果:共纳入6篇RCTs,Meta分析结果显示:D2术式和D3术式治疗胃癌在围手术期病死率[优势比(odds ratio,OR)=1.01,95%可信区间(confidence interval,CI)=0.44~2.32]、术后总并发症的发生率(OR=1.53,95%CI=0.81~2.89)、5年生存率(OR=1.08,95%CI=0.81~1.44)、术后复发率(OR=0.89,95%CI=0.67~1.81)方面差异无统计学意义(P=0.980、0.190、0.590、0.410)。D3术式淋巴瘘(OR=0.66,95%CI=0.01~0.50)和顽固性腹泻(OR=0.11,95%CI=0.01~0.90)的发生率高,而D2术式肺部感染发生率高(OR=3.71,95%CI=1.43~9.61),差异均有统计学意义(P=0.009、0.040、0.007)。2种术式在术后吻合口瘘、胰瘘、腹腔脓肿、术后出血、伤口感染、二次手术发生率、肠梗阻等发生率差异无统计学意义(P=0.240、0.500、0.080、0.400、0.710、0.570、0.960)。D3术式手术时间长[加权均数差(weighted mean difference,WMD)=-154.86 min,95%CI=1.04~4.18]、术中失血量大(WMD=301 ml,95%CI=151.55~450.45),差异有统计学意义(P=0.008、0.000);但在术后平均住院天数(WMD=1.77 d,95%CI=-1.65~5.15)和术中平均输血量(WMD=-138.47 ml,95%CI=-379.96^-103.01)方面差异均无统计学意义(P=0.310,0.260)。结论:当前证据表明与D2术式相比,D3术式不能使胃癌患者生存受益且手术风险高,不推荐常规应用。

进展期胃癌D2与D3术式的近、远期疗效比较

目的比较进展期胃癌D2与D3术式的近期及远期疗效。方法选取2006年1月～2007年12月于韶关市粤北人民医院进行治疗的104例患者为研究对象，根据其手术方式的不同分为A组（D2术式）52例和B组（D3术式）52例，比较两组患者术中出血量、手术时间、胃肠道功能恢复时间、手术前后的QOL评分及术后1、2、3、5年生存率、复发率。结果B组术中出血量大于A组，手术时间长于A组，但术后6周的QOL评分指标优于A组，且术后1、2、3、5年生存率高于A组，复发率低于A组，差异均有统计学意义（均P〈0．05），而两组术后2周的QOL评分及胃肠道功能恢复时间差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论D3术式对患者的手术性不良影响大于D2术式，但是其术后恢复较快，而远期疗效优于D2术式。

侵犯浆膜层胃癌D2术式与D3术式的临床对照研究

目的比较侵犯浆膜层胃癌D2术式与D3术式的临床疗效。方法选取2006年1月至2007年11月于本院采用D2术式进行治疗的48例侵犯浆膜层的胃癌患者为A组,同期采用D3术式进行治疗的48例患者为B组,然后将两组患者的并发症发生率、2年、3年、5年的生存率及手术前、手术后不同时间段的Spitzer量表评分、血清肿瘤标志物进行比较。结果 B组的2年、3年、5年的生存率高于A组,而手术后3个月、6个月及12个月的Spitzer量表评分均高于A组,血清肿瘤标志物水平均低于A组,其差异均具有统计学意义(P均<0.05),但两组患者的并发症发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 D3术式在侵犯浆膜层胃癌中的综合优势大于D2术式,对患者的生存质量发挥着积极的作用。

HPLC-APCI(+)-MS/MS测定乳制品中的维生素D_2及D_3

建立了一种高效液相色谱-大气压化学电离串联四极杆质谱,正离子监测模式下（HPLC-APCI（＋）-MS/MS）测定乳制品中维生素D2和D3的方法。样品经皂化后,用石油醚提取,提取液经无水硫酸钠干燥,在氮气保护下旋转蒸发浓缩至10 mL以下,氮气吹干,用10 mL甲醇溶解后,经ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（1.7μm,2.1 mm×100 mm）分离,甲醇-水（95∶5）洗脱,多反应监测模式测定。维生素D2和D3在0.01-0.2 mg/L范围内呈良好的线性关系,相关系数（r2）分别为0.998 7和0.999 1,方法回收率为83.0%-99.4%,相对标准偏差（RSD）为2.0%-8.3%。

用液相色谱串联质谱法检测脐带血血清25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3浓度

目的建立一种测定脐带血25-羟基维生素D2[25（OH）D2]和25-羟基维生素D3[25（OH）D3]浓度的方法。方法脐带血血清样本前处理采用饱和硫酸锌和乙腈的蛋白沉淀法。采用液相色谱串联质谱法（LC．MS／MS）测定25（OH）D2和25（OH）D3浓度。固定相为Poroshell@120EC-C18正向柱；电喷雾离子源（ESI）；多反应监测模式（MRM）；喷雾电压35．0psi；喷雾温度180℃；鞘气温度350℃；鞘气流速11．0L／min。以甲醇（80％）、超纯水（20％）为流动相进行梯度洗脱，流速为0．5mL／min，柱温为50℃；质谱采用高温ESI，以选择反应监测模式进行定量分析。结果25（OH）D2和25（OH）D3在3．125～100μg/L范围内呈良好的线性关系（R^2=0．9987、0．9991）。血样冻融3次进行检测，日内、日间相对标准偏差（RSD）均〈15％。对血清25．（OH）D2和25（OH）D3质控品进行检测，结果均符合要求。结论LC—MS／MS敏感性高，分析时间短，适用于脐带血1．25（OH）D2和25（OH）D3浓度检测。

深圳市龙岗区1～3岁幼儿血清25-羟维生素D2＋D3水平调查

目的 了解目前深圳市龙岗区1～3岁婴幼儿维生素D的营养状况.方法 采用高效液相色谱-串联质谱方法对2011年11月至2013年4月在广东省深圳市龙岗区妇幼保健院儿童保健科门诊进行健康检查的293例1～3岁幼儿进行血清25-羟基维生素D2及25-羟基维生素D3水平检测.结果 血清25-羟基维生素D2＋D3＜ 20 ng/ml （50 nmol/L）检出率为14.3％,其中3岁组儿童检出率最高达27.5％（P＜0.01）;血清25-羟基维生素D2＋D3≤30 ng/ml （75 nmol/L）检出率为38.2％;血清25-羟基维生素D2＋D3＞30 ng/ml （75 nmol/L）检出率为47.4％;1岁及2岁组血清25-羟维生素D2＋D3水平均高于3岁组幼儿（P＜0.01）.结论 深圳市龙岗区大于2岁的幼儿及学龄前儿童不应忽视维生索D的补充,2岁前补充维生素AD滴剂依从性不好的幼儿应及时检测25-羟基维生素D水平,适时补充维生索D.

双相情感障碍与DRD3、DRD2和COMT基因多态性的关联分析

目的 探索多巴胺D3受体 (DRD3)、多巴胺D2受体 (DRD2 )和儿茶酚氧位甲基转移酶 (COMT)基因多态性与双相情感障碍的关系。方法 使用病例 对照的关联分析方法 ,对 10 5名双相情感障碍患者和 12 8名对照者之DRD3、DRD2和COMT的多态性进行检测 ,并进行关联分析。结果 DRD3等位基因在两组间的分布有显著性差异 (χ2 =5 77,P =0 0 2 ) ,Logistic多元回归分析发现基因型 1/ 1和 2 / 2在两组间分布的有显著性差异 (P =0 0 36 ,OR=5 72 7) ,等位基因分析也有显著性差异 (P =0 0 2 2 ,OR =6 786 ) ;DRD2和COMT基因型和等位基因的分布在两组间无显著性差异 (χ2 =1 983,P =0 37/ χ2 =1 6 7,P =0 4 1;χ2 =0 2 16 ,P >0 0 5 / χ2 =0 14 3,P >0 0 5 ) ;将DRD3和DRD2共同分析时发现OR值升高 (OR =6 6 97)。结论 DRD3基因多态性与双相情感障碍有关联 ,且与DRD2有协同作用。

光化学合成维生素D_2和D_3

综述了光化学法合成维生素D_2和D_3的研究进展.

高效液相色谱法测定化妆品中VD2及VD3

采用高效液相色谱法对VD2及VD3进行测定,以甲醇/乙腈(90∶10)为流动相,流速为1.0 mL/min,DAD检测器,C18柱,检测波长260 nm,得到在0.50～50.0 mg/L浓度范围内有较好的线性关系,相关系数分别为rVD2=0.999 4和rVD3=0.999 5,回收率为96.9%～100.6%,方法检出限VD2为0.13 mg/L,VD3为0.06 mg/L。该方法快速方便,可用于化妆品VD2及VD3的检测。

中重度抑郁症患者血清维生素D_2/D_3水平分析

目的·分析中重度抑郁症患者血清维生素D_2/D_3的水平。方法·选取符合抑郁症诊断标准的85例患者为病例组(中度抑郁者53例,重度抑郁者32例),同时选取50例年龄相仿的正常人作为对照组;采用液相色谱-质谱联用分析方法(LC-MS/MS)检测研究对象血清中的25(OH)D_2、25(OH)D_3及总浓度,并进行组间比较。采用Logistic回归筛选影响抑郁症患者抑郁严重程度的危险因素。结果·病例组维生素D_2、D_3以及总维生素D浓度均显著低于对照组(P=0.012,P=0.000,P=0.000);重度组的维生素D_2、D_3以及总维生素D浓度低于对照组(均P=0.000)和中度组(P=0.007,P=0.010,P=0.002)。中度组仅维生素D_3、总维生素D浓度与对照组的差异具有统计学意义(均P=0.000)。重度组的体质量指数显著高于对照组和中度组(均P=0.002);超重/肥胖和总维生素D浓度是抑郁症严重程度的影响因素(P=0.034,P=0.011)。结论·不同严重程度的抑郁症患者均存在血清维生素D_2、D_3及总浓度的降低,而重度抑郁症患者的维生素D缺乏更严重,超重/肥胖更明显;为抑郁症患者制定治疗计划时,可能需考虑补充足量的维生素D和控制体质量。

多巴胺D_2、D_3受体基因多态性与汉族人精神分裂症相关研究

目的探索多巴胺D2受体(Dopamine D2receptor,DRD2)基因第8外显子Taq I A位点多态和多巴胺D3受体(Dopamine D3receptor,DRD3)基因第5内含子Msp I位点多态与汉族人群精神分裂症是否关联及其在不同性别是否存有差异。方法使用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(Polymerase chain reaction-re-striction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)及DNA测序技术,对317例精神分裂症患者及310名对照DRD2Taq I A基因多态性和DRD3Msp I位点基因多态性进行检测。结果患者组与对照组间DRD2 Taq I A位点等位基因分布差异显著(P<0.01)、两两基因型对比(A1/A2与A1/A1相比:P<0.05;A2/A2与A1/A1相比:P<0.01)及两基因型联合对比(A1/A2+A2/A2与A1/A1:P<0.01)组间差异也显著。性别分层研究DRD2Taq I A位点女性组间差异显著(P<0.01),男性组间差异无意义(P>0.05)。DRD3Msp I位点的基因型频率、等位基因分布及性别分层分析等所有数据均显示患者组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。风险因子趋势检验结果DRD2Taq I A位点等位基因A2:P<0.01;DRD3Msp I位点等位基因2:P>0.05。结论所得数据支持DRD2Taq I A位点等位基因A2可能为精神分裂发生的风险因子,特别对女性而言。数据分析不支持DRD3Msp I位点基因与精神分裂发生有关。此结果需更进一步研究证实。

高效液相色谱-串联质谱法测定食品中维生素D_2和维生素D_3

提出了食品中维生素D2和维生素D3的高效液相色谱-串联质谱分析方法。食品样品经氢氧化钾皂化后乙醚萃取,所得有机相经无水硫酸钠除水后蒸发至干。用1 mL乙醇溶解后经Agilent Zorbax XDB C18色谱柱（2.1 mm×50 mm,3.5μm）分离,用甲-醇10 mmol·L-1乙酸铵溶液（90＋10）的混合溶液洗脱,采用电喷雾正离子模式多反应监测。维生素D2和维生素D3的线性范围均为50~500μg·L-1,检出限（3S/N）均为10μg·L-1。方法应用于测定奶粉和酸酸乳中维生素D2和维生素D3,回收率在76.8%~83.9%之间。