莲瓣兰DALP遗传多样性研究

采用DALP(Direct amplification of length polymorphism)检测莲瓣兰5个居群的遗传结构。5个引物组合共检测到103个多态位点。和其它具有相似生活史(多年生草本、以动物为媒介的杂交、种子随风散布)的物种相比,莲瓣兰原变种水平(PPB=88.18%,A=1.8818,Ae=1.4880,H=0.2911,I=0.4412)和物种水平(PPB=93.64%,A=1.9364,Ae=1.5262,H=0.3129,I=0.4732)均具有较高的遗传多样性;各居群间(Gst=0.3292)存在较大的遗传分化。基因流的估计值(Nm=1.0186)表明莲瓣兰物种水平上各居群间每代有1.0186个移居个体。地理隔离和选择压力可能是造成莲瓣兰居群间基因流动受到限制的原因。在这些研究的基础上,探讨了野生莲瓣兰资源的保护问题。

云南丽江山慈菇遗传多样性的DALP分析

采用DALP (Direct amplification of length polymorphism) 分子标记技术, 对产自云南的药用植物丽江山慈菇Iphigenia indica (L.) Kunth的9个居群进行DNA指纹检测。筛选出5个引物组合, 扩增共产生131条DNA片段, 其中104 条谱带具有遗传多态性, 约占79 39%, 平均每组引物扩增所得多态条带为20 8, 9个居群平均多态百分率为42 21%。9个居群平均观察等位基因数Na为1 4224, 总Na为1 7939; 平均有效等位基因数Ne 为1 3141, 总Ne 为1 4810; 平均遗传多样性指数H为0 1745, 总H为0 2831; 平均Shannon 多样性指数I 为0 2527, 总I为0 4231; 总基因多样性Ht为0 2831, 居群内多样性Hs 为0 1745, 居群间基因分化系数Gst为0 3834, 即丽江山慈菇有61 66%的遗传变异来自居群内, 38 34%来自居群间, 居群间存在较高水平的遗传分化。滇西北居群的遗传多样性明显高于滇中居群的遗传多样性, 这与滇中地区丽江山慈菇野生资源被大规模挖掘有着直接的关系。

云南川百合DALP遗传变异分析

采用DALP分子标记技术,对10个川百合居群进行DNA指纹检测,结果筛选出5个引物组合,扩增后共产生192条DNA基因片段,其中178条谱带具有遗传多态性,占92.71%;10个居群的总等位基因数(Na)为1.9271、平均为1.0823,总有效等位基因数(Ne)为1.4430、平均1.0533,基因多样性指数(H)为0.2673、平均0.0303,总Shannon多样性指数(I)为0.4105、平均为0.0447,基因分化系数(Gst)为0.8874,即遗传变异有88.74%发生在居群间、有11.26%发生在居群内,表明川百合居群间存在较大的遗传分化。此外,昆明市西山的川百合野生居群(DC)的遗传多样性明显高于栽培居群,这与川百合栽培品种长期人工驯化有直接关系。同时野生居群受到人为活动干扰严重。研究结果表明,DALP分析可为川百合遗传育种的可持续利用提供理论依据。

红景天属植物DALP反应体系的建立

目的 利用直接扩增片段长度多态(DALP)这一新分子标记技术建立一套稳定的红景天属植物的DALP反应体系。方法 以红景天基因组DNA为模板,对DALP反应程序的一些重要参数进行摸索和优化试验。结果 建立了一套稳定性强、可靠性高的DALP应用反应体系;经过大量重复性实验,反应体系为20μL,Mg2+浓度为2.5 mmol/L,dNTPs浓度为1.25 mmol/L,模板DNA的量为60 ng,5 pmol/L选择性引物1μL,5 pmol/L反向引物3 μL,引物浓度比为1:3,Taq酶2 U。反应过程为:95℃预变性5 min、94℃变性30 s、50℃退火30 s、72℃延伸1 min;30个循环,再72℃延伸10 min,完成整个PCR反应。结论 该体系可有效地应用于红景天属药材的分类鉴定和地道性鉴定。

正交实验法优化千金藤属植物的DALP反应体系

目的建立一套稳定的千金藤植物DALP反应体系,为开展该属植物的DALP分子标记奠定基础.方法采用正交实验设计,以云南地不容Stephania yunnanensesLo与地不容Stephania epigaeaLo基因组DNA为模板,对DALP反应程序的重要参数进行优化.结果最佳的反应体系为20μL,包含模板DNA2.0μL,2.5 mmol/L的MgCl22.5μL,2.5 mmol/L的dNTPs 2.0μL,5 pmol/L的选择性引物1μL,5 pmol/L的反向引物3μL,0.5 U/μL的Taq酶5μL,10×Buffer 2.0μL,灭菌超纯水2.5μL.结论该DALP应用反应体系稳定、可靠、重现性好,可有效的地应用于千金藤植物的种间及居群间分类鉴定.

DALP Analysis on Genetic Diversity of <i>Panax notoginseng</i>

Panax notoginseng (Burk) F.H. Chen is one of the most famous Chinese traditional medicinal plants, which belongs to Panax genus under Araliaceae family. At the present, Panax notoginseng cultivated is a mix colony. Using DALP makers, this article studied on genetic diversity of cultivated populations of Panax notoginseng in Wenshan County of Yunnan province and Napo country of Guangxi province. And the results showed that there were 260 polymorphic loci detected from the total of 292 in 13 populations, and there was great part of genetic diversity found between populations and the genetic differentiations were lower within populations. So there is broad prospect in good species breeding. And it can provide basic information for resource protection and sustainable use of Panax notoginseng.

云南桃儿七遗传多样性的DALP分析

目的进行药用植物桃儿七Sinopodophyllum hexandrum的遗传多样性研究,为桃儿七资源的保护和开发利用提供分子遗传理论基础。方法对6个桃儿七居群进行DALP分析,利用PopGene 1.31软件分析遗传多样性相关数据,UPGMA方法聚类,结合Treeview软件生成树状图。结果筛选5对引物组合,扩增共产生150条DNA片段,其中104条谱带具有遗传多态性,占69.33%,平均每组引物扩增所得多态条带为20.8,6个居群平均多态百分率为14.22%。6居群总的观察等位基因数Na为1.693 3,平均1.142 2;总的有效等位基因数Ne为1.417 1,平均1.083 8;基因多样性指数H为0.244 3,平均0.048 8;总的Shannon多样性指数I为0.364 3,平均0.073 0;居群总的基因多样性Ht为0.244 3,居群内基因多样性Hs为0.048 7。基因分化系数Gst为0.800 5,即遗传变异有80.05%发生在居群间,19.95%发生在居群内,居群每代迁移数Nm为0.124 6。结论桃儿七居群间存在较大的遗传分化,基因流受到阻碍,这与桃儿七的繁育系统和生存环境紧密相关。

云南金钗石斛居群DALP遗传变异研究

对云南7个金钗石斛居群和1个喇叭唇石斛居群，用5组DALP引物扩增得到140条清晰条带，其中102条为多态位点，多态比率72．86％，平均每组引物扩增所得多态条带为20．4。金钗石斛居群水平平均多态位点47．96％，多态位点在22．86％～68．57％；物种水平多态位点72．86％。DALP分析显示，金钗石斛物种水平的遗传多样性指数分别为PPB72．86％，H0．2889，I0．4242；居群水平遗传多样性指数分别为PPB47．96％，H0．1861，I0．2739。金钗石斛基因遗传分化系数G。。为0．3386，即66．14％的遗传变异来自居群内，33．86％的遗传变异来自居群间，居群间存在较高水平的遗传分化。

野山人参和栽培人参的DALP指纹图谱

采用DALP分子标记技术寻找野山人参和栽培人参DNA之间的特异性差异.选取10个野山人参和5个栽培人参(包括一个移山参),通过改进微量人参DNA提取的方法和优化DALP PCR实验体系,得到了人参的DALP指纹图谱.图谱显示,野山人参的遗传多样性远高于栽培人参,野山人参与栽培人参图谱存在差异,且各自存在一条特异性条带.结果表明,DALP分子标记技术可以用来进行野山人参和栽培人参的遗传差异研究.

螨类系统学研究中的分子标记

近年来,分子标记技术在螨类系统学研究中起到越来越重要的作用。文章就几种螨类系统学中用到的分子标记的原理和应用作一回顾,其中包括随机扩增多态性RAPD、限制性内切酶片段长度多态性RFLP、直接扩增片段长度多态性DALP、扩增片段长度多态性AFLP、微卫星DNASSR、核酸序列分析。讨论这几种分子标记在其应用中的优势及其局限性,并对分子标记在螨类系统学研究中的应用作出展望。

亚洲百合种内杂交后代的多态性及其分离

利用7对DALP引物组合对5个亚洲百合杂交组合后代的多态性及分离方式进行了研究。结果表明,筛选出的7对DALP引物共检测出136个位点,5个杂交组合共得到680个位点,其中多态性位点为379个,多态性位点出现的平均频率是55.7%,呈现出的多态性较高;DALP标记在杂交后代中的分离方式有不分离、发生分离和异常分离3种方式。3种分离方式出现的平均频率与数量分别为44.3%、60;41.8%、57;14.1%和19。该研究结果可为进一步构建百合遗传图谱打下良好的基础,并提供了一定的理论依据。

汤洪敏云南野生大白口蘑遗传多样性研究

应用DALP技术对云南野生大白口蘑遗传多样性进行分析.筛选的5组引物在大白口蘑6个菌塘的56朵子实体中检测到202个位点,其中多态位点151个,多态位点百分比PPB为74.75%.6个菌塘总的观察等位基因数Na为1.7475;总的有效等位基因数Ne为1.4659;Nei＇s基因多样性指数H为0.2722;总的Shannon多样性指数I为0.4053;菌塘总的基因多样度Ht为0.2705,菌塘内基因多样性度Hs 为0.012,菌塘间基因分化系数 Gst 为0.9556,菌塘的遗传一致度在0.60～0.80之间.结果表明大白口蘑遗传变异有95.56%存在菌塘间,4.44%存在菌塘内,即大白口蘑遗传变异绝大多数存在于菌塘之间.

珍稀药用金钗石斛组培苗遗传稳定性直接扩增长度多态性检测

目的研究珍稀药用金钗石斛DNA指纹图谱,初步探讨直接扩增长度多态性(DALP)分子标记技术在石斛组织培养过程中遗传稳定性检测上的应用。方法采用直接扩增长度多态性(DALP)技术对金钗石斛野生移栽苗和组培苗进行基因组DNA多态性分析。结果从12对引物组合中筛选出6对能获清晰条带的引物组合,分别利用琼脂糖和聚丙烯酰胺对DALP-PCR产物进行凝胶电泳,发现两组苗扩增的DNA带型基本一致,未发现明显变异,说明金钗石斛茎尖离体继代培养具有较高的遗传稳定性。结论DALP分子标记技术可用于石斛遗传稳定性和遗传多样性研究。

DNA标记技术在螨类系统学研究中的应用

长期以来,螨类主要依靠其形态特征进行系统学研究。DNA标记是指能反映生物个体或物种间基因组中某种差异特征的DNA片段。近年来,DNA标记技术在螨类系统学研究中得到越来越广泛的应用。本文综述了随机扩增多态性RAPD、限制性内切酶片段长度多态性RFLP、微卫星SSR、核酸序列扩增、扩增片段长度多态性AFLP和直接扩增片段长度多态性DALP等6种DNA标记技术在螨类系统学研究中的应用现状及前景。