NR/DAPI共染色-荧光计数法测定自来水中的微塑料

为解决现有NR/DAPI共染色-荧光计数法对水样中微塑料(MPs)的高估问题,对水样及实验器具的处理方法进行了优化研究。优化试验结果表明,在500℃条件下对玻璃器皿、滤膜灼烧1 h,可显著减少由实验器具带入样品中的MPs;对自来水样品采用30%H_(2)O_(2)在V_(H_(2)O_(2))∶VH_(2)O=1∶5条件下消解24 h,可消除水样中有机物引起的结果高估。采用改进的NR/DAPI共染色-荧光计数法对合肥市不同区域自来水样品测定结果表明,样品中MPs的平均浓度范围为350~1250个/L,占比最大的MPs种类为聚乙烯(PE,占比为40%~60%),尺寸小于10μm的MPs占比较高(36%~71%)。自来水样品中的MPs具有显著的时间分布特征,在夜间用水低谷时段供水管网中自来水流速低,小颗粒MPs发生沉降聚集,导致早晨龙头初放水中MPs浓度显著高于其他时段。

Steedman’s wax包埋切片DAPI染色法证实铝诱导花生根尖细胞程序性死亡

【目的】检验Steedman’swax包埋切片DAPI染色法是否适用于观察花生根尖细胞核形态。【方法】分别采取100μmol/L AlCl3处理不同时间(0、4、8、12 h)后两个花生品种(铝敏感型中花2号和耐铝型99-1507)的根尖,经过Steedman’s wax包埋切片等一系列过程,利用荧光染料DAPI染色观察细胞核形态变化。【结果】100μmol/L AlCl3可引起花生根尖细胞核形态发生改变,核质浓缩、核边缘化、呈新月状等,具有明显的PCD特征。花生根尖细胞在铝胁迫下发生PCD,PCD程度与花生耐铝性呈负相关,与处理时间呈正相关。【结论】Steedman’swax包埋切片DAPI染色法是一种快速、高效的适用于观察花生根尖细胞核形态的方法。

海带染色体的DAPI染色及核型初步分析

鉴于海带染色体比较小且数目存在分歧等原因,利用0.2%秋水仙素对海带配子体及孢子体处理10 h左右,经过卡诺试剂固定、多种酶组合处理及30 cm的高位滴片,可以获得质量比较高的海带染色体;使用灵敏度高、特异性强的DNA荧光染料DAPI进行染色,结果显示,海带雌、雄配子体的染色体各为31条,孢子体染色体为62条,大多为短杆状或者点状;雌配子体染色体的大小为0.78～2.61μm,稍大于雄配子体(大小为0.57～2.17μm)。根据染色体的大小,对海带配子体的染色体核型进行了初步分析。这些结果为分子标记的染色体定位等细胞学研究奠定了技术基础。

PKH26和DAPI联合示踪骨髓干细胞在脑缺血模型小鼠脑内迁移的实验研究

目的探讨PKH26和DAPI联合标记骨髓干细胞在脑内迁移过程中的示踪作用。方法用PKH26和DAPI联合标记从Balb/c小鼠骨髓中分离出的骨髓单个核细胞(BMMCs),用改良电凝法制备局灶性脑缺血模型后,将标记的BMMCs经尾静脉移植入脑缺血小鼠体内,对照组经尾静脉注入PBS。移植2w后取脑组织,通过激光共聚焦荧光显微镜观察BMMCs向脑内迁移的情况。结果实验组小鼠脑组织内可发现PKH26和DAPI双标的神经样细胞。结论 PKH26和DAPI可以联合标记向脑缺血模型小鼠脑组织迁移的骨髓干细胞,为体内示踪骨髓干细胞脑内迁移提供更加准确的实验方法。

一种用于DAPI染色的方法——Steedman's wax包埋切片法

以植物的胚珠和子房为实验材料,介绍一种用Steedman swax包埋对组织切片中的细胞核进行DAPI染色的方法.Steedman swax作为一种低熔点多酯蜡,具有与石蜡相似的性质,切片方法同常规石蜡切片,适合于切成厚度大于5μm的连续切片.Steedman swax包埋的切片能成功地进行DAPI染色.与用压片法和Technovit7100或GMA包埋切片法进行的DAPI染色相比,用Steedman swax包埋切片法进行的DAPI染色具有廉价、操作简便、可进行连续切片、图象清晰等优点,特别在植物细胞程序化死亡 PCD 的研究中及细胞核DNA含量测定方面,有着较大的应用价值和潜能.

小鼠骨髓组织细胞微核DAPI染色法

实验将DAPI染色方法运用到小鼠微核检测中。选取20只小鼠随机分为实验组和对照组,每组10只。2组均往小鼠腹腔注射环磷酰胺60mg/kg,1次/d,连续注射3d。实验组采用DAPI染色;对照组采用10%的Giemsa染色。结果显示,实验小鼠骨髓组织细胞微核DAPI染色特异性强,易判断,对照组Giemsa染色结果特异性差,且不能排除染色过程中Giemsa染液中的染色颗粒沉淀的干扰,这样就使Giemsa染色后,对微核的判断造成困难。本实验建立了小鼠骨髓组织细胞微核DAPI染色方法,检测效果好,特异性强。

栉孔扇贝DAPI带型和PI带型研究

选取栉孔扇贝Chlamys farreri担轮幼虫为材料,采用秋水仙素-低渗-空气干燥法制备染色体标本,应用荧光显带技术,分析了DAPI带和PI带在栉孔扇贝染色体上的分布。DAPI带型结果显示,栉孔扇贝所有染色体上都存在DAPI阳性带,主要分布于传统的着丝粒区和端部区域,另外还存在一些中间区DAPI带及可变带,总带数为62。PI带型结果与DAPI带型结果相似,在所有染色体上都存在PI阳性带。2种带型的阳性带所在位置与异染色质分布区域相吻合。

DAPI标记骨髓间充质干细胞在胶质瘤模型大鼠脑内的迁徙和定位

背景:骨髓间充质干细胞作为载体细胞行脑内移植治疗胶质瘤,如何证实其为最好的药物载体?目的:将DAPI标记的大鼠骨髓间充质干细胞移植入模型鼠脑内,观察骨髓间充质干细胞在肿瘤内的迁徙与定位。方法:体外培养骨髓间充质干细胞。利用立体定向仪将培养好的C6细胞注入大鼠脑内,建立大鼠脑内胶质瘤模型。将DAPI标记于培养好的骨髓间充质干细胞上,利用微量注射器注入模型鼠脑内;移植后第3,7天处死大鼠,利用共聚焦显微镜观察骨髓间充质干细胞在肿瘤内的分布及与肿瘤细胞的关系。结果与结论:实验成功建立了大鼠脑内胶质瘤模型。以DAPI标记的骨髓间充质干细胞。在模型鼠脑内主动聚集于肿瘤血管周围,并能与肿瘤细胞发生融合。结果证实骨髓间充质干细胞可以作为肿瘤基因治疗的良好载体。

Hoechst33342与DAPI标记细胞核对胞内活性氧检测效果的比较

目的探讨Hoechst 33342与DAPI两种荧光染料标记细胞核后对细胞内活性氧水平的影响。方法静息培养的血管平滑肌细胞加入晚期糖基化终末产物作用10 min,加入标记活性氧的荧光探针H2DCFDA,再分别加入Hoechst 33342和DAPI不同荧光染料进行核标记。荧光显微镜下观察细胞核被标记的数目与细胞内活性氧的荧光水平。结果 Hoechst 33342染料标记5 min后即可见细胞核被标记上,随着时间的延长被标记的核数目并不发生改变;而与之明显不同的是,DAPI染料标记5 min时,只有几个细胞核被标记上,但随着时间的延长被标记的核数目越来越多。Hoechst 33342标记后细胞内活性氧的荧光强度并不随时间的延长发生变化,而DAPI标记后细胞内活性氧绿色荧光的细胞数就越少,DAPI标记的细胞核数与显示活性氧绿色荧光的细胞数呈反比。这些结果提示,DAPI染料在标记细胞核时破坏了活性氧在细胞内的储存,干扰了实验结果。结论检测细胞内活性氧时,应使用Hoechst 33342核标记染料而不能用DAPI。

DAPI染色直接定量测定细菌胞内多聚磷酸盐

采用DAPI将细菌胞内或活性污泥中多聚磷酸盐(Polyp)染色,用酶标仪测定DAPI-Polyp复合物发射荧光的强度,以此定量细菌胞内的Polyp。用该方法和镜检法同时测定异染粒含量差异显著的菌株胞内Polyp,2种方法测定结果一致。异染粒含量差异不显著的菌株胞内Polyp定量分析表明,该方法灵敏度高于镜检法和废水总磷间接测定法。

DAPI联合PKH26标记骨髓干细胞在急性肝脏损伤模型小鼠肝内迁移的示踪作用

目的探讨PKH26和DAPI联合标记骨髓干细胞在肝脏组织内迁移过程中的示踪作用。方法用PKH26和DAPI联合标记从Balb/c小鼠骨髓中分离出骨髓干细胞,用CCl4腹腔注射的方法制备小鼠急性肝脏损伤模型后,将标记的BMMC经尾静脉移植入急性肝脏损伤模型小鼠体内,对照组经尾静脉注入磷酸盐缓冲液(PBS)。移植2周后取肝脏组织,通过激光共聚焦荧光显微镜观察骨髓干细胞向肝脏内迁移的情况。结果接受骨髓干细胞移植组小鼠肝脏组织内可发现DAPI和PKH26双重标记的骨髓干细胞。结论 PKH26和DAPI可以联合标记向急性肝损伤模型肝组织迁移的骨髓干细胞,为体内示踪骨髓干细胞脑内迁移提供更加准确的实验方法。

褐牙鲆、夏鲆及其杂交子代核型与DAPI带型分析

为了深入剖析褐牙鲆与夏鲆杂交后代的染色体结构,本研究利用秋水仙素-低渗-空气干燥法制备胚胎染色体和DAPI(4’,6’-diamidino-2-phenylindole)荧光染色的方法,对褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)、夏鲆(Paralichthys dentatus)及其正反交子代胚胎细胞的染色体组型和染色质的分布进行了研究。结果表明,褐牙鲆、夏鲆及其正交子代(褐牙鲆♀×夏鲆♂)染色体组均含有48条端部着丝粒染色体,染色体组型公式均为2n=48t,组内染色体长度分布连续,三者核型相似。反交子代(夏鲆♀×褐牙鲆♂)为46条端部着丝粒染色体,比亲本及正交子代少了两条染色体。DAPI荧光染色显示,褐牙鲆1号染色体中的一条染色体有较明显的次缢痕,夏鲆及正反交子代染色体中未见明显次缢痕。褐牙鲆与正交子代染色体着色较为均一,而夏鲆与反交子代着丝粒区域亮度明显增强。

MTG-DAPI双染色法观察黄瓜花粉细胞半薄切片中线粒体DNA的研究

[目的]MTG(Mito Tracker Green)是一种线粒体特异绿色荧光探针,但是目前还没有研究将MTG应用于细胞的树脂半薄切片中线粒体的荧光染色。分子生物学研究证明黄瓜线粒体是父系遗传但是还没有在细胞学观察中得到进一步证实,因此我们选择MTG和DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚)2种染料建立适用于黄瓜花粉细胞的树脂半薄切片荧光双染色技术。[方法]树脂半薄切片厚度为0.3μm,切片首先经20 nmol·L-1的MTG染色液处理30 min,然后用0.1μg·m L-1的DAPI溶液染色6 min,即可在荧光显微镜下清楚地显示出线粒体结构及DNA的存在情况。[结果]观察显示:黄瓜贴壁期花粉细胞中生殖细胞内存在线粒体结构及线粒体DNA,表明黄瓜小孢子第一次有丝分裂时没有将线粒体排除在生殖细胞之外,而是被分配到了生殖细胞中,并且此时的线粒体细胞器携带有基因信息。[结论]MTG-DAPI双染色技术可以有效地对黄瓜花粉细胞中生殖细胞核周围的线粒体进行定位,为探索黄瓜线粒体基因父系遗传现象提供技术支持。同时研究也证实了MTG可以对固定后并进行树脂半薄切片的细胞中的线粒体进行着色,扩展了MTG的应用范围。

基于DNA和小沟结合染料DAPI快速检测水样中Hg^(2+)

设计了一条DNA序列作为专一识别Hg2+的探针,结合小沟结合染料DAPI,构建了一种新型无标记荧光降低型核酸适体传感器。无Hg2+时DNA折叠成稳定的茎-环结构,DAPI插入茎部位有强荧光发射;Hg2+存在时DNA发生结构转变,DAPI释放荧光降低。结果表明:在最佳实验条件下,体系荧光降低百分数和Hg2+浓度正相关,在较低的浓度范围(0.5~50 nmol/L)仍呈良好的线性关系,实际检出限为0.5 nmol/L。该方法操作简单、对于环境水样中Hg2+的快速实时检测具有潜在的应用前景。

DAPI标记脐带间充质干细胞在颅脑创伤模型大鼠脑内的迁徙和分布

目的将人脐带间充质干细胞应用DAPI标记后经尾静脉移植入模型鼠体内,观察脐带间充质干细胞在模型鼠体内的迁徙与定位。方法体外培养脐带间充质干细胞。建立大鼠脑外伤模型,将DAPI标记于培养良好的脐带间充质干细胞上,通过尾静脉注入模型鼠体内;移植后7d处死大鼠,断头取脑,利用荧光倒置显微镜观察脐带间充质干细胞在模型鼠脑内的分布及与损伤神经元细胞的关系。结果实验成功建立了大鼠脑外伤模型。荧光倒置显微镜观察在模型鼠脑皮质内可见经DAPI标记的脐带间充质干细胞,并能与损伤神经元细胞发生融合。结论人脐带间充质干细胞移植入宿主体内后可存活并迁徙至损伤的部位。

SPIO、DAPI双重标记猕猴骨髓间充质干细胞：对细胞活性及增殖的影响

背景:传统的细胞移植示踪方法均需要在体外状态下进行组织学切片鉴定和分析,这显然限制了干细胞移植进入临床应用,因此,探索无创的、可多次重复应用的活体示踪方法已成为迫切亟待解决的问题。目的:观察SPIO和DAPI双标记猕猴骨髓间充质干细胞的效果及对干细胞存活、增殖的影响。方法:全骨髓贴壁法分离培养猕猴骨髓间充质干细胞,并采用流式细胞术对骨髓间充质干细胞进行鉴定。用SPIO和DAPI双标记骨髓间充质干细胞,通过荧光显微镜观察DAPI标记阳性率,普鲁士蓝染色和透射电镜鉴定SPIO标记阳性率,MTT检测标记细胞的活性、增殖能力。结果与结论:采用全骨髓贴壁法成功获得高纯度猕猴骨髓间充质干细胞,纯度达95.1%。SPIO和DAPI成功标记骨髓间充质干细胞,标记阳性率达95%-98%,且对干细胞的活性、增殖无影响。

DAPI染色法快速检测细胞培养中支原体的污染

利用DAPI与DNA特异结合进行简单,快速而灵敏地检测细胞培养中污染的支原体,检测被支原体污染的单层细胞整个过程不到三十分钟,就能判定培养物中是否有支原体污染,本方法可以成为一般实验室的常规方法。

大肠杆菌O157:H7体内多聚磷酸盐的DAPI荧光定量检测

目的应用荧光剂DAPI探索一种直接定量大肠杆菌O157:H7无机多聚磷酸盐(polyP)的可靠方法。方法提取并纯化大肠杆菌O157:H7野生株DNA,DAPI与DNA、polyP45结合,测定360 nm和415 nm激发光的发射光谱;应用共聚焦显微镜,观察细菌DAPI-DNA和DAPI-polyP复合物荧光,验证DAPI检测polyP的可行性;细菌液氮速冻溶解、-80℃速冻溶解、-20℃速冻溶解、60℃加热10 min、Triton x-100作用、室温下放置后倍比稀释涂平板,观察6种方法对细菌存活的影响;与DAPI作用后,测定荧光值,确定细胞膜通透性的最佳前处理方法;建立标准曲线,测定EHEC野生株、ppk1两个突变株polyP含量。结果应用360 nm激发波长,DAPI-DNA最大发射波长为460 nm;应用415 nm激发波长,DAPI-polyP最大发射波长为550 nm;应用405 nm激发光,收集DAPI-DNA蓝色荧光(425～475 nm),应用488 nm激发光,收集DAPI-polyP绿色荧光(500～560 nm);最佳细菌前处理方法为-80℃速冻后室温下自然溶解;标准曲线为Y=1849X+127.5(R2=0.991),测定各株菌polyP量,其中野生株显著高于ppk1缺失突变株。结论 DAPI荧光定量检测方法具有直接、可靠、易于操作、定量检测等特点,可为进一步研究polyP在肠出血型大肠埃希菌O157:H7中的作用提供技术支持。

抗枣疯病枣树品种的DAPI荧光染色检测

该文通过嫁接枣疯病病皮和病枝传病的方法 ,对抗病材料婆枣 (JL)和壶瓶枣 (Hu)共 10棵单株 ,结合感病酸枣 (Suan)品种的健枝和疯枝作对照 ,应用DAPI染色技术对抗病材料体内植原体的侵染情况进行了荧光观察 ,结果表明 :抗病植株体内已感染了植原体病原 ,说明应用嫁接方法进行枣疯病病原接种是可行的 ,但其却不表现丛枝症状 ,证明了抗病材料具有一定的抗病性 ;同时 ,抗病材料中发现的金黄色自发荧光 ,也为其抗病物质的寻找和抗病机理的研究提供了重要线索。

栽培高粱、甜高粱和拟高粱前中期染色体DAPI显带核型

本研究利用二脒基苯基吲哚(DAPI)荧光染色的方法分析了栽培高粱、甜高粱和拟高粱的DAPI带型,根据前中期染色体上(从短臂到长臂)荧光强度的变化,结合染色体的相对长度和臂比作为辅助参数,构建了它们的前中期染色体核型图,其结果能准确识别栽培高粱、甜高粱和拟高粱基因组中每条染色体,为高粱属的细胞遗传学研究提供一定依据。