Daxx通过上调caveolin-1的表达介导Ox-LDL诱导巨噬细胞胆固醇蓄积和凋亡(英文)

为探讨Daxx对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,Ox-LDL)诱导巨噬细胞胆固醇蓄积和凋亡的介导作用及其可能的分子机制,用高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量,油红O染色观察细胞内脂滴的形成情况,流式细胞术和吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色法研究Ox-LDL对细胞凋亡的影响,Realtime RT-PCR检测细胞内Daxx mRNA的表达水平,Western blot检测caveolin-1蛋白的表达,用特异性siRNA沉默Daxx在RAW264.7细胞中的表达.Ox-LDL上调Daxx mRNA和caveolin-1的表达、增加细胞内胆固醇含量、促使RAW264.7细胞凋亡,用特异性siRNA干扰Daxx在RAW264.7细胞中的表达能降低caveolin-1的表达、减少细胞内胆固醇含量、以及抑制细胞凋亡.上述结果表明,Daxx对Ox-LDL诱导RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积和凋亡具有介导作用,这一作用可能与Daxx上调caveolin-1的表达有关。

Daxx过表达对氧化应激诱导的肝肿瘤细胞凋亡的影响(英文)

死亡结构域相关蛋白Daxx可以敏化多种肿瘤细胞的凋亡过程,但对于肝肿瘤细胞株HepG2的影响未见报道.为了研究Daxx增加肝HepG2细胞对药物敏感性的影响及机制,为开发药物新的药理作用提供理论依据,分别转染pEGFP-C1和pEGFP-C1-Daxx这两个载体到HepG2细胞.实验分组如下:(1)正常对照组(未转染细胞组);(2)pEGFP-C1空载体转染组(HepG2/GFP细胞);(3)pEGFP-C1-Daxx表达载体转染组(HepG2/GFP-Daxx细胞).筛选稳定细胞株,用逆转录聚合酶链反应检测mRNA的表达;用过氧化氢孵育24h诱导细胞凋亡,采用MTT法和流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测蛋白质的表达.经G418筛选稳定的细胞运用RT-PCR技术分析其mRNA,结果显示,转染绿色荧光蛋白Daxx表达载体的细胞Daxx的mRNA明显上调;用荧光显微镜观察到Daxx蛋白主要定位于细胞核.用过氧化氢诱导HepG2细胞凋亡,观察到过氧化氢呈浓度依赖性地抑制HepG2细胞活性.正常对照细胞、HepG2/GFP、HepG2/GFP-Daxx 3组细胞的IC50值分别是0.72、0.76、0.49mmol/L.并且运用流式细胞仪检测到HepG2/GFP-Daxx组细胞凋亡率明显高于转染空载体质粒组与未转染组((42.9±8.42)vs(27.3±6.38)or(28.5±4.71)).提示HepG2/GFP-Daxx细胞对过氧化氢的反应性较未转染细胞和HepG2/GFP敏感.还运用Western-blot检测到活化的caspase3在Daxx转染组细胞表达最强,达到(204.66±19.68)%,而未转染和HepG2/GFP组细胞分别是(100±3.1)%、(107.39±20.1)%,进一步说明了Daxx可以增加HepG2细胞对于过氧化氢的敏感性.同时,观察到过氧化氢处理24h后,Daxx转染组细胞磷酸化的JNK表达明显高于空载体转染组和未转染细胞组.上述结果表明:a.Daxx可以增加肝HepG2细胞对过氧化氢诱导的细胞凋亡敏感性;b.Daxx蛋白敏化过氧化氢诱导的HepG2细胞凋亡可能与协同增加JNK活性有关.

Daxx亚细胞定位研究进展

死亡域相关蛋白(death domain-associated protein,Daxx)是一种高度保守的核蛋白,在转录调控、致癌、抵抗病毒感染等方面有重要作用。Daxx可定位于早幼粒细胞白血病蛋白核体、核质、核仁、胞浆和异染色质。Daxx通过修饰或与其他蛋白相互作用后能在亚细胞区室之间发生转位。应激条件下,Daxx与多种分子相互作用并发生转位,进而影响下游信号通路。本文综述了Daxx在不同条件下的亚细胞定位及在各亚细胞区室之间的转位。

Daxx在急性白血病的表达及意义

目的研究Daxx在急性白血病(AL)中的表达及其与AL的分型、临床特征、疗效及预后的关系。方法应用免疫组织化学方法检测88例初治AL骨髓细胞Daxx蛋白的表达情况,分析其与FAB分型、临床特征、疗效及预后的关系。结果急性髓细胞白血病(AML)骨髓细胞中Daxx的表达显著高于正常对照组(P<0.05)与急性淋巴细胞白血病(ALL)组(P<0.05)。在AML亚型中,Daxx在M3中的表达显著高于M1,M2,M3,M4和M5。采用逐步回归法分析,校正其它参数,Daxx的表达与初诊时的白细胞数及骨髓原始细胞数目呈正相关,与疗效呈负相关。结论Daxx在急性髓细胞白血病中广泛表达,其表达的紊乱可能在AML的发病中起作用,还与AML的某些临床特征、疗效及预后密切相关。

Daxx蛋白在儿童急性白血病中的表达及其临床意义

目的通过检测Daxx蛋白在儿童急性白血病骨髓细胞中的表达,探讨其与急性白血病临床分型和预后的关系,为进一步研究抗白血病治疗新靶点提供思路。方法应用免疫组织化学链霉素亲和素-生物素-过氧化酶复合物(SABC)方法检测50例儿童急性白血病骨髓细胞Daxx蛋白的表达,对照组为20例非恶性血液病且骨髓正常患儿。结果在50例急性白血病患儿骨髓细胞中,Daxx蛋白阳性表达率为38.0%,显著高于正常骨髓组织(P<0.05);Daxx在急性非淋巴细胞白血病患儿骨髓细胞中的阳性表达率为62.5%,显著高于正常骨髓组织(P<0.05)和急性淋巴细胞白血病患儿(P<0.05);Daxx在急性淋巴细胞白血病患儿骨髓细胞中的阳性表达率为26.5%,与正常骨髓组织比较差异无显著性(P>0.05);Daxx在高危(HR)、标危(SR)急性淋巴细胞白血病患儿骨髓细胞中的阳性表达率为55.6%和0,两者比较差异有显著性(P<0.05)。结论Daxx蛋白在儿童急性白血病中异常表达,并且与儿童急性白血病的某些临床特征密切相关,可能在儿童急性白血病的发生发展过程中起重要的作用。

细胞凋亡通路及转录调控中的Daxx

Daxx is found in the nucleus where it localizes to PML oncogenic domains (PODs). Its multiple domains can interact proteins involved in transcriptional regulation and apoptotic signal transduction. In addition, Daxx is associated with viral infection、tumorigenesis and embryonic development.

糖尿病大鼠缺血再灌注脑组织中FADD、Daxx的表达及其意义

目的:研究Fas相关死亡域蛋白(FADD)、死亡域相关蛋白(Daxx)在糖尿病缺血再灌注脑组织损伤中的作用。方法:36只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组、脑缺血再灌注组和糖尿病脑缺血再灌注组。大鼠腹腔内注射链脲佐菌素制作糖尿病模型,之后再应用栓线法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。于缺血1h再灌注12h后对各组大鼠进行神经功能缺损评分,TTC染色测定梗死体积,Tunel法检测细胞凋亡数目,免疫组化染色及Western blot检测缺血半暗带侧皮质区FADD、Daxx的表达。结果:与脑缺血再灌注组相比,糖尿病脑缺血再灌注组的神经功能缺损评分、梗死面积及凋亡细胞数均有明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。糖尿病脑缺血再灌注组免疫组化染色检测FADD灰度值为110.18±4.21、Daxx为101.26±3.27;Western blot检测FADD蛋白定量为1.191±0.041、Daxx为1.389±0.052。脑缺血再灌注组免疫组化染色检测FADD灰度值为131.46±3.24、Daxx为123.16±2.19;Western blot检测FADD蛋白定量为1.035±0.032、Daxx为1.146±0.083。与脑缺血再灌注组相比,糖尿病脑缺血再灌注组FADD及Daxx蛋白的表达均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:FADD、Daxx可能参与了糖尿病加重脑缺血再灌注损伤的病理生理过程,FADD、Daxx表达增加可能是糖尿病加重脑缺血再灌注损伤的机制之一。

Daxx与PML在HeLa和Caski细胞株中的定位观察

目的分析宫颈癌细胞内早幼粒细胞白血病蛋白(PML)和死亡域相关蛋白(Daxx)的定位,为进一步研究高危型HPV16和HPV18的致癌机制奠定试验基础。方法培养HeLa细胞和Caski细胞,利用间接免疫荧光试验,在激光共聚焦显微镜下观察并分析PML和Daxx在细胞内的定位;分析Caski细胞中Daxx与HPV16 E6蛋白定位。结果在HeLa细胞和Caski细胞,PML红色信号和Daxx绿色信号在胞核和胞浆呈弥散样均匀分布;Daxx绿色信号与PML红色信号重叠时,依然显示各自的绿色信号与红色信号。在Caski细胞,HPV16 E6和Daxx在细胞中分布不均匀,呈区域性聚集;表达红色信号的HPV16 E6与表达绿色信号的Daxx重叠成黄色信号。结论在Caski细胞和HeLa细胞,PML定位于细胞核的PML-NBs;Daxx在胞核和胞浆呈弥散样均匀分布;两者未发生共定位。Daxx与HPV16 E6蛋白在Caski细胞共定位于胞浆与胞核。

Daxx基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征

目的:研究死亡结构域相关蛋白(Daxx)基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征,初步探讨其在生精过程中的作用。方法:通过实时荧光定量PCR(q PCR)、Western印迹及免疫荧光等方法检测Daxx在不同周龄野生型小鼠睾丸组织以及成年睾丸支持细胞雄激素受体特异性敲除(SCARKO)和雄激素受体敲除(ARKO)小鼠睾丸中的表达特征。结果:q PCR、Western印迹和免疫荧光结果表明,Daxx基因在出生4周后小鼠睾丸中高表达,且主要定位于细胞核;与野生型小鼠相比,SCARKO小鼠睾丸中DAXX的表达差异不显著(0.853±0.058 vs1.000±0.015),但在生精细胞细胞核中呈极性分布;DAXX在ARKO小鼠睾丸表达显著降低(0.299±0.026 vs1.000±0.015,P<0.01)。结论 :Daxx基因在小鼠睾丸发育中期时表达最高。ARKO小鼠中DAXX的表达与野生型相比显著降低,睾丸支持细胞中AR基因特异性敲除影响DAXX定位。DAXX可能参与调控小鼠的精子发生过程。

沉默DAXX基因表达促进人卵巢癌细胞凋亡和衰老

DAXX是Fas死亡结构域相关蛋白(Fas death-associated protein,DAXX),可与Fas死亡受体的死亡域结合.通过激活c-Jun NH2末端激酶通路,DAXX增强Fas介导的凋亡,同时也增强转录生长因子β依赖的凋亡.本研究通过免疫组化检测人正常卵巢组织和卵巢癌组织中DAXX蛋白表达,然后通过Tet-on诱导体系构建DAXX基因沉默的慢病毒,感染卵巢癌细胞后,加入嘌呤霉素筛选稳定表达的OV2008细胞,四环素诱导DAXX基因沉默,通过免疫印迹和定量PCR检测DAXX基因干扰效果,MTT检测细胞增殖,克隆形成实验检测克隆形成能力,免疫印迹和免疫荧光方法检测DNA损伤蛋白的变化,SA-β-gal检测细胞衰老.结果表明,在人正常卵巢组织中DAXX低表达,而在人卵巢癌组织中DAXX高表达,随着四环素浓度的增加DAXX的表达量降低,DAXX基因沉默抑制卵巢癌OV2008细胞的增殖和克隆形成.免疫印迹结果显示,DAXX基因沉默可诱导DNA损伤相关蛋白p-H2AX和p-CHK2高表达.SA-β-gal检测结果表明,DAXX基因沉默可诱导OV2008细胞发生衰老,免疫印迹检测发现,p21和p27在DAXX沉默的卵巢癌细胞中高表达.综上结果,DAXX沉默可以抑制卵巢癌细胞的增殖和克隆形成,同时也促进卵巢癌细胞发生DNA损伤和衰老.该研究为卵巢癌的基因治疗提供新的思路.

腺病毒12型E1B 55kD癌蛋白与人Daxx相互作用

目的研究腺病毒(adenovirus,Ad)12型E1B 55kD癌蛋白(ad12 E1B 55kD)与人Daxx(human Daxx,hDaxx)的相互作用及作用部位。方法利用细胞内外共免疫沉淀反应研究Ad12 E1B 55kD与bDaxx的直接结合反应,通过酵母双杂交体系测定两种蛋白质的相互作用。结果酵母双杂交试验结果显示Ad12 E1B 55kD通过全序列氨基酸(amino acid,aa)与hDaxx结合并发生相互作用。共免疫沉淀反应和Western blot结果证实Ad12 E1B 55KD能在细胞内外与hDaxx直接结合。结论Ad12 E1B55kD与hDaxx结合并发生相互作用。

Daxx在恶性血液病中的表达

目的研究Daxx在血液病患者骨髓单个核细胞中的表达及其与急性白血病分类的关系。方法应用RT-PCR方法从mRNA水平检测了100例恶性和21例良性血液病患者骨髓单个核细胞中Daxx的表达,并分析了其与急性白血病分类的关系。结果急性髓样白血病组(0.75±0.28)、其他血液系统恶性疾患组(0.57±0.34)Daxx的表达水平均显著高于良性组(0.33±0.19),差异均有极显著性意义(均P<0.01);急性髓样白血病组Daxx的表达水平显著高于急性淋巴细胞白血病组(0.42±0.21),差异有极显著性意义(P<0.01)。结论Daxx在血液病中广泛表达,在恶性组中高表达,其表达的高低与急性白血病的分类有关。

Daxx-C抗血清的制备与纯化及初步应用

将含有Daxx-C端的融合蛋白6His-DM626—740纯化物免疫小鼠,分析抗血清效价并将其纯化,为进一步分析Daxx在人乳头瘤病毒16型(HPV16)阳性宫颈癌组织中的分布奠定基础。将6His-DM626—740纯化物以皮下多点注射和腹腔注射方式免疫接种4只8周龄雌性BALB/c小鼠,初次免疫3周后,加强免疫1次,以后每周加强免疫1次;共免疫4次。每次免疫前及末次免疫后7 d取血,ELISA测定抗体效价。饱和硫酸铵盐析沉淀法初步纯化抗血清,并用Western blot检测之。培养Caski细胞,利用间接免疫荧光试验观察Daxx在细胞中的分布与定位。纯化物免疫小鼠后,制备的Daxx-C多克隆抗体效价为1∶6 400。纯化的抗血清能够与IPTG诱导表达的6His-DM626—740及其纯化物发生结合反应。在Caski细胞,显绿色信号的Daxx主要分布于胞浆,少数分布于胞核且在核膜附近荧光较强,呈区域性聚集。6His-DM626—740纯化物具有良好的免疫原性;纯化的抗血清可用来检测细胞中的Daxx。

Daxx对Chol：MβCD诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用与机制

目的探讨Daxx对Chol：MβCD诱导的平滑肌细胞凋亡的影响以及可能的机制。方法体外培养大鼠源性血管平滑肌细胞，然后分别将人源性pcDNA3．1（＋）、pcDNA3．1（＋）-Daxx质粒瞬时转染进入血管平滑肌细胞中，并通过RT．PCR和Westernblot两种方法检测平滑肌细胞内Daxx的表达；瞬时转染成功的血管平滑肌细胞用10mg／LChol：MβCD孵育48h，建立泡沫细胞模型．然后用油红O染色检测细胞内脂滴情况。再分别采用CCK-8法检测血管平滑肌细胞的细胞活性，流式细胞术检测血管平滑肌细胞的凋亡情况。

Daxx在介导ox-LDL诱导巨噬细胞凋亡中的作用

目的初步探讨Daxx在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞凋亡中的作用。方法通过MTT比色法检测ox-LDL对小鼠源性巨噬细胞(RAW264.7)细胞生长的影响:用AO/EB染色、流式细胞仪和DNA断裂片段分析研究ox-LDL诱导的细胞凋亡。Real time PCR检测细胞内Daxx mRNA的表达情况。结果ox-LDL能抑制RAW264.7细胞的生长,抑制作用呈剂量-效应关系;50 mg/L ox-LDL处理RAW 264.7细胞48 h后,AO/EB染色细胞呈凋亡特征性改变,并且DNA断裂片段分析显示电泳图出现梯形条带;流式细胞检测显示相同时间不同浓度ox-LDL(0、12.5、25、50、75 mg/L)处理RAW264.7细胞48 h和相同浓度不同时间(50 mg/L,487、2 h)处理细胞,细胞凋亡率逐渐升高;Real timePCR结果表明不同时间和不同浓度的ox-LDL处理RAW264.7细胞后,Daxx mRNA表达水平呈时间和浓度依赖性增加,其中50 mg/L ox-LDL处理细胞48 h组Daxx mRNA表达最高。结论ox-LDL有诱导RAW264.7巨噬细胞凋亡的作用,其机制可能与Daxx表达增高从而启动细胞凋亡有关。

胃癌组织中Daxx和Fas蛋白的表达

目的:检测胃癌组织中Daxx和Fas蛋白的表达情况并探讨其临床意义。方法:利用组织芯片技术联合免疫组织化学方法检测71例胃癌组织(男44例,女27例;高分化腺癌14例,中分化腺癌21例,低分化腺癌36例)和19例癌旁正常胃黏膜组织中Daxx和Fas蛋白的表达。结果:共制作1个组织芯片蜡块,含90个位点,有效位点86个(95.6%),包括70个胃癌组织位点和16个癌旁正常胃黏膜组织位点。癌组织与癌旁正常胃黏膜组织中Daxx蛋白的阳性表达率分别是51.4%和18.8%,Fas蛋白的阳性表达率分别是70.0%和100.0%,差异均有统计学意义(P均<0.05)。胃癌组织中Daxx与Fas蛋白的表达呈负相关(rs=-0.387,P<0.05)。胃癌组织中Daxx和Fas蛋白表达与患者性别、年龄、胃癌组织分化程度均无关(P均>0.05)。结论:Daxx和Fas蛋白的异常表达可能在胃癌发生发展过程中起重要作用,对胃癌组织中2者的联合检测可能为胃癌的发病机制研究及寻找肿瘤治疗方案提供新思路。

Daxx对γ射线诱导HeLa细胞凋亡的影响

研究过表达死亡结构域相关蛋白(Daxx)对经γ射线照射过的细胞凋亡的影响,探讨Daxx与辐射诱导细胞凋亡之间的关系及其机制。通过转染将宫颈癌HeLa细胞分为正常对照组、空质粒转染阴性组与Daxx转染组,利用生物细胞辐照仪经γ射线照射至不同剂量;Western blot检测细胞中Daxx的表达;MTT检测细胞的增殖情况;ELISA检测细胞中Caspase-8的相对活性;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果发现:随着照射剂量增加,细胞数量逐渐减少,且其中变形细胞越来越多;Daxx表达水平随着照射剂量增加而升高;Daxx转染的辐照细胞组的细胞增殖抑制率、A 405值以及细胞凋亡率均明显高于未辐照细胞组,差异均有统计学意义(p<0.01,p<0.05,p<0.05)。过表达Daxx能通过上调经γ射线照射细胞的Caspase-8活性,促进辐射诱导的细胞凋亡。

DAXX的泛素化和去泛素化研究进展

Fas死亡结构域相关蛋白(Fas death domain-associated protein,DAXX)是一种高度保守的核蛋白,在细胞凋亡和转录调控中发挥重要作用。小鼠双微体基因(murine double minute 2,MDM2)是凋亡抑制家族的新成员,可通过泛素化作用调节靶蛋白活性;而泛素特异性蛋白酶7(ubiquitin-specific-processing protease 7,USP7)则通过去泛素化作用参与调节多种癌蛋白、抑癌蛋白的细胞内水平与亚细胞定位。大量文献显示MDM2的泛素化与USP7的去泛素化作用对DAXX调节的生物学活动具有重要作用,本文对DAXX此方面的研究进展做一综述。

Daxx蛋白、HSP90α、转铁蛋白受体TfR在儿童急性髓细胞白血病中诊断价值的ROC分析

目的绘制ROC曲线分析Daxx蛋白、HSP90α、TfR在儿童急性髓细胞白血病中的诊断价值。方法选取我院2016年10月至2020年6月我院收治的84例儿童急性髓细胞白血病患儿作为观察组,84例健康体检者作为对照组;检测并对比患儿血中Daxx、HSP90α、TfR水平,并对比不同危险度患儿的血清Daxx、HSP90α、TfR水平。统计各指标单独应用与联合应用时在鉴别儿童急性髓细胞白血病的结果,并分析各自的敏感度、特异度及AUC。结果观察组患儿血中Daxx、HSD90α及TfR水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);不同危险度患儿的血清Daxx、HSP90α、TfR水平存在明显差异(P<0.05),按照从低至高顺序排列为低危<中危<高危。Daxx检测鉴别为儿童急性髓细胞白血病共64例,HSP90α检查鉴别为儿童急性髓细胞白血病共68例,TfR检查鉴别为儿童急性髓细胞白血病共66例,联合应用鉴别为儿童急性髓细胞白血病共79例;Daxx、HSD90α及TfR各指标联合应用对儿童急性髓细胞白血病鉴别诊断的敏感度、特异度及AUC分别为94.05%、95.24%、0.988,明显高于Daxx、HSP90α及TfR单独应用(敏感度分别为76.19%、80.95%、78.57,特异度分别为82.14%、79.76%、78.57%,AUC分别为0.831、0.815、0.822),差异有统计学意义(P<0.05)。结论联合检测Daxx蛋白、HSP90α、TfR在儿童急性髓细胞白血病鉴别诊断中可有效提高诊断价值。

Daxx蛋白在儿童急性白血病骨髓细胞中的表达意义

目的探究Daxx蛋白在儿童急性白血病骨髓细胞中的表达意义。方法2010年2月至2014年10月汕头大学医学院第一附属医院儿科收治住院的急性白血病患儿100例为观察组,又根据疾病类型分为3个亚组,即急性淋巴细胞白血病(ALL)组49例,急性非淋巴细胞白血病(ANLL)组21例,急性髓细胞白血病(AML)组30例。对照组30例,为同年龄正常健康儿童。采用免疫组织化学方法检测Daxx蛋白的表达。结果对照组儿童骨髓细胞中Daxx蛋白的表达阳性率与ALL组比较差异无统计学意义(P>0.008 3);对照组儿童骨髓细胞中Daxx蛋白的表达阳性率显著低于ANLL组和AML组,差异有统计学意义(P<0.008 3)。对照组中Daxx蛋白在儿童急性白血病骨髓中的表达(6.01±1.13)μg/L,显著高于ALL组(3.55±2.32)μg/L、ANLL组(3.54±2.47)μg/L、AML组(3.12±1.56)μg/L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Daxx蛋白在儿童急性白血病骨髓细胞中过度表达,可能对促进白血病细胞的增殖、生长过程起到重要作用。