抗艾滋病候选药物DCK系列化合物毒性评价

目的:利用短期毒性检测方法对3种具有抗HIV活性的DCK系列化合物的一般毒性和特殊毒性进行检测。方法:采用MTT比色法、上下法和Ames波动试验对3种DCK系列化合物3-CH2NO2-4-CH3-DCK(N-DCK),3-CH2CN-4-CH3-DCK(C-DCK),3-F-4-CH3-DCK(F-DCK)的细胞毒性、急性毒性和遗传毒性进行检测。结果:3个化合物中,N-DCK和C-DCK对CHL细胞毒性相似,F-DCK细胞毒性最大,半数抑制浓度(IC50)分别为0.43,0.49,0.18 mg.mL-1;3种化合物对小鼠半数致死剂量(LD50)均>2 000 mg.kg-1;对沙门菌TA100诱变作用均与溶剂对照组相似,无明显致突变作用。结论:3种DCK系列化合物均为低毒物质,无明显遗传毒性。

急性白血病细胞内dCK和CDA含量与临床疗效的关系

目的 了解急性白血病细胞内脱氧胞苷激酶 (dCK )、胞苷脱氨酶 (CDA)的含量与临床疗效的关系。方法 应用核素闪烁计数仪 ,对 7例ALL ,2 4例AML化疗前细胞内dCK、CDA进行检测。结果 AML细胞内dCK、CDA活性均高于ALL(P <0 .0 5 )。AML完全缓解者dCK活性 3倍于未缓解者 (P <0 .0 0 1) ,CDA/dCK比值明显降低 (P <0 .0 5 )。AML初发者dCK活性是复发者的 2 .5倍 (P <0 .0 1)。M 3细胞内dCK活性高于其他髓系白血病细胞 ,其CDA/dCK比值显著降低 (P <0 .0 1)。细胞内CDA活性在 5 0岁以上者明显升高 (P<0 .0 5 ) ,男性患者细胞内dCK显著高于女性患者 (P <0 .0 1)。结论 细胞内dCK活性高、CDA活性低 ,CDA/dCK比值小 ,临床对Ara C疗效佳 ,故可作为预测对Ara C是否敏感的一个监测指标。

应用MALDI-TOFMS检测5种白血病细胞株DCK和CDA基因部分单核苷酸多态性

目的:检测5种白血病细胞株中脱氧胞苷激酶(deoxycytidine kinase,DCK)和胞苷脱氨酶(cytidine deaminase,CDA)基因的单核苷酸多态性。方法:培养人红白血病细胞株K562,人慢性粒细胞白血病细胞株Ka,人急性髓系白血病细胞株HL-60、U937,人Burkkit淋巴瘤细胞株Raji。采用QIAamp DNA Blood Mini Kit提取基因组DNA,设计引物,PCR扩增相应目的片段,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOFMS)检测DCK基因A674G(rs111454937)、C1644T(rs72552079),CDA基因A79C(rs2072671)、G208A(rs60369023)的单核苷酸多态性。结果:5种细胞株DCK基因A674G(rs111454937)均为A/A纯合子型,C1644T(rs72552079)均为C/C纯合子型。HL-60、U937、Raji细胞株CDA基因A79C(rs2072671)为A/A纯合子,K562、Ka细胞株为C/A杂合子;5种细胞株CDA基因G208A(rs60369023)均为G/G纯合子型。结论:CDA基因的A79C(rs2072671)SNPs位点基因型在5株血液系统肿瘤细胞株中不尽相同,余所测3个SNPs位点基因型在各细胞株中均相同。

新型非核苷类HIV逆转录酶抑制剂DCK的研究进展

DCK是以天然产物为先导化合物经结构修饰得到的一个高活性抗HIV化合物,其作用机制独特,不同于现有的非核苷类逆转录酶抑制剂,高效低毒,有可能发展成为一类新的抗HIV药物。近年来以它为先导化合物进行了多方面的结构修饰,以期得到药用性质更好的化合物。本文就DCK的发现、结构修饰、构效关系及最新进展予以介绍。

DCK信号系统与骨骼肌功能作用的细胞分子机理

最新研究表明,决定疾病相关表型的因素40%由基因决定,包括膳食、运动、心理和生活压力等环境因素决定25%的表型,作为连接环境因素(如环境和食品)和疾病的关键蛋白,钙协调蛋白DCK信号通路与许多疾病相关。基于钙协调蛋白的基本分子特性可组织分布特征,介绍了肌肉细胞中正常生理和病理的功能作用。在肌肉细胞中钙诱导的钙释放CICR中,DCK均是通过结合到CaV1.1和Ca1.2上从而间接调节RyR的功能。DCKCaV调节RyRs和IP3Rs两个蛋白家族介导钙离子从内质网/肌浆网释放进入胞浆,在肌肉收缩、激素分泌、基因转录、蛋白折叠、程序凋亡以及坏死等一系列以细胞功能为基础的生理过程中起到了极其重要的作用。以上分析表明,作为外界环境影响基因表型的重要介质,钙协调蛋白DCK可能是通过钙信号通路来实现对基因表型的决定,以上研究结果为解决诸如肌肉萎缩等肌肉相关疾病提供重要信息和早期预警监控生物标记,同时也为研发该类疾病的治疗方案提供药物可能的药物靶点。

Synthesis and Anti-HIV Activity of Trisubstituted (3′R, 4′R)-3′,4′- Di-O-(S)-camphanoyl-(+)-cis-khellactone (DCK) Analogs

To further explore the potential of DCK analogs as anti-HIV drug candidates, ten new tri-substituted （3＇R,4＇R）-3＇,4＇-di-O-（S）-camphanoyl-（＋）-cis-khellactone （DCK） derivatives （4-13） were designed, synthesized, and evaluated against HIV replication in MT4 cells and H9 lympho- cytes.

DCK信号系统在心脏及神经两类兴奋细胞功能的分子机理

心脏心肌细胞和神经系统神经元细胞是人类及哺乳动物中最为重要的两类兴奋细胞,心脏心肌细胞为整个机体血液循环提供动力,将氧气和营养物质通过血液运输送至各组织,同时,将二氧化碳等有害气体和代谢废物带离各组织器官;而神经系统神经元细胞则为有机体生存的指挥体系,为生物的生存进化提供了可能。两类兴奋细胞均以RyRs、IP3R家族为主导,以及它们的重要调节蛋白DCK来协调,并借助钙诱导的钙释放CICR体系完成上述功能。DCK通过结合到CaV1.1和Ca1.2上,从而间接调节RyR的功能。DCK-CaV系统调节RyRs和IP3Rs两个蛋白家族介导钙离子从内质网/肌浆网释放进入胞浆,进而在心肌细胞肌肉收缩、突触神经冲动的传递、激素分泌、基因转录、蛋白折叠、程序性凋亡等以细胞功能为基础的生理过程中发挥非常重要的作用,DCK的突变及异常均会引起包括人类在内的相关疾病。DCK的基因调控作用会直接影响心脏传导系统,通过RyRs和IP3R以及这两个基因的构象改变,导致心律失常,比如儿茶酚胺能多态性心室心搏过速,乃至心脏突然死亡。同时,DCK基因的表达对神经元热感觉感知的调控也起到了重要作用,通过PKC联合调控SFO神经元血管紧张素II介导的钙瞬变来控制大脑相关功能的正常发挥。如果异常,则会导致大脑病理生理学的病变。

豆豉溶栓激酶DCK的体内溶栓抗栓作用

目的:探讨贵州豆豉溶栓激酶DCK(DCK酶)的体内溶栓抗栓作用及其相关机制。方法:雄性昆明小鼠随机分为模型组,尿激酶(150 U·g^(-1))组,DCK酶低、中、高剂(150,300,450 U·g^(-1))组,ip 7 d,每日1次,第7天给药30 min后,各组小鼠ip 0.8%角叉菜胶,继续每天给药,观察尾部血栓的变化,于24,36 h游标卡尺测量鼠尾长度和血栓长度,计算血栓形成率和血栓形成相对长度。Wistar大鼠随机分为模型组,尿激酶(100 U·g^(-1))组,DCK酶低、中、高剂量(100,200,300 U·g^(-1))组,ip 10d,每日1次。第10天给药30 min后,水合氯醛溶液麻醉大鼠,分离右颈总动脉、左颈外静脉,构建右颈总动脉-左颈外静脉旁路循环,比较该旁路循环异物所致血栓湿重。新西兰大耳白兔随机分为模型组,尿激酶(38 U·g^(-1))组,DCK酶低、中、高剂量(38,76,114 U·g^(-1))组,耳缘静脉注射给药,给药1 h后耳缘静脉采血,进行凝血酶原时间(PT),活化部分凝血活酶时间(APTT),凝血酶时间(TT),纤维蛋白原(FIB),优球蛋白溶解时间(ELT),纤维蛋白(原)降解产物(FDP)的检测。结果:与模型组比较,DCK酶组在24,36 h各组小鼠鼠尾血栓形成相对长度均明显减少(P<0.05,P<0.01);DCK酶高、中剂量组的旁路循环血栓湿重明显减少(P<0.05,P<0.01)。DCK酶高、中剂量组的PT,APTT,TT时间明显延长(P<0.05,P<0.01),DCK酶高、中剂量组FIB明显减少(P<0.05,P<0.01),DCK酶高、中剂量组ELT的水平明显降低(P<0.05),DCK酶组FDP含量均增加,中剂量组明显增加(P<0.05)。结论:DCK酶具有良好的体内溶栓抗栓作用。

DCK基因敲减对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭及放化疗敏感性的影响

目的 研究DCK对宫颈癌HeLa细胞增殖及侵袭活性影响, 对HeLa细胞顺铂及放疗的敏感性影响.方法 siRNA干扰DCK基因在HeLa细胞中的表达. CCK-8实验、克隆形成试验及细胞侵袭实验分别检测DCK基因敲减后细胞增殖、克隆形成及侵袭能力变化.不同浓度顺铂或不同剂量放射线处理HeLa对照及DCK敲减细胞, CCK-8检测细胞增殖活性变化.利用细胞自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤、自噬诱导剂雷帕霉素及不同放射剂量处理HeLa对照及DCK敲减细胞, 检测细胞增殖活性及自噬活化标记 LC-Ⅱ, 揭示DCK在放射诱导细胞自噬中的作用.结果 DCK基因敲减后, HeLa细胞增殖活性及克隆形成能力显著减弱 (P<0.01);细胞侵袭能力与对照组比较也明显减弱 (P<0.01).对于顺铂处理组, 我们发现随着顺铂药物浓度增加HeLa细胞的细胞活力明显降低, 然而DCK未敲减对照组与敲减组之间的细胞活力没有显著变化 (P>0.05).对于放疗处理组, 未敲减对照组细胞随着放射剂量增加, 细胞活力下降;而DCK敲减组细胞活力与对照组比较进一步下降 (P<0.01);对于放射线处理合并DCK敲减处理组, 3-甲基腺嘌呤可导致进步抑制细胞增殖 (P<0.01), 而雷帕霉素可部分逆转DCK敲减导致的细胞增殖抑制 (P<0.01).对HeLa细胞进行低剂量 (2 Gy) 及高剂量 (6 Gy) 放射处理, 对照组细胞LC-Ⅰ/LC-Ⅱ比值相对表达显著下调 (P<0.05), 而DCK敲减组, 无论低剂量 (2 Gy) 及高剂量 (6 Gy) 放射处理, LC-I/LC-II比值都处于较低水平.结论 DCK对宫颈癌细胞增殖及转移起到重要促进作用, 同时敲减DCK后, HeLa细胞对放射敏感性增高.

创客教师知识结构框架的构建与生成机理分析

“创客教师”是伴随创客教育热潮而涌现出的一类新的教师群体。“谁能胜任创客教师角色”“创客教师应具备什么知识结构”是培育创客教师必须回答的问题。文章在文献研究与创客师资培训扎根研究的基础上,首先指出创客教师具有跨领域性知识、造物实践能力、高阶思维和开源文化素养等独特性。然后,借鉴“整合技术的学科教学法知识”(TPCK)框架,针对创客教师在知识、能力和素养上所蕴含的为创新而变革的设计性知识和思维的需求,在原TPCK框架中增加设计(Design)要素,提出并优化构建“整合技术的设计性学科教学法知识”(TP-DCK)框架,明确指出设计性学科内容知识(DCK)是创客教师知识的核心主导要素。最后,揭示创客教师设计性学科内容知识的映射与转化机理,以期为创客教师的培养提供学理依据和创新思路。

阿糖胞苷代谢关键酶活性与大剂量阿糖胞苷治疗时药物血浓度关系研究

目的：通过检测急性白血病（AL）及非霍奇金淋巴瘤（NHL）患儿骨髓单个核细胞内阿糖胞苷（Ara—C）代谢关键酶-脱氧胞苷激酶（DCK）、胞苷脱氨酶（CDA）活性及静滴大剂量阿糖胞苷（HD—AraC）后2h外周血中Ara—C、阿糖尿苷（Ara—U）的浓度，分析DCK、CDA活性与外周血中Ara—C、Ara—U血浆峰浓度的关系。探索Ara—C的体内代谢特征，以及Ara—C代谢关键酶活性表达对儿童恶性血液肿瘤接受HD—AraC治疗时药物血浓度的影响。方法：采用同位素。H—Cytidine做为放射底物检测24例患儿骨髓单个核细胞内DCK、CDA酶活性．同时采用高效液相色谱法（HPLC）和Ara—C、Ara—U标准品测定静滴HD—AraC2h后血浆Ara—C、Ara—U的峰浓度，统计分析DCK、CDA酶活性表达强弱与外周血Ara—C、Ara—U峰浓度的相关性。结果：CDA酶活性表达强弱明显影响Ara—C、Ara—U的血浆峰浓度（P〈0．05）：CDA酶活性高的患儿，Ara—U血浆峰浓度高，Ara—C血浆峰浓度低；CDA酶活性低的患几，Ara—U血浆峰浓度低，Ara—C血浆峰浓度相对高。但是，DCK酶活性与Ara—C、Ara—U的血浆峰浓度未见显著性相关（P〉O．05）。结论：HD—AraC是治疗儿童难治型恶性血液肿瘤的有效疗法，但是CDA酶活性表达强弱将显影响患儿个体所能达到Ara—C、Ara—U的血浆峰浓度，进而对Ara—C疗效和骨髓抑制等治疗反应产生影响。因此，检测CDA酶活性表达，有可能为临床适当调整药物剂量，开展个体化治疗，提供较为可靠的参考依据。

阿糖胞苷代谢关键酶基因在儿童恶性血液肿瘤中的表达

目的通过检测儿童急性白血病(AL)及非霍奇金淋巴瘤(NHL)骨髓细胞内阿糖胞苷(Ara-C)代谢关键酶———脱氧胞苷激酶(DCK)和胞苷脱氨酶(CDA)的基因表达及酶活性水平,探索DCK和CDA表达与临床疗效的关系。方法共计31例患儿,其中初诊27例(ALL20例,AML3例,NHL4例),复发4例(ALL2例,AML、NHL各1例),采集患儿骨髓细胞,采用荧光定量PCR检测细胞内DCK、CDA基因表达,核素液闪法检测细胞内DCK、CDA酶活性,统计分析各组患儿的检测结果。结果 (1)DCK:ALL和NHL患儿DCK mRNA与酶活性水平均明显高于AML患儿(P<0.05);初治患儿均明显高于复发患儿(P<0.05);(2)CDA:AML和复发患儿的CDA酶活性水平明显高于ALL、NHL和初治患儿(P<0.05),但各组病例间的CDA mRNA表达差异无显著性(P>0.05)。(3)DCK和CDAmRNA表达与酶活性水平呈高度正相关。结论 AML以及某些复发的血液肿瘤患儿,其总体DCK酶活性及基因表达水平降低,CDA酶活性水平增高。DCK和CDA酶活性可能与儿童恶性血液肿瘤疗效相关。

长期传代后HL-60细胞内脱氧胞苷激酶与阿糖胞苷耐药性的关系

目的通过观察人早幼粒白血病细胞系(HL-60)及其耐药细胞株(HL-60/R)经过长期传代后细胞内脱氧胞苷激酶(deoxycytidine kinase,dck)mRNA表达及其酶活性的变化规律,探讨dck与阿糖胞苷(Ara-C)疗效及耐药现象发生的相关性。方法分别采用实时PCR方法和核素液闪法测定HL-60和HL-60/R细胞内dck的mRNA表达水平及其酶活性水平。通过体外培养传代,观察2种细胞株经长期传代(5、10、20、30、40、50代)后细胞内dck的mRNA表达及酶活性的变化规律。结果传代初期结果显示,HL-60和HL-60/R两组细胞株之间的mRNA表达水平分别为0.37±0.03和0.17±0.03,活性值分别为0.069±0.006nmol.min-1.mg-1 protein和0.019±0.007nmol.min-1.mg-1 protein,HL-60的dck mRNA表达水平和酶活性均明显高于HL-60/R(P<0.01)。并且两组细胞株之间的显著性差异(P<0.01)持续存在于各传代过程中。HL-60和HL-60/R两组各传代节点(10、20、30、40和50代)的dck mRNA表达水平与酶活性与本组第5代细胞相比,则无明显变化(P>0.05)。结论 HL-60及HL-60/R两组细胞株间的dck mRNA表达和酶活性在传代初期存在显著差异,且两组间的差异持续存在。但与各自的初期传代相比,长期传代后的dck mRNA表达和酶活性变化并不明显,提示dck仅与Ara-C的初期疗效明显相关,而与Ara-C耐药现象的发生可能无关。

苗岭纳豆素胶囊对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨苗岭纳豆素胶囊对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法 48只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注模型组,阳性药物普萘洛尔组,苗岭纳豆素胶囊高、中、低剂量组;假手术组及模型组每天按1 m L/100 g灌胃生理盐水,普萘洛尔阳性组,高、中、低剂量组,药物用生理盐水配置,灌胃给药,每天2次。用8%水合氯醛麻醉,按结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支方法造模,缺血30 min,再灌注180 min,实时监测心电图ST段及T波的变化。假手术组只穿线不结扎冠状动脉前降支。再灌注末股动脉采血,检测血清中谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(c Tn I)、超氧化歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等相关指标变化,同时利用TTC染色法对各组心肌梗死面积进行测定。结果与假手术组比较,模型组ST段明显抬高或T波高耸,血清中AST、LDH、CK-MB活性及c Tn I、MDA、TNF-α的量均明显升高,SOD活性显著降低,梗死面积显著增大(P<0.01或P<0.05)。与模型组比较,普萘洛尔组和苗岭纳豆素胶囊各剂量组抑制ST段抬升或T波增大,降低AST、LDH、CK-MB释放,同时显著抑制血清中c Tn I、MDA、TNF-α上升,提高SOD活力(P<0.01或P<0.05),并且心肌梗死面积明显减小(P<0.001)。结论苗岭纳豆素胶囊对心肌缺血再灌注损伤的心肌具有保护作用。

阿糖胞苷代谢关键酶活性与儿童恶性血液肿瘤临床疗效的关系研究

目的通过检测急性白血病（acute leukemia，AL）及非霍奇金淋巴瘤（aggressive non-Hodgkin’s lymphoma，NHL）患儿骨髓单个核细胞内阿糖胞苷（Ara-c），代谢关键酶——脱氧胞苷激酶（deoxycyfidine kinasekinase，DCK）胞苷脱氨酶（cytidine deaminase，CDA）活性，探索阿糖胞苷代谢关键酶活性与儿童恶性肿瘤临床疗效的关系。方法采用同位素3H—Cytidine做为放射底物检测32例患儿（ALL19例，AML9例，晚期NHL4例）骨髓单个细胞内DCK、CDA酶活性，统计分析各组患儿的检测结果。结果初发患儿DCK酶活性明显高于复发患儿（P〈0．05）。初发患儿CDA酶活性明显低于复发患儿（p〈0．05）。初发患儿cDA／DCK明显低于复发患儿（P〈0．05）。初发患儿ALL、AML、NHL中DCK酶活性来见显著差异（P〉0．05）。酶的活性与患儿年龄、性别未发现相关性（P〉0．05）。结论DCK活性增高，有利于Ara-C转化为具有活性的Ara-CTP。CDA活性增高，将促进Ara-C迅速降解，影响疗效。所以，初发与复发患儿DCK、cDA酶活性的显著差异（DCK活性降低和CDA活性增强），很可能是导致肿瘤复发的原因。因此，骨髓单个核细胞内DCK、CDA酶活性表达强弱与Ara—C的疗效密切相关。

端粒、端粒酶与造血干细胞

端粒是由染色体末端的DN A重复序列组成的,其上有蛋白结合。可保护染色体免受伤害,与细胞周期过程中DN A末端片断的流失、细胞凋亡有关。端粒酶由hTERC和hTERT组成,可以维持端粒的稳定。造血干细胞有一定的端粒酶活性,目前已研究出多种因素影响其表达。端粒酶相关基因修饰干细胞可以达到建立永生化细胞系等目的,亦有很好的应用前景。最近,在研究端粒酶在人类造血系统的作用时,人们把目光集中到一种罕见的遗传病DCK上。治疗这种疾病可能需要进一步的研究来揭示hTERT的内在基因和外来因素的两种调节之间的关系。

EMS公司推荐内建涡轮的直流电机

最近，EMS公司生产的Valeo DCK31系列直流电机又添新品，其特点是内建一个涡轮式变速箱。

纳扎尔巴耶夫铁腕治国

乌克兰发生的大选风波，很可能燃起哈萨克斯坦反对派的“革命热情”。联想起2003年格鲁吉亚发生的“玫瑰革命”，中亚国家的政府如果不从现在开始就认真解决选举公正性问题，这一地区将不可避免遭遇一场政治危机的“多米诺骨牌”效应。

小说《白鲸》中两个问题解读

人与自然一直以来就是小说界老生常谈的话题,而《白鲸》便是其中影响力最为深远的一部。本文通过解读美国浪漫主义作家赫尔曼·梅尔维尔的巨作《白鲸》,分析探讨了小说中的两个问题:第一,为什么梅尔维尔在曼哈顿岛开始讲述这个故事?第二,为什么小说的讲述者伊希梅尔在鲸类学那一章中坚持认为鲸应该是鱼?从新的视角对小说进行了解读,以此探讨说明了小说作者在试图讨论相似与差异的问题以及对待相似与差异的态度。

基于DKC值的K-means改进聚类算法的研究

由于K-means算法的中心点是随机选择的,这样会导致聚类结果很不稳定,同时,孤立点的存在也会影响到聚类的精度,为解决这些问题及二者之间互相牵制,文章基于DCK值来对初始聚类中心进行选择,同时去除数据中的孤立点,使得聚类中心相对稳定,再利用改进的k-means算法对数据进行聚类,改进后的算法较原始算法更准确。