H9N2亚型禽流感病毒HA-DCpep融合基因重组乳杆菌的构建及免疫原性分析

为了构建HA-DCpep融合基因重组乳杆菌并检测其表达产物的免疫原性,以pSIP409-HA质粒为模板,采用PCR方法将HA基因和DCpep基因融合。将目的基因克隆至pGEM-T载体中,进行测序。再将阳性基因亚克隆至大肠杆菌-乳杆菌穿梭表达载体pSIP409中,电转化入植物乳杆菌NC8中,经SppIP诱导后对表达产物进行Western-blot分析。结果显示,重组菌NC8-pSIP409-HA-DCpep的裂解物中出现大小约为64ku的反应条带,大小与预期结果相符,表明重组融合蛋白具有良好的反应原性。重组菌NC8-pSIP409-HA-DCpep口服免疫SPF雏鸡后,在免疫后第14天可被检出特异性HI抗体,28d后达到高峰。结果表明,应用重组菌NC8-pSIP409-HA-DCpep免疫雏鸡能刺激机体产生特异性体液免疫应答反应,这为研制预防禽流感的重组乳杆菌口服制剂奠定了基础。

表达H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白重组乳酸杆菌的构建

H9N2亚型禽流感病毒的血凝素(HA)基因经树突状细胞靶向肽(DCpep)与异亮氨酸拉链(GCN4)基因修饰后,插入到穿梭表达载体p SIP409中,将质粒电转化至乳酸杆菌内。结果表明,该重组乳酸杆菌经诱导后,能够表达大小约为63 000且具有反应原性的蛋白,为进一步探讨重组乳酸杆菌在激发黏膜免疫反应过程中,DC调控黏膜免疫应答的机制及研制抗禽流感口服疫苗奠定基础。

表面展示狂犬病病毒糖蛋白的重组乳酸菌的构建及其免疫原性的研究

为开发基于乳酸菌载体表达的新型狂犬病口服疫苗,合成狂犬病病毒糖蛋白主要抗原表位区基因RVG,并通过PCR方法在其C′端融合特异性树突状细胞(DC)靶向肽编码基因后插入到乳酸菌表达载体中,以融合无关肽编码基因为对照,分别构建表达RVG基因的重组乳酸菌pSIP-409-pgsA′-RVG-DCpep和p SIP-409-pgsA′-RVG-ctrl。在清酒乳杆菌素的诱导下,表达产物经Western-blot和免疫荧光鉴定后,对小鼠进行口服免疫,通过流式细胞术检测免疫后小鼠脾中树突状细胞和B细胞活化效率,用ELISA检测肠道内sIgA和血清IgG分泌量。结果显示,该抗原表位区在重组乳酸菌中得到了正确表达,并且可锚定于菌体表面,pSIP-409-pgsA′-RVG-DCpep能有效活化小鼠脾中的树突状细胞和B细胞;与其他组相比差异显著(P<0.05),且肠道内sIgA和血清IgG分泌量显著高于其他组(P<0.05),表明重组乳酸菌pSIP-409-pgsA′-RVG-DCpep能够更好地激活黏膜免疫反应,具有良好的免疫原性。