虫草多糖醇沉和DEAE-32纤维素柱层析特性研究

分级醇沉、分步醇沉和DEAE-32纤维素柱层析法研究了虫草多糖的分子量和多糖组分分布。分级醇沉实验表明,各醇沉浓度对应的得率都随醇浓度的升高而呈增加趋势,多糖含量变化起伏较大,醇浓度为30%和70%时所得多糖含量较高,虫草胞内和胞外多糖分子量分布都很不均匀;分步醇沉测定了各部分多糖所占的比例。DEAE-32纤维素柱层析实验结果表明:冬虫夏草的胞外多糖和胞内多糖具有分子量相似的中性多糖峰,并且它们的含量较为接近;二者的酸性多糖组分也具有相似的规律。

不同浓度甘油和pH对DEAE-纤维素柱分离伊氏锥虫效果的影响

在不同ｐＨ条件下以不同浓度甘油破坏鼠红细胞后，用ＤＥＡＥ－５２纤维素柱层析分离纯化伊氏锥虫（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｅｖａｎｓｉ），结果表明在ｐＨ７．４时，２０％甘油能溶解大约９５％的大、小鼠红细胞；经此处理后，对Ｔ．ｅｖａｎｓｉ的回收率和活力无不良影响，可明显提高其分离纯化效果。作者还观察了渗透压和ｐＨ条件改变对Ｔ．ｅｖａｎｓｉ的影响。

紫苏叶多糖纯化工艺的研究

研究了Seveage法对紫苏叶多糖的脱蛋白工艺。结果表明,氯仿与正丁醇的体积比为4∶1,样液与Seveage试剂的体积比为1∶1,时间为30 min,次数为4次,紫苏叶多糖的脱蛋白率为72.1%,多糖损失率为17.3%。紫苏叶多糖提取液经活性炭脱色、Seveage脱蛋白后通过DEAE-纤维素柱层析,采用蒸馏水、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mol/L Na Cl洗脱液进行洗脱,分离得到紫苏叶多糖Ⅰ(PLPⅠ)3.18μg/m L、紫苏叶多糖Ⅱ(PLPⅡ)4.64μg/m L、紫苏叶多糖Ⅲ(PLPⅢ)12.22μg/m L、紫苏叶多糖Ⅳ(PLPⅣ)26.36μg/m L、紫苏叶多糖Ⅴ(PLPⅤ)32.63μg/m L、紫苏叶多糖Ⅵ(PLPⅥ)62.52μg/m L六个紫苏叶多糖组分。

枇杷叶多糖的分离纯化及组分鉴定

提取纯化枇杷叶多糖,并对其组分进行研究。枇杷叶多糖提取液经大孔树脂除杂,醇沉后干燥即得枇杷叶可溶性总多糖。经DEAE-52纤维素柱层析及Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱层析,得到纯化后多糖,并采用Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱测定多糖的分子量,水解多糖后采用薄层层析对枇杷叶多糖进行组分鉴定及单糖的组成比例测定。通过DEAE-52柱层析得3个枇杷叶多糖酸性组分,分别经过Sephadex G-200柱层析得到3个乳白色组分,分别为PSL-1、PSL-2、PSL-3。3个组分的洗脱曲线均为单一对称峰,初步判断3个组分含有单一成分的多糖。PSL-1、PSL-2、PSL-3分子量分别约为700、500、400 k Da。经过薄层层析初步推断出PSL-1含有鼠李糖和葡萄糖,含量之比为1∶0.602;PSL-2含有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖,含量之比为1∶1.415∶1.408;PSL-3含有半乳糖和鼠李糖,含量之比为1∶1.03。

乳清蛋白肽的酶法制备、分离纯化及活性评价

以抗氧化活性及蛋白质回收率为筛选指标对乳清蛋白肽酶解工艺进行优化,用层析柱对酶解液进行逐级分离纯化,并对其分子质量进行检测.研究结果表明:利用胰酶、复合风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶酶解制备乳清蛋白肽,最佳用酶为碱性蛋白酶、最适底物含量为4.0%、最适加酶量为8000U/g、最佳酶解时间为4h;酶解液经DEAE-52纤维素层析后得到的A组分抗氧化活性最好,其还原力为0.320 0±0.004 1,DPPH自由基清除率为6.58%±0.36%;A组分再经Sephadex G-15葡聚糖凝胶层析柱分离纯化后得到组分G,其DPPH自由基清除率为6.73%±0.083%;组分G的主要成分为分子质量378 u的肽段,其一级氨基酸组成为赖氨酸(Lys)、亮氨酸(Leu)及丝氨酸(Ser).

人工培养冬虫夏草胞外多糖的分离纯化研究

本文以乙醇沉淀法提取得到的人工培养冬虫夏草(Cs-HK1)粗胞外多糖为研究对象,采用DEAE-52纤维素(Cl-)离子交换柱层析和Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析进行分离、纯化得到一水溶性胞外多糖分EPS-1A。紫外光谱、比旋光度和凝胶渗透色谱法研究表明该多糖为相对均一组分,中性糖含量为99.0%,重均相对分子质量为4.0×104。多糖特征反应表明该多糖为非淀粉类,不含单糖、糖醛酸、蛋白质、核酸和多酚类物质的中性多糖。

白兰瓜子叶衰老过程中蔗糖酶同工酶的分离及其活性变化

利用DEAE—纤维素柱层析对白兰瓜子叶蔗糖酶同工酶进行了分离。发现细胞质可溶性部分含有4种蔗糖酶同工酶,其中3种为酸性蔗糖酶(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),其活性最适pH分别为5.40、4.30和4.73;另外一种为碱性蔗糖酶,其最适pH为7.40。细胞壁盐溶性部分仅含1种酸性蔗糖酶,其最适pH亦为4.73。在白兰瓜子叶生长后期(7～11d),定位于细胞质的酸性蔗糖酶Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的活性略有升高;衰老发生后(17～23d)其活性显著下降;衰老后期碱性蔗糖酶活性消失。在子叶生长和衰老期间细胞壁酸性蔗糖酶活性则一直下降。

桑黄菌丝球多糖的分离纯化

桑黄菌丝球多糖经大孔树脂除蛋白、DEAE-纤维素初步纯化后得到三个组分,其中Ap2含量最多,且有两个峰部分重叠,将Ap2过Sephadex G-100凝胶柱层析进一步纯化,得到Ap2-1和Ap2-2两个单一多糖组分,纯化后的多糖各组分经紫外光谱分析不含蛋白质和核酸,整个分离纯化过程,多糖的回收率仅为48%,但纯度达到了96%。

大豆球蛋白的组成多肽分离及氨基酸组分分析

通过Nagano方法制备得纯度达95%以上的大豆球蛋白,以其为原料,通过制备型液相色谱,对大豆球蛋白的组成多肽进行了分离。结果显示:以DEAE-Sepharose Fast Flow为分离介质,以含有6 mol/L碳酰二胺和0.02 mol/L巯基乙醇、pH值为6.45的0.05 mol/L磷酸缓冲液为平衡液,通过对穿透液及梯度洗脱液的分部收集,大豆球蛋白的组成多肽能得到较好的分离,回收率达到75%,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示各组分的纯度达90%。此外,对各组成多肽的氨基酸组分及种类进行了分析。

二氢嘧啶酶的分离纯化与性质研究

二氢嘧啶酶产生菌Pseudomonasputida 980 1经过超声波粉碎及分级盐析 ,DEAE 纤维素和羟基磷灰石柱层析 ,SephadexG 2 0 0凝胶过滤得到纯化 2 49倍的酶液。SDS PAGE显示为单带 ,单体分子量为 380 0 0 ,SephadexG 2 0 0凝胶过滤测得分子量为 15 6 0 0 0。二氢嘧啶酶对苯海因的km 为 2 .39× 10 -2 mol/L ,其最适 pH和最适温度分别是 8.5～ 8.7和 34℃～ 35℃。 1mmol/L的EDTA和 β 巯基乙醇对酶活力有强烈的抑制作用。

滇桂艾纳香多糖的分离纯化及单糖组成分析

以滇桂艾纳香干燥全草为原料,以水为溶剂提取多糖BRP,经过D101大孔树脂脱色,DEAE-纤维素柱分离,依次用水和0.15,0.3,0.45 mol/L Na Cl溶液梯度洗脱,得BRP-0,BRP-1.5,BRP-3和BRP-4四个洗脱部分;将BRP-0,BRP-1.5采用Sevage法脱蛋白、活水透析和Sephadex G-15柱层析,再经琼脂糖Sepharose 6FF柱层析分离纯化,得到BRP-0-1,BRP-1.5-1,BRP-1.5-2,BRP-1.5-3和BRP-1.5-4五个组份;GPC检测其相对分子质量、分子质量分布及峰型,确定它们为均一组分多糖;HPLC分析结果显示,BRP-0和BRP-1.5主要由鼠李糖、果糖和半乳糖组成,其物质的量之比大致为:1.00∶0.962∶0.392和1.00∶1.125∶0.584.

鼻咽癌病人血清中EBV特异性胸苷激酶抗体测定的初步研究

巴豆油和正丁酸钠诱导B95—8细胞株生成胸腺嘧啶核苷酸激酶(TK),其粗酶液经DEAE纤维素柱层析,可分成两个性质不同的TK活性峰——峰Ⅰ和峰Ⅱ:峰Ⅰ是穿过峰,峰Ⅱ是洗脱峰,洗脱液浓度为172mMk_2 HPO_4。峰Ⅰ酶活性为TTP强烈的抑制作用,不能利用GTP,不被鼻咽癌病人血清所中和。但峰Ⅱ对GTP的利用率高,能被鼻咽癌病人血清所中和,TTP对峰Ⅱ的抑制作用较弱。提示:峰Ⅱ部分是EBV特异性TK。 我们首次用峰ⅡTK来测定NPC(124例)、正常人(56例)、鼻咽部炎症病人(24例),其他头颈部肿瘤病人(26例)血清的TK抗体水平。其阳性率分别为75％、10.71％、8.33％、7.69％,(抗酶率≥30％为阳性)。NPC病人与其他对照组比较,具有显著性差异。实验结果表明:检测EBV——TK抗体可望发展成为NPC诊断的辅助方法而且与现常用EBV血清学检测方法具有互补作用。

新型凝胶纯化凝血酶原复合物的工艺探讨

目的探索新型凝胶Capto DEAE离子交换柱层析纯化凝血酶原复合物的工艺条件。方法健康人混血浆经离心去除冷沉淀后,采用DEAE-Sephadex A-50凝胶进行吸附,经洗涤、洗脱得到洗脱液;将得到的洗脱液超滤脱盐后,再通过Capto DEAE凝胶柱纯化,制备凝血酶原复合物（prothrombin complex concentrates,PCC）。测定PCC中凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ及抗凝蛋白C的活性并计算收率;采用Bradford法测定PCC蛋白浓度,再根据测定的4种凝血因子和蛋白C的活性,计算有效成分的比活;以此分析所选工艺条件下Capto凝胶对PCC的纯化效果。结果不同实验方案下,所得制品中FⅡ、FⅨ、FⅩ收率和纯度均较高,且该3种凝血因子均衡度较好;但FⅦ收率和纯度均较低;其中A方案下PCC收率和纯度较好,即Capto DEAE凝胶体系平衡液、洗涤液、洗脱液中柠檬酸钠、Na Cl、p H分别为0.020-0.028 mol/L、0.10-0.15 mol/L、6.9-7.2;0.012-0.020 mol/L、0.10-0.15 mol/L、6.9-7.2;0.005-0.012 mol/L、2.4 mol/L、7.2-7.5时,FⅨ收率为（74.40±10.89）%,比活为（3.31±0.31）IU/mg,抗凝蛋白C的收率和比活均较高。结论采用DEAE-Sephadex A-50批式吸附及Capto DEAE柱层析相结合的新方法制备PCC,在所选择条件下,PCC制品的纯度为2.17-3.31 IU/mg,远优于传统工艺制得的产品,此为高品质PCC的制备提供了新的方法。

抑制素质粒的提取与纯化研究

[目的]为抑制素质粒的大量提取与纯化寻找一种成本低的方法。[方法]采用碱裂解法与DEAE-纤维柱层析法提取与纯化抑制素质粒DNA,用分光光度法测定其浓度和纯度。[结果]抑制素质粒DNA的等电点为2.0～2.5,低于大部分蛋白质。pH值为8.0时,抑制素质粒DNA带负电荷,且电荷数量与RNA和蛋白质不同。用紫外分光光度计测定的柱层析后洗脱峰1、2、3在260和280 nm波长处的吸光度值分别为3.01和2.9、0.95和0.51、0.84和0.76,其OD260 nm/OD280 nm分别为1.04、1.86和1.10。3 mol/LNaCl的洗脱峰1大部分是蛋白质,0.6 mol/LNaCl的洗脱峰2是浓度为93.0 ng/ml的抑制素质粒DNA,3 mol/LNaCl的洗脱峰3是杂质。[结论]利用碱裂解法能从大肠杆菌细胞中分离出抑制素质粒DNA,DEAE-纤维柱层析法纯化的抑制素质粒DNA达到了要求的纯度。

毛栓菌木聚糖酶的纯化

[目的]进一步研究毛栓菌木聚糖酶的酶学性质。[方法]对毛栓菌木聚糖酶的粗酶液进行硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素离子交换柱层析S、ephadexG100柱层析3步纯化,探讨木聚糖酶的产酶曲线及纯化方法。[结果]毛栓菌在最适培养基中培养时,木聚糖酶活力从第2天迅速提升,第8天达高峰,随后下降。经饱和度为30%～70%的硫酸铵分级沉淀后,酶活力回收率为84.931%,蛋白质含量为粗酶液的24.640%,纯化倍数为3.445。经DEAE-纤维素离子交换层析后,酶活力回收率为44.345%,酶蛋白纯化倍数为11.772。经SephadexG100柱层析后,酶活力回收率为20.201%,酶蛋白纯化倍数为16.123。[结论]毛栓菌木聚糖酶的粗酶液经过3步纯化后,酶活力回收率达20.201%,酶蛋白纯化倍数达16.123。

番石榴多糖的提取工艺优化、纯化及其抗氧化活性测试

以番石榴为原料,采用水溶剂提取法提取其中的多糖。利用响应面法对提取工艺进行优化,得到最佳提取条件为提取温度67℃、液料比49∶1(mL/g)、提取时间59 min、提取次数2次。在此条件下,实测番石榴多糖的平均提取率为7.03%,与回归模型预测值7.07%几乎一致。粗多糖经DEAE-52纤维素柱层析纯化获得多糖P-1和多糖P-2。体外抗氧化活性测试结果表明,2种多糖对各种自由基均具有较好的清除效果,并且清除能力随多糖浓度的升高而增强,其中多糖P-1的清除能力强于多糖P-2。

金花茶叶多糖的分离纯化及组成分析

以金花茶叶为原料,以纯化水为溶剂提取金花茶叶粗多糖(Crude polysaccharides from dry leaves of Blumea riparia,CCTLP),经过D101大孔树脂脱色,上DEAE-纤维素柱分离,依次用水、0.15 mol/L Na Cl、0.3 mol/L Na Cl、0.45 mol/L Na Cl溶液梯度洗脱,得CCTLP-0、CCTLP-0.15、CCTLP-0.3和CCTLP-0.45四个洗脱部分;将CCTLP-0、CCTLP-0.15部分采用Sevage法脱蛋白、活水透析、Sephadex G-15柱层析脱盐,再经琼脂糖Sepharose6FF柱层析分离纯化,得到CCTLP-0-1、CCTLP-0.15-1、CCTLP-0.15-2、CCTLP-0.15-3和CCTLP-0.15-4五个组份;经GPC检测其分子量及分子量分布和GPC峰型表明,确定它们为均一组份多糖;CCTLP-0、CCTLP-0.15酸解,经HPLC分析其组份结果显示,CCTLP-0和CCTLP-0.15洗脱部分主要由鼠李糖、果糖和半乳糖组成,其摩尔质量比大致为:1.00∶1.066∶0.384和1.00∶1.186∶0.544。

正常人脑胶质纤维酸性蛋白的提取及鉴定

经匀浆反复沉淀,DEAE—Sephadex A50 柱层析等多步骤,从正常成人脑白质中提取了胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。提取物与兔抗人GFAP抗血清存在有特异性沉淀反应,提取物纯度为91％,分子量为43kd。用提取物免疫动物制备抗血清,以此作为第一抗体进行免疫细胞化学染色,结果可显示出胶质瘤细胞内GFAP的分布,证明提取物确为人GFAP。GFAP的提取为进而解决其抗体来源问题打下了基础。