miR-25a-5p促进乳腺癌蒽环类药物治疗所致的心肌损伤

目的:探讨蒽环类药物诱导心肌毒性的机制和新的治疗靶点。方法:106例乳腺癌患者根据超声心动图检查鉴别出肿瘤治疗相关心功能障碍,分为心功能障碍组及对照组。通过微阵列技术高通量筛选两组患者差异表达miRNA。体外构建蒽环类药物诱导H9C2心肌细胞损伤模型,通过调控miR-25a-5p的表达,观察miR-25a-5p在蒽环类药物诱导H9C2心肌细胞损伤中的作用。结果:乳腺癌患者中9例发生肿瘤治疗相关心功能障碍,并从两组患者中鉴定出9个差异表达的miRNA。其中8个miRNA在体外模型中进一步得到验证,尤其是miR-25a-5p。通过上调miR-25a-5p,可进一步加重蒽环类药物诱导心肌细胞氧化损伤。结论:miR-25a-5p促进蒽环类药物诱导的心肌损伤,可能是新的生物标志物及治疗靶点。

热性惊厥患儿血清miR-148a-3p HMGB125(OH)D水平与癫痫发作的相关性

目的探讨热性惊厥患儿血清微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、25-羟维生素D(25(OH)D)水平与癫痫发作的相关性。方法回顾性分析2018-01—2022-03南阳市中心医院收治的122例热性惊厥患儿,根据热性惊厥患儿预后结局是否发生癫痫,分为热性惊厥癫痫组36例和热性惊厥非癫痫组86例,同期选择55例未发生惊厥的呼吸道感染仅发热的患儿为对照组,比较3组患儿的血清miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D水平。收集3组患儿临床资料进行多因素Logistic回归分析,绘制ROC曲线分析miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D对热性惊厥患儿癫痫发作的预测价值。结果热性惊厥癫痫组的血清miR-148a-3p表达量、HMGB1水平高于热性惊厥非癫痫组、对照组[(2.26±0.57)vs(1.71±0.43)vs(1.50±0.38);(7.45±1.87)μg/L vs(6.70±1.58)μg/L vs(5.33±1.29)μg/L;均P<0.05],血清25(OH)D水平低于热性惊厥非癫痫组、对照组[(26.83±6.79)μg/L vs(34.24±8.56)μg/L vs(42.16±4.15)μg/L;P<0.05]。惊厥类型、惊厥持续时间、退热后脑电图结果、miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D与癫痫发作存在相关关系(P<0.05)。miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D预测热性惊厥患儿癫痫发作的灵敏度为83.33%、77.78%、72.22%,特异度为74.42%、68.60%、63.95%。结论血清miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D水平与热性惊厥患儿癫痫发作有一定相关性,可作为临床辅助诊断标志物。

miR-92a-3p和miR-25-3p海绵上调Kiss1并影响雌性小鼠的青春期启动及动情周期

下丘脑Kiss1神经元产生的神经肽kisspeptin通过影响促性腺激素释放激素的分泌,参与青春期的启动、生殖系统的成熟以及排卵等过程的神经内分泌调节。Kiss1基因的表达受到包括多种反式调控因子及表观遗传的调控。预测与前期研究表明,miR-92a-3p、miR-25-3p的种子序列能够与Kiss1的3′-UTR直接结合,抑制Kiss1的表达。为进一步研究miR-92a-3p、miR-25-3p在Kiss1表达调控中的作用,本研究分别构建了对miR-92a-3p、miR-25-3p具有抑制作用的特异性吸附海绵载体:sponge-miR-92a和sponge-miR-25,以实现miRNA的功能缺失。流式细胞术和双荧光素酶报告基因系统分别证实,这2个海绵载体均能够非常有效地吸附外源性或内源性靶miRNA。sponge-miR-92a和sponge-miR-25载体被进一步包装成慢病毒LV-sponge-miR-92a和LV-sponge-miR-25。实时荧光定量PCR结果显示,经LV-sponge-miR-92a和LV-sponge-miR-25感染的下丘脑原代神经元细胞中,Kiss1表达水平均显著上调(P<0.05);将LV-sponge-miR-92a注射到下丘脑后,雌性小鼠阴门开启时间明显提前(P<0.05);下丘脑注射LV-sponge-miR-92a和LV-sponge-miR-25扰乱了雌性小鼠的正常动情周期。综上所述,成功构建了能够有效吸附miR-92a-3p、miR-25-3p的海绵载体,证明它们在解除miR-92a-3p、miR-25-3p对Kiss1的抑制中的作用,下丘脑注射海绵对雌性小鼠的阴门开启时间和动情周期均产生一定程度的影响,提示miR-92a-3p、miR-25-3p可能在青春期的启动和生殖成熟过程中发挥重要的作用。

miR-103a-3p通过调控FEZF1/CDC25A途径影响肝癌细胞的增殖和凋亡

目的探究miR-103a-3p在肝癌细胞的表达及其与锌指蛋白1(FEZF1)/细胞分裂周期25A蛋白(CDC25A)途径的关系。方法体外培养人肝癌Hep G2、BEL-7402细胞,将转染试剂、miR-103a-3p阴性对照质粒、miR-103a-3p mimis质粒分别转染细胞,命名为空白对照组、miR-103a-3p阴性转染组、miR-103a-3p过表达组。实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-103a-3p mRNMA表达;MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆形成试验检测菌落形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞中FEZF1、CDC25A蛋白表达情况;荧光素酶活性检测miR-103a-3p与FEZF1靶向调控关系。结果在Hep G2细胞、BEL-7402细胞中,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组miR-103a-3p mRNA表达显著升高(P<0.05)。随着细胞培养时间延长,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率逐渐升高,在同一时间点,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率均升高(P<0.05)。与空白对照组、阴性转染组相比,细胞菌落数量显著降低,细胞凋亡率显著升高,G0/G1期DNA含量升高,S期细胞DNA含量下降,FEZF1、CDC25A蛋白表达均降低(P<0.05)。荧光素酶活性测定显示,在3'UTR-Wt的细胞中,与阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性显著降低(P<0.05);而3'UTR-Mut的细胞中,阴性转染组与miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性无显著差异(P>0.05)。结论 miR-103a-3p过表达后能够抑制肝癌细胞的增殖,引起细胞周期G0/G1期阻滞,促进其凋亡,其机制可能与靶向调控FEZF1/CDC25A表达有关。

Rab25基因3'UTR荧光素酶报告基因载体及突变体的构建

目的针对Rab25基因3＇端非翻译区（untranslated region,3＇UTR）构建Rab25荧光素酶报告基因载体及突变体,为研究miR-125a-5p在肺癌耐药中调控其靶基因RAB25提供有效的工具。方法 PCR扩增包含Rab25的3＇UTR的DNA片段,克隆至荧光素酶载体GV306,构建GV306/Rab25＇UTR载体;通过Trget Scan Release 6.2查找Rab25与miR-125a-5p结合区域并设计突变序列,参照构建GV306/Rab25＇UTR载体方法构建GV306/Rab25＇UTR突变载体。结果通过获得Rab25与miR-125a-5p的种子区域及侧翼部分120~126 nt,并上下延伸150 bp,合成Rab25＇UTR,并且在120~126 nt区域设计突变序列,构建了GV306/Rab25 3＇UTR及其突变载体。结论成功构建了含Rab25基因3＇UTR区的荧光素酶报告基因载体及突变体,为进一步研究Rab25在非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药中的作用打下基础。

分子筛离子交换剂(二乙胺基乙基葡聚糖凝胶)A-25除热原试验

制取无离子无热原注射用水通常有蒸馏、活性炭吸附、石棉过滤、化学处理等方法,而目前一般药厂仍然采用蒸馏法。蒸馏法需耗费大量蒸汽;活性炭吸附需有贮水槽、搅拌、过滤装置,设备占地面积大,劳动强度也大;用化学处理则会引入新的离子或分子,需要用离子交换树脂(或其它方法)再行除去。

液相色谱质谱联用分离、鉴定芥蓝中脱硫芥子油苷

从芥蓝菜薹中提取芥子油苷,经阴离子交换柱DEAE-Sephadex A-25纯化和硫酸酯酶脱硫,得到脱硫芥子油苷提取液.比较了两种高效液相色谱的流动相体系(甲醇与水体系和乙腈与水体系)及两种长度(250 mm×4.6 mm和150 mm×4.6 mm)的C18色谱柱(Prontosil ODS2,粒径5μm)对芥蓝脱硫芥子油苷的分离效果,确定分离条件为乙腈与水流动相体系和250 mm×4.6 mm C18柱.采用质谱联用及紫外扫描,在芥蓝菜薹中检测出7种脂肪族芥子油苷和4种吲哚族芥子油苷,其中4-甲硫基丁基芥子油苷为第一次在芥蓝中检测到.芥蓝中主要以脂肪族芥子油苷为主,占总芥子油苷含量的91.6%,而吲哚组芥子油苷的含量仅占8.4%.其中,3-丁烯基芥子油苷和4-甲基亚硫酰丁基芥子油苷为主要芥子油苷组分,分别占总含量的47.9%和35.5%,而含量最低的为4-羟基-3-吲哚甲基芥子油苷,只占总芥子油苷含量的0.2%.

转Bt基因植物表达产物Cry1Ab蛋白的制备纯化方法研究

以转Bt基因水稻为试材,研究其表达产物Cry1Ab蛋白的提取、分离及纯化的方法。实验结果表明,DEAE纤维素填料对Bt蛋白有较好捕获效果。根据生物信息学方法预测了目标蛋白和主要共存蛋白的等电点和疏水性差异。合理地选择了阴离子交换色谱与疏水作用色谱组合方法。提取液经DEAESephadexA50柱层析及PhenylSepharoseFastFlow疏水层析分离后,目标蛋白得到了显著的纯化。考察了疏水层析中用不同洗脱液洗脱Cry1Ab蛋白对活性回收率和纯度的影响,结果表明:以0.25mol/LKSCN作洗脱液对活性影响最小,HIC一步纯化倍数可达8倍,总纯化倍数达100倍。

LncRNA MALAT-1调控miR-125a-5p及其靶基因Rab25参与非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药机制研究

目的在前期已经验证miR-125a-5p通过调控Rab25参与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(epidermal-growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)耐药的基础上,本研究进一步检测出临床具有EGFR突变的NSCLC EGFR-TKIs耐药的患者中lncRNA MALAT-1的相对表达量高于具有EGFR突变的NSCLC未治疗的患者,同时通过生物信息学软件预测出MALAT-1与miR-125a-5p有结合位点,遂预测MALAT-1可能通过调控miR-125a-5p及其靶蛋白Rab25参与NSCLC EGFR-TKIs的耐药。方法采用SAM双载体慢病毒转染技术过表达肺腺癌细胞(PC9细胞)中的MALAT-1基因,Crispr/Cas9慢病毒转染技术敲除肺腺癌厄洛替尼耐药细胞(PC9ER细胞)中的MALAT-1基因;qRT-PCR实验检测未治疗患者血清标本中MALAT-1的表达量和亲本及耐药细胞组中MALAT-1和miR-125a-5p的变化;CCK-8实验验证MALAT-1对两组细胞耐药指数的影响;细胞凋亡和周期实验检测MALAT-1对细胞凋亡率和细胞周期分布的影响:免疫荧光定性检测MALAT-1对靶基因Rab25的影响。结果MALAT-1的相对表达量临床耐药患者组(3.280±0.369)高于未治疗患者组(1.000±0.000),差异有统计学意义,t=6.185,P=0.004;SAM双载体及Crispr/Cas9慢病毒转染技术成功在PC9细胞中过表达MALAT-1及PC9ER细胞中敲除MALAT-1;与PC9细胞(1.000±0.000)相比,PC9ER细胞中MALAT-1的相对表达量升高(6.113±0.546,t=10.010,P<0.001),PC9ER细胞中miR-125a-5p的相对表达量降低(0.233±0.044,t=16.470,P<0.001),PC9+MALAT-1细胞中miR-125a-5p的相对表达量降低(0.303±0.012,t=14.900,P<0.001);在厄洛替尼作用48h后,PC9ER和PC9+MALAT-1细胞的IC50高于PC9细胞(tPC9ER=7.566,PPC9ER<0.001;tPC9+MALAT-1=9.766,PPC9+MALAT-1<0.001),PC9-shMALAT-1细胞IC50低于PC9细胞,差异有统计学意义,t=6.025,P=0.002。PC9+MALAT-1细胞凋亡率(1.333±0.088)低于PC9细胞(7.100±0.379),t=14.270,P<0.001;PC9ER-shMALAT-1细胞(14.970±0.410)凋亡率高于PC9ER细胞(1.267±0.088),t=33.900,P<0.001;PC9+MALAT-1细胞G0/G1期细胞比例低于PC9细胞(t=11.370,P<0.001),S期细胞比例高于PC9细胞,t=9.365,P<0.001,PC9ER-shMALAT-1细胞G0/G1期比例高于PC9ER细胞(t=14.060,P<0.001),S期细胞比例低于PC9ER细胞(t=8.365,P<0.001);PC9+MALAT-1细胞(184.900±6.712)中Rab25的表达量高于PC9细胞(25.990±1.820),t=29.880,P<0.001;而PC9ER-shMALAT-1细胞(27.060±1.400)中Rab25的表达量低于PC9ER细胞(193.200±2.500),t=31.250,P<0.001。结论MALAT-1的过表达导致PC9细胞的增殖能力及其对厄洛替尼的耐药能力增加,细胞凋亡率降低,而MALAT-1的敲除,能使PC9ER细胞的增殖能力及细胞对厄洛替尼的耐药能力降低,细胞凋亡率增加;初步验证了lncRNA MALAT-1通过调控miR-125a-5p及其靶基因Rab25参与NSCLC EGFR-TKIs的耐药。

“橡皮套鞋”今安在——俄罗斯四代反导系统

在美国退出反导条约后,俄罗斯也宣布将不再受反导条约的限制,并将发展一套类似于美国的导弹方御系统。其实,俄罗斯从20世纪60年代开始就拥有了导弹防御武器,只是从未公开过。早在1961年3月,苏联就进行了第一次导弹拦截试验并获得成功。1972年,苏联的反弹道导弹系统正式通过了验收,进入战备值班。俄罗斯的导弹防御系统已经历了四代:第一代称为RZ-25,研制于1956年,1964年退役;第二代称为A-35,于1964年部署:第三代S-225;第四代称为A-135,服役于1984年,至今仍在使用。

TD24A-12／1250-25型真空灭弧室

TD24A-12／1250-25型真空灭弧室灭弧室是针对国外用户开发的，主要用于额定电压12kV、额定电流1250A、额定短路开断电流25kA的高压真空断路器上，广泛应用于城网、农网输配电系统及其它高压交流电路中，起开关控制和保护作用。

特应性皮炎患儿临床特征及血清Apo A1、25(OH)D、EDN水平变化

目的探讨特应性皮炎(AD)患儿临床特征及血清载脂蛋白A1(Apo A1)、25羟基维生素D[25(OH)D]、嗜酸性粒细胞衍生神经毒素(EDN)水平变化。方法回顾性选取2016年1月至2019年12月株洲市中心医院就诊的200例AD患儿为AD组,100例健康体检儿童为对照组。分析AD患儿临床特征,对比两组血清Apo A1、25(OH)D、EDN水平差异,探讨血清Apo A1、25(OH)D、EDN水平与AD病情严重程度的关系。结果200例AD患儿男女构成比为1.41∶1,发病年龄<3个月占比最高[64.50%(129/200)],检测出吸入性过敏原118例(59.00%),食入性过敏原82例(41.00%)。AD组患儿血清Apo A1、EDN水平均高于对照组(均P<0.05),而血清25(OH)D水平则明显低于对照组(P<0.05)。随着病情的加重,AD患儿血清Apo A1、EDN水平逐渐升高,而血清25(OH)D则呈明显降低趋势(均P<0.05)。AD患儿AD严重程度评分与血清Apo A1、EDN水平呈正相关(均P<0.05),与血清25(OH)D水平呈负相关(P<0.05)。结论Apo A1、25(OH)D、EDN参与小儿AD的发病过程,其血清表达水平与AD病情严重程度密切相关。