PS-MPs和DEHP联合暴露通过NO/iNOS/NF-κB通路诱导小鼠结肠上皮细胞自噬的作用机制研究

【目的】探究聚苯乙烯微塑料(PS-MPs)和邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)联合暴露通过NO/iNOS/NF-κB通路诱导小鼠结肠上皮细胞(MCEC)自噬的作用机制。【方法】依据CCK-8法测定的PS-MPs和DEHP对MCEC的半数抑制浓度(IC 50),将MCEC分为5组:对照组、PS-MPs组、DEHP组、联合组和抑制组,各组MCEC分别用培养基及含有200μg/L PS-MPs、100μmol/L DEHP、200μg/L PS-MPs+100μmol/L DEHP、200μg/L PS-MPs+100μmol/L DEHP+5 nmol/L硼替佐米(PS-341)的培养基处理24 h后,采用生化试剂盒检测NO含量及iNOS活性,通过MDC法检测自噬小体,利用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR和Western blotting检测自噬,以及NO/iNOS/NF-κB通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平。【结果】PS-MPs和DEHP均可抑制MCEC的活力,且IC 50分别为2315μg/L和1477μmol/L。与对照组相比,PS-MPs、DEHP、联合组细胞中NO含量、iNOS活性及NO/iNOS/NF-κB通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),MDC法与免疫荧光染色的荧光强度均显著增强(P<0.05),MCEC的自噬相关基因(Beclin1、ATG5、LC3-B)的mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.05);PS-341可显著缓解PS-MPs和DEHP对MCEC暴露引起的上述检测指标的变化。【结论】联合暴露于PS-MPs和DEHP可激活iNOS,使NO含量激增,上调NO/iNOS/NF-κB通路,从而诱导小鼠结肠上皮细胞自噬。

淀粉吸附剂脱除浓香花生油中塑化剂DEHP的研究

旨在为浓香花生油的品质提升和安全生产提供科学指导,以4种市售淀粉(普通淀粉、乙酰化二淀粉磷酸酯、羟丙基二淀粉磷酸酯、醋酸酯淀粉)为吸附剂,浓香花生油中邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)脱除率为衡量指标,研究了淀粉吸附剂种类、添加量、添加位置、添加方式及浓香花生油添加量对浓香花生油中DEHP的脱除效果,并考察了淀粉吸附剂对浓香花生油品质的影响。结果表明:4种市售淀粉吸附剂对DEHP的脱除能力大小依次为醋酸酯淀粉>羟丙基二淀粉磷酸酯>乙酰化二淀粉磷酸酯>普通淀粉;采用在烘炒前添加醋酸酯淀粉吸附剂至花生仁中的吸附脱除方法,在浓香花生油添加量1%、醋酸酯淀粉添加量2%的条件下,DEHP的脱除率为35.4%;在烘炒前添加醋酸酯淀粉吸附剂DEHP的脱除效果好于烘炒后添加的,且直接将醋酸酯淀粉吸附剂添加于浓香花生油中无明显DEHP脱除效果;醋酸酯淀粉对浓香花生油酸值、过氧化值、色泽、透明度及风味无明显影响。综上,在花生仁烘炒前添加醋酸酯淀粉吸附剂,可以减少浓香花生油中DEHP含量,从而保证浓香花生油的产品品质。

DEHP对斑马鱼早期发育细胞凋亡及生长相关基因表达的影响

为探究邻苯二甲酸二乙基已酯(DEHP)对斑马鱼(Danio rerio)早期发育阶段细胞凋亡及生长相关基因表达的影响,将刚受精的斑马鱼胚胎放入培养皿(φ15 cm,200粒卵/皿)中,暴露于质量浓度分别为0μg/L(对照组)、10μg/L、30μg/L和300μg/L的DEHP溶液中4 d,每组5个平行。在28.5℃培养箱中孵化,每天更换培养液,及时吸除死亡胚胎和仔鱼,记录各皿中的鱼苗数,随机取10尾鱼活体检测细胞凋亡。利用AO染色、细胞凋亡DNA Ladder以及实时荧光定量PCR技术分析斑马鱼仔鱼的细胞凋亡及其生长相关基因的表达。结果显示,3个处理组的孵化率均低于对照组(P>0.05),出现不同程度的细胞凋亡,30μg/L和300μg/L组的AO染色荧光强度显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,3个处理组斑马鱼仔鱼IGF1a和Ghra基因的表达量均显著下调(P<0.05);30μg/L和300μg/L组IGF2b基因的表达量显著下调(P<0.05);30μg/L组IGF1b基因的表达量显著下调(P<0.05)。结果表明,较高浓度的DEHP能够诱导斑马鱼早期发育阶段细胞凋亡,抑制其生长相关基因的表达。

增塑剂DEHP通过铁死亡途径抑制小鼠GC-1 spg精原细胞生长

目的:探究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)损伤小鼠GC-1 spg精原细胞功能的可能机制。方法:采用不同浓度DEHP(0、30、60、90、120μmol/L)处理GC-1 spg细胞,通过CCK8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测细胞增殖和迁移能力的变化;化学分光光度比色法检测细胞内铁离子(Fe 3+)和丙二醛的相对含量;蛋白质印迹实验检测细胞内铁死亡相关蛋白胱氨酸/谷氨酸逆转运蛋白(xCT)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的相对表达;细胞免疫荧光染色技术检测细胞内活性氧水平以及线粒体膜电位(JC-1)的改变。使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(1μmol/L)与DEHP(90μmol/L)联合培养GC-1 spg细胞24 h,CCK8实验检测细胞的增殖能力。结果:与对照组(0μmol/L)相比,30、60、90、120μmol/L DEHP组细胞的增殖能力、克隆形成能力和迁移能力明显下降;丙二醛、活性氧、Fe 3+(90、120μmol/L DEHP组)含量明显升高;线粒体膜电位(60、90、120μmol/L DEHP组)明显降低;GPX4(60、90、120μmol/L DEHP组)和xCT蛋白表达水平明显降低。DEHP与Ferrostatin-1联合培养后细胞增殖能力较DEHP单独培养明显提高。结论:DEHP能够抑制GC-1 spg细胞的增殖和迁移能力,降低GPX4和xCT蛋白的表达,可能通过铁死亡途径引起细胞死亡。

垃圾渗滤液中DEHP与DBP的迁移演化规律研究

采用一维土柱下渗实验和垂向入渗模型相结合的方式,研究垃圾渗滤液中邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)和邻苯二甲酸二正丁酯(DBP)在土壤中的垂向迁移演化规律。结果表明:原状土和混有石英砂土的土柱对DBP的吸附能力均强于DEHP,而混有石英砂的土柱中DEHP、DBP均出现不同程度的穿透现象,且DEHP的穿透速度比DBP要快2倍;做或不做防渗处理,DEHP和DBP渗出量均呈前期快速增长而后期归于稳定的趋势,防渗对DBP效果较DEHP好;垂向入渗模型与一维土柱实验结果一致,该模型可用于其他区域有机污染物在土壤中垂向迁移的研究。

孕期暴露DEHP对子代雌性大鼠下丘脑神经内分泌基因表达的影响

目的 探究孕期DEHP暴露对后代下丘脑生殖和能量代谢相关神经内分泌基因的影响。方法 将16只受孕成功的SD大鼠随机分为溶剂对照组(D0)和DEHP剂量500 mg/kg组(D500),从妊娠第1天开始连续灌胃18 d,1次/d。F1代子鼠出生后第1天定为PND0,记录新生鼠体质量、死胎、畸胎情况。F1代子鼠于28日龄时处死,采用荧光定量PCR技术检测F1代雌鼠下丘脑生殖相关基因(Kiss1、GnRH)和能量代谢相关基因(Npy、Agrp、Pomc)的mRNA表达。同时,采用下丘脑冷冻切片免疫荧光技术分析上述基因的蛋白表达水平。结果 孕期接触DEHP可导致新生鼠体质量下降,下丘脑GnRH mRNA表达增加,腹前室旁核(AVPV)区Kiss1基因及其编码蛋白Kisspeptin表达增加。在下丘脑弓状核中,Kiss1和Npy基因的mRNA和蛋白表达无明显差异,Agrp基因mRNA和蛋白表达量显著增加,Pomc基因mRNA和蛋白表达量显著降低。结论 孕期DEHP暴露可影响子代雌性大鼠下丘脑生殖和能量代谢相关基因的转录和蛋白表达。

DEHP促Nrf2蛋白表达致小鼠肝脏损伤研究

为探究DEHP对雌性动物肝脏毒性及肝损伤的作用,本试验选取21 d的健康雌性小鼠80只,随机分为对照组(玉米油,CK)、DEHP低剂量组[100 mg/(kg·d),LD]、DEHP中剂量组[250 mg/(kg·d),MD]及DEHP高剂量组[500 mg/(kg·d),HD],将其分别溶解于0.3 mL玉米油中连续灌胃14 d。末次灌胃后禁食12 h,处死并取出肝脏组织进行HE染色和Nrf2免疫组织化学检测。结果表明,DEHP处理的小鼠肝脏出现了肝水肿、细胞紊乱、坏死变性和炎症等肝脏病理现象,呈现剂量越高损伤越严重的趋势。IHC检测发现Nrf2在MD和HD中的表达显著高于CK(P<0.01)。DEHP暴露可能促使Nrf2过度表达,Nrf2的持续积累对肝脏细胞造成损伤及炎症反应,从而诱导小鼠肝脏损伤。本研究为深入探讨DEHP对动物肝脏的毒性作用机制提供参考。

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)的细菌生物降解

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(dis(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)是一种人工合成的有机化合物,其作为增塑剂,因具有优良的柔韧性、可塑性和耐久性等特征而被广泛应用在个人护理、医疗器械、食品包装和塑料制造等领域。DEHP在土壤、水体和大气等环境中普遍存在,且由于DEHP是一种常见的内分泌干扰物,具有生殖毒性、免疫毒性以及神经毒性等,不仅给生态环境造成了威胁,而且可通过食物链进入人体给健康带来危害。因此,去除环境中的DEHP备受关注。DEHP的生物降解被认为是最绿色环保的降解方式,目前已有不少关于DEHP生物降解的研究报道。本文综述了DEHP的污染及危害、细菌生物降解现状,重点介绍了DEHP经酯键水解、β氧化、原儿茶酸降解、苯甲酸降解以及三羧酸循环等过程实现完全降解的途径,以及从基因层面阐述DEHP降解的分子机制,并针对DEHP生物降解目前还存在的问题进行总结和展望,为环境中DEHP有效生物降解提供参考。

孕期DEHP暴露后子代雌鼠下丘脑lncRNA的差异性表达研究

目的 探究孕期DEHP暴露对大鼠子代雌鼠下丘脑长链非编码RNA(lncRNA)表达的影响,分析并预测DEHP影响子代下丘脑-垂体-性腺轴与能量代谢的机制。方法 大鼠孕0~18 d连续灌胃染毒,子代雌鼠出生后立刻取下丘脑组织并提取总RNA,使用illumina Hiseq测序平台进行测序,筛选出差异表达的mRNA和lncRNA进行GO与KEGG富集分析。利用实时荧光定量PCR检测技术验证染毒组与对照组的下丘脑细胞中差异表达的目的lncRNA。结果 通过RNA-seq测序分析,筛查到108条差异表达的lncRNA和342条差异表达的mRNA。KEGG分析显示差异表达的lncRNA主要富集在雌激素信号通路、Ras信号通路信号转导和PI3K-Akt信号通路等通路。结论 孕期DEHP暴露后子代雌鼠下丘脑组织存在lncRNA及mRNA的差异表达,且差异表达的lncRNA和mRNA功能分析结果显示产前DEHP暴露可能对子代雌鼠下丘脑的性腺激素和能量代谢过程有影响。

塑胶跑道中DBP和DEHP含量的不确定度评定

对GB 36246-2018标准中GC-MS法测定塑胶跑道DBP和DEHP含量的不确定度进行了分析,结果显示对不确定度贡献最大的是标准溶液的原始浓度、稀释及曲线拟合。塑胶跑道中DBP和DEHP不确定度评定结果表示分别为:(0.105±0.0072)mg/kg,k=2、(0.0947±0.0068)mg/kg,k=2,可为实验室测量过程的质量控制和结果判定提供依据。通过使用GUM法对DBP和DEHP含量的不确定度进行评定:(1)建立数学模型和不确定度来源分析;(2)评定标准不确定度;(3)计算合成标准不确定度;(4)确定扩展不确定度及报告测量结果。

DEHP对土壤脱氢酶活性及微生物功能多样性的影响

选用肥熟旱耕人为土(黄棕壤),设置了在土壤中施加100 mg kg-1 DEHP与不施加DEHP两个水平,盆栽试验研究了DEHP对土壤脱氢酶活性以及土壤微生物群落功能多样性的影响,以及植物在污染土壤中的修复作用。结果表明,施加DEHP显著抑制了土壤脱氢酶活性,30 d时与对照相比降低了约30%, 第60 d时尽管有缓慢的回升,但仍明显低于对照(p<0.05)。从BIOLOG反应的结果可以看出,DEHP也显著影响土壤微生物的功能多样性,土壤微生物群落的Shannon指数、Simpson指数、McIntosh指数和均度均显著低于无污染的对照,说明DEHP的污染导致了土壤微生物群落功能多样性的下降。种植植物对土壤脱氢酶和微生物活性有很明显的促进作用,并且在一定程度上缓解了DEHP的毒害作用,但并未消除DEHP对土壤微生物的影响。

DEHP在土壤和白菜中的残留及毒性分析

用聚氯乙烯(PVC)塑膜覆盖白菜地,收获期土壤和白菜植株中DEHP的残留量分别为2.73mg·kg^(-1)和3.05mg·kg^(-1).借鉴国外的评价指标,对人体食用白菜后的潜在危害进行了分析认为,人每天摄入干白菜中DEHP的量<0.05mg·kg^(-1),远低于人每天可接受DEHP的安全摄入量1mg·kg^(-1).

邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对金鲫鱼脑细胞DNA的损伤

为了研究邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对金鲫鱼(Carassius auratu)脑细胞DNA的损伤作用,采用不同浓度的DEHP溶液(0、25、50、100、200mg·L-1)对体外培养脑细胞进行染毒,应用单细胞凝胶电泳(彗星实验)检测脑细胞DNA的损伤效应.结果表明,染毒1.5h后,与对照组相比,DEHP各染毒组细胞尾部DNA百分率(Tail DNA%)和尾矩(Tail Moment)均显著升高(p<0.01),即DEHP染毒引起了脑细胞DNA的严重断裂;随着DEHP浓度的增加,DNA损伤程度加剧,细胞尾部DNA百分率及尾距与DEHP染毒浓度呈明显的剂量-效应关系.以上结果表明,DEHP可导致金鲫鱼脑细胞DNA损伤。

邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)对土壤中微生物和动物的影响

在确定进入土壤系统中的邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)在土壤气、固、液三相间的分配率的基础上,主要研究了DEHP与土壤中微生物和动物的相互作用。结果表明,DEHP对土壤系统中所测试生物的生长和生理均有一定抑制作用。DEHP对微生物产生影响的最低可见效应浓度(LOEC)为0.01g·kg-1干土;在较低浓度下(<0.01g·kg-1干土),DEHP可促进细菌的生长,表明细菌可利用DEHP作为其生长的C源,而霉菌和放线菌均无此现象。DEHP对蚯蚓生长的LOEC为0.005g·kg-1干土,蚯蚓可从土壤中富集DEHP,试验进行50d,对于0.005g·kg-1干土的DEHP富集倍数为7.32。在所测试生物中,蚯蚓对DEHP的毒性反应最敏感。

土壤中DBP/DEHP污染对几种蔬菜品质的影响

采用田间试验方法,考察了土壤中DBP(邻苯二甲酸二丁酯)和DEHP(邻苯二甲酸二异辛酯)污染对番茄、蕹菜和胡萝卜品质的影响。结果表明,与对照相比,当土壤中DBP/DEHP(1∶1m/m)施加量为20mg·kg-1土和200mg·kg-1土时,番茄果实中维生素C含量分别降低8.53%和23.86%,蕹菜茎叶中维生素C含量分别降低4.77%和24.62%;番茄果实中可溶性糖含量分别增加32.11%和42.95%,可滴定酸度分别降低0.58%和20.66%,糖酸比分别提高33.07%和82.02%;胡萝卜块根中总类胡萝卜素含量分别增加6.19%和6.97%。表明DBP和DEHP可以影响蔬菜的品质。它们对蔬菜品质的影响并不是因为对植物生长的毒害作用而引起的,而可能是由于干扰了植物正常的生理代谢而引起的。在番茄、蕹菜和胡萝卜的果实、茎叶和根系中都检测到了DBP和DEHP的残留,残留量随土壤中施加DBP/DEHP浓度的增加而增加。在植物的地上部分DBP的含量较高,而DEHP含量很低,说明植物容易吸收积累DBP,而对DEHP的吸收很少。

一株邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)高效降解菌的筛选及其降解特性

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)是一种高分子量的邻苯二甲酸酯(PAE),因高用量、难降解性成为一种全球性的有机污染物.从二沉池活性污泥中筛选出一株革兰氏阴性菌,能够以DEHP作为唯一碳源和能源,高效降解DEHP,命名为XB.基于其形态、生化特性以及16S r RNA基因序列分析,鉴定为Pseudomonas sp..优化其降解100 mg·L^(-1)DEHP的条件,结果表明最佳降解条件为:温度30—35℃,p H 7.0.同时,不同初始浓度下DEHP的降解动力学研究表明Pseudomonas sp.XB对DEHP的降解符合一阶动力学模型.当DEHP浓度为100 mg·L^(-1)时,降解半衰期大约为8.25 h.通过GC-MS检测到了菌株XB降解DEHP的代谢产物,如邻苯二甲酸(2-乙基己基)单酯(MEHP)和2-乙基己基醇,推导了其降解途径.菌株Pseudomonas sp.XB还可以以其他3种常见PAEs(DMP、DEP、DBP)、苯酚、苯甲酸钠以及邻苯二甲酸等有机化合物为唯一碳源和能源生长,表明其降解环境有毒物质的能力.结果证明Pseudomonas sp.XB作为生态修复PAEs生物强化菌具有潜在的适用性.

VA菌根对土壤中DEHP降解的影响

以豇豆为供试植物 ,分别接种泡囊丛枝菌根 (VAM)真菌Acaulosporalavis(光壁无梗球囊霉 ,菌号 :34)和Glomuscaledoni um(苏格兰球囊霉 ,菌号 :90 0 36 ) ,研究VA菌根对菌根际 (A)、菌丝际 (B)和常规土 (C)土层中不同浓度DEHP(4、2 0、10 0mg kg)降解的影响 .试验持续 6 0d .结果表明 :接种VAM真菌促进了DEHP在A、B、C土层中的降解 ,尤其在B层的降解 ,说明菌丝在DEHP降解和转移过程中起了重要作用 .其中 34号菌接种效果较为显著 ,A、B土层中的DEHP残留浓度分别比不接种最大下降 2 5 1%和 10 1% .受VAM直接影响的A、B土层中细菌、真菌、放线菌数量呈下降趋势 ,而在C层中呈增加趋势 ,A、B、C土层中土壤中性磷酸酶活性也呈现出同样变化趋势 .

食品塑料袋中DEHP气相色谱检测方法的建立

DEHP是塑料中常用的增塑剂之一,直接与内装高脂食品接触时,能够从塑料中迁移到内装食品中,造成内装食品的污染。DEHP对人体系统有不良影响,具有致畸、致癌的作用。本实验对各种材质(PVC、PE、PP、PS等)的食品塑料袋中DEHP的测定进行了较为系统的研究,采用气相色谱法,FID检测器,对DEHP进行测定。本方法检出限为3.38×10-3mg/kg,加标回收率为90.7%～105.1%,能够满足各种材质食品塑料袋中低浓度至高浓度DEHP含量测定的需要。

食品包装中增塑剂DEHP毒性特点及迁移研究进展

随着人们对食品安全问题关注度的提高,社会各界对于食品包装材料中有害物质的迁移给予了高度重视。作为一种邻苯二甲酸酯类化合物,邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)是塑料工业最主要的增塑剂之一,广泛用于食品包装材料、医疗器械以及儿童玩具等生产。由于DEHP在塑料制品中含量高且常以游离状态存在,故非常容易通过多途径迁移至食品基质中,进而对人体造成器官损伤、生育和神经毒性等严重危害。本文就DEHP的性质、毒性损伤以及在食品中的迁移规律研究做了综述,以期为DEHP的深入研究提供理论参考。

DEHP对黑土微生物数量及酶活性的影响

采用室内模拟法,研究不同浓度的邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对黑土微生物数量及酶活性影响,旨在评价DEHP环境生态效应。结果表明,20 mg·kg-1处理对土壤细菌和放线菌数量影响不大,浓度为50>100>200和400 mg·kg-1处理对土壤细菌和放线菌表现出抑制作用,且抑制效应随DEHP浓度增大而增强,表现出良好的剂量-效应关系。真菌对DEHP敏感性低于细菌和放线菌,20、50和100 mg·kg-1处理对土壤真菌表现出短暂的抑制作用,处理后10 d均恢复到正常水平,200和400 mg·kg-1处理对土壤真菌有明显抑制作用。DEHP对土壤转化酶表现为抑制作用,与对照组相比,在整个培养周期,各浓度DEHP均明显抑制土壤转化酶活性。20 mg·kg-1处理对土壤脲酶活性、酸性磷酸酶活性和蛋白酶活性影响不大,50、100、200和400 mg·kg-1处理对土壤脲酶、酸性磷酸酶和蛋白酶活性有明显抑制作用,随着DEHP浓度增大,抑制作用逐渐增强。