CDC6、DEK、β-catenin蛋白在结直肠癌中的表达及相关性研究

目的分析结直肠癌组织中CDC6、DEK、β-catenin蛋白的表达及临床病理性质,并探讨三者表达的相关性。方法选取结直肠癌(实验组)及对应的癌旁黏膜组织(对照组),每组52例。免疫组化检测2组CDC6、DEK、β-catenin蛋白水平,探讨其与患者临床病理性质的关联,并研究它们之间的相关。结果CDC6、DEK、β-catenin蛋白的表达在实验组阳性率分别为80.77%(42/52)、84.62%(44/52)、65.38%(34/52),在对照组阳性率分别为3.85%(2/52),7.69%(4/52),23.08%(12/52),差异有统计学意义(P<0.01);结肠癌中,CDC6、DEK、β-catenin蛋白高表达均与结肠癌的T分期、临床分期、脉管侵犯呈相关性(P<0.05),且DEK蛋白的表达还与结肠癌分级呈相关性(P<0.05),三种蛋白相互之间具有正相关性。结论CDC6、DEK、β-catenin表达增高与结直肠癌的进展有关,且互相存在正相关,可用作判断结直肠癌预后的潜在参数和药物靶点。

DEK蛋白在宫颈癌病因学中的意义研究

目的:检测DEK蛋白在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈癌组织中的表达情况,探讨其在宫颈癌发病机制中的作用。方法:采用免疫组织化学方法检测DEK蛋白在35例宫颈癌组织,30例宫颈上皮内瘤变(CIN)及20例正常宫颈组织的表达情况,分析DEK蛋白的表达与宫颈癌发生的关系。结果:宫颈癌组织中DEK蛋白表达率(74.3%)高于宫颈上皮内瘤变组织(23.3%)和正常组织(15.0%),差异具有显著性意义(P<0.05),宫颈上皮内瘤变组织和正常组织,二者无统计学意义(P>0.05)。结论:DEK蛋白在宫颈癌中表达升高,可能与宫颈癌的发生有关,DEK蛋白可作为宫颈癌病因学的一个新指标。

超声引导下肝癌穿刺组织中DEK表达的临床意义

为探讨超声引导下穿刺活检肝癌组织中DEK表达的临床意义,作者利用36例经超声引导下穿刺所得的肝癌组织经免疫组化方法检测DEK蛋白的表达,得出结果:肝穿癌组织DEK阳性表达率为52.8%(17/36),明显高于癌旁正常肝组织(阳性率为0%,0/8)(p=0.007),与肿块大小密切相关(p=0.040)。结果表明,DEK与肝癌的发生发展有一定关系,超声引导下肝肿物穿刺活检并检测肿瘤组织中相关基因的表达对肝癌治疗有一定的指导价值。

DEK蛋白在膀胱尿路上皮癌癌组织和尿液中的表达及临床意义

目的探究DEK蛋白在膀胱尿路上皮癌癌组织和尿液中的表达及其与肿瘤病理分期之间的关系。方法应用免疫组化技术检测48例膀胱尿路上皮癌组织和18例癌旁正常组织DEK蛋白的表达,应用蛋白免疫印迹的方法检测28例膀胱尿路上皮癌患者和6例健康者(对照组)尿中的DEK蛋白的表达。结果膀胱尿路上皮癌癌组织中DEK蛋白的阳性表达率(73%)高于癌旁正常组织(33%,P<0.05);浅表性膀胱尿路上皮癌组织中DEK的阳性表达率(86%)高于浸润性(55%,P<0.05);膀胱尿路上皮癌患者尿液中DEK相对表达量(0.834)明显高于对照组(0.242,P<0.05);以对照组尿液中DEK的相对表达量作为标准,诊断膀胱尿路上皮癌的灵敏度可达82.1%。结论 DEK蛋白在膀胱尿路上皮癌患者癌组织和尿液中呈现阳性表达,与膀胱癌的病理分级有密切关系。癌症早期DEK蛋白在组织中的阳性表达高于癌症晚期。组织中和尿液中DEK表达认为是潜在的诊断膀胱尿路上皮癌的肿瘤标记物。

胃癌中DEK蛋白的表达与生物学行为相关性研究

目的 DEK蛋白与病毒感染、肿瘤、自身免疫性疾病有关。DEK蛋白的表达与胃癌的相关性方面的研究尚未见报道文中利用胃癌组织芯片研究DEK蛋白在胃癌中的表达与病理生物学行为的相关性,为胃癌的诊断及预后判定提供新的指标。方法选取121例胃癌和39例正常胃黏膜组织制作成组织芯片,利用免疫组织化学方法检测DEK蛋白在胃癌及正常胃组织中的表达水平。结果 DEK蛋白在121例胃癌中86例呈阳性表达。早期胃癌及进展期胃癌的阳性表达率与正常胃黏膜组织比较差异有统计学意义(P<0.001),进展期胃癌的阳性表达率与早期胃癌相比差异有统计学意义(P<0.001)。不同组织类型中,DEK蛋白在未分化癌、鳞状细胞癌和管状腺癌中的阳性表达率分别为66.7%、66.7%和87.5%,与黏液腺癌和印戒细胞癌中的阳性表达率0%和6.7%相比差异有统计学意义(P<0.001),管状腺癌的阳性表达率与未分化癌和鳞状细胞癌相比均有显著性差异(P<0.001)。DEK蛋白的表达与胃癌的病理学行为相关性研究结果表明,DEK蛋白在90例男性和31例女性胃癌中的阳性表达率分别为72.2%和67.7%,2组间无统计学意义(P>0.05)。Ⅳ级与Ⅰ级比较,2组间差异有统计学意义(P<0.05)。在14例浸润至肌层和58例浸润至浆膜层及浆膜外的胃癌中DEK蛋白的阳性表达率分别为78.6%和81.0%,与49例早期胃癌中的57.1%阳性表达率相比差异有统计学意义(P<0.001)。DEK蛋白在有淋巴结转移的92例和无淋巴结转移的29例胃癌中阳性表达分别为82.6%和41.4%,2组间差异有统计学意义(P<0.001)。DEK蛋白在有远处转移的44例和无远处转移的77例胃癌中的阳性表达率分别为79.5%和66.2%,2组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DEK蛋白的高表达在胃癌的发生发展中起重要作用,并与胃癌的组织学类型、浸润程度、淋巴结转移及远处转移有密切相关,可作为胃癌早期诊断及预后判定的一个指标。

肺癌转移相关蛋白1相互作用蛋白的筛选及验证

目的筛选肺癌转移相关蛋白1(lung cancer metastasis related protein 1,LCMR1)的相互作用蛋白并进行验证。方法以人肺癌95D细胞RNA作为模板,构建95D细胞c DNA文库。将LCMR1质粒及人肺癌95D细胞c DNA文库共转化酵母菌AH109,初步筛选LCMR1相互作用蛋白。应用融合蛋白沉降技术和免疫共沉淀技术对酵母双杂交结果进行验证,确定蛋白质相互作用。结果成功构建了人肺癌95D细胞的c DNA文库。应用酵母双杂交技术筛选出6种LCMR1相互作用蛋白,选取其中DEK原癌基因进行验证。使用融合蛋白沉降技术及免疫共沉淀技术证实,LCMR1蛋白与DEK蛋白在体外及细胞内均可以特异结合,特异结合发生在DEK蛋白N端功能区。结论 LCMR1与DEK为相互作用蛋白,DEK蛋白N端功能区与细胞凋亡密切相关,为LCMR1基因功能研究提供线索和相应分子基础。

DEK蛋白C末端DNA结合域的原核表达、纯化及其与DNA的结合活性

DEK蛋白C末端DNA结合域(简称CDB)是近年新发现的一个DEK蛋白与DNA的结合域,其中含有多个磷酸化位点,与DEK蛋白的功能密切相关。利用原核表达系统表达DEK蛋白的CDB肽段并进行纯化,具体为以pET-30a(+)为载体质粒,E.coliBL21(DE3)为宿主细胞,构建重组基因工程菌,以IPTG诱导目的蛋白的表达,用Ni-NTA纯化的重组蛋白样品来进行SDSPAGE电泳分析,约在10.7kDa处出现明显的特征蛋白条带。凝胶迁移分析证实DEK蛋白C末端DNA结合域与DNA的结合倾向于与超螺旋型DNA相结合,同全长的DEK蛋白与DNA的结合具有类似的特点,表明DEK蛋白C末端DNA结合域在DEK蛋白与DNA的结合中可能具有一定的作用。

DEK-CAN融合基因阳性急性髓系白血病患者临床特征及预后分析

目的探讨DEK-CAN融合基因阳性急性髓系白血病(AML)患者的临床特征及预后。方法回顾性分析2014年8月至2018年1月郑州大学第一附属医院收治的6例DEK-CAN融合基因阳性AML患者的临床资料,总结其临床特征、治疗及转归。结果6例患者均为女性,中位年龄29岁(4~64岁)。6例患者中,原始粒细胞白血病部分分化型(M_(2))5例,急性单核细胞白血病(M5)1例。外周血白细胞数升高5例,骨髓病态造血1例,嗜碱性粒细胞增多2例。6例患者免疫表型均CD34、CD13、CD38、CD33阳性。融合基因检测示患者DEK-CAN均为阳性,NPM1突变均为阴性,3例合并FLT3-ITD突变,2例合并WT1突变。染色体核型分析示2例未见分裂象,其余均为t(6;9)。6例患者中仅1例儿童患者第1个疗程诱导化疗取得完全缓解,5例成年患者第1个疗程化疗均未达到完全缓解,且在短期内死于并发症。结论DEK-CAN融合基因阳性AML患者预后极差,初次诱导缓解率低,死亡率高。

DEK蛋白的真核表达纯化及其活性检测

利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达DEK蛋白并进行纯化。首先以pFastBacI质粒构建重组质粒pFastBacI-DEK,转化DH10Bac大肠杆菌后获得重组穿梭载体Bacmid-DEK,通过脂质体介导转染Sf9细胞产生具有强感染力的重组杆状病毒AcNPV-DEK。用此重组杆状病毒AcNPV-DEK感染Sf9细胞表达His-DEK融合蛋白。在非变性条件下,利用Ni-NTA agarose对表达的His-DEK融合蛋白进行纯化,经SDS-PAGE和Western blotting分析,在50 kDa处出现特异性蛋白条带并证实其为His-DEK融合蛋白。凝胶迁移阻滞实验表明,融合蛋白His-DEK与DNA的结合具有结构特异性,其与超螺旋型DNA结合活性强于与线性化DNA的结合活性。真核表达并纯化的融合蛋白His-DEK与DNA的结合活性要明显强于原核表达的融合蛋白His-CDB。DEK蛋白的磷酸化修饰会阻碍其与DNA的结合,而Sf9细胞中表达的融合蛋白His-DEK存在磷酸化修饰,将His-DEK去磷酸化后,其与DNA的结合活性有所提高。