神经示踪染料DiI影响溃疡性结肠炎小鼠背根神经节神经元电学特性

目的:探究在神经示踪结合膜片钳全细胞记录的实验中,示踪染料DiI是否会对小鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元兴奋性产生影响。方法:采用SPF级雄性C57BL/6J小鼠,经5%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型,在T12~L2皮节多点注射DiI逆向示踪躯体感觉神经元,分离全组织DRG并进行全细胞膜片钳记录。结果:HE染色结果显示模型诱导成功。膜片钳记录未经标记的小鼠DRG神经元,模型组小鼠膜电位兴奋性高于正常组小鼠。两组小鼠示踪后,正常示踪组和模型示踪组DiI+神经元兴奋性均低于本组DiI-神经元;与两未示踪组的神经元相比较,两示踪组的DiI-神经元兴奋性分别升高。结论:本实验结果明确了示踪剂DiI会降低DRG神经元的兴奋性,提示相关实验设计中应注意示踪剂的应用对神经元兴奋性的影响,以保证实验结果的可靠性。

美DIII-D国家聚变设施完成升级改造

【美国DIII-D国家聚变设施网站2024年5月8日报道】美国DIII-D国家聚变设施近期完成历时8个月的重大升级,全面提升了性能,进一步巩固其作为世界上最灵活和最强大磁约束聚变研究设施之一的地位。

基于DIIS理论的公立医院青年科技人才跟踪评价研究

青年科技人才是医院创新发展的有生力量,建设一支思想坚定、品质优秀、能力过硬的青年科技人才队伍对医院高质量发展至关重要。本研究立足医院青年科技人才的培养问题,扎根于地市级三甲综合医院的实际,基于智库DIIS理论方法,通过收集数据、揭示信息、综合研判、形成方案等一整套研究流程,对医院青年科技人才培养现状进行分析研究,探索建立医院青年科技人才评价指标体系,以期为优化医院人才培育机制提供思路。

DIIS理论下地方政府数据治理政策的现状分析与提升策略

通过引入DIIS(数据收集-信息揭示-综合研判-形成方案)理论,运用内容分析法和PMC(策略建模一致性)指数模型对副省级城市的数据治理政策进行分析。研究发现,地方政府数据治理政策整体设计科学、目标明确、效力良好,采取了多样化的政策手段。不过,仍存在政策工具运用不均衡、非政府主体参与不足、政策性质单一、数据类型多样性有待加强等问题。据此,应持续优化政策工具在结构与空间上的协调配置,充分发挥多元主体的积极作用,加强政策的反馈性、预测性和稳定性。

DiI顺行追踪大鼠皮质脊髓束

目的用DiI追踪大鼠皮质脊髓束,探讨DiI在皮质脊髓束顺行追踪中的应用效果。方法Wistar大鼠24只,随机分为DiI组和溃变组,于DiI组感觉运动区皮质表面涂布5%DiI;对溃变组则损毁相应的感觉运动区皮层。结果DiI组术后存活5d的鼠,仅在端脑和间脑区见红色荧光标记的纤维,在术后存活10d、15d、20d的鼠脑及脊髓各节段内均可见红色荧光标记的皮质脊髓束纤维;溃变组在脊髓节段可观察到明显的溃变纤维,以术后存活5d最为显著,在脊髓以上节段未见明显溃变纤维。结论采用DiI活体顺行追踪大鼠皮质脊髓束的方法简便易行,对于皮质脊髓束的示踪研究,尤其中脑以下节段的显示具有比较好的应用价值。

基于DII检索数据的智能手机Wifi技术专利分析

以Derwent Innovation Index为数据源,通过主题和IP分类号为限定条件,检索全球范围内关于智能手机wifi技术的相关专利,并对结果进行归类、整理,结合定性和定量的分析方法,从而得出该技术的发展趋势、技术路线、技术领先者、发展热点等信息。

经股后肌群注射DiI逆行示踪标记神经元胞体的实验研究

目的探讨经股后肌群注射DiI行逆行示踪以精确显示支配神经元胞体在脊髓的时空分布情况。方法新生昆明小鼠65只，经左后肢股后肌群注射DiI，在注射2、4、6、8、12、24h和2、4、7、14、28d及2、3个月后观测背根神经节和腰段脊髓示踪荧光的分布和强度。结果①示踪细胞分布在左侧L2～S2脊髓段和相应的背根神经节，主要集中在L4～L6段；②注射DiI 6h后，在背根神经节和脊髓前角可见发微弱红色荧光的神经元；③标记的神经元数量逐渐增多，4d达到高峰；④6～24h每个标记神经元荧光逐渐增强，24h后达到高峰；⑤3个月后荧光强度无显著降低。结论经股后肌群注射DiI作逆行示踪，可快速、准确、持久地标记背根神经节感觉神经元和脊髓运动神经元，且适当延长示踪时间可提高神经元的标记率。

CM-DiI标记大鼠骨髓间充质干细胞的体外体内的示踪观察

目的建立骨髓间充质干细胞(BMSCs)的一个简单、有效的标记和示踪方法并对BMSCs移植治疗心肌梗死作初步观察,为进一步的研究提供依据。方法应用CM-DiI细胞标记液标记第三代大鼠BMSCs,应用荧光显微镜对标记的细胞进行体外示踪观察;8只SD大鼠,制作急性心肌梗死模型,将已标记CM-DiI的BMSCs经心肌注射途径移植给急性心肌梗死模型大鼠,在移植后1周、2周、3周、4周分别取心肌组织行冰冻切片,并在荧光显微镜下观察移植细胞;于移植后4周应用免疫组织化学法检测移植细胞心肌缝隙连接蛋白43(connexin43)的表达。结果CM-DiI标记大鼠BMSCs效率达100,标记后BMSCs生长和增殖特性未受影响,形态无改变,经过传代培养14d仍然保持较清晰的红色荧光。已标记细胞在大鼠心梗模型心肌内移植后1周、2周、3周、4周,心肌组织冰冻切片可找到移植细胞,CM-DiI与BMSCs结合稳定,荧光标记效果维持一个月无明显衰退,免疫组化切片显示移植细胞少量表达connexin43。结论CM-DiI细胞标记液标记BMSCs,对细胞生长特性无影响,操作简单,标记效果好,BMSCs移植到梗死心肌4周后仍存活,并少量表达心肌特异性蛋白connexin43。CM-DiI标记细胞法可用于进一步的BMSCs移植治疗心肌梗死的研究。

细胞膜红色荧光探针(DiI)光学转换及其电镜样本的制备

目的对细胞膜红色荧光探针(DiI)标记的神经元进行光学转换,使其结果更稳定,更适于长期保存,并且经过处理可用于电镜观察。方法选用C57/B6J小鼠20只,采用DiI散射法标记视皮质神经元,对其进行光学转换后,制备电镜样本和观察超微结构。结果经过光学转换的DiI散射神经元可以更好地显示中枢神经系统内神经元的细微结构,其中包括树突小棘。结论经过DiI散射标记的细胞可以进行光学转换,转换后能清晰地观察到细胞的细微结构和超微结构,细胞器保存完好,突触结构清晰可见。

血清高密度脂蛋白的超速离心、氧化修饰及DiI标志

目的:探讨一种方便快捷地从血浆中分离高密度脂蛋白(HDL)及氧化修饰、荧光标记的方法。方法:采用一次性密度梯度超速离心法,经超速离心分离后获得HDL(10℃,50000r/min,5h),并用Cu2+进行氧化修饰(37℃,50μmol/L,24h)及DiI进行荧光标记(37℃,15mg/mL,15h)。结果:5h内成功分离出脂蛋白,并氧化、标记了HDL;琼脂糖凝胶电泳、Bradford蛋白质定量及MDA测定证实其为纯度和浓度较高的HDL及氧化HDL(OX-HDL);标记的HDL(DiI-HDL)结合到体外培养的ECV-304细胞,表明DiI-HDL保持了正常脂蛋白的配体功能。结论:本方法缩短了超速离心时间并降低了标记成本,效果理想,可成功应用于脂蛋白受体的研究。

新生猫视皮质胼胝体神经元的DiI示踪研究

采用ＤｉＩ示踪法研究了新生猫视皮质的胼胝体神经元的分布和形态．ＤｉＩ标记的胼胝体神经元普遍分布于视皮质各区，包括在成年时缺乏胼胝体联系的１７区内侧部．这些标记的神经元位于除Ⅰ层外的皮质各层中，但大部分位于Ⅲ展并有成簇分布的倾向．ＤｉＩ标记的胼胝体神经元，特别是位于Ⅱ／Ⅲ层者大多呈“Ｇｏｌｇｉ样”标记，其树突走行和各级分支，甚至树突棘均清晰易辨．上述结果除证实以往用其他方法证明的新生猫视皮质胼胝体神经元的分布外，还显示了标记神经元的详细形态特点，表明ＤｉＩ示踪法是研究发育中的神经通路起源细胞及其突起形态的一种简单而有效的手段．

CM-DiI标记人骨髓间充质干细胞并检测其移植后产生脑源性神经营养因子的实验研究

目的观察荧光染料(CM-Di I)标记人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSC)后,是否会脱落造成周围细胞被污染,标记细胞经静脉移植入脑梗死大鼠后是否会造成宿主脑内神经元被误染色;以及是否可以鉴定人BMMSC产生脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)。方法应用不同浓度CM-Di I分别标记培养的人BMMSC,观察标记效率。将转染绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的人胚肾293T细胞和CM-Di I标记的人BM-MSC细胞共培养,7 d之后观察CM-Di I的红色荧光和293T细胞是否双标记。将CM-Di I标记的人BM-MSC经静脉移植入脑梗死大鼠体内,观察植入细胞的红色荧光是否会沾染宿主细胞以及和BDNF免疫荧光的双标记。结果不同浓度CM-Di I(1 000、200、100、20 nmol/L)均可成功标记人BM-MSC,其中1 000、200 nmol/L浓度标记24 h后观察标记效率均达到98%以上,比100、20 nmol/L标记的效率明显升高(P<0.01)。CM-Di I标记后的人BM-MSC与GFP标记的293T细胞共培养,7 d之内没有发现红色荧光沾染绿色的293T细胞。移植后第3天,静脉植入脑梗死大鼠的标记细胞的红色荧光没有沾染宿主脑内神经元,而且可以和BDNF的绿色荧光形成双标记。结论 CM-Di I可以高效地标记人BM-MSC。采用200 nmol/L浓度标记的人BM-MSC细胞在体外培养和移植入脑梗死大鼠后都未发现对周围细胞造成污染,植入细胞的CM-Di I荧光可以鉴定产生BDNF的人BM-MSC。

荧光活性染料DiI标记的大鼠骨髓基质干细胞生长增殖及其成骨分化

背景:目前关于骨髓基质干细胞的标记报道较多,各有其优缺点,寻找一种有效、简便的细胞标记与示踪的方法尤为关键。目的:观察经荧光活性染料DiI标记的大鼠骨髓基质干细胞生长增殖与成骨分化情况。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-09/12在南方医科大学组织工程研究中心完成。材料:SD大鼠10只,由南方医科大学实验动物中心提供。DiI应用液为美国Molecular ProbeInc公司产品。方法:全骨髓法体外分离培养大鼠骨髓基质干细胞,取传至第3代细胞,加入无血清的DMEM制成细胞悬液,再加入1×109L-1的DiI应用液5μL,37℃下孵育25min,清洗离心后,加入DMEM高糖完全培养基,荧光显微镜观察细胞荧光强度及形态变化。另取传至第3代细胞,加入含地塞米松、维生素C、β-磷酸甘钠、体积分数为10%胎牛血清的成骨诱导剂进行诱导分化。主要观察指标:DiI标记后细胞形态变化,XTT比色法测定细胞增殖状况,细胞上清液中乳酸脱氢酶活性,成骨诱导后细胞碱性磷酸酶活性及成骨分化能力。结果:锥虫蓝染色见骨髓基质干细胞活力好,仅偶见蓝染细胞,荧光显微镜下DiI标记后全部细胞的胞浆、胞膜均显红色荧光,标记的骨髓基质干细胞呈梭形,胞浆丰富,保持了良好的正常形态,DiI标记阳性率为100%,标记早期细胞形态呈荧光环状,48h后细胞中荧光颗粒增多,荧光增强,细胞核未染荧光。与未标记细胞比较,DiI标记的骨髓基质干细胞增殖吸光度、培养上清液乳酸脱氢酶活性、碱性磷酸酶活性均无明显变化(P>0.05)。成骨诱导7d后,钙钴法染色两组骨髓基质干细胞均见不同程度的胞质呈棕黑色改变。结论:DiI能有效标记体外培养的骨髓基质干细胞,并在细胞内稳定表达,且标记细胞形态良好,对活体细胞无毒性作用;此外,DiI标记不影响骨髓基质干细胞的生长、增殖及成骨分化能力。

大鼠皮质脊髓束的磁共振与DiI示踪对照研究

目的:验证Mn2+增强磁共振技术与DiI荧光示踪技术对于大鼠皮质脊髓束的追踪效果,并对两种方法进行比较评价。方法:采用Wistar大鼠30只,随机分为MnCl2组和DiI组各15只,分别经感觉运动区皮层进行MnCl2(0.8mol/L)注射和5%DiI涂布。MnCl2组,于术后24h行MR扫描;DiI组动物存活10d后,灌杀、切片、观察。结果:两种方法在颈髓以上节段对皮质脊髓束的示踪结果一致。结论:Mn2+增强磁共振技术与DiI荧光示踪技术对皮质脊髓束的示踪效果好,二者结合应用,对临床影像学神经束路追踪研究具有较大的应用价值。

DiI荧光标记的软骨细胞与支架材料复合后的观察

目的:通过DiI荧光染料标记观察软骨细胞在聚乳酸/乙醇酸共聚物支架(PLGA)体外和体内培养环境中的生长状态,为研究组织工程化软骨探索一种理想的软骨细胞示踪方法。方法:体外分离培养大鼠剑突软骨细胞,应用DiI标记软骨细胞,通过MTT法测定细胞的增殖活性。DiI荧光标记的软骨细胞种植于PLGA支架上分两组:一组体外培养1周,另一组体外培养1周后,再植入同系大鼠大网膜体内培养1周。分别取出细胞-支架复合物,在荧光显微镜下观察体外和体内条件下软骨细胞的荧光表达情况。结果:应用DiI标记不影响软骨细胞的增殖,MTT测定结果显示标记组和对照组的A值未见显著性差异(P>0.05)。标记后的软骨细胞显示环状红色荧光,胞核未着色。体外培养和体内培养的软骨细胞-支架复合物,均可在荧光显微镜下观察到红色荧光表达。结论:DiI荧光染料能够有效标记软骨细胞,标记的细胞-支架复合物可直接在荧光显微镜下进行观察,可作为体外和体内构建组织工程软骨的较好的示踪方法。

大鼠未固定神经组织DiI荧光示踪方法的研究

目的用DiI荧光示踪剂对大鼠未固定神经组织染色,观察神经组织在冰冻保存条件下DiI的示踪效果,以及扩散距离和扩散时间,从而获得使用DiI示踪未固定神经组织的良好方法。方法大鼠脑和脊髓组织取材,放置在-20℃条件下冰冻,用DiI标准溶液表面涂布小脑皮质或脊髓断端,保持-20℃冰冻,染色达到一定时间后用多聚甲醛固定液固定组织,以阻断DiI的传导,冰冻切片观察。结果大鼠未固定神经组织冰冻后,DiI扩散速度较快,均可见顺向。逆向示踪显示,神经元胞体及突起染色效果良好。结论大鼠未固定神经组织在离体后冰冻保存较用固定液保存,其DiI扩散速度明显加快。

CM-DiI体外标记人乳牙牙髓干细胞的可行性研究

目的:筛选CM-DiI用于人乳牙牙髓干细胞标记的最佳浓度,并对标记后细胞的生物学行为进行评价,为下一步细胞活体移植和体内示踪打下基础。方法:酶解组织块法培养人乳牙牙髓细胞并纯化,免疫组化鉴定细胞来源,进行细胞体外多向诱导分化能力实验。将第3代细胞分别使用浓度2mg/L、3mg/L及4mg/L的CM-DiI进行标记,比较标记后细胞乳酸脱氢酶释放率及细胞增殖情况,并观察经体外多次传代后细胞荧光的表达情况。结果:酶解组织块法可获得成集落状生长的人乳牙牙髓细胞;免疫组化确定细胞为间充质而非造血来源;细胞具有成脂、成骨及成牙本质等多向分化能力。3种标记物浓度均未对细胞乳酸脱氢酶释放及细胞增殖产生显著的不利影响;随体外多次传代,标记荧光强度逐渐减退。结论:CM-DiI操作简便、染色速度快,可有效的标记人乳牙牙髓干细胞,其中3mg/L的标记浓度细胞毒性极小,标记效率高,在体外多次传代后荧光信号仍能稳定表达。

CM-DiI应用于标记大鼠牙髓干细胞的实验研究

目的探讨荧光染料CM-DiI用于标记大鼠牙髓干细胞可行性。方法酶解组织块法体外分离培养SD大鼠牙髓细胞,有限稀释法对所培养的牙髓细胞进行纯化,获得呈克隆集落式生长的干细胞,免疫组化法鉴定培养细胞种属来源,成脂/成骨诱导液诱导细胞向脂肪、骨细胞方向分化。荧光染料CM-DiI体外标记第3代大鼠牙髓干细胞,观察标记后细胞增殖情况以及细胞乳酸脱氢酶释放率,统计学分析CM-DiI标记与未标记细胞的生物学状态。结果利用酶解组织块法可培养出大鼠牙髓细胞,经有限稀释法纯化后可获得克隆集落状生长的大鼠牙髓干细胞;免疫组化法确定大鼠牙髓细胞为间充质来源,且具有向脂肪细胞、骨细胞等多向分化的潜能。CM-DiI标记后的大鼠牙髓干细胞的胞浆、胞膜呈现红色荧光,并且细胞生长为梭形、生长状况良好。与未进行细胞标记组比较,CM-DiI标记后细胞形态、上清液乳酸脱氢酶含量及CCK-8值均无明显变化,两者差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CM-DiI可用于标记大鼠牙髓干细胞,此种标记方法操作简便、染色速度快,对所标记的细胞无毒性。

体内构建组织工程骨的示踪观察:CM-DiI长效示踪骨髓间充质干细胞的可行性研究

目的探索组织工程骨体内成骨时,CM-DiI长效示踪骨髓间充质干细胞的可行性,为种子细胞的体内转归研究提供标记方法。方法分离比格犬BMSCs,成骨诱导至第2代,用荧光染料CM-DiI进行细胞标记。荧光倒置显微镜观察标记后的细胞形态,MTT比色法测定标记前后BMSCs的增殖状况,检测标记前后Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、骨形态发生蛋白(BMP-2)、骨钙素(BGLAP)和骨黏连蛋白(SPARC)的表达。最后,CM-DiI荧光标记后的BMSCs与β-TCP复合共培养后植入比格犬背部皮下,8周后取材,荧光显微镜下观察BMSCs体内转归,HE染色观察异位成骨情况。结果CM-DiI标记后早期细胞呈现红色荧光,48 h后荧光增强,72 h内荧光强度无明显减弱。BMSCs在CM-DiI标记前后细胞形态基本一致,两组间细胞的增殖率无明显差别;标记后RT-PCR检测Col-Ⅰ、BMP-2、BGLAP、SPARC表达,显示标记后的BMSCs亦可向成骨方向分化。扫描电镜检测到标记后细胞在β-TCP上增殖良好,细胞基质分泌丰富。细胞-支架复合物植入比格犬皮下,8周后荧光显微镜观察到标记细胞仍存在,且HE染色可见支架孔隙中有类骨基质沉积。结论CM-DiI对BMSCs的生长增殖、成骨分化无明显影响,对体内组织工程骨中BMSCs的示踪时间可长达8周,可用作体内细胞的长效示踪剂。

CM-DiI示踪人脐血源基质细胞体内迁移定位的研究

目的:课题组前期实验发现人脐血源基质细胞(hUCBDSC)体外具有促进造血细胞集落扩增的能力,文中拟采用CM-DiI荧光标记技术,观察hUCBDSC移植后的归巢、定位和增殖情况。方法:传代培养hUCBDSC,CM-DiI荧光染料预染后经尾静脉输入BALB/c-nu/nu裸鼠体内,分别于移植后1、7、14、21 d取裸鼠骨髓、脾脏、肝脏、肺脏组织,激光共聚焦显微镜观察CM-DiI标记hUCBDSC体内分布情况。结果:传代培养hUCBDSC呈成纤维样,CM-DiI染色后胞膜呈红色。经尾静脉移植至裸鼠体内,移植后1 d,hUCBDSC广泛分布在骨髓、脾脏、肝脏、肺脏等组织中,移植7 d以后,hUCBDSC主要分布在骨髓,在骨髓中增殖、分化;脾脏、肝脏、肺脏等组织中的hUCBDSC明显减少。结论:人脐血源基质细胞经尾静脉输注可"归巢"至骨髓,并在骨髓中增殖、分化,重建受损造血微环境。