DMRIE-C脂质体介导CLEC2B转染Jurkat细胞及其转染率的影响因素

目的探讨由DMRIE-C脂质体介导将CLEC2B siRNA转染入Jrukat细胞的过程中,对Jurkat细胞的影响,并分析其转染率的影响因素。方法通过DMRIE-C转染CLEC2B siRNA入Jrukat细胞,台盼蓝染色法观察细胞活性,流式细胞仪检测siRNA转染率,RT-PCR检测CLEC2B基因沉默效率。结果 DMRIE-C脂质体对细胞的损伤程度与两者比例相关,对转染体系600μL(其中200μL密度为2×106/mL淋巴细胞)进行转染时,脂质体达3μL时可损伤细胞,不利于后续试验进行;siRNA∶DMRIE-C比例为3μL∶2μL,siRNA终浓度约80 nmol/L时,转染率最高,可达30.7%,转染后CLEC2B基因抑制率可达(35±1.9)%(t=15.9,P<0.05)。结论 DMRIE-C脂质体可实现目的 siRNA对Jurkat细胞有效转染,同时转染中脂质体与细胞比例、血清、操作方式等因素均可对转染效率产生一定的影响。

尾静脉高压注射质粒DNA后体内表达的规律

目的研究小鼠尾静脉高压注射质粒DNA后，目的基因在体内分布表达的规律，以及该方法的转基因效率。方法将LacZ质粒按小鼠体重比稀释到一定的PBS中，经尾静脉快速高压注射导入小鼠体内，通过X-gal染色的方法在不同时间点观察目的基因在肝脏和其他脏器中的分布规律。结果含有CMV启动子的LaeZ裸质粒经小鼠尾静脉高压注射途径导入体内，24h后即开始表达，第3天出现表达高峰，1周后表达消失，基因转染率达5％-6％；用脂质体包裹质粒DNA后，再进行尾静脉高压注射，质粒在肝脏的表达效率可达18％-20％。结论应用尾静脉高压注射脂质体／质粒DNA复合物途径，目的基因在小鼠肝脏获得高效表达，该方法可以广泛应用于基因治疗的实验研究。