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IDENTIFICATION AND SEQUENCE OF A cDNA CLONE CORRESPONDING TO A GENE INVOLVED IN DEVELOPMENT OF UNDARIA PINNATIFIDA 被引量:1
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作者 侯和胜 李凝 吴超元 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 1998年第S1期25-29,共5页
During the induction of gamete-producing gametangia, induced gametophytes werecollected at 4 days intervals (0,4,8, 12 d) and total RNAs were isolated by CsCl gradient ultracentrifu-gation. Some stage-specific express... During the induction of gamete-producing gametangia, induced gametophytes werecollected at 4 days intervals (0,4,8, 12 d) and total RNAs were isolated by CsCl gradient ultracentrifu-gation. Some stage-specific expressed mRNAs were identified by differential display of mRNAs from dif-ferent developing stages of the gametophytes. The cDNA of one specific mRNA was verified, cloned andsequenced. This gene was specifically expressed during 4 days of induction, and had partial homologoussequence with tobacco IAA-binding protein gene. It suggests that this cDNA may represent a gene whichis related to the LAA regulating function during the development of the gametophytes. 展开更多
关键词 UNDARIA PINNATIFIDA DEVELOPMENT cdna CLONING dna SEQUENCE
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Pathogenic Effects of Cloned Genomic DNA of Porcine Circovirus-like Virus P1 on Neonatal Mice via Different Inoculation Routes
2
作者 Sheng Shaoyang Ren Zili +2 位作者 Wen Libin He Kongwang Zhu Xuejiao 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2018年第3期191-193,共3页
[Objective] The paper was to explore the pathogenicity of cloned genomic DNA of porcine circovirus-like virus Pl to neonatal mice via different inoculation routes (brain, liver and muscle). [Method] Cloned genomic D... [Objective] The paper was to explore the pathogenicity of cloned genomic DNA of porcine circovirus-like virus Pl to neonatal mice via different inoculation routes (brain, liver and muscle). [Method] Cloned genomic DNA of P1 was inoculated to neonatal mice via different routes of brain, liver and muscle. Tissues of heart, liver, spleen, lung, kidney and brain were taken from neonatal mice at 7, 14 and 21 d post inoculation, re- spectively. Pl in various tissues were qualitatively and quantitatively detected by using ordinary PCR and quantitative real-time PCR. Meanwhile, histopathological changes were analyzed. [Result] Pl was detected in neonatal mice inoculated through three different routes. The viral load of tis- sues at 7 d post inoculation was significantly higher than those at 14 and 21 d post inoculation. Moreover, muscle inoculation led to the highest viral load in all tissues of neonatal mice. [Conclusion] Pl infection caused different degrees of pathological damage to heart, liver, lung, kidney and brain in neonatal mice. 展开更多
关键词 P1 cloned genomic dna Brain inoculation Liver inoculation Muscle inoculation
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DNA Fingerprinting of Acer truncatum Clones Using SRAP Markers
3
作者 Xinling QI Zhen FENG Qian QIAO 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2016年第4期26-30,共5页
[ Objective] This study aimed to establish DNA fingerprints of 23 Acer truncatum clones, thus providing the theoretical basis for selection, classification and identification of A. truncatum varieties. [Metho... [ Objective] This study aimed to establish DNA fingerprints of 23 Acer truncatum clones, thus providing the theoretical basis for selection, classification and identification of A. truncatum varieties. [Method] Sixteen pairs of SRAP primers with rich polymorphism and high specificity were used to establish DNA fin-gerprints. [Result] A total of 223 bands were amplified with 16 primer pairs, including 197 polymorphic bands. Averagely 13.9 loci and 12.3 polymorphic loci were amplified with each primer pair. The average percentage of polymorphic loci reached 88. 34% . [ Conclusion] The classification result drawn by cluster analy-sis is consistent with that obtained based on main characteristics and genetic relationships of A. truncatum, clones. By using DNA fingerprints established with prim-er pairs ME1-EM4 and ME2-EM1, 23 A. truncatum clones can be effectively distinguished, and the confidence probability is greater than 99.99%. 展开更多
关键词 Acer truncatum clones dna fingerprints SRAP
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THE ABNORMAL EXPRESSION OF CLONED REPEATED SEQUENCE DNA, L5B-4, IN RAT HEPATOMA BERH-2
4
作者 徐亚男 张向阳 +1 位作者 麻孙恺 张玉砚 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 1989年第4期10-17,共8页
A repeated sequence DNA fragment, L5B-4, was cloned from the 5 kb BamHI DNA fragments of rat genomic DNA. The expressions of the L5B-4 DNA fragment are different in liver and hepatoma cells. The amounts of transcripts... A repeated sequence DNA fragment, L5B-4, was cloned from the 5 kb BamHI DNA fragments of rat genomic DNA. The expressions of the L5B-4 DNA fragment are different in liver and hepatoma cells. The amounts of transcripts in hepatoma cells are lower in nucleus and higher in cytoplasm, especially in polysomal RNA, as compared with that in liver cells. The alteration shown in polysomal RNA of hepatoma cells seems to be specific. These results are discussed with respect to the possible function of this repeated DNA and its variation in hepatoma cells. 展开更多
关键词 THE ABNORMAL EXPRESSION OF cloneD REPEATED SEQUENCE dna IN RAT HEPATOMA BERH-2 L5B-4
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桑树叶绿体基因组DNA的提取及部分序列分析 被引量:9
5
作者 赵卫国 赵巧玲 +3 位作者 张志芳 肖庆利 潘一乐 何家禄 《蚕业科学》 CAS CSCD 2001年第4期303-305,共3页
改进Milligan法 ,提取了桑树叶绿体基因组DNA(cpDNA)。利用特异性引物 ,从cpDNA基因组扩增出tRNL tRNF基因。再用随机引物对同一种桑基因组DNA及cpDNA进行RAPD分析 ,表明提取的DNA是具有相当纯度的cpDNA。进一步用XbaⅠ和HindⅢ进行了cp... 改进Milligan法 ,提取了桑树叶绿体基因组DNA(cpDNA)。利用特异性引物 ,从cpDNA基因组扩增出tRNL tRNF基因。再用随机引物对同一种桑基因组DNA及cpDNA进行RAPD分析 ,表明提取的DNA是具有相当纯度的cpDNA。进一步用XbaⅠ和HindⅢ进行了cpDNA的酶切和克隆。通过酶切鉴定 ,已克隆到 5个片段 ,对其中 1个片段的 70 0bp序列进行了分析 ,推测克隆的片段可能为trnK基因的内含子。 展开更多
关键词 桑树 叶绿体 基因组dna 序列分析 提取 基因克隆
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编码中华绒螯蟹蜕皮抑制激素基因的cDNA片段克隆和序列分析 被引量:15
6
作者 王在照 相建海 崔朝霞 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期432-438,共7页
于 2 0 0 0年 3月提取中华绒螯蟹眼柄总RNA ,以此为模板 ,根据日本对虾的神经肽Pej SG Ⅳ设计兼并引物 ,进行RT PCR扩增 ,在适宜的反应条件下 ,获得一特异性的产物 ,将该片段克隆到载体中进行测序。结果表明 ,中华绒螯蟹特异性cDNA片段... 于 2 0 0 0年 3月提取中华绒螯蟹眼柄总RNA ,以此为模板 ,根据日本对虾的神经肽Pej SG Ⅳ设计兼并引物 ,进行RT PCR扩增 ,在适宜的反应条件下 ,获得一特异性的产物 ,将该片段克隆到载体中进行测序。结果表明 ,中华绒螯蟹特异性cDNA片段由 2 1 3个碱基组成。在生物信息数据库中查找由该cDNA推定的氨基酸序列的相似序列 ,可以发现有大量甲壳动物的CHH家族神经肽与它相似。在所有相似序列中 ,甲壳动物的蜕皮抑制激素 (MIH)与它的相似度最高 ,这一结果提示由中华绒螯蟹的眼柄特异性cDNA片段推定的氨基酸序列可能是它的MIH片段。 展开更多
关键词 中华绒螯蟹 蜕皮抑制激素 Cdna克隆 序列分析 生物信息数据库 甲壳动物
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弓形虫基因组文库的建立、特异克隆的筛选和弓形虫病的DNA诊断 被引量:13
7
作者 夏爱娣 顾允中 +4 位作者 徐世杰 陈诗书 杨惠珍 徐克继 钱宗立 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第3期165-169,共5页
首次建立弓形虫人株(ZS_2株)基因组文库,筛选出一个弓形虫特异DNA片段的克隆。对该克隆的DNA片段(1.1kb)进行了限制性内切酶图谱分析。应用Southern印迹法及斑点印迹法检测,结果示同位素^(32)P标记的该克隆DNA片段能与弓形虫DNA、人工... 首次建立弓形虫人株(ZS_2株)基因组文库,筛选出一个弓形虫特异DNA片段的克隆。对该克隆的DNA片段(1.1kb)进行了限制性内切酶图谱分析。应用Southern印迹法及斑点印迹法检测,结果示同位素^(32)P标记的该克隆DNA片段能与弓形虫DNA、人工感染弓形虫幼猪白细胞和胸腺DNA、弓形虫感染病人DNA杂交,但不与正常人、正常幼猪外周血白细胞、正常小鼠脾脏、恶性疟原虫、肺孢子虫、pBR322的DNA杂交。斑点杂交检测低限为100个弓形虫或500pg弓形虫DNA。该探针已成功地应用于多种弓形虫感染病例的检测,为弓形虫病提供了一个特异、灵敏的DNA诊断方法。 展开更多
关键词 弓形虫 基因组文库 克隆 弓形虫病
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乙型肝炎病毒DNA聚合酶逆转录酶蛋白反式调节基因1的克隆化研究 被引量:6
8
作者 张黎颖 成军 +2 位作者 邓红 王春花 刘妍 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2004年第5期466-470,共5页
目的 应用抑制性消减杂交 (SSH)技术及生物信息学 (bioinformatics)技术筛选并克隆乙型肝炎病毒 (HBV)DNA聚合酶(DNAPolymerase)逆转录酶 (RT)区蛋白的反式调节新型靶基因 ,进一步阐明HBV感染相关疾病的发病机制。方法 以HBVDNA聚合... 目的 应用抑制性消减杂交 (SSH)技术及生物信息学 (bioinformatics)技术筛选并克隆乙型肝炎病毒 (HBV)DNA聚合酶(DNAPolymerase)逆转录酶 (RT)区蛋白的反式调节新型靶基因 ,进一步阐明HBV感染相关疾病的发病机制。方法 以HBVDNA聚合酶RT基因的表达质粒pcDNA3 1( -) RT转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1( -)为平行对照 ,提取mRNA并进行SSH分析。并应用分子生物学技术 ,结合生物信息学技术 ,克隆RT反式调节作用的新的靶基因。结果 对于所获基因片段序列分析表明 ,其中之一为新型基因片段。从HepG2细胞提取总RNA ,以逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列 ,并测序证实 ,因其可以被HBVDNA聚合酶逆转录酶RT反式激活 ,故命名为DNA多聚酶反式激活蛋白 1(DNAPTP1) ,已在GenBank中注册 ,注册号 :AY45 0 3 89。DNAPTP1基因的编码序列全长为 43 5个核苷酸 (nt) ,编码产物由 14 4个氨基酸残基 (aa)组成。结论 HBVDNA聚合酶逆转录酶RT在HBV进入宿主细胞的过程中起着重要的作用 ,最近的研究表明RT蛋白还具有反式激活的作用 ,上调宿主细胞某些基因的表达 ,从而改变宿主正常的免疫应答水平 ,引起病变。逆转录酶RT反式激活新靶基因的发现 ,为进一步研究RT蛋白的分子生物学机制和探索新型治疗? 展开更多
关键词 逆转录酶 反式激活 HBV RT 靶基因 蛋白 反式调节基因 dna聚合酶 PCdna3 克隆
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TA克隆及双链DNA测序:介绍一种快速克隆及分析PCR产物的方法 被引量:16
9
作者 于永利 麻彤辉 杨贵贞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第1期5-7,共3页
将人酸性纤维母细胞生长因子’(aFGF’)cDNA的PCR产物以TA连接方式克隆入pCR ̄(TM)II质粒,然后采用T7和Sp6启动子特异性引物对克隆的片段以双脱氧未端终止法进行双链DNA测序。
关键词 dna 聚合酶链反应 克隆 TA
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禽流感病毒血凝素基因的克隆及其DNA疫苗的免疫原性 被引量:27
10
作者 陈化兰 于康震 +2 位作者 田国斌 唐秀英 卢景良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期555-558,共4页
禽流感病毒(AIV)的表面结构蛋白血凝素(HA)是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的H7亚型AIV的HA基因序列,设计合成了1对H7HA特异引物,以AIVA/Afri.Star./Eng-Q/983/79/(H7N... 禽流感病毒(AIV)的表面结构蛋白血凝素(HA)是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的H7亚型AIV的HA基因序列,设计合成了1对H7HA特异引物,以AIVA/Afri.Star./Eng-Q/983/79/(H7N1)(A/Afri.Star./Eng)核酸为模板,通过RT-PCR扩增出1条1.7kbcDNA片段。将这一片段定向克隆到pUC18中,对其5′端及3′端部分序列测定后,确证其为HAcDNA。将HA基因置于SV40启动子和增强子下游,构建了这一基因的真核表达质粒pSVH7。以此质粒100μg肌肉注射免疫3周龄SPF鸡6只,4周后以100倍鸡胚感染剂量(EID)的HA基因同源病毒对所有鸡进行攻毒,1周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离;免疫后1~6周每周对所有鸡翅静脉采血,分离血清,检测HI抗体。结果,100μg免疫组鸡病毒分离数为0/6,对照组为6/6;攻毒后1周免疫组鸡HI效价为1∶32~1∶64,对照组为1∶4~1∶16。表明所构建的HA基因表达质粒可作为基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 RT-PCR 克隆 dna疫苗
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绞股蓝的RAPD指纹图谱鉴定及其特异DNA片段克隆、序列分析 被引量:8
11
作者 蒋军富 李雄英 +3 位作者 吴耀生 罗育 赵瑞强 蓝秀万 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期190-193,共4页
目的:在DNA分子水平上鉴定绞股蓝及其伪品乌蔹莓。方法:用筛选出的两条随机引物(WGS001,WGS004)对不同采集地绞股蓝及乌蔹莓基因组DNA进行PCR扩增,将引物WGS004扩增7份绞股蓝样品中的具有相同迁移率的1条500bp左右的DNA片段进行... 目的:在DNA分子水平上鉴定绞股蓝及其伪品乌蔹莓。方法:用筛选出的两条随机引物(WGS001,WGS004)对不同采集地绞股蓝及乌蔹莓基因组DNA进行PCR扩增,将引物WGS004扩增7份绞股蓝样品中的具有相同迁移率的1条500bp左右的DNA片段进行克隆、测序、一致性分析,并在NCBI上作Blastn比对检索。结果:以上两条引物能分别扩增得到绞股蓝与乌蔹莓样品基因组的差异性DNA片段,这些片段可以明确区别绞股蓝与乌蔹莓。经克隆获得的7条绞股蓝DNA序列问的一致性在45.7%~94.5%之间,在NCBI上检索后未见相似序列的报道,为新序列。结论:RAPD技术可有效地鉴别绞股蓝和乌蔹莓,本研究克隆得到一段绞股蓝DNA序列,为绞股蓝的品种鉴定、辅助选择育种等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 绞股蓝 RAPD 鉴别 特异dna片段 克隆
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免疫筛选恶性疟原虫cDNA克隆 被引量:6
12
作者 王燕妮 谢毅 +5 位作者 肖谷田 李明 毕惠祥 巢穗 王萍 李英杰 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期193-197,共5页
目的 :获取恶性疟原虫 (海南株 )抗原的 c DNA克隆并进行初步鉴定。方法 :采用 dot-EL ISA,以兔免疫血清对恶性疟原虫 c DNA表达文库约 80万个重组噬斑进行筛选 ,并用 2 0株单克隆抗体和恶性疟患者血清对强阳性克隆进行再筛选。 PCR初... 目的 :获取恶性疟原虫 (海南株 )抗原的 c DNA克隆并进行初步鉴定。方法 :采用 dot-EL ISA,以兔免疫血清对恶性疟原虫 c DNA表达文库约 80万个重组噬斑进行筛选 ,并用 2 0株单克隆抗体和恶性疟患者血清对强阳性克隆进行再筛选。 PCR初步鉴定 17个强阳性克隆。结果 :兔免疫血清确定了 17个强阳性克隆 ,患者血清检测到 11个阳性克隆 (含 8个强阳性 ) ,11株单抗与 9个 c DNA克隆呈阳性反应。 17个强阳性克隆均能扩增出大小在 30 0 bp- 2 .5kb左右的条带。结论 :已筛选到能与抗恶性疟原虫兔血清、单克隆抗体及患者血清产生特异性免疫反应的 c DNA克隆。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 Cdna克隆 抗体 筛选
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16S rDNA克隆文库法与高通量测序法在浓香型大曲微生物群落结构分析中的对比研究 被引量:31
13
作者 陈玲 袁玉菊 +4 位作者 曾丽云 廖作敏 陈伊童 吴正云 张文学 《酿酒科技》 2015年第12期33-36,40,共5页
针对浓香型白酒大曲样本,以16S r RNA基因为目的片段,分别采用16S r DNA克隆文库法和高通量测序法分析大曲中细菌微生物群落的组成,并通过丰度和多样性分析,比较了两种方法在研究大曲样品细菌多样性方面的适用性。结果表明,在门、纲、... 针对浓香型白酒大曲样本,以16S r RNA基因为目的片段,分别采用16S r DNA克隆文库法和高通量测序法分析大曲中细菌微生物群落的组成,并通过丰度和多样性分析,比较了两种方法在研究大曲样品细菌多样性方面的适用性。结果表明,在门、纲、目、科和属的分类水平上,克隆文库方法检测大曲样本微生物得到4个门,4个纲,5个目,4个科,6个属;高通量测序得到13个门,22个纲,33个目,61个科,133个属。在门的水平上,克隆文库与高通量测序检测出优势类群的总数量与总丰度分别为3个(99.32%)和4个(98.61%),共有优势类群及其丰度分别为Firmicutes(88.88%和79.32%)、Proteobacteria(7.8%和15.04%)、Actinobacteria(2.72%和1.77%)。重复样本分析,得出的结果相似。克隆文库法与高通量测序法在反映样本微生物群落规模上差异较大,而在反应大曲样本中主要微生物的物种组成及数量比例上结果相近,特别是样本中优势微生物类群的结果基本相同。两种方法各具优势。 展开更多
关键词 16S r dna克隆文库 高通量测序 大曲 微生物群落 白酒
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人脂联素cDNA的克隆及序列分析 被引量:5
14
作者 刘德敏 靳立忠 +1 位作者 孙颖 张捷 《天津医药》 CAS 北大核心 2005年第2期71-73,共3页
目的:构建人脂联素cDNA的克隆并进行序列分析。方法:提取人脂肪组织总RNA,运用RT-PCR方法扩增人脂联素cDNA完全编码区,将扩增产物通过TA克隆技术克隆至pMD18-T载体,对重组质粒进行测序验证。结果:成功构建人脂联素cDNA的克隆,重组质粒(p... 目的:构建人脂联素cDNA的克隆并进行序列分析。方法:提取人脂肪组织总RNA,运用RT-PCR方法扩增人脂联素cDNA完全编码区,将扩增产物通过TA克隆技术克隆至pMD18-T载体,对重组质粒进行测序验证。结果:成功构建人脂联素cDNA的克隆,重组质粒(pMD18-T/ADPN)经测序与Genebank检索的脂联素cDNA序列进行对比证实为100%同源。结论:所构建的人脂联素cDNA克隆适于进一步的克隆表达。 展开更多
关键词 脂联素 Cdna序列 克隆表达 重组质粒 序列分析 测序 脂肪组织 T载体 克隆技术 Cdna克隆
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天蚕卵黄原蛋白cDNA的克隆及序列分析 被引量:4
15
作者 刘朝良 王磊 +1 位作者 梶浦善太 中垣雅雄 《激光生物学报》 CAS CSCD 2006年第1期39-45,共7页
天蚕卵黄原蛋白cDNA的全碱基序列由5720个碱基构成,一个开读框有5334个碱基序列,编码了包括由15个氨基酸组成的信号肽在内的共1778个氨基酸的蛋白质前体。天蚕和柞蚕卵黄原蛋白的同源性非常高,氨基酸序列达到92.6%,碱基序列达到9... 天蚕卵黄原蛋白cDNA的全碱基序列由5720个碱基构成,一个开读框有5334个碱基序列,编码了包括由15个氨基酸组成的信号肽在内的共1778个氨基酸的蛋白质前体。天蚕和柞蚕卵黄原蛋白的同源性非常高,氨基酸序列达到92.6%,碱基序列达到94%。天蚕、柞蚕和家蚕的卵黄原蛋白的糖链附加位点(N—linkedg—lycosylationsite):柞蚕有4个,家蚕有5个,天蚕和家蚕相同保存着5个。在N-末端区域,天蚕和家蚕有多聚丝氨酸区域和可被胰蛋白酶识别的RSRR部位;柞蚕虽然也具有多聚丝氨酸区域,但没有可被胰蛋白酶识别的RSRR部位。在C-末端区域里,大多数昆虫从GICG功能部位至C-末端结尾具有7个~10个半胱氨酸(Cys)。鳞翅目的4种昆虫柞蚕、天蚕、家蚕和舞毒蛾(A.pernyi,A.yamamai,B.mori,L.dispar)都是7个半胱氨酸。 展开更多
关键词 天蚕 卵黄原蛋白 Cdna克隆 序列分析
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DNA序列分析鉴定HLA-DRB1新等位基因DRB1 1449 被引量:7
16
作者 缪扣荣 潘芹芹 +7 位作者 薛敏 旭日 周小玉 费小明 赵星 徐安龙 汪承亚 KuKuruga D 《中国输血杂志》 CAS CSCD 2006年第2期100-103,共4页
目的鉴定HLADRB1位点新等位基因。方法应用基因克隆和DNA测序技术对1例受检样本HLADRB1基因第2外显子(Exon2)作核苷酸序列分析,与已知等位基因序列比对并作血清学分型。结果基因组DNA和DNA克隆的测序结果一致;DRB1Exon2的核苷酸序列与... 目的鉴定HLADRB1位点新等位基因。方法应用基因克隆和DNA测序技术对1例受检样本HLADRB1基因第2外显子(Exon2)作核苷酸序列分析,与已知等位基因序列比对并作血清学分型。结果基因组DNA和DNA克隆的测序结果一致;DRB1Exon2的核苷酸序列与已知等位基因序列均不相同,与同源性最高的HLADRB11432相比,存在4处碱基的改变;以Exon2的第1位碱基为记数起点,核苷酸71位C→>G,196位G→>A,244位T→>G和245位上G→>T,引起相应编码氨基酸28位上天门冬氨酸(Asp)→>谷氨酸(Glu),70位上精氨酸(Arg)→>谷氨酸盐(Gln),86位上缬氨酸(Val)→>氨基乙酸(Gly)。血清学分型结果表明新等位基因血清学特异性为DR14。结论被检标本HLADRB位点存在新等位基因,2005年2月WHOHLA命名委员会正式将其命名为HLADRB11449。 展开更多
关键词 新等位基因 DRB1^* 1449 HLA dna 测序dna 亚克隆
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谷子DnaJ蛋白基因的克隆 被引量:11
17
作者 崔润丽 智慧 +4 位作者 王永芳 李伟 李海权 黄占景 刁现民 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第4期9-13,共5页
DnaJ蛋白是近年研究较多的同热激等胁迫反应相关的基因。本研究用0.8%NaCl胁迫下的谷子幼苗提取RNA,用反转录酶M-MLV扩增得到第一链cDNA,再以第一链cDNA为模板进行PCR扩增,克隆获得了完整的谷子DnaJ蛋白基因,该基因cDNA全长1 260 bp,编... DnaJ蛋白是近年研究较多的同热激等胁迫反应相关的基因。本研究用0.8%NaCl胁迫下的谷子幼苗提取RNA,用反转录酶M-MLV扩增得到第一链cDNA,再以第一链cDNA为模板进行PCR扩增,克隆获得了完整的谷子DnaJ蛋白基因,该基因cDNA全长1 260 bp,编码419个氨基酸,具有DnaJ蛋白分子伴侣系统的3个保守结构域。将谷子DnaJ蛋白基因构建入表达载体pGFP,获得了谷子DnaJ基因的表达载体。该基因的克隆和表达载体构建,为谷子DnaJ蛋白基因的功能分析以及谷子耐热抗旱机理研究有重要意义。 展开更多
关键词 谷子 dnaJ 基因克隆
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中度嗜盐菌Halomonas sp.BYS-1耐盐相关DNA片段的克隆 被引量:5
18
作者 洪青 徐剑宏 +3 位作者 王云端 武俊 张晓舟 李顺鹏 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期375-378,共4页
通过固体亚硝基胍诱变获得了Halom onassp.BYS-1的盐敏感突变株BYS-1M.以pBBR1MCS-2为载体在E.coliDH5α中构建了BYS-1的基因文库.以文库菌E.coliDH5α(pBBR-X)为供体菌、E.coliWD803(pRK2013)为辅助菌、BYS-1M为受体菌进行三亲接合,筛... 通过固体亚硝基胍诱变获得了Halom onassp.BYS-1的盐敏感突变株BYS-1M.以pBBR1MCS-2为载体在E.coliDH5α中构建了BYS-1的基因文库.以文库菌E.coliDH5α(pBBR-X)为供体菌、E.coliWD803(pRK2013)为辅助菌、BYS-1M为受体菌进行三亲接合,筛选到了恢复耐盐性能的接合子HR-23,提取接合子HR-23的重组质粒pHR23,酶切确定其插入的耐盐相关DNA片段大小分为5.4 kb.该片段为Halom onassp.BYS-1耐盐相关基因的克隆奠定了基础. 展开更多
关键词 中度嗜盐菌 耐盐相关dna片段 克隆
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鳙小卫星DNA的克隆 被引量:6
19
作者 简纪常 夏德全 《中国水产科学》 CAS CSCD 1999年第4期18-20,共3页
鳙基因组DNA 经内切酶Sau3AⅠ完全酶切后,与Bam HⅠ- pUC18 质粒连接,转化DH5α后,获得933 个重组体。用人源小卫星探针33 .15 对重组体进行原位杂交筛选,获得14 个阳性克隆,取其中的1 个阳性克隆... 鳙基因组DNA 经内切酶Sau3AⅠ完全酶切后,与Bam HⅠ- pUC18 质粒连接,转化DH5α后,获得933 个重组体。用人源小卫星探针33 .15 对重组体进行原位杂交筛选,获得14 个阳性克隆,取其中的1 个阳性克隆( 即小卫星pBC174) 作探针,与5 尾鳙和4 尾鲢基因组DNA 杂交,能产生具有高度变异性的、个体特异性的DNA 指纹图,表明克隆的鳙小卫星pBC174 可用于鱼类DNA 指纹分析。 展开更多
关键词 小卫星dna 克隆
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猪肺表面活性蛋白A的DNA全序列克隆与生物信息学分析 被引量:2
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作者 乔莉娟 王立贤 +1 位作者 苏振环 颜华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期393-398,共6页
猪肺表面活性蛋白A(Porcine surfactant proteinA,SP-A)是猪肺泡表面活性蛋白中含量最多、最先被发现具有炎症免疫调节功能的表面活性蛋白。本研究利用比较基因组学方法,设计了6对引物进行PCR扩增,克隆测序后进行拼接,获得了长为4... 猪肺表面活性蛋白A(Porcine surfactant proteinA,SP-A)是猪肺泡表面活性蛋白中含量最多、最先被发现具有炎症免疫调节功能的表面活性蛋白。本研究利用比较基因组学方法,设计了6对引物进行PCR扩增,克隆测序后进行拼接,获得了长为4037bp猪SP-A基因的全序列(gi:DQ985806)。经生物信息学分析,此序列包含了猪SP-A基因启动子区,含有1个747bp的完整开放阅读框,编码248个氨基酸;预测猪SP-A蛋白理论分子量约为26.37ku,蛋白的等电点为5.20;在1~20位氨基酸可能是信号肽序列;在大约1~20、120~135、145~160位氨基酸存在疏水性区域;跨膜结构分析表明此蛋白所有氨基酸都位于膜表面;并且发现猪SP-A蛋白同人SP-A蛋白一样也含有保守的碳水化合物识别区、胶原样区域和茎区。本结果为进一步对SP-A与猪呼吸道疾病相关性的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 SP-A基因 全序列克隆 生物信息学分析
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