大豆总DNA直接导入法培育优质高蛋白玉米材料研究

利用外源总DNA转导的花粉管通道法和经我们发展的减压渗透法将大豆总DNA导入玉米自交系统 4 8- 2和S3 7,在 74 3份后代材料中筛选出 8份高蛋白含量变异材料 ,它们的蛋白质与受体相比提高 2 0 %以上。用种子蛋白SDS -PAGE、谷氨酸 -草酰乙酸同工酶及RAPD等分析方法对变异材料及其受体进行了鉴定分析 ,同时也对此 8份变异材料的自交后代进行了筛选和在田间比较观察了变异材料与受体的农艺性状。结果表明 ,这些高蛋白变异材料与受体 4 8- 2和S3 7在遗传上存在明显的差异 ,在其自交后代中仍有部分株系保持了高蛋白含量特性。此外 ,4 8- 2的变异材料在植株形态、花药颜色上有明显变化。上述结果初步证明高蛋白特性是可遗传的 ,这为选育高蛋白玉米新自交系提供了新材料 。

减压渗透法将外源DNA导入水稻研究

紫稻(叶和叶鞘紫色,稻谷和米粒分别为黄、白色)为受体,高梁、小麦和小米为外源DNA供体。受体材料的种子播种前用减压渗透法分别导入供体DNA于成熟胚。受体种苗五叶期出现了颜色变异株,紫稻和高梁、小麦以及小米的组合中,幼苗变异率分别为0.36％、1.5％和2.5％。在以后的生长发育过程中,变异株的颜色逐渐趋向受体或供体;始穗期提前或推迟。对供、受体和杂种后代幼芽的可溶性蛋白电泳分析表明:后代明显地不同于亲本。

大豆DNA片段导入玉米自交系提高蛋白质含量的研究

采用花粉管通道法把大豆DNA片段导入玉米骨干自交系,对诱变玉米籽粒材料进行了籽粒总蛋白含量及醇溶蛋白和谷蛋白含量的测定。结果表明:(1)处理后的38个材料总蛋白含水量都比较高,与各自的对照相比,除1DA2、1DA6上、1DA3、26DB1、26DA4外差异都达显著或极显著水平;(2)醇溶蛋白含量测定中,选了4个处理材料,其中1DA5、26DB4、26DC6含量都比对照高,5DB2含量较对照降低了8 76%;(3)谷蛋白含量测定中,1DA5、26DB4的含量较对照低,5DB2、26DC6的含量比对照高,其中5DB2的增加比例达到23 7%。上述结果初步证明高蛋白特性是可遗传的,这为选育高蛋白玉米新自交系提供了新材料,也为利用外源DNA直接导入技术创造玉米新种质开辟了新途径。

玉米胚性愈伤组织经不同方法导入大豆DNA形成的幼苗同工酶分析

以玉米胚性愈伤组织为受体，以大豆ＤＮＡ为供体，采用超声波法、减压渗透法和电激法转化玉米，所获后代材料采用ＰＡＧＥ电泳法对其进行酯酶及过氧化物酶同工酶分析。结果显示：多数受试材料与对照材料之间其酶谱差异明显，表明导入处理已对受体基因组产生较大影响；各转导方法的转化效果依次为：超声波法＞电激法＞减压渗透法。

用双探针原位杂交法检测常见肝病组织中输液传染性病毒DNA

目的 :建立肝组织输液传染性病毒DNA(TTVDNA)的原位杂交检测技术 ,探讨TTVDNA在肝组织中的分布。方法 :采用PCR扩增法 ,分别合成地高辛标记的G1a、G2b两种亚型的双链TTVDNA探针。同时应用两型探针对 2 2例血清学检查无甲 -庚型肝炎病毒感染的肝病患者肝组织TTVDNA进行原位杂交检测 ,并将检测结果与巢式PCR法检测配对血清TTVDNA的结果进行比较。结果 :原位杂交阳性信号主要定位于肝细胞核 ,少数位于胞浆。 2 2例肝病患者肝组织标本中TTVDNA原位杂交阳性率 6 8 2 % (15 / 2 2 ) ,其中慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌患者中原位杂交阳性率83 3% (15 / 18) ,4例肝破裂、肝良性肿瘤患者TTVDNA原位杂交检测皆为阴性。配对血清TTVDNA阳性率 6 3 6 % (14/ 2 2 )。血清与肝组织TTVDNA检测符合率 86 4 % (19/ 2 2 )。结论 :双探针原位杂交检测具有较高的特异性和灵敏性 ,有助于肝病病因的分析。TTVDNA在慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌的肝组织中检出率较高 。

Transfusion transmitted virus infection in general populations and patients with various liver diseases in south China

INTRODUCTIONAlthough several specific detecting methods hadbeen applied to determine the hepatitis virus,therewas a lot of cryptogenic hepatitis without anyknown hepatitis infectious marker.Theprevalence of hepatitis G virus (HGV) (also knownas GB-C virus) infection has been reported to be 5%-13% in patients with non-A-E hepatitis andcirrhosis,however,there is little evidencesuggesting that HGV causes hepatitis in human.

病毒性肝炎合并输血传播肝炎病毒感染的初步研究

目的 了解病毒性肝炎合并输血传播肝炎病毒 (TTV)感染对肝功能及其预后的影响。方法 采用微板核酸杂交技术检测了 92例各型病毒性肝炎患者血清中的TTVDNA ,并对检测结果和临床资料进行统计学分析。结果 92例各型慢性病毒性肝炎患者中TTVDNA阳性 15例 ,阳性率 16 .3%。其中乙型肝炎 10例 ( 6 6 .6 7% ) ,丙型肝炎 2例 ( 13.33% ) ,戊型肝炎 1例 ( 6 .6 % ) ,原因不明的肝炎 2例 ( 1.33% )。 92例患者临床分型中慢性肝炎中度 2 3例 ,阳性 3例 ( 13.0 4 % ) ;慢性肝炎重度 2 7例 ,阳性 4例 ( 14 .81% ) ;肝炎肝硬化 4 2例 ,阳性 8例( 19.0 5 % )。各型间无统计学差异。在慢性肝炎、肝炎肝硬化中TTVDNA阳性与TTVDNA阴性患者的肝功能无统计学差异。结论 病毒性肝炎合并TTV感染不影响肝功能及病情预后。

TTV核酸模板快速制备方法

目的 寻求建立适合大批量临床标本检测 TT病毒(TTV)核酸快速制备方法 ,直接用于 PCR扩增 .方法 应用蛋白酶 K裂解酚氯仿抽取法与直接快速裂解法 ,分别制备TTV核酸做 PCR模板 ,用于 TTV的聚合酶链反应的快速检测 .结果 在 30例非甲～非庚型肝炎血清和 5 0例慢性乙型肝炎患者血清 ,应用经典的蛋白酶 K裂解酚氯仿抽取法和直接快速裂解法 ,分别制备 TTV核酸模板 ,在相同条件下进行PCR扩增 ,结果两种制备方法的符合率为 89% .结论 TTV是一种新发现的肝炎病毒 ,目前主要以实验室检测病毒核酸的存在为诊断依据 ,建立了具有快速、简便、适合大批量临床标本中 TTV核酸制备方法 ,对 TTV肝炎的快速诊断 。

扬州、无锡两地男性STD6种支原体感染研究

目的 :我们研究了扬州和无锡两地区男性STD患者解脲脲原体 (Uu)、人型支原体 (Mh)、肺炎支原体 (Mpn)、生殖支原体 (Mg)、发酵支原体 (Mf)、穿通支原体 (Mpe)等支原体感染状况。 方法 :应用nestedPCR(nPCR)和DNA全自动测序技术对扬州和无锡地区的各 5 6例男性STD者的尿道拭子进行Uu、Mh、Mpn、Mg、Mf、Mpe等 6种支原体联合检测。 结果 :扬州地区男性STD者Uu、Mh、Mpn、Mg、Mf、Mpe阳性率分别为 6 9 6 %、35 7%、2 8 6 %、16 1%、3 6 %和 3 6 % ;无锡地区则为5 5 4%、32 1%、5 4%、5 4%、1 8%和 0 % ,二地区均存在多种支原体合并感染。结论 :本文认为扬州和无锡地区男性STD患者中都有较高的支原体感染率 。

HBV感染者重叠感染TTV的研究

目的 研究乙型肝炎病毒 (HBV)感染者重叠感染输血传播病毒 (TTV)的状况。方法 采用斑点杂交法检测乙型肝炎病毒感染者血清TTVDNA。结果 在 16 9例乙型肝炎病毒感染者中检出血清TTVDNA阳性者 2 3例 ,阳性率 13 6 1%。其中 ,急性乙型肝炎患者组阳性率 13 46 % ,慢性乙型肝炎患者组阳性率 15 0 7% ,HBsAg携带者组阳性率 11 36 % ,三者之间的差异无统计学意义P >0 0 5。结论 在我国存在TTV感染 。

TTV与HBV重叠感染的研究

目的 研究乙型肝炎病毒 (HBV)感染者重叠感染输血传播病毒 (TTV)的状况。方法 采用斑点杂交法检测乙型肝炎病毒感染者血清TTVDNA。结果 在 364例乙型肝炎病毒感染者中检出血清TTVDNA阳性者 82例 ,阳性率 2 2 .53 %。其中 ,急性乙型肝炎患者组阳性率 2 3 .2 1 % ,慢性乙型肝炎患者组阳性率 2 6 .2 5 % ,HBsAg携带者组阳性率 1 5 .2 2 % ,三者之间的差异无统计学意义P >0 .0 5。结论 在我国存在TTV感染 。

输血传播病毒样微小病毒基因检测

目的:测定慢性肝炎患者体内输血传播病毒(TTV)样微小病毒(TLMV)的全基因序列,并研究人群中TLMV感染状况。方法:采用日本学者Shunji Mishiro提供的序列选择TLMV-CBD279和CBD-231最保守区设计引物,用慢性乙型肝炎且TTV阳性患者血清制备DNA模板,进行PCR扩增;将阳性PCR产物连接至pGEMR-T质粒,碱裂解法提取质粒DNA并纯化。以T7引物为起始全自动荧光测序仪测序。结果:获得162bp基因序列,该序列与日本株CBD231、CBD279同源性为72%,丙型肝炎患者及健康献血员感染率最高。结论:在中国慢性乙型肝炎患者体内存在TLMV感染。

男性性病病人穿通支原体nPCR检测

目的 :探讨扬州地区男性性病病人穿通支原体 (Mpe)感染状况及 Mpe与 STD感染的关系。方法 :应用套式PCR (n PCR)对扬州地区的 76例男性 STD者的尿道拭子进行 Uu、Mh、Mpn、Mg、Mf、Mpe、Mpi等七种支原体联合检测 ,并对 Mpe阳性标本作了 DNA测序分析。结果 :76例男性 STD患者中有 2例 Mpe阳性 ,阳性率为 2 .6 %。其中 1例经DNA测序与 Mpe(GTU5 4 T株 )标准株完全一致。结论 :Mpe是 HIV感染的协同因子和 AIDS发病的诱发因素 ,在 STD患者尿道拭子标本检出 Mpe值得关注。

HPV6，11型在女性生殖器尖锐湿疣和乳头瘤样增生中的分布

从３４２名上海地区患者的外阴、阴道和宫颈的病变部，采集４８７份活检标本。５种病理诊断类型，经斑点杂交法检测，ＨＰＶ６、１１ＤＮＡ总阳性率：尖锐湿疣８５％、乳头瘤样增生１０．１０％、慢性宫颈炎７．１４％、鳞状上皮增生５％、生殖器正常粘膜２．６５％。５１例尖锐湿疣和１０例乳头瘤样增生，ＨＰＶ６、１１和６＋１１感染阳性率分别为：１５．６９％、２５．４９％、５８．８２％和２０％、３０％、５０％。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹转移杂交与斑点杂交的符合率，在尖锐湿疣中，ＨＰＶ６、１１和６＋１１分别为７５％、９２．３％、８６．７％；在乳头瘤样增生中，分别为１００％、３３．３％、６０％。ＡＢＣ法检测阳性率仅为６１．６７％和０％。本调查结果证实，上海地区女性尖锐湿疣和乳头瘤样增生与ＨＰＶ６、１１型感染密切相关，且以ＨＰＶ两种型别（ＨＰＶ６＋１１）混合感染为主。

输血传播病毒感染状况调查

目的 调查河南省不同人群输血传播病毒(TTV)的感染状况。方法 采用酶联免疫法 (ELISA)和套式聚合酶链反应(PCR)法对 321例正常人群、正常献血员、急性肝炎、慢性肝炎和肝癌患者血清进行了抗 -TTVIgG和TTVDNA检测。结果 以上人群TTV感染率分别为 5. 0%、0、11. 25%、17. 24%、26. 42%、34. 18%;混合感染中TTV合并HBV、HCV感染率最高,分别为 32. 20%和 30. 51%。结论 河南省不同人群均有TTV的感染;TTV与各型肝炎均有混合感染;ELISA法检测抗-TTVIgG与PCR法检测TTVDNA结果有较好的一致性。

长春地区TTV感染与其他病毒性肝病关系的流行病学调查

目的了解长春地区TTV的感染状况方法采用酶联免疫吸附实验,对前来白求恩医科大学第三临床学院消化内科就诊或住院的213例长春地区患者进行抗-TTVIgG的检测,并进一步分析TTV感染情况与性别、年龄、传播途径的关系,探讨TTV的致病性以及TTV感染与其他病毒性肝病的关系。结果长春地区存在TTV感染者,感染率为7.98％;从感染与性别、年龄无关;TTV可经胃肠道和胃肠道外两种途径而传播;TTV感染可见于急性肝炎、慢性肝炎、肝硬变和肝癌患者,但也可表现为单纯携带;TTV可与乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)合并存在,但合并HCV感染的概率要明显高于合并HBV感染的概率。不过,TTV感染并不加重HBV,HCV对肝脏的损害,与HBV,HCV也无协同致病作用。结论长春地区存在TTV感染者,TTV感染可能与丙型肝炎病毒感染有一定联系。

杭州地区健康献血员输血传播病毒的检测及部分阳性标本的核苷酸序列分析

目的 :了解杭州地区健康献血员中输血传播病毒 (TTV)的感染情况和病毒基因组片段的变异性。方法 :用酚 -氯仿法从献血员的血清标本中提取 DNA,半套式聚合酶链反应检测 TTV,部分阳性标本的扩增片段 T- A克隆后测序。结果 :2 0 3例献血员血清标本中 TTV DNA的阳性率为 15 .3% ,部分阳性标本扩增产物与报道的TTV TA2 78株的核苷酸和氨基酸序列比较 ,其同源性分别为 6 3.5 1%～ 6 7.12 %和 5 9.4 6 %～ 6 6 .2 2 %。结论 :杭州地区献血员中 TTV的携带率比较高 ,献血员感染的 TTV可能是一种新的基因型。

疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒抗原及抗体检测与分析

目的了解性病门诊疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒抗原及抗体检测情况。方法对2008年4月至2012年3月到我院性病门诊就诊的1101名疑似GH患者进行HSV-2抗原检测，并对其中336名愿意同时采集血标本进行HSV-2血清抗体检测患者进行血清HSV-21gM、HSV-21gG抗体检测，对所检测结果及临床资料进行统计分析。结果1101例疑似GH患者共检出551例HSV-2DNA阳性，总阳性率50．05％，其中男性患者HSV-2DNA阳性率为52．33％，女性患者HSV-2DNA阳性率为40。99％，男女患者阳性率比较差异有显著性（P〈0．01）；不同类型的标本HSV-2DNA检出率有明显的差异，其中疱液拭子的检出率最高，为57．05％，其次是男性的阴茎拭子及包皮拭子，两者检出率分别为56．25％、46．62‰从年龄段来看，以20～29岁年龄段患者HSV-2抗原检出率最低，除该年龄段，其它年龄段阳性率均超过50％，≥50岁受检测患者，HSV-2抗原检出率高达56．21％。336位同时接受HSV-2DNA及血清HSV-21gM、HSV-21gG抗体检测患者中，共检出血清HSV-21gM抗体阳性33例，阳性率9．82％。血清HSV-21gG抗体阳性149例，阳性率44．35％，其中155名HSV-2DNA阳性患者有104例至少-种抗体阳性，181名HSV-2DNA阴性患者有61例至少-种抗体阳性。结论对于疑似生殖器疱疹患者，同时进行HSV-2抗原及血清HSV-21gM、HSV-21gG抗体三者联合检测更有助于临床GH诊断；老年生殖器疱疹的防治应引起足够的重视。

梅毒孕妇不同治疗时期梅毒螺旋体DNA检测结果

目的探讨不同治疗时期梅毒孕妇血清及阴道分泌物中梅毒螺旋体DNA(TP-DNA)的传染性。方法分析2015年1~12月,宁波市妇女儿童医院分娩的132例梅毒孕妇及其所产婴儿,孕早中期治疗组(56例)、孕晚期治疗组(54例)及未治疗组(22例)梅毒孕妇及其分娩婴儿于分娩后24h内检测血清TP-DNA,分娩1周后检测妇阴道分泌物TP-DNA。结果不同治疗时期,孕妇产后血清TP-DNA阳性率(χ~2=16.76,P<0.05)及阴道分泌物TP-DNA阳性率(χ~2=12.39,P<0.05)差异均有统计学意义。不同治疗时期,婴儿血清TRUST阳性率(χ~2=43.50,P<0.05)与TP-DNA阳性率(χ~2=25.70,P<0.05)差异均有统计学意义。随着孕妇TRUST水平的增高,所分娩婴儿血清TP-DNA阳性率有增高趋势,差异有统计学意义(χ~2=19.26,P<0.05)。结论梅毒孕妇及早规范治疗,可以降低血清、阴道分泌物的传染性,有效阻断先天性梅毒的发生。

镉暴露小鼠生精细胞DNA损伤与Bcl-2和Bax表达率及超微结构改变

目的研究镉暴露对小鼠睾丸生精细胞DNA的损伤作用、bcl2和Bax蛋白表达率及超微结构的变化。方法取24只雄性ICR小鼠随机分为4组,每组6只,分别以1、5、10μmolkg氯化镉腹腔注射,每天1次,连续5d,设阴性对照生理盐水组。于第6天用单细胞凝胶电泳(singlecellgelelectrophoresis,SCGE)技术检测生精细胞DNA损伤情况,免疫组化法测定生精细胞Bcl2和Bax蛋白表达阳性率,透射电镜观察生精细胞超微结构变化。结果腹腔注射1、5、10μmolkg氯化镉组小鼠睾丸生精细胞DNA损伤率(分别为35.00%、61.25%、82.50%)明显高于对照组(14.75%),差异有统计学意义(P<0.01),Bcl2蛋白表达阳性细胞率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),5μmolkg组Bax蛋白表达细胞阳性率明显高于对照组和1、10μmolkg组。透射电镜观察显示,3种剂量处理组生精细胞核染色质、核膜、线粒体和内质网超微结构发生不同程度的病理改变,并随着处理浓度的升高,超微结构改变程度加重。结论小鼠镉暴露可导致生精细胞DNA断裂,Bcl2和Bax蛋白表达率发生变化,细胞超微结构发生病理性改变。