应用PCR和单克隆抗体方法从人粪便及肿瘤组织中检测大肠癌基因突变的研究

目的 :检测大肠癌病人粪便中脱落细胞与肿瘤组织细胞的DNA ,对比两者K ras基因序列和突变位点的变化 ,为临床非介入性的、简便的大肠癌诊断提供理论和实验依据。方法 :分离和提纯大肠癌组织及粪便中脱落细胞的DNA ,用PCR (Polymerasechainreaction)法扩增K ras基因 ,克隆K ras基因PCR产物并进行DNA序列的测定。免疫组化检测大肠癌相应抗原的表达 :采用ELISA法 ,用大肠癌单克隆抗体对大便样品进行检测。结果 :同一病人的大肠癌组织细胞与粪便中的脱落细胞的K ras基因的序列完全一致 ,并检测到 1例K ras基因点突变。K ras基因突变与否与大肠癌病理类型和大肠癌单克隆抗体检测大便样品中脱落细胞的癌抗原表达水平有一定的相关性。结论 :以大肠癌分子发病机理为基础的非介入性检测粪便中K ras突变是可行的 ,有望成为正常人群大肠癌筛查以及诊断的新方法之一 ,可以为大肠癌的早期发现及监测大肠癌的发生。