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DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒在案件中的应用研究
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作者 杨乐 陈滢 +4 位作者 吴俞衡 石妍 齐朝阳 孔祥仕 马温华 《刑事技术》 2024年第3期255-261,共7页
本文探讨DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒在案件中应用的可行性。应用DNATyper mtDNASNP60^(TM)试剂盒对100个汉族无关个体和20组全同胞进行mtDNA SNP检验;取25 pg/μL马、牛、羊、猪、鸡、鸭、猫、狗、兔、鼠和大肠杆菌的DNA样品进行... 本文探讨DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒在案件中应用的可行性。应用DNATyper mtDNASNP60^(TM)试剂盒对100个汉族无关个体和20组全同胞进行mtDNA SNP检验;取25 pg/μL马、牛、羊、猪、鸡、鸭、猫、狗、兔、鼠和大肠杆菌的DNA样品进行种属特异性测试;取5、10、20、40μmol/L血红素进行抗抑制性测试;取两个批次的DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒经反复冻融10次后进行稳定性测试;分别应用VeriFiler^(TM)Plus PCR扩增试剂盒和DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒对100份陈旧、腐败、降解检材进行检验。结果表明,100个汉族无关个体均获得清晰的mtDNA SNP分型结果,其检验结果与通过mtDNA测序获得的结果完全一致;100个汉族无关个体含有100种不同的单倍型;20组全同胞中每组个体之间mtDNA SNP分型结果相同;DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒对马、牛、羊、猪、鸡、鸭、猫、狗、兔、鼠和大肠杆菌的DNA样品进行检测,均未出现特异性分型;当血红素浓度≤40μmol/L时,所有mtDNA SNP位点均获得正确分型;两个批次的DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒经反复冻融10次后,所有mtDNA SNP位点均可正确分型;对于100份陈旧、腐败、降解检材,STR检出率为55%,mtDNA SNP的检出率为86%,mtDNA SNP的检出率显著高于STR。当模板DNA浓度大于5 pg/μL时,DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒能得到完整的分型谱图。综上,DNATyper mtDNA-SNP60^(TM)试剂盒可应用于陈旧、腐败、降解检材的检验,具有很好的实战应用价值。 展开更多
关键词 法医遗传学 dnaTyper mtdna-SNP60^(TM)试剂盒 线粒体dna 单核苷酸多态性 VeriFiler^(TM)Plus PCR扩增试剂盒 短串联重复序列
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肾细胞癌中c-kit蛋白表达和DNA倍体分析的临床病理学意义 被引量:1
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作者 刘双萍 林贞花 +2 位作者 吴群英 赵祎玮 李柱虎 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期171-174,共4页
目的探讨肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)各组织学类型中c-kit蛋白表达和DNA倍体分析的临床病理学意义。方法选取32例透明细胞肾细胞癌、26例乳头状肾细胞癌、20例嫌色细胞肾细胞癌和10例癌旁正常肾组织共88例蜡块组织标本作为实验... 目的探讨肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)各组织学类型中c-kit蛋白表达和DNA倍体分析的临床病理学意义。方法选取32例透明细胞肾细胞癌、26例乳头状肾细胞癌、20例嫌色细胞肾细胞癌和10例癌旁正常肾组织共88例蜡块组织标本作为实验对象。并应用免疫组化染色方法检测c-kit蛋白的表达,用流式细胞仪技术进行DNA倍体分析。结果在透明细胞肾细胞癌中c-kit呈阴性,26例乳头状肾细胞癌和20例嫌色细胞肾细胞癌标本均呈c-kit强阳性表达;在乳头状肾细胞癌中,c-kit阳性信号主要存在于胞质;而在嫌色细胞肾细胞细胞癌中,c-kit阳性信号主要表达在细胞膜上;在癌旁正常肾组织中可见肾小管上皮细胞的阳性表达信号。c-kit蛋白表达与肾细胞癌的分级和分期无相关性。另外,DNA异倍体分析结果表明,43.8%的透明细胞肾细胞癌、46.2%的乳头状肾细胞癌和30.0%的嫌色细胞肾细胞癌存在DNA异倍体现象;而正常肾组织均为DNA二倍体。结论c-kit蛋白表达检测可以作为肾细胞癌诊断和组织学分型的重要指标,同时,DNA倍体分析在肾细胞癌的诊断和预后判定中也有重要的辅助意义。 展开更多
关键词 肾肿瘤 肾细胞癌 c—kit dna倍体分析
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IDentifier DNA分型盒(炎黄34)的法医学验证及应用评估
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作者 高林林 谢炜 +4 位作者 朱素娟 李达 王琴 洪亮 李佑英 《法医学杂志》 CAS CSCD 2023年第6期579-585,共7页
目的 测试IDentifier DNA分型盒(炎黄34)的技术性能指标,评估其法医学应用价值。方法 根据《法庭科学人类荧光标记STR复合扩增检测试剂质量基本要求》(GB/T 37226—2018),从种属特异性、分型准确性、灵敏度、适应性、耐受性、一致性、... 目的 测试IDentifier DNA分型盒(炎黄34)的技术性能指标,评估其法医学应用价值。方法 根据《法庭科学人类荧光标记STR复合扩增检测试剂质量基本要求》(GB/T 37226—2018),从种属特异性、分型准确性、灵敏度、适应性、耐受性、一致性、均衡性、反应条件验证、混合样本、稳定性、批间差11个方面对IDentifier DNA分型盒(炎黄34)进行测试。比较IDentifier DNA分型盒(炎黄34)与Power Plex~?Fusion 6C系统、Versa Plex~?27PY系统、Veri Filer~(TM) Plus PCR扩增试剂盒的系统效能。使用IDentifier DNA分型盒(炎黄34)检测日常案件中的拭子类生物检材,观察其STR检验结果 。结果 IDentifier DNA分型盒(炎黄34)具有良好的种属特异性、分型准确性、适应性、耐受性和均衡性,灵敏度可达0.062 5 ng,能检测案件中不同类型的检材、降解检材及混有抑制剂的检材,对混合比例为4∶1以内的样本均能获得完整分型。该试剂盒的系统效能非常高,TDP可达1-1.08×10~(-37),CPE_(trio)和CPE_(duo)分别可达1-5.47×10~(-14)和1-6.43×10~(-9)。针对案件中的接触类生物检材,其有效检出率可达21.05%。针对亲缘关系鉴定,单亲鉴定和全同胞鉴定的系统效能均得到了有效提高。结论 IDentifier DNA分型盒(炎黄34)的上述性能指标符合要求,可用于个体识别及亲权鉴定,适合在法庭科学领域应用。 展开更多
关键词 法医遗传学 短串联重复序列 IDentifier dna分型盒(炎黄34) 性能验证 亲缘关系 个体识别
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花椒果皮基因组DNA提取:不同试剂盒性能评估与比较研究 被引量:1
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作者 易秋菊 邢冉冉 +2 位作者 张九凯 葛毅强 陈颖 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第22期134-142,共9页
目的 通过比较不同植物试剂盒在花椒果皮DNA提取中的差异,探究适用于花椒果皮的基于离心柱法的DNA提取试剂盒。方法 选取8种不同品种的花椒,利用TIANGEN DNAsecure新型植物基因组DNA提取试剂盒(Tiangen-Ⅰ)、DNeasy Plant Mini kit (DNe... 目的 通过比较不同植物试剂盒在花椒果皮DNA提取中的差异,探究适用于花椒果皮的基于离心柱法的DNA提取试剂盒。方法 选取8种不同品种的花椒,利用TIANGEN DNAsecure新型植物基因组DNA提取试剂盒(Tiangen-Ⅰ)、DNeasy Plant Mini kit (DNeasy)、多糖多酚植物基因组DNA提取试剂盒(Tiangen-Ⅱ)、Nucleospin?Food kit (Nucleospin) 4种基于离心柱法的试剂盒提取花椒果皮基因组DNA,通过对比提取到的DNA浓度、纯度、聚合酶链式反应扩增能力,以及提取过程中的成本、耗时等因素,基于简单加权(simple additive weighting, SAW)分析对比不同试剂盒对于花椒果皮DNA的提取效果,并进行综合评分。结果 不同试剂盒各有优缺点,最终Tiangen-Ⅰ试剂盒得分1.64,排名第一,综合考虑价格、所用时间与提取得到的DNA质量,Tiangen-Ⅰ试剂盒是更适用于花椒果皮DNA提取的试剂盒;同时,Nucleospin试剂盒在提取得到的花椒DNA质量方面有着较好的表现。结论 本研究以花椒为例探究干扰组分较多植物的基因组DNA试剂盒提取方案,通过比较Tiangen-Ⅰ试剂盒被推荐作为最佳选择,本研究为花椒果皮及其他相似植物的基因组DNA提取提供了参考方案。 展开更多
关键词 花椒 果皮 dna提取试剂盒 简单加权分析
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三种游离核酸提取试剂盒对血浆cfDNA提取性能的比较 被引量:1
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作者 应超 蔡燕宁 +3 位作者 郝淑文 王婷 刘沅贺 赵立芳 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第12期1556-1563,共8页
目的综合评估3种游离核酸(cfDNA)提取试剂盒,以筛选出经济可靠的商品试剂盒。方法我们使用了3种不同的试剂盒提取10名健康人血浆中的cfDNA,并使用Agilent 2100生物芯片分析仪对cfDNA片段大小和丰度进行评估。同时,我们还使用微滴式数字P... 目的综合评估3种游离核酸(cfDNA)提取试剂盒,以筛选出经济可靠的商品试剂盒。方法我们使用了3种不同的试剂盒提取10名健康人血浆中的cfDNA,并使用Agilent 2100生物芯片分析仪对cfDNA片段大小和丰度进行评估。同时,我们还使用微滴式数字PCR(ddPCR)对cfDNA中的核糖核酸酶P蛋白亚基p30(RPP30)、NADH脱氢酶亚基1(ND1)、NADH脱氢酶亚基4(ND4)基因拷贝数进行定量,并利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测cfDNA中藤黄节杆菌序列(ALU)ALU115和ALU247的浓度。此外,我们还在混合血浆中掺入50~766 bp的DNA Ladder,然后使用上述3种提取试剂盒对其进行提取,并使用Agilent 2100生物芯片分析仪分析各DNA片段的浓度,以计算不同试剂盒对不同大小的DNA片段的回收率和提取偏好性。结果3种试剂盒从健康人血浆中纯化的100~300 bp cfDNA浓度分别为(5.10±1.99)、(4.64±3.09)和(1.82±1.29)ng/mL(P=0.006)。Kit A所提取的RPP30拷贝数显著高于Kit C(P=0.018),而Kit A和Kit B所提取的ND1和ND4拷贝数也均显著高于Kit C(P=0.001;P=0.001;P=0.001;P=0.001)。此外,Kit A所提取的cfDNA中,ALU 115和ALU 247的浓度也显著高于Kit C(P=0.009;P=0.003)。3种试剂盒对混合血浆中掺入的外源性DNA Ladder的回收率差异有统计学意义(P<0.001),同时Kit B和Kit C对不同大小的DNA片段也存在提取偏好性。结论Kit A性能最佳,Kit B是一种低成本替代方案,其工作流程更简单省时。 展开更多
关键词 游离dna 提取试剂盒 核酸提取
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DNA ploidy and c-Kitmutation in gastrointestinal stromal tumors 被引量:8
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作者 JuHanLee XianglanZhang +3 位作者 WoonYongJung YangSeokChae Jong-JaePark InsunKim 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2004年第23期3475-3479,共5页
AIM: To investigate the prognostic significance of c-Kitgen emutation and DNA ploidy in gastointestinal stromal tumors (GISTs).METHODS: A total of 55 cases of GISTs were studied for the expression of c-Kit by immunohi... AIM: To investigate the prognostic significance of c-Kitgen emutation and DNA ploidy in gastointestinal stromal tumors (GISTs).METHODS: A total of 55 cases of GISTs were studied for the expression of c-Kit by immunohistochemistry, and the c-Kit gene mutations in exons 9, 11, 13, and 17 were detected by polymerase chain reaction-single strand confirmation polymarphism (PCR-SSCP) and denaturing high performance liquid chromatography (D-HPLC) techniques. DNA ploidy was determined by flow cytometry.RESULTS: Of the 55 cases of GISTs, 53 cases (96.4%) expressed c-Kit protein. The c-Kit gene mutations of exons 11 and 9 were found in 30 (54.5%) and 7 cases (12.7%),respectively. No mutations were found in exons 13 and 17.DNA aneuploidy was seen in 10 cases (18.2%). The c-Kit mutation positive GISTs were larger in size than the negative GISTs. The aneuploidy tumors were statistically associated with large size, high mitotic counts, high risk groups, high cellularity and severe nuclear atypia, and epithelioid type.There was a tendency that c-Kit mutations were more frequently found in aneuploidy GISTs.CONCLUSION: DNA aneuploidy and c-Kit mutations can be considered as prognostic factors in GISTs. 展开更多
关键词 Adult Aged Aged 80 and over ANEUPLOIDY Female Gastrointestinal Neoplasms Gastrointestinal Stromal Tumors Gene Expression Regulation Neoplastic Humans Immunohistochemistry Male Middle Aged MUTATION PLOIDIES Prognosis Proto-Oncogene Proteins c-kit Risk Factors Tumor Markers Biological
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双条拂粉蚧基因组DNA提取方法的比较和优化
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作者 王宇航 孟秀利 +4 位作者 黄山春 林兆威 宋薇薇 唐庆华 覃伟权 《热带生物学报》 2023年第6期636-641,共6页
为了提高双条拂粉蚧(Ferrisia virgata Cockerell)昆虫基因组DNA的提取浓度和质量,以当天采集活体和经95%酒精-20℃冷藏浸泡7 d后的双条拂粉蚧(Ferrisia virgata Cockerell)成虫为实验材料,采用2种试剂盒、3种前处理研磨方法进行组合的... 为了提高双条拂粉蚧(Ferrisia virgata Cockerell)昆虫基因组DNA的提取浓度和质量,以当天采集活体和经95%酒精-20℃冷藏浸泡7 d后的双条拂粉蚧(Ferrisia virgata Cockerell)成虫为实验材料,采用2种试剂盒、3种前处理研磨方法进行组合的方式,设置1头、3头、5头、7头和10头5个梯度,提取不同头数的粉蚧基因组DNA,并对提取的基因组DNA浓度和OD比值(A260/A280)进行了测定和评价。结果表明,以活体双条拂粉蚧为材料,使用TIANGEN试剂盒,采用研磨杵+研磨仪作为前处理,提取昆虫数为10头时,双条拂粉蚧基因组DNA浓度较高、质量较好,其OD比值(A260/A280)为1.80~1.90,电泳条带清晰;与其他组合的OD比值(1.95~2.20)相比所含杂质和污染最少。 展开更多
关键词 双条拂粉蚧 基因组dna 试剂盒法 研磨方法
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DNA extraction from paraffin embedded colorectal carcinoma samples: A comparison study of manual vs automated methods,using four commercially kits
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作者 Zsolt Kovacs Ioan Jung +4 位作者 Erzsebet Csernak Zoltan Szentirmay Laura Banias Genoveva Rigmanyi Simona Gurzu 《World Journal of Clinical Oncology》 CAS 2019年第9期307-317,共11页
BACKGROUND Nucleic acid isolation from formalin-fixed, paraffin-embedded tissue(FFPET)samples is a daily routine in molecular pathology laboratories, but extraction from FFPET is not always easily achieved. Choosing t... BACKGROUND Nucleic acid isolation from formalin-fixed, paraffin-embedded tissue(FFPET)samples is a daily routine in molecular pathology laboratories, but extraction from FFPET is not always easily achieved. Choosing the right extraction technique is key for further examinations.AIM To compare the performance of four commercially available kits used for DNA extraction in routine practice.METHODS DNA isolation was performed on 46 randomly selected formalin-fixed, paraffinembedded(FFPE) colorectal adenocarcinoma(CRC) surgical specimens. Four commercially available extraction kits were used: two for manual DNA extraction(the Pure Link Genomic DNA Mini Kit from Invitrogen and the High Pure FFPE DNA Isolation Kit from Roche) and two for automated DNA extraction(the i Prep Genomic DNA Kit from Invitrogen and the Magna Pure LC DNA Isolation Kit from Roche). The DNA concentration and quality(odds ratio) among the four systems were compared. The results were correlated with the clinicopathological aspects of CRC cases: age, gender, localization, macro-and microscopic features,lymph node metastases, and the lymph node ratio.RESULTS The highest DNA concentration was obtained using the manual kits: 157.24 ±62.99 ng/μL for the Pure Link Genomic DNA Mini Kit and 86.64 ng/μL± 43.84 for the High Pure FFPE DNA Isolation Kit(P < 0.0001). Lower concentrations were obtained with automated systems: 20.39 ± 21.19 ng/μL for the Magna Pure LC DNA Isolation Kit and 8.722 ± 6.408 ng/μL for the i Prep Genomic DNA Kit,with differences between the systems used(P < 0.0001). The comparison between age, gender, tumor localization, pT or pN stage and the lymph node ratio indicated no statistically significant difference in DNA concentration using any of the nucleic acid isolation kits. DNA concentration was influenced by the macroscopic features and grade of differentiation. A higher DNA concentration was obtained for well-differentiated polypoid colorectal adenocarcinomas(CRCs), compared with undifferentiated ulcero-infiltrative carcinomas,irrespective of the kit used.CONCLUSION For research or diagnosis that needs high DNA concentrations, manual methods of DNA isolation should be used. A higher amount of DNA can be obtained from polypoid-type differentiated CRCs. Automated systems confer comfort and a lower amount of DNA that is, however, sufficient for classic polymerase chain reaction(PCR) and real-time quantitative PCR molecular examinations. All four commercially available kits can be successfully used in daily practice. 展开更多
关键词 dna ISOLATION Colorectal cancer PARAFFIN-EMBEDDED PureLink GENOMIC dna Mini kit High Pure FFPE dna ISOLATION kit iPrep GENOMIC dna kit MagnaPure LC dna ISOLATION kit
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DNATyper^(TM) 30六色荧光STR复合扩增冻干试剂的验证
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作者 张哲 于浩 +5 位作者 李晨佳 余政梁 吴俞衡 张广峰 李万水 白雪 《刑事技术》 2023年第6期616-622,共7页
本研究旨在测试DNATyper^(TM) 30冻干试剂的技术性能指标,评估其在法医学案件检验中的应用能力。制定测试方案,设置不同的存储条件和时间范围,通过检测标准DNA 9947A对冻干试剂的检出率、灵敏度、稳定性等方面进行测试,并使用案件样本... 本研究旨在测试DNATyper^(TM) 30冻干试剂的技术性能指标,评估其在法医学案件检验中的应用能力。制定测试方案,设置不同的存储条件和时间范围,通过检测标准DNA 9947A对冻干试剂的检出率、灵敏度、稳定性等方面进行测试,并使用案件样本对冻干试剂进行检测,同时将液体试剂和冻干试剂性能进行平行比对。结果显示,DNATyper^(TM) 30冻干试剂分型结果准确,可重复性好,具有较高的灵敏度(0.125 ng),对微量陈旧检材有很好的适应性,可常温状态下保存1个月以上。本研究表明DNATyper^(TM) 30冻干试剂可显著增加上样模板量、可延长试剂在常温下的保存时间、操作简单、灵敏度高,可满足微量DNA检测、试剂长途运输和常温携带的需要。 展开更多
关键词 法医遗传学 冻干试剂 微量dna 短串联重复序列 dnaTyper^(TM)30试剂盒
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柿属植物基因组DNA提取方法比较 被引量:21
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作者 梁玉琴 李芳东 +2 位作者 傅建敏 乌云塔娜 吴硕 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期170-173,共4页
针对柿属植物叶片富含单宁,常规CTAB法提取DNA质量低等问题,为了获得符合柿属植物SSR-PCR扩增要求的DNA,分别采用改良CTAB法和植物基因组DNA提取试剂盒两种方法,提取柿属植物DNA,结果显示:两种方法均可得到满足SSR-PCR扩增要求的DNA;试... 针对柿属植物叶片富含单宁,常规CTAB法提取DNA质量低等问题,为了获得符合柿属植物SSR-PCR扩增要求的DNA,分别采用改良CTAB法和植物基因组DNA提取试剂盒两种方法,提取柿属植物DNA,结果显示:两种方法均可得到满足SSR-PCR扩增要求的DNA;试剂盒较改良CTAB法提取的DNA质量高、杂质少,DNA得率略低,但其操作步骤简单,耗时短,毒害小,因其费用较改良CTAB法高,各实验室可根据自身条件选择适宜方法提取柿属植物DNA。 展开更多
关键词 柿属植物 dna提取 改良CTAB法 基因组dna提取试剂盒
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不同DNA提取试剂盒提取作物种子基因组DNA效果的比较 被引量:10
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作者 李会 任志莹 +1 位作者 王颖 王建忠 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第8期1956-1958,共3页
比较3种不同DNA提取试剂盒(宝生物、天根、LGC)在转基因产品检测中的应用效果,分别提取玉米、水稻和大豆种子的基因组DNA。结果表明,天根DNA提取试剂盒DP305更为适合从作物种子中提取基因组DNA进行转基因成分检测。
关键词 dna提取试剂盒 基因组dna 作物 比较
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雷公藤总DNA提取方法的研究 被引量:5
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作者 范文洁 洪伟 +3 位作者 李键 陈昕 林晗 吴承祯 《福建林学院学报》 CSCD 北大核心 2011年第1期8-12,共5页
由于雷公藤叶片富含多糖及酚类物质,要获得高质量的DNA有一定难度。本研究以雷公藤植物叶片为材料,对传统提取方法进行改进、优化,比较了4种不同的提取方法,最终获得了一种以CTAB法为基础,试剂盒纯化的获得高质量DNA的方法。试验结果表... 由于雷公藤叶片富含多糖及酚类物质,要获得高质量的DNA有一定难度。本研究以雷公藤植物叶片为材料,对传统提取方法进行改进、优化,比较了4种不同的提取方法,最终获得了一种以CTAB法为基础,试剂盒纯化的获得高质量DNA的方法。试验结果表明,使用该方法从雷公藤叶片中分离的DNA,纯度高、杂质少,且相对于其他方法,试验成功率明显提高,适用性强。 展开更多
关键词 雷公藤 dna提取 CTAB法 试剂盒法试验
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一种适用于PCR反应的酵母菌、无绿藻及丝状真菌DNA提取方法 被引量:28
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作者 刘素玲 冉玉平 +4 位作者 曾蔚 张浩 代亚玲 李明远 贾文祥 《中国真菌学杂志》 2006年第6期340-342,共3页
目的介绍一种从酵母、无绿藻及丝状真菌中提取DNA以用于PCR反应的方法。方法所用菌种包括临床分离的未知菌株和保藏菌株共23株:未知酵母菌(5株)、真皮毛孢子菌(1株)、糠秕马拉色菌(1株)、季也蒙念珠菌(5株)、未知丝状真菌(6株)、无绿藻(... 目的介绍一种从酵母、无绿藻及丝状真菌中提取DNA以用于PCR反应的方法。方法所用菌种包括临床分离的未知菌株和保藏菌株共23株:未知酵母菌(5株)、真皮毛孢子菌(1株)、糠秕马拉色菌(1株)、季也蒙念珠菌(5株)、未知丝状真菌(6株)、无绿藻(1株)、烟曲霉(2株)、拟青霉菌(1株)、茎点霉(1株)。用溶细胞酶(lyticase)结合Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA,A260/A280检测纯度并计算质量浓度,用真菌通用引物ITS1/ITS4扩增真菌核糖体基因(rDNA)内转录间区ITS基因,经PCR扩增检验所提取的DNA质量。结果成功提取所有23株真菌基因组DNA,其纯度及质量浓度能满足PCR反应的要求。结论用溶细胞酶结合Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒从酵母菌、无绿藻及丝状真菌提取的DNA可用于PCR反应。 展开更多
关键词 dna提取 真菌 dna提取试剂盒 溶细胞酶
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六种试剂盒提取血液基因组DNA效果比较 被引量:7
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作者 张艳 王金鸿 +3 位作者 吕亚莉 菅复春 张龙现 宁长申 《中国草食动物科学》 CAS 2014年第2期9-12,共4页
为筛选一种高效、快捷的血液基因组DNA提取试剂盒,采集24份新鲜西藏绵羊血液样本,选用6种市售商业化试剂盒(LifeFeng柱式试剂盒DK601和非柱式试剂盒DK602,康为世纪非柱式试剂盒CW0544和柱式试剂盒CW0546,上海生工非柱式试剂盒SK8224和... 为筛选一种高效、快捷的血液基因组DNA提取试剂盒,采集24份新鲜西藏绵羊血液样本,选用6种市售商业化试剂盒(LifeFeng柱式试剂盒DK601和非柱式试剂盒DK602,康为世纪非柱式试剂盒CW0544和柱式试剂盒CW0546,上海生工非柱式试剂盒SK8224和柱式试剂盒SK8254),比较所提DNA的浓度、纯度、得率以及对嗜吞噬细胞无形体16S rRNA进行巢式PCR扩增,综合评价不同试剂盒DNA提取效果。结果表明,应用LifeFeng柱式试剂盒DK601提取的DNA浓度和纯度均最高,得率较高,分别达到75.63 ng/μL、1.894(OD260/OD280)、18.91 ng/μL;且嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因的PCR扩增条带清晰度最优。因此,LifeFeng DK601可作为提取绵羊血液基因组DNA及嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum)病原鉴定的首选试剂盒。 展开更多
关键词 dna提取试剂盒 血液基因组dna PCR
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CTAB结合DNA凝胶回收试剂盒提取食用菌DNA 被引量:11
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作者 杨同文 马利华 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期32-34,共3页
目的:为探索从食用菌子实体中快速分离和纯化DNA的方法。方法:以三种栽培的食用菌为材料,采用CTAB结合DNA凝胶回收试剂盒进行基因组DNA的分离和纯化。结果:与对照相比,结合法提取DNA样品的电泳条带更规则、清晰,并且DNA的酶切效率显著... 目的:为探索从食用菌子实体中快速分离和纯化DNA的方法。方法:以三种栽培的食用菌为材料,采用CTAB结合DNA凝胶回收试剂盒进行基因组DNA的分离和纯化。结果:与对照相比,结合法提取DNA样品的电泳条带更规则、清晰,并且DNA的酶切效率显著高于对照。结论:该结合法是一种快捷、高效提取纯化食用菌子实体DNA的方法。 展开更多
关键词 食用菌 CTAB dna凝胶回收试剂盒 dna提纯
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不同提取方法和不同组织对中华绒螯蟹DNA提取效果的比较研究 被引量:4
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作者 刘皓 刘青 +4 位作者 吴旭干 何杰 董鹏生 李彤 成永旭 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第24期147-150,共4页
为了优化中华绒螯蟹基因组DNA提取方法,采用酚-氯仿法和试剂盒法分别对中华绒螯蟹的鳃、肌肉、血淋巴液和刚毛4种组织进行DNA提取,并从纯度、浓度、片段完整性及微卫星标记PCR扩增效果4个方面评价提取DNA的质量。结果显示:酚-氯仿法提取... 为了优化中华绒螯蟹基因组DNA提取方法,采用酚-氯仿法和试剂盒法分别对中华绒螯蟹的鳃、肌肉、血淋巴液和刚毛4种组织进行DNA提取,并从纯度、浓度、片段完整性及微卫星标记PCR扩增效果4个方面评价提取DNA的质量。结果显示:酚-氯仿法提取的DNA片段比试剂盒法提取的更完整,且DNA浓度较高,但纯度稍低;无论何种提取方法,刚毛和血淋巴液中的DNA纯度都高于鳃和肌肉,4种组织中的DNA含量依次为鳃>肌肉>刚毛>血淋巴液,未剪碎刚毛中未能提取到基因组DNA;微卫星标记的电泳结果表明,两种提取方法下4种组织中提取的DNA均可满足微卫星标记的应用要求。综上,本研究建立了一种简便的非损伤性中华绒螯蟹的采样及其DNA提取方法,这对于进行中华绒螯蟹遗传育种和分子标记研究等方面具有一定的积极作用。 展开更多
关键词 中华绒螯蟹 dna提取 酚-氯仿法 试剂盒法 不同组织
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3种方法对临床菌血症样本细菌DNA提取的比较 被引量:5
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作者 赵晓丽 李晓霞 +3 位作者 刘德华 任宝军 邵剑春 胡大春 《昆明医科大学学报》 CAS 2014年第4期117-120,共4页
目的寻找一种简单、有效的提取临床菌血症样本细菌DNA的方法.方法分别用碱液加热裂解法、溶菌酶法和商品DNA提取液法提取细菌DNA,用临床常见病原菌特异性引物,进行PCR扩增.结果 (1)商品DNA提取液法提取革兰阴性菌DNA,经PCR扩增后得到特... 目的寻找一种简单、有效的提取临床菌血症样本细菌DNA的方法.方法分别用碱液加热裂解法、溶菌酶法和商品DNA提取液法提取细菌DNA,用临床常见病原菌特异性引物,进行PCR扩增.结果 (1)商品DNA提取液法提取革兰阴性菌DNA,经PCR扩增后得到特异性目的片段,但未扩增出革兰阳性菌的特异性目的片段;(2)碱液加热裂解法、溶菌酶法提取革兰阴、阳性菌DNA,经PCR扩增后均得到特异性目的片段,但碱液加热裂解法比溶菌酶法能扩增到更低浓度的细菌DNA目的片段.结论碱液加热裂解法是3种方法中最简单有效的细菌DNA提取方法,适用于临床病原菌基因组DNA提取. 展开更多
关键词 细菌dna 碱液加热裂解法 溶菌酶法 商品dna提取法
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利用不同方法从深加工牦牛肉产品中提取基因组DNA效果的比较 被引量:11
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作者 何建文 韩建林 罗玉柱 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期162-167,共6页
为了从深加工牦牛肉产品中获得片段较大、数量较多的基因组DNA,以用于分子追溯的检测,尝试并系统地比较了异硫氰酸胍法、酚-氯仿抽提法和试剂盒提取法的提取效果。通过定量分析、凝胶电泳和PCR片段大小梯度扩增等手段,对利用3种方法提... 为了从深加工牦牛肉产品中获得片段较大、数量较多的基因组DNA,以用于分子追溯的检测,尝试并系统地比较了异硫氰酸胍法、酚-氯仿抽提法和试剂盒提取法的提取效果。通过定量分析、凝胶电泳和PCR片段大小梯度扩增等手段,对利用3种方法提取的基因组DNA的数量和质量进行了比较。结果显示,利用酚-氯仿抽提法提取的基因组DNA质量不佳,异硫氰酸胍法和试剂盒提取法的提取效果相当,PCR可以扩增出730 bp左右的核外基因细胞色素b,而核内基因只能扩增出300bp左右的核基因DNA片段(内乳铁蛋白基因,271 bp;BoLA-DRB3基因,302 bp)。综合考虑提取时间、费用、数量和质量等各方面的因素,认为异硫氰酸胍法操作简便、快速、廉价、有效,是较好的从动物深加工肉产品中提取基因组DNA的方法。 展开更多
关键词 异硫氰酸胍法 酚-氯仿抽提法 试剂盒方法 深加工牦牛肉产品 基因组dna
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常见病原菌基因组DNA快速提取试剂盒研制 被引量:2
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作者 曹飞扬 王娉 +4 位作者 赵晓美 谈笑 李菲 江连洲 陈颖 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期81-88,共8页
以单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌等6种常见食源性致病菌为研究对象,优化试剂盒工艺参数,采用琼脂糖凝胶电泳及OD260/OD280分析基因组DNA提取效果。结果表明,试验试剂盒可在30 min内完成基因组DNA提取,对常见10类食品样品抗基质干扰... 以单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌等6种常见食源性致病菌为研究对象,优化试剂盒工艺参数,采用琼脂糖凝胶电泳及OD260/OD280分析基因组DNA提取效果。结果表明,试验试剂盒可在30 min内完成基因组DNA提取,对常见10类食品样品抗基质干扰能力强。与实时荧光PCR技术联用,检测染菌量1~10 cfu·25 g-1食品样品时,仅一次增菌可得阳性结果;市售食品样品检测与国标方法结果无显著差异。所研制病原菌基因组DNA提取试剂盒适用于食品病原菌快速检测。 展开更多
关键词 食源性致病菌 基因组dna 提取试剂盒 快速
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全血中DNA6种提取方法的比较 被引量:10
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作者 畅晶晶 张素华 李莉 《法医学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期109-111,114,共4页
目的比较经典有机法、改良有机法、常规Chelex-100法、IQ法、Qiagen法及SP法6种方法在提取DNA纯度和得率上的差异。方法收集10名健康志愿者的静脉全血各5mL,分别采用6种方法提取基因组DNA,通过紫外分光光度仪和荧光定量分析技术检测产... 目的比较经典有机法、改良有机法、常规Chelex-100法、IQ法、Qiagen法及SP法6种方法在提取DNA纯度和得率上的差异。方法收集10名健康志愿者的静脉全血各5mL,分别采用6种方法提取基因组DNA,通过紫外分光光度仪和荧光定量分析技术检测产物的纯度和浓度,计算得率,并使用统计软件对结果进行分析。结果常规Chelex-100法所得DNA的纯度明显低于其他方法,而另外5种方法所得DNA纯度的差异不具有统计学意义。改良有机法得率最低,IQ法得率最高。统计结果表明试剂盒方法抽提全血DNA的得率明显高于经典有机法、常规Chelex-100法和改良有机法,其差异具有统计学意义。结论与有机法和常规Chelex-100法相比,高质量试剂盒类方法更有利于法医学检材的DNA抽提。 展开更多
关键词 法医遗传学 提取法 试剂盒 诊断 dna定量
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