山定子抗苹果褐斑病菌侵染过程中 DNA ladder 与类 caspases 活性的检测

接种褐斑病菌分生孢子悬浮液于山定子与富士苹果叶片,接种后1、3 d和5 d取样,提取DNA,检测DNA ladder;提取样品粗蛋白,用特异性荧光底物检测粗蛋白中类caspase活性,探索山定子受褐斑病菌侵染过程中引起的细胞程序性死亡(PCD)与抗性的关系,检测DNA ladder和类caspases活性变化的规律。研究发现:在接种后1、3 d和5 d,山定子和富士苹果叶片中没有明显DNA ladder的产生;受检测的YVADase、DEVDase、IETDase和VEIDase活性在接种后1 d和3 d没有显著变化,但在接种后5 d,活性均降低30%左右,显著低于对照。研究表明,山定子在褐斑病菌侵染过程中并没有DNA ladder产生,但却伴随着类caspase活性的下降。

DNALadder和ELISA联合检测PRRSV诱导Marc145细胞凋亡动态变化规律的研究

对PRRSV诱导Marc145细胞凋亡的动态变化规律进行了研究,实验收集PRRSV SC1株感染Marc145细胞后0、24、48、72、96、120、144h和同一时间点未接毒的细胞样品,用DNALadder定性检测和ELISA定量检测细胞凋亡的变化规律。定性检测结果表明,PRRSV能诱导Marc145细胞发生凋亡,病毒感染后凋亡细胞DNA电泳呈典型“梯状”条带。定量检测结果表明,Marc145细胞在PRRSV感染后24h开始出现凋亡,48h凋亡更加明显,72h达到高峰,明显高于对照组。

紫外辐射诱发NIH3T3细胞凋亡时DNA断裂的特性

用常规琼脂糖凝胶电泳ＵＶＢ照射后培养不同时间的ＮＩＨ３Ｔ３细胞ＤＮＡ，两个样本均未出现凋亡梯形带，而用相同条件处理的昆明小鼠胸腺细胞ＤＮＡ出现了典型的梯形带．再用反转电场琼脂糖凝胶电泳（ＦＩＧＥ）ＵＶＢ照射后培养不同时间的ＮＩＨ３Ｔ３细胞ＤＮＡ，发现ＤＮＡ先断裂成低于２３ｋｂ的大分子片段，然后进一步断裂成小分子片段，但始终未出现梯形带，说明ＤＮＡ并不总是从核小体之间断裂的．

Hg^(2+)胁迫对浮萍体细胞DNA一级结构和抗氧化酶系的损伤(英文)

主要从DNA一级结构及抗氧化酶系变化两方面 ,研究了Hg2 + 胁迫下浮萍体细胞的损伤。结果表明 :运用随机扩增多态性DNA法 (RandomamplifiedpolymorphismDNA ,RAPD)和DNA梯法 (DNALadder) ,5～ 1 0mg·L- 1 Hg2 +处理组可检测到基因组DNA的明显损伤 ,2 0mg·L- 1 Hg2 + 已导致细胞坏死 ;RAPD法较DNALadder法更灵敏。本文还发现 ,活性氧和抗氧化酶系很可能参与了浮萍体细胞凋亡过程。低浓度的Hg2 + 胁迫可刺激抗氧化酶活性升高 ,以清除体内活性氧 ,而一旦活性氧水平超出一定域值 ,抗氧化酶活性急速下降 。

钬元素对小鼠肝脏细胞DNA损伤的影响

背景与目的: 通过研究钬离子溶液对小鼠肝脏细胞DNA的损伤 ,探讨钬元素对诱导动物细胞凋亡的影响。材料与方法:处理组1:小鼠定时灌胃氯化钬溶液50mg/(kg·d),连续5d;组2～3 :小鼠分别定时腹腔注射氯化钬溶液60mg/(kg·d)和120mg/(kg·d) ,连续2d ;组4:小鼠一次性腹腔注射氯化钬溶液320mg/kg;每次染毒相间24h,组1～4:小鼠均在末次染毒24h后处死 ,提取肝脏DNA。组5:小鼠一次性腹腔注射等体积生理盐水 ;组6～9 :小鼠一次性腹腔注射氯化钬溶液80mg/kg,分别于注射后12、24、48和96h处死小鼠提取肝脏DNA。通过琼脂糖凝胶电泳研究各组DNA带型变化。 结果 :处理组7DNA电泳中出现连续的弥散带型 ,其它各组均未观察到明显的拖尾现象。也未观察到“DNAladder"。 结论 :钬离子对小鼠肝脏细胞DNA的断裂作用可能与其剂量大小、处理时间及DNA修复作用有关 ,而且无特异性。本实验结果表明 。

蒜鳞片薄壁细胞衰退过程中酶的细胞化学定位及DNA生化分析

蒜在储藏过程中,鳞茎薄壁细胞衰退,其营养物质供给幼芽萌发生长。采用细胞化学方法,对蒜休眠进程中的鳞茎薄壁细胞进行了ATPase以及APase的细胞化学定位,结果显示在薄壁细胞的质膜、细胞壁和胞间连丝上的酶活性随着蒜自休眠至萌发的不同发育进程而呈现增强的趋势,且在萌芽期酶活性表现最为强烈,表明细胞内物质的降解、转化与输出的加强有助于细胞内含物向新生芽的彻底转移。配合采用琼脂糖凝胶电泳对衰退薄壁细胞的DNA进行了分析,实验结果表现出典型的DNA Ladder,为蒜鳞茎薄壁细胞的衰退属于受基因控制的程序性死亡范畴补充了生化证据。

凋亡而不出现DNA梯形带一例

用普通琼脂糖凝胶电泳UVB照射后分别培养24、36小时的NIH3T3细胞DNA,均未出现梯形带,但从细胞形态上看,大部分细胞发生凋亡并出现凋亡小体。电泳UVB照射后培养24小时的昆明小鼠胸腺细胞DNA,出现典型的凋亡梯形带。说明细胞在发生凋亡时DNA并不总是从核小体之间断裂的,不能把DNA梯形带作为判断细胞凋亡的唯一标准。

ATM在人胃癌细胞系的表达及其在细胞DNA损伤中的作用

目的:研究DNA损伤剂对ATM基因缺陷和正常的胃癌细胞系的作用机制。方法:Western-blot方法检测6株胃癌细胞系ATM蛋白的表达情况,并用DNA损伤剂顺铂作用于ATM基因缺陷的MKN28细胞系和ATM基因正常的BGC823细胞系,采用Western-blot、DNAladder、Hoechest33258/PI双荧光染色等方法观察凋亡相关激酶的表达和细胞的应答反应。结果:Western-blot显示,ATM蛋白在胃癌细胞系MGC803、MKN28、MKN45、SGC7901的表达水平显著低于BGC823和AGS细胞系,BGC823细胞在CDDP作用后,ATM蛋白表达水平升高,磷酸化chk1和chk2活性24小时后增强,而Cdc25C表达减少;MKN28细胞中G2期检测点蛋白ATM、p-chk1、p-chk2表达较低,Cdc25C表达较高,但在CDDP作用前后无明显变化。MKN28细胞在DNA损伤剂作用后出现显著凋亡,而BGC823细胞在DNA损伤剂作用48小时后未见显著凋亡。结论:ATM在细胞周期的多个环节均有调控作用,特别是在细胞周期检测点和DNA损伤的修复中有重要的监视和启动作用。

载脂蛋白CⅡ微卫星DNA检测的方法学建立

目的 建立准确检测载脂蛋白CⅡ (apoCⅡ )微卫星DNA(TG)n(AG)m的方法。方法 采用套式聚合酶链反应扩增样品DNA ,将扩增产物上样于变性聚丙烯酰胺凝胶 ,高压电泳 ,凝胶银染后按等位基因梯阶标准判定样品基因型 ;对等位基因(TG) 2 0 (AG) 8进行测序。结果 (TG)n(AG)m位点 ,共检出 12个等位基因 ( 17、18、2 6～ 3 5 ) ,3 6个基因型。 (AG)m位点 ,共检出4个等位基因 ( 6～ 9) ,7个基因型。DNA测序确证该等位基因为 (TG) 2 0 (AG) 8。结论 该法准确、快速、简便 ,适用于科研及大规模人群检查。

DNA梯度化分析软件系统在细胞凋亡定量检测中的应用

目的:检验我们设计的DNA梯度化分析软件在细胞凋亡定量检测中的应用价值 方法:用Camptothesin(CAM)诱导U937细胞株凋亡,通过该系统计算DNA琼脂糖凝胶电泳后DNA的梯度值,并与凋亡细胞胞浆寡聚核小体的Elisa检测值进行相关性分析.结果:随着CAM浓度的增加,DNA琼脂糖凝胶电泳后梯度化程度越明显,测出的梯度值也越大,而且与胞浆寡聚核小体的Elisa检测值呈正相关(r=0.989,p<0.01)结论:利用DNA梯度化分析系统可对琼脂糖凝胶电泳后的凋亡细胞DNA片段,进行定量分析,提供简便直接的方法.

1例新的Penta D基因座off-ladder等位基因测序分析

目的鉴定1例新的PentaD基因座短串联重复序列(STR)分型标准外(OL)等位基因的序列构成。方法用AGCU Expressmarker 22荧光检测试剂盒和华夏TM白金PCR扩增试剂盒对一对父女进行STR分型。用Chelex-100法提取DNA,进行PentaD基因座的PCR扩增,纯化回收PCR扩增片段后进行测序。结果AGCU Expressmarker 22荧光检测试剂盒检出Penta D基因座为单峰,相邻的D10S1248基因座检出三等位基因;华夏^(TM)白金PCR扩增试剂盒检出PentaD和D10S1248基因座为双等位基因,PentaD基因座检出OL等位基因;测序结果显示该OL等位基因核心序列为[AAAGA]_(20)AAAA,是一个新的微变异等位基因。根据法医学STR基因座命名规范,将该等位基因命名为20.4。结论对于STR分型中出现的微变异等位基因或OL等位基因可进行测序鉴定,对于OL等位基因的精确分型将丰富STRBase数据库,对提高基因座个体识别和亲权鉴定能力具有重要意义。

NaCl胁迫对花生种子萌发的影响

以花生品种鲁花14号(LH14)和丰花1号(FH1)为材料,通过对不同NaCl浓度(0、1002、00、300、4005、00mmol/L)处理的花生种子研究表明:低浓度NaCl处理(100 mmol/L)对花生种子的萌发影响相对较小;随着NaCl浓度增加,花生种子的发芽势和发芽率逐渐降低,根长、根表面积、根体积、根鲜重和胚根粗逐渐减小,MDA和脯氨酸含量逐渐增加;高浓度NaCl处理情况下,花生根尖DNA凝胶电泳出现明显的连续拖带现象,根尖细胞凋亡相对严重。

山楂中谷甾醇抑制肿瘤细胞的研究

目的从山楂中提取及鉴定谷甾醇,并研究其对3种肿瘤细胞和人体正常肝脏细胞的作用。方法取对数生长期的细胞进行MTT法细胞增殖实验及DNA凝胶电泳实验,观察谷甾醇对不同细胞的作用。结果MTT法细胞增殖实验显示一定剂量的谷甾醇对体外培养的HepS、S180、EAC细胞有显著的抑制作用(P<0.01),抑制率总体上与时间和浓度呈正相关;对L02细胞无明显的抑制作用(P>0.05);电泳结果显示经谷甾醇作用的HepS细胞DNA出现梯带。结论谷甾醇可能是通过促进肿瘤细胞凋亡来抑制其增殖。

钬离子溶液诱导蚕豆根细胞凋亡的初步研究

运用硝酸钬溶液对蚕豆根尖染毒,提取根尖细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳;取根尖压片观察细胞核异常情况;同时取根尖细胞进行单细胞凝胶电泳。结果表明,钬离子诱导了根尖细胞核异常;在8mg·L-1剂量下,彗星细胞尾长和拖尾细胞数量在24h内随着根尖处理时间的延长而增加,处理24h时,琼脂糖凝胶电泳中出现明显的连续拖尾带型;处理48h后彗星拖尾缩短,琼脂糖凝胶电泳中拖尾带型缩短,推测可能发生了DNA修复作用或者交联作用。64mg·L-1剂量处理24h,彗尾缩短且出现核碎裂,琼脂糖凝胶电泳中未出现拖尾带型。实验中未观察到细胞凋亡的典型DNA"梯状带型"和特征性彗星拖尾现象。

杆状病毒诱导昆虫细胞凋亡的初步研究

Microscopic examination of Spodoptera litura(SL-1)cell infected with AcMNPV or SfaMNPV revealed progressive cell blebbing starting at 8h～12h postinfection and culminating in total cell destruction at 24h postinfection.The fragmentation of the infected cell nuclei was observed by stained with the specific fluorescent dye DAPI.Agarose gel electrophoresis analysis of the DNA extracted from infected cells show typical DNA ladder. All these supported that both viruses infected SL-1 cells undergo apoptosis.Through lipofectin transinfection,we observed that only the DNA of AcMNPV or SfaMNPV can also induce apopotosis of SL-1 cell.Virus titer analysis revealed that neither viruses can duplicate in SL-1 cells.

乙烯诱导胡萝卜原生质体凋亡

乙烯是一种参与多种重要生理学过程的植物激素。用乙烯利在密闭条件下处理胡萝卜（ＤａｕｃｕｓｃａｒｏｔａＬ．）原生质体（在ｐＨ＞４．１时释放乙烯），发现随着乙烯利浓度增加，细胞死亡率逐渐增高。经乙烯利处理的胡萝卜原生质体出现核内染色质固缩，形成凋亡小体等典型的细胞凋亡的形态学特征。用中性法彗星电泳观测到彗星状的核ＤＮＡ片段的迁移。ＤＮＡ电泳分析观察到细胞凋亡时产生的典型的核小体间ＤＮＡ断裂所形成的梯状条带。结果表明。

三种猕猴桃多酚粗提物对A549和Hela细胞的抑制作用

使用60%的乙醇提取三种猕猴桃多酚,离心后上清液通过旋转蒸发仪真空浓缩获得猕猴桃多酚粗提物,通过细胞形态分析、MTT实验以及DNALadder实验分析三种猕猴桃粗提物对A549和Hela细胞的抑制作用。结果表明狗枣猕猴桃多酚粗提物具有较好的抗肿瘤增殖活性,因此,软枣猕猴桃多酚可以作为新的癌症抑制剂,具有潜在的应用价值。

蓖麻毒素诱导的小鼠淋巴细胞的凋亡

无菌制备小鼠脾淋巴细胞,以不同浓度蓖麻毒素(0、0.3、3、30、300μg/mL)对细胞进行处理,于不同时间段(3、6、122、4 h)采用MTS法对细胞活力进行检测。结果表明,蓖麻毒素对淋巴细胞有明显的毒性作用,3μg/mL的毒素处理细胞24 h后,细胞活力降为60%左右。为研究蓖麻毒素是否是通过诱发凋亡作用而引起细胞死亡,本试验对典型的凋亡特征进行了检测,首先用流式细胞仪对细胞的线粒体膜电位进行了检测,证明经毒素处理细胞后,其电位发生显著变化(P<0.05);Ho-echst33258染色和DNA梯度裂解检测结果同时也证明,接毒细胞发生了明显的调亡作用。此结果可为深入研究蓖麻毒素的毒理作用机制提供理论依据。

Parasiticein诱导烟草细胞凋亡的形态及生化特征

【目的】研究烟草细胞对parasiticein的反应,了解parasiticein诱导烟草细胞的PCD的发生机制。【方法】用浓度约100nmol·L-1的parasiticein处理烟草悬浮细胞,相差显微镜下观察细胞的形态变化。【结果】发现烟草细胞的细胞膜收缩,与细胞壁间形成空隙,原生质浓缩等;用trypanblue染色后观察到类似现象。对诱导处理的悬浮细胞经DAPI(4,6-diamino-2-phenylindole)染色后,通过荧光显微镜观察,发现细胞核先后表现染色质凝集、形成颗粒状等特征;对处理的悬浮细胞提取基因组DNA并进行琼脂糖凝胶电泳,可观察到梯状的DNA条带(DNA laddering)。研究还发现,parasiticein诱导的烟草细胞死亡可被蛋白激酶信号通路抑制剂K252-a部分抑制。【结论】parasiticein诱导的烟草细胞死亡具有细胞凋亡的典型形态及生化特征,是一种主动的细胞死亡过程。

药物诱导的玉米根尖细胞凋亡

同时应用DNALaddering、DNAGelBlot以及基于染色体涂片的原位末端标记技术 ,从染色体、细胞核和DNA不同水平对细胞毒素类药物放线菌D、放线菌酮和秋水仙碱诱导的玉米 (ZeamaysL .)根尖分生组织细胞死亡作了检测。结果表明 :同动物中一样 ,这些药物诱导的玉米根尖分生组织细胞死亡也具有DNALadder、染色质和细胞核浓缩等典型的凋亡特征 ,说明这些细胞毒素类药物能够诱导植物体内的细胞凋亡。