疫霉菌激发子PB90诱导烟草悬浮细胞的凋亡

激发子 PB90 是疫霉菌(Phytophthora boehmeriae)分泌的一种分子量为90 kD 的胞外蛋白激发子,该激发子可以诱导非寄主植物烟草的过敏反应和系统获得抗性. BY-2烟草悬浮细胞经该激发子PB90处理后, Trypan blue 染色观察到细胞死亡, 这种死亡可被蛋白质合成抑制剂 Cycloheximide 抑制, 表明这种细胞死亡是主动死亡过程. 提取 PB90 处理的悬浮细胞的 DNA 进行琼脂糖凝胶电泳观察到 DNALadder 现象, 表明核小体间的 DNA 发生了断裂; 对经 PB90 分别处理 4 和 12 h 的烟草悬浮细胞进行TUNEL 染色, 观察到较强的阳性信号, 进一步表明其细胞核内发生了 DNA 末端断裂; 同时结合 DAPI染色观察到经 PB90 处理后的细胞染色质凝集、细胞核解体形成凋亡小体等细胞凋亡的形态学特征. 上述结果表明激发子 PB90 可以诱导 BY-2 烟草悬浮细胞发生细胞凋亡, 提示该激发子诱导的过敏反应是一个细胞凋亡过程.

坦布苏病毒诱导昆明鼠脾细胞凋亡

为探讨坦布苏病毒(TMUV)能否诱导昆明鼠脾细胞凋亡,采用体内和体外2种途径、不同检测方法进行验证。体内试验:TMUV脑内接种3周龄昆明鼠,分别取病毒感染3,5,7d后昆明鼠的脾脏,采用琼脂糖凝胶法观察其DNA Ladder。结果显示,攻毒3d后,脾脏没有出现明显的梯状DNA Ladder,攻毒5,7d后,脾脏出现了明显的特异性梯状DNA Ladder图谱。通过无菌研磨脾脏获得游离脾细胞,AnnexinV-FITC/PI双染色后采用流式细胞仪检测脾细胞的细胞凋亡情况。结果显示,攻毒后3d,脾细胞中凋亡细胞比例与对照组相比差异显著(P<0.05);攻毒后5,7d,脾细胞中凋亡细胞比例与对照组细胞相比差异极显著(P<0.01)。体外试验:无菌取3周龄昆明鼠脾细胞,接种不同剂量TMUV,将分别感染病毒24,48h的脾细胞AnnexinV-FITC/PI双染色,通过流式细胞仪和荧光显微镜检测脾细胞的细胞凋亡情况。结果显示,病毒感染后24,48h的脾细胞中,凋亡细胞比例与对照组相比差异显著(P<0.05)。病毒感染后24,48h脾细胞在荧光显微镜下均出现了数量较多呈现绿色荧光的细胞,且感染后48h更多。由此可见,TMUV可诱导昆明鼠发生显著的脾细胞凋亡,感染病毒时间较长,脾细胞凋亡越明显。本研究通过体内和体外2种途径、采用不同检测方法明确了TMUV能诱导昆明鼠脾细胞发生显著细胞凋亡,为进一步了解TMUV的致病机制提供理论支撑。