The Possible Involvement of Apoptotic Decay of Terminal Deoxynucleotidyl Transferase-Positive Lymphocytes in the Reutilization of the Extracellular DNA Fragments by Surrounding Living Cells

The migrating TdT+ thymocytes can die in other tissues, promoting the surrounding cells’ renewing likes holocrine secretion does. To clarify the role of TdT-enzyme for this function of progenitor lymphocytes, their extracellular media with its components included by living cells analyzed in vitro before and after in vivo irradiation of donor rats. The nucleoid with DNase-sensitive (free) DNA and TdT activity discovered in extracellular media conditioned preliminary by spontaneous apoptotic death of a minor part of the thymocyte’s suspension in vitro. The penetration of labeled products of non-template synthesis with free DNA’ primers from media into cells by pinocytosis confirmed by exogenous polymeric DNA marked artificially. The DNA penetration into cells follows an increase of the cell’s viability and acceleration of spontaneous intracellular DNA-synthesis controlled with labeled thymidine uptake. Both phenomena are typical for either the lowest initial concentration of intact cells or their preliminary irradiation in vivo. The data point to possible involvement of apoptotic decay of TdT+ cells in the reutilization of the extracellular DNA fragments for reparation/regeneration of surrounding living cells.

丹葛解酲汤对酒精性肝病大鼠DNA甲基化转移酶表达的影响

目的观察丹葛解酲汤对酒精性肝病(ALD)大鼠DNA甲基化转移酶(DNMTs)表达的影响。方法将96只SD大鼠随机分为空白组13只、造模组83只,造模组采用白酒灌胃法建立ALD模型,将成功造模的68只大鼠随机分为模型组、丹葛解酲汤高剂量组、丹葛解酲汤低剂量组、益肝灵片组,每组17只,分别进行干预。干预结束后采用赖氏法检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量,酶联免疫吸附法检测血清DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝脏组织中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组AST、ALT含量明显升高(P<0.01),DNMT1、DNMT3a含量明显降低(P<0.01),DNMT1mRNA、DNMT3a mRNA、DNMT3b mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。与模型组比较,益肝灵片组AST、ALT、DNMT1、DNMT3a、DNMT1mRNA、DNMT3a mRNA、DNMT3b mRNA明显升高(P<0.01);丹葛解酲汤高剂量组AST、ALT、DNMT1、DNMT3a、DNMT1mRNA、DNMT3a mRNA、DNMT3b mRNA明显升高(P<0.01);丹葛解酲汤低剂量组ALT、DNMT1、DNMT3a mRNA明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论丹葛解酲汤通过上调ALD大鼠DNMTs的表达,进而影响甲基化状态,可能是其防治ALD的作用机制之一。

卵磷脂对花尾胡椒鲷幼鱼谷胱甘肽-硫-转移酶,谷胱甘肽过氧化物酶和DNA完整性的影响

采用不同卵磷脂添加量的配合饲料投喂花尾胡椒鲷(Plectorhyncchuscinctus)幼鱼,同步测定幼鱼的谷胱甘肽-硫-转移酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性以及DNA完整程度。结果表明,谷胱甘肽-硫-转移酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性随着饲料中卵磷脂含量的增加而提高,而DNA单链断裂程度随着饲料中卵磷脂含量的增加而减少。这提示卵磷脂能够提高鱼体的抗氧化防御系统的机能。

日本血吸虫Mr26000GSTDNA疫苗和重组蛋白疫苗联合免疫的保护作用研究

目的观察日本血吸虫Mr26000谷胱甘肽S-转移酶(Sj26)DNA疫苗和重组蛋白(rSj26GST)疫苗联合免疫对小鼠的保护作用。方法将Sj26基因克隆入含有增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N3,构建重组质粒pEGFP-Sj26,并转染幼仓鼠肾细胞(BHK),用荧光显微镜和蛋白质印迹法(Western blotting)检测蛋白的表达。联合免疫组BALB/c小鼠分别在第0、2周用pEGFP-Sj26免疫2次,第4周再用rSj26GST加强免疫1次;而单独免疫的pEGFP-Sj26组及rSj26GST组,与上组同步各自免疫3次。末次免疫后2周进行感染攻击,45d后剖杀,计数成虫及肝内虫卵。同时设PBS对照组。结果pEGFP-Sj26在BHK中能有效表达。联合免疫组的减虫率为50·8%,显著高于pEGFP-Sj26(28·0%)和rSj26GST组(25·5%)(P值均<0·01)。联合免疫组以及pEGFP-Sj26、rSj26GST组减卵率分别为32·7%、20·6%、33·0%;联合免疫组及rSj26GST组,肝组织中每条雌虫平均产卵数显著低于PBS对照组(P值均<0·01)。结论联合免疫组的保护作用优于pEGFP-Sj26和rSj26GST单独免疫组。

环磷酰胺/卡铂联合化疗对卵巢癌患者外周血单个核细胞DNA损害

应用单细胞凝胶电泳（彗星测定）方法测定３０名卵巢癌病人环磷酰胺／卡铂联合化疗期间外周血单个核细胞ＤＮＡ损害，同时用［３２Ｐ］ＮＡＤ参入法测定与ＤＮＡ修复有关的ＮＡＤ＋ＡＤＰ核糖转移酶活性．结果表明，卵巢癌患者在环磷酰胺／卡铂联合化疗开始前其外周血单个核细胞ＤＮＡ断裂所形成的彗星样影像长度（ＣＬ）略大于对照人群，而ＮＡＤ＋ＡＤＰ核糖转移酶活性略低于对照人群，但经统计学处理无显著性意义；联合化疗后，由ＤＮＡ链断裂所形成的ＣＬ明显加长，达化疗前的１．５１倍（Ｐ＜０．０１）．如用蛋白酶Ｋ处理细胞以除去与ＤＮＡ联着的蛋白质，则各组ＣＬ均有增长，但以化疗后最为明显，达未用蛋白酶Ｋ处理的同组对象的１．４７倍（Ｐ＜０．０１）；与化疗前相比，增加近１倍（Ｐ＜０．０１），提示有ＤＮＡ－蛋白质交联形成．与此同时，ＮＡＤ＋ＡＤＰ核糖转移酶被活化，达治疗前的１．７８倍（Ｐ＜０．０１）．以上资料为监测肿瘤化疗对外周血ＤＮＡ的损害作用和可能的副作用提供了线索．

DNA拓扑异构酶和谷胱甘肽S转移酶介导的机制在急性白血病临床耐药中作用的探讨

目的探讨急性白血病(AL)患者DNA拓扑异构酶和谷胱甘肽S-转移酶介导的机制在临床耐药中的作用。方法应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测111例AL患者DNA拓扑异构酶基因(TopoⅠ、Ⅱα、Ⅱβ)及谷胱甘肽S转移酶(GSTα、π)等基因mRNA表达水平,分析与临床化疗疗效的关系。结果AL组TopoⅡα、TopoⅡβ、GSTπ相对表达水平明显高于正常对照组,GSTα表达水平明显低于对照组(P<005)。TopoⅠ则在两者间差别无显著(P>005)。上述基因在初治与复发组间表达无明显差别,但GSTα在耐药组表达水平明显高于敏感组(P<005),其余基因在敏感组与耐药组AL患者间表达无明显差别(P>005)。结论GSTα可能与临床耐药相关,Topo和GSTπ在酶介导耐药机制中的具体作用需结合其它因素综合分析,不能将其孤立地作为判断耐药的肯定指标。

DNA甲基化与卵巢肿瘤的研究进展

DNA甲基化是目前肿瘤领域研究中研究最多的表现遗传学机制之一。特殊基因的DNA异常甲基化对于卵巢肿瘤的发生、发展、治疗、预后及肿瘤耐药性都有重要影响。随着DNA甲基化检测水平的提高,DNA甲基化的检测可望成为卵巢肿瘤早期诊断、病情进展、患病风险评估及预后评估的重要的分子生物学诊断方法。

新型胞质DNA感受通路：cGAS-STING的研究进展

细胞胞质中存在的游离DNA一直被宿主的固有免疫系统当做潜在的危险信号,但免疫系统识别和清除这些危险信号的机制还不明确.近几年有研究发现,DNA感受器(DNA sensor)是宿主感受DNA和免疫防御的桥梁,目前已经有超过10种DNA感受器被发现,而干扰素刺激基因(stimulator of interferon genes,STING,也称为TMEM173、MPYS、MITA和ERIS)作为一种DNA感受通路下游关键的接头分子,在感受胞质DNA和免疫防御方面起着重要的信号传递作用,胞质中的DNA可通过DNA感受器激活STING,再激活Ⅰ型干扰素和其他细胞因子,进而启动机体的免疫反应.近些年,胞质中游离DNA如何激活STING,进而如何在体内启动免疫反应以产生抗病毒或抗菌作用的机制研究取得了显著进展.最近,在哺乳动物细胞中发现了一种新型的核酸转移酶cGAS(cyclic GMP-AMPsynthase),它能识别DNA并能产生一种内源性的环化二核苷酸cGAMP(cyclic GMP-AMP)激活STING.本文将最近关于cGAS的发现、胞质DNA通过cGAS激活STING及STING活化后激活机体免疫反应的机制进行了综述.

激光辅助制动对精子核DNA的影响

目的:研究激光辅助制动精子是否引起精子核DNA损伤。方法:23例行体外受精(IVF)的男性精液标本,上游法处理后用0.45ms脉冲激光照射精子尾部制动精子。采用末端转移酶介导的dUTP末端标记法(TUNEL)和单细胞凝胶电泳法(SCGE)两种方法分别检测激光辅助制动处理前后阳性精子百分率。结果:TUNEL法检测激光辅助制动处理前后阳性精子的百分率分别为(1.32±0.61)%、(1.41±0.51)%,差异无显著性(P>0.05);SCGE法检测处理前后阳性精子百分率分别为(1.59±0.70)%、(1.83±0.68)%,差异亦无显著性(P>0.05)。结论:激光照射精子尾部辅助制动精子对精子核DNA无明显损伤。

日本血吸虫 26 kDa 谷胱甘肽S-转移酶DNA疫苗的研究及其保护性免疫效果观察

本文对大陆株日本血吸虫２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）的ＤＮＡ疫苗进行研究，并观察了其免疫保护效果。分别构建含Ｓｊ２６ＧＳＴ基因的重组质粒ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６，采用脂质体介导的基因转移将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６分别导入ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞，用免疫荧光法（ＩＦＡ）证实Ｓｊ２６ＧＳＴ在真核细胞中的表达。分别将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６及ｐＢＫ－ＣＭＶ肌注ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。免疫３次后，免疫鼠产生一定水平的抗血吸虫抗体。用日本血吸虫尾蚴攻击感染免疫小鼠，结果ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６免疫鼠减虫率分别为３７．１９％和４４．４４％，肝组织减卵率为７３．８０％和４７．２０％，每对成虫产卵减少５６．８８％和１５．６７％。实验结果表明，日本血吸虫Ｓｊ２６ＤＮＡ疫苗免疫小鼠后能诱生一定水平的抗血吸虫抗体，免疫鼠可形成一定水平的保护性免疫力，预防血吸虫尾蚴感染。

光学活性黄皮酰胺类化合物体外对黄曲霉毒素B_1损伤大鼠肝细胞非程序性DNA合成的保护作用

目的研究9种光学活性黄皮酰胺类化合物体外对黄曲霉毒素B1(AFB1)引起大鼠肝细胞非程序性DNA合成(UDS)损伤和谷丙转氨酶(GPT)释放的保护作用有无差异。方法用胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞。将分离的大鼠肝细胞与羟基脲(终浓度10 mmol.L-1)和所试化合物于37℃5%CO2培养1 h,再加入AFB1(终浓度0.1μmol.L-1)和[3H]TdR,测定UDS合成和GPT释放的量。结果所试9种光学活性黄皮酰胺类化合物在0.1 mol.L-1浓度时,右旋(+)黄皮酰胺、左旋(-)新黄皮酰胺、消旋(±)新黄皮酰胺、(-)表新黄皮酰胺和(±)表新黄皮酰胺对AFB1引起的大鼠肝细胞UDS损伤有显著的阻抑作用;而(-)黄皮酰胺、(+)新黄皮酰胺和(±)新黄皮酰胺、(-)表新黄皮酰胺和(±)表新黄皮酰胺则能显著抑制AFB1引起的大鼠肝细胞GPT的释放。(±)黄皮酰胺和右旋表新黄皮酰胺二者则对UDS损伤和GPT释放均无影响。结论黄皮酰胺类化合物对上述的AFB1引起大鼠肝细胞非程序性UDS合成的损伤和GPT释放的不同作用与其立体结构的不同有关系,5S6R构型有利于保护AFB1引起的大鼠肝细胞UDS损伤,而5R6S构型则利于保护AFB1引起的大鼠肝细胞GPT的释放。

散发性乳腺癌中DNA甲基转移酶1与乳腺癌易感基因1基因甲基化和蛋白表达的相关性

目的本研究通过检测DNA甲基转移酶(DNMT)1在散发性乳腺癌中的表达,分析DNMT1与乳腺癌易感基因(BRCA)1蛋白表达及基因启动子甲基化状态的相关性,以探讨DNMT1在散发性乳腺癌中的临床意义。方法应用免疫组织化学法检测182例散发性乳腺癌与30例乳腺纤维腺瘤组织中DNMT1蛋白的表达水平,应用甲基特异化聚合酶链反应(PCR)检测97例散发性乳腺癌组织中BRCA1基因启动子区甲基化状态,采用χ2检验、Fisher确切概率法、Spearman等级相关进行统计学分析。结果与乳腺纤维腺瘤相比,乳腺癌组织中DNMT1蛋白表达水平均显著增高(P=0.013);在发生淋巴结转移的组织中DNMT1蛋白表达量增多(P=0.014);用甲基特异化PCR法检测97例乳腺癌标本中BRCA1蛋白基因启动子区甲基化率为19.6%;DNMT1蛋白的表达与BRCA1基因启动子区甲基化呈正相关(r=0.349,P<0.01);BRCA1和DNMT1阳性表达有降低患者总体生存期(OS)(P=0.059,P=0.041)和无病生存期(DFS)(P=0.054,P=0.026)的趋势。结论乳腺癌中DNMT1蛋白高表达与肿瘤侵袭转移相关,并且可能存在DNMT1催化BRCA1基因甲基化,从而下调BRCA1蛋白表达,进而导致乳腺癌患者预后不良的机制,提示抑制DNMT1可能利于乳腺癌的治疗。

DNA甲基化与衰老的相关研究进展

衰老是人类生活中一个自然而渐进的过程。在大多数生物体中,衰老速度与平均寿命成反比,它受遗传、环境、生活方式和疾病等影响。衰老被认为与细胞中各种分子的改变有关,这种改变在人的一生中积累。而DNA甲基化是老化过程中研究最深入和表征最完善的表观遗传修饰之一。DNA甲基化模式的变化被认为是衰老的主要标志之一。自1983年起,用于检测DNA甲基化的技术得到大幅度提升,且其在医学和生物学中的作用取得重大进展。因此,了解衰老过程中发生的DNA甲基化变化是一个主要的研究领域,这将有助于寻找衰老的标识基因和开发新的治疗方法来延缓衰老。

多氯联苯对神经干细胞DNA甲基转移酶活性的影响

目的探讨多氯联苯(PCBs)对神经干细胞(NSCs)DNA甲基转移酶(DNMTs)的影响,研究PCBs导致神经发育损伤的机制。方法分离培养原代NSCs,用免疫荧光技术检测NSCs上Nestin的表达,并诱导分化。NSCs与不同剂量的多氯联苯A1254作用72 h,用比色法测定NSCs DNMTs活性,并用流式细胞仪检测NSCs凋亡情况。结果所培养细胞Nestin表达阳性,能多向分化。A1254能降低DNMT1和DNMT3b的活性,并具有剂量依赖性,同时诱导NSCs凋亡增加。结论多氯联苯可下调DNMTs活性,进而可能影响基因甲基化状态,而导致胎儿神经系统的发育损伤。

顺铂联合替莫唑胺治疗O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶启动子甲基化胶质瘤的近期疗效观察

目的采用顺铂联合替莫唑胺方案与单用替莫唑胺方案对O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子甲基化胶质瘤术后辅助化疗,比较两种化疗方案的近期疗效及不良反应的差异。方法选择2016年6月至2016年12月在安徽医科大学第一附属医院神经外科就诊,术后组织病理证实为胶质瘤(WHOⅡⅣ级)且分子病理示MGMT启动子甲基化阳性的患者18例为处理组;选择同期手术且符合纳入标准的患者16例为对照组,所有处理组和对照组患者都采取同步放化疗加6个周期序贯化疗。结果处理组与对照组患者的客观应答率分别为66.66%和31.25%,差异有统计学意义(P=0.042);癫痫发生率分别为22.22%和12.50%,差异无统计学意义(P=0.660);且未发生严重不良反应。结论 MGMT启动子甲基化胶质瘤术后采用同步放化疗+顺铂联合替莫唑胺化疗疗效优于同步放化疗+替莫唑胺单药化疗,两组患者癫痫发生率差异无统计学意义,且未发生严重不良反应。

DNA末端定量及其应用的研究

为定量DNA断裂末端评价DNA的降解程度 ,以饱和标记 (TdT)法定量DNA末端最大标记量 (Lmax) ;并用流式细胞分析 (FCA)、原位DNA末端标记 (TUNEL)和琼脂糖电泳检测或标记DNA降解片段 .结果发现 :a TdT法最低检测限 5ngDNA ,线性范围为 5～ 5 0 0 0ng ,较检测DNA降解片段的琼脂糖电泳敏感 2 0 0倍以上 ;b 地塞米松 (DEX)诱导淋巴瘤 (Raji)细胞凋亡产生的Lmax呈DEX剂量与诱导时间依赖性增加 ;c 自发性高血压大鼠 (SHR)心肌的Lmax呈年龄依赖性增加并与正常对照鼠 (WKY)相比差异非常显著 (P <0 0 1) ;d TdT法定量Lmax与FCA、TUNEL或电泳分析的相关性良好 (r >0 98) .TdT法定量Lmax敏感、特异、准确 ,可应用于分子生物学、细胞生物学 。

多药耐药相关蛋白1、谷胱甘肽S转移酶和DNA拓扑酶Ⅱ在骨肉瘤中的表达

目的探讨骨肉瘤组织中多药耐药相关蛋白1(MRP1)、谷胱甘肽S转移酶(GST-π)和DNA拓扑酶Ⅱ(TopoⅡ)的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学方法检测10例正常成年骨组织和40例骨肉瘤组织中MRP1、GST-π和TopoⅡ的表达,并结合临床病理指标进行分析。结果10例正常骨组织和骨肉瘤中MRP1、GST-π和TopoⅡ阳性率分别为47.5%和0%、70.0%和20.0%、35.0%和80.0%(P<0.05),且随着骨肉瘤分化程度的降低,MRP1和GST-π表达率升高。根据肿瘤大小、患者性别、年龄及就诊前病程长短等分组,MRP1、GST-π和TopoⅡ表达无统计学意义,但与Enneking外科分期相关。结论骨肉瘤组织中有MRP1、GST-π和TopoⅡ的表达与骨肉瘤的恶性程度呈正相关,提示MRP1、GST-π和TopoⅡ可能为骨肉瘤原发耐药的重要原因之一。

膀胱癌P糖蛋白、谷胱甘肽S转移酶-π、DNA拓扑异构酶Ⅱ-α表达及其意义

目的 :探讨膀胱癌中 P糖蛋白 (Pgp)、谷胱甘肽 - S-转移酶 -π(GST-π)、DNA拓扑异构酶 -α(Topo -α)表达情况及其临床意义。方法 :采用免疫组织化学 SP法 ,检测 10 7例原发性膀胱移行细胞癌中 Pgp、GST-π、Topo - α的表达情况。结果 :Pgp、GST- π总阳性表达率分别为 6 3.6 %、72 .9% ,二者的表达与该肿瘤的病理分级、临床分期和术后腔内化疗的复发密切相关。所有膀胱癌细胞均有不同程度的 Topo - α表达降低 ,其中 Topo - α指数 、 、 、 级分别为 45 .0 %、36 .3%、12 .5 %、6 .3% ,Topo - α指数与病理分级有关、但与临床分期和术后腔内化疗的复发无关。 Pgp与 GST- π、GST- π与 Topo - α指数密切相关 ,Topo - α指数与 Pgp表达无关联。结论 :Pgp、GST-π表达情况和 Topo -α指数是判定原发性膀胱移行细胞癌恶性程度的客观指标 ;在预测以塞替派和丝裂霉素为主的术后腔内化疗敏感性方面 ,Pgp、GST-π表达情况较 Topo -α指数更为有效。

DNA甲基化转移酶1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的观察DNA甲基化转移酶1(DNMT1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织、癌旁组织及正常肺组织中的表达,通过其表达水平的分析,探讨其与临床特征的关系。方法选取睢宁县人民医院胸外科手术切除的肺癌标本,分别取癌组织54例,癌旁组织48例,另取周边正常组织24例为对照组,行免疫组化检测,分析各组织中DNMT1表达差异及与临床各指标之间关系。结果 DNMT1在NSCLC的癌组织、癌旁组织、正常肺组织中阳性表达率分别39/54(72.2%)、30/48(62.5%)、0/24(0%),与正常肺组织比较差异有统计学意义(P<0.01)。DNMT1的表达与NSCLC组织的分化程度、TNM分期、患者的年龄、性别、吸烟、病理类型无相关性。结论 DNMT1在NSCLC癌组织、癌旁组织中出现高表达,在正常肺组织中表达缺失,提示DNMT1参与NSCLC发病机制,可以作为病理诊断NSCLC的标志物。DNMT1与NSCLC的临床特征之间无相关性,不能作为预后的指标。

隐睾发生过程中DNA甲基化状态和甲基化转移酶表达的实验研究

目的研究环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二（2-乙基已基）酯[Di—（2-ethylhexy）phthalate，DEHP]作用于孕鼠后，胎鼠睾丸组织基因组DNA甲基化水平的变化及3种DNA甲基化转移酶的表达情况；探讨DEHP所致表观遗传修饰改变在睾丸下降过程中的作用。方法妊娠昆明小鼠（KMmice）随机分为3组，即正常对照组、玉米油对照组和DEHP实验组，每组15只。玉米油对照组和DEHP实验组自妊娠第12．5天到妊娠第18．5天分别持续经口予以玉米油和DEHP，用量按每日500mg／kg，正常对照组不予灌药。采用高效液相色谱仪检测基因组DNA甲基化水平，实时荧光定量PCR检测3种DNA甲基化转移酶的表达量。结果正常对照组和玉米油对照组DNA甲基化水平和3种甲基化转移酶的表达均无统计学意义（P〉0．05）：DEHP实验组DNA甲基化水平比对照组增高约10％。与对照组相比，差异有显著统计学意义（P〈0．05）；实验组3种甲基化转移酶的表达量均比对照组高，与对照组相比，差异有显著统计学意义（Dnmt1，P〈0．05；Dnmt3a，P〈0．01；Dnmt3b，P〈0．05）。结论环境内分泌干扰物DEHP通过影响3种甲基化转移酶的表达而导致基因组DNA甲基化水平升高，从而抑制睾丸下降过程中多种基因的表达，发生隐睾。DNA甲基化等表观遗传学修饰的改变可能是DEHP诱发隐睾的分子机制之一。