耐药淋球菌差异DNA消减文库的构建及初步筛选

目的克隆和研究耐药性淋球菌相关基因.方法从耐药淋球菌株RSM292C4和淋球菌标准参考菌株WHO-A细胞中提取DNA,经Rsa Ⅰ酶切后,应用抑制性消减杂交技术构建耐药性淋球菌差异DNA消减文库并进行初步筛选.结果耐药淋球菌差异DNA消减文库经扩增获得约2 500个白色克隆,随机挑取96个白色克隆,进行PCR扩增鉴定,发现克隆中插有100～600 bp大小的片段.分别以RsaI酶切样本和参照DNA为探针,与随机挑取的96个白色菌落质粒作点杂交,有5个克隆仅能与样本DNA探针杂交,而不能与参照DNA探针杂交,表明它们为RSM292C4基因组DNA所特有,可能代表某些淋球菌新基因.对这5个克隆插入的DNA片段进行测序,经送基因库和淋球菌基因组部分测序基因库检索分析,发现5个片段均为未知新序列.结论淋球菌耐药菌株DNA消减文库的构建为进一步筛选、克隆淋球菌耐药的新基因奠定了基础.

骨髓增殖性肿瘤患者骨髓间充质干细胞生物学特性及其JAK2突变的研究

目的研究骨髓增殖性肿瘤（MPN）患者骨髓间充质干细胞（BMSC）的生物学特性，检测其BMSC是否存在JAK2基因突变。方法体外分离培养健康志愿者和初诊MPN患者BMSC，光学显微镜下行细胞形态学观察；流式细胞术鉴定BMSC表面标志；检测BMSC成脂、成骨、成软骨分化能力；检测MPN患者BMSC以及外周血或骨髓单个核细胞是否存在JAK2V617F、JAK2基因12号外显子（JAK2exon12）突变。结果MPN患者的BMsc细胞形态、表面标志、分化能力与正常对照相比无明显差异。检测到21例真性红细胞增多症（PV）、17例原发性血小板增多症（ET）及1例原发性骨髓纤维化（PMF）患者外周血（或骨髓）标本存在JAK2V617F突变，但未发现其BMSC存在该突变。检测到2例PV和1例ET患者外周血（或骨髓）标本存在JAK2exon12突变，但未发现其BMSC存在该突变。结论MPN患者BMSC与健康志愿者BMSC的生物学特性无明显差异；在外周血或骨髓单个核细胞JAK2基因突变阳性及阴性的MPN患者中，均未检测到其BMSC存在该突变。