单管巢式PCR扩增梅毒螺旋体polA的建立及临床应用(英文)

目的建立一种检测临床标本中微量梅毒螺旋体(Tp)的简便、特异、敏感的方法,作为血清学方法的补充诊断梅毒。方法运用双管巢式PcR(SN-PCR)和单管巢式PCR(DN-PCR)扩增了Tp的DNA多聚酶Ⅰ基因(polA)的特异性片段,进行特异性和敏感性试验;用SN-PCR 和DN-PCR检测86份可疑梅毒的临床全血标本中TP polA,同时对相应血清标本用TPPA法检测。结果SN-PCR和DN-PCR polA PCR只在扩增Tp时有特异性产物,灵敏度均约为1个生物。检测86份临床标本,TPPA法阳性62份,DN PCR和SN-PCR PCR阳性数分别为54和 51,结果无显著性差异;TPPA法阴性24份,DN-PCR、SN-PCR阳性数均为5例,。结论SN-polA PCR具有高度敏感、特异、操作简便、不易污染等优点,适用于血液等标本中微量Tp的检测,是血清学方法诊断梅毒的有效补充。

半巢式聚合酶链反应扩增全血中梅毒螺旋体polA基因

目的探讨半巢式聚合酶链反应(PCR)扩增梅毒螺旋体(Tp)的DNA多聚酶Ⅰ基因(polA)以探讨检测全血标本中微量Tp的可行性。方法应用半巢式PCR和常规PCR分别扩增165例可疑梅毒及非梅毒患者全血中Tp的polA,与血清学方法比较,探讨半巢式PCR方法在扩增全血中Tp DNA的意义。结果待测的165例标本中,与血清学方法比较,半巢式PCR检测Tp的敏感性和特异性分别为62.7%和95.9%,两者符合率为82.4%;两种PCR方法检测结果差异有显著性(P<0.01),半巢式PCR敏感性远高于常规PCR。结论半巢式polA PCR检测全血中Tp较常规PCR灵敏,是血清学方法诊断梅毒的有效补充,但其检测的灵敏度仍有待进一步提高。

基于DNA聚合酶I的新型电化学传感器及其胰腺癌K-ras基因点突变检测

本文构建DNA聚合酶Ⅰ的新型DNA电化学传感器，将捕获探针通过Au—S键固定于Au基底表面，与互补靶序列杂交至点突变前一个碱基，通过DNA聚合酶Ⅰ将dUTP-biotin连接在目标DNA的检测位点。再与avidin-HRP反应，而后测定在TMB溶液中的电化学特性．结果表明，DNA电化学传感电极的检测电流值与K-ras突变型基因浓度（1．0×10^-15～1．0×10^-10mol·L^-1）对数呈良好的线性关系，且灵敏度高，特异性较佳．

PCR法和TP-ELISA法检测梅毒的结果分析

目的:探讨巢式PCR法在血液样本梅毒检测中适用性。方法:运用常规及巢式PCR扩增了梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)的DNA多聚酶I基因(DNA polymerase I,polA)的特异性片段,与血清学方法比较,评价了两方法在诊断梅毒中的意义。结果:用PCR法和TP-ELISA检测89份拟诊为梅毒的血液标本,TP-ELISA方法与巢式polA(DNA polymerase I)PCR结果差异有统计学意义;巢式PCR敏感性高于常规PCR。结论:巢式polA(DNA poly-merase I)PCR虽然具有高度敏感、特异等优点,但对全血、血清等标本要求较高,是否适合用于血液样本的检测有待进一步研究。

PCR法在早期梅毒诊断中的应用

目的提高早期梅毒诊断的敏感性和特异性。方法采用PCR技术对梅毒螺旋体(Tp)的DNA多聚酶Ⅰ基因(polA)特异性片段进行扩增,共检测385份生殖器溃疡分泌物,同时做暗视野镜检和TpELISA血清学试验。结果 PCR法共检测出阳性75例,敏感性和特异性分别为74.5%、99.3%;PCR法与暗视野镜检及TpELISA结果比较差异有统计学意义。结论 PCR法在早期梅毒诊断中具有快速、有效、结果可靠的优点,可作为血清学的补充试验。