血清PIVKA-Ⅱ、AFP与HBV-DNA联合检测对HBV所致肝癌的诊断及预后预测价值

目的探究血清异常凝血酶原Ⅱ(PIVKA-Ⅱ)、甲胎蛋白(AFP)与乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)联合检测对HBV所致肝癌(HCC)的诊断及预后预测价值。方法选取2018年8月至2020年7月在本院接受治疗的98例HCC患者作为研究对象(肝癌组),另取同期95例体检健康人群作为健康组,95例肝硬化患者作为肝硬化组,观察3组受试者血清PIVKA-Ⅱ、AFP与HBV-DNA表达水平和一般资料差异。根据肝癌组3年内预后情况将患者分为生存组(57例)和死亡组(41例)。比较肝癌组一般资料和血清PIVKA-Ⅱ、AFP与HBV-DNA水平关系;多因素Logistic和COX回归分析分别分析影响受试者患肝癌和患者预后不良的影响因素;四格表法计算血清PIVKA-Ⅱ、AFP与HBV-DNA水平对HCC的预测价值;ROC曲线分析评估血清PIVKA-Ⅱ、AFP与HBV-DNA水平对HCC患者预后的预测价值。结果肝癌组患者血清PIVKA-Ⅱ、AFP与HBV-DNA水平显著高于健康组和肝硬化组(P<0.05);HCC发病与血清PIVKA-Ⅱ、AFP与HBV-DNA水平有关,且是危险因素(P<0.05)。HCC患者预后不良与血清PIVKA-Ⅱ、AFP与HBV-DNA水平以及肿瘤数量有关(P<0.05),且是危险因素。血清PIVKA-Ⅱ、AFP与HBV-DNA水平以及3项联合诊断HCC发病的准确度分别为77.43%、72.57%、77.43%和84.72%。血清PIVKA-Ⅱ、AFP与HBV-DNA水平以及3项联合诊断HCC预后不良的AUC分别为0.823、0.841、0.824和0.958,3项联合诊断效能优于单一诊断(P<0.05)。结论血清PIVKA-Ⅱ、AFP与HBV-DNA水平在HCC患者和预后不良患者中呈高表达,且3项联合可有效预测HCC发病和HCC患者预后情况。

骆驼蓬种子提取物及其β咔保啉生物碱对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的抑制作用

目的探讨去氢骆驼蓬碱、骆驼蓬碱、骆驼蓬总碱及哈尔满碱(止咳药用植物)对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的抑制作用。方法从体外培养的Q3肝癌细胞中,提取分离DNA拓扑异构酶Ⅱ;以阿霉素为阳性对照,用琼脂糖凝胶电泳法检测药物对DNA拓扑异构酶Ⅱ的作用。结果骆驼蓬总碱、去氢骆驼蓬碱、骆驼蓬碱及哈尔满碱对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性均有一定的抑制作用。结论对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的抑制作用是骆驼蓬总碱、去氢骆驼蓬碱、骆驼蓬碱等生物碱抗癌作用和细胞毒作用的机制之一。

毛叶茶和龙井茶提取物的抗瘤作用以及对DNA拓扑异构酶Ⅱ的抑制作用

作者用噻唑蓝(MTT)法研究了毛叶茶提取物(毛茶C)和龙井茶提取物(龙井A)对人宫颈癌HeLa细胞、鼻咽低分化鳞癌CNE_2细胞和胃低分化粘液腺癌MGC—803细胞的细胞毒作用。毛茶C对上述3种细胞株的半数抑制浓度(IC_(50))分别为495.6μg/ml、243.4μg/ml、268.6μg/ml;而龙茶A分别为421.1μg/ml、311.4和274.6μg/ml。体内抑瘤试验表明,毛茶C在2.5—10mg//kg剂量范围内,对小鼠艾氏腹水癌实体型(ESC)有明显抑制作用,抑瘤率为17.8％—48.3％;对小鼠网织细胞肉瘤(L_2)的抑瘤率为28.3％—54.5％;龙茶A在2.5—10mg/kg剂量范围内对艾氏实体瘤ESC的抑制率为31.5％—49.4％;对L_2的抑瘤率为35.8％—50％。而二种茶叶提取物对小鼠肉瘤S—180仅有边缘的抗瘤活性。用琼脂糖凝胶电泳方法则得毛茶C和龙茶A在1—50μg/ml浓度范围内,对DNA拓扑异构酶Ⅱ的抑制率分别为75—100％,抑酶作用有明显的量效关系。在50μg/ml浓度均可抑制全部酶活性,推测DNA拓扑异构酶Ⅱ可能是这两种茶叶提取物的靶酶。

钌(Ⅱ)多吡啶配合物与DNA相互作用研究

DNA是遗传信息的携带者和基因表达的物质基础,金属配合物与DNA的相互作用研究已受到广泛关注,成为生物无机化学的重要研究内容之一。本文简要评述了钌(Ⅱ)多吡啶配合物在DNA识别、断裂及拓扑异构酶抑制方面的研究情况。

以DNA拓扑异构酶Ⅱ为靶点的一种抗癌药筛选的新方法

借鉴文献方法,我们以小鼠L_(1210)白血病细胞为村料,提取DNA拓扑异构酶Ⅱ,鉴别了其生物学特性,并观察了十多种已知及未知的抗癌药物对其活性的影响,初步建立了以DNA拓扑异构酶Ⅱ为靶点的新抗癌药筛选方法。实验表明DNA拓扑异构酶Ⅱ对DNA链切割反应是可逆的,并且高浓度的氯化钠对其活性有抑制作用。许多药物能促进拓扑酶Ⅱ引起的DNA链断裂如ADM、DNR、Vp16及ACM—B等,而另一些药物如萜类化合物BC_1、BC_4等则能抑制链断裂反应。

基于DNA拓扑异构酶Ⅱ基因部分序列的侧耳属系统发育分析

对侧耳属(Pleurotus)14个种的14个菌株,亚侧耳属(Hohenbuehelia)1个种和离褶伞属(Lyophyllum)1个种的DNA拓扑异构酶II(EC5.99.1.3)部分序列进行扩增分析。以灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、新型隐球酵母(Cryptococcus neoformans)和玉米黑粉菌(Puccinia polysora)等担子菌为外群,采用最大距离法、最大简约法和最大似然法构建侧耳属的系统发育树。结果表明:作为外群的3个物种独立于所有供试材料;侧耳属菌株作为一大类与供试的离褶伞属和亚侧耳属分开。侧耳属14个种又可细分成6支:可能为侧耳属起源最早的P.flabellatus、P.salmoneostramineus和P.djamor组成一组;P.tuberregium和P.pulmonarius均自成一组;P.abalonus和P.cystidiosus均产生束梗孢,聚为同组;P.eryngiivar.eryngii、P.eryngiivar.ferulae和P.nebrodensis为一组;另一组由P.ostreatus、P.columbinus、P.cornucopiae和P.citrinopileatus组成。按照侧耳属物种菌丝类型的不同,构建的系统发育树将该属14个种进行系群划分,单、二系菌丝分属于各个不同的分支中,说明单、二系菌丝均为多系起源,与用28S rDNA序列进行系统分析的结果一致。

乳腺癌组织DNA TOPOⅡα、p53的表达与化疗耐药的关系

目的 检测DNA拓扑异构酶Ⅱα(TOPOⅡα)、p53在乳腺癌组织的表达 ,并探讨其与化疗耐药的关系。方法 采用免疫组化S P法检测 91例未经抗肿瘤治疗的原发乳腺癌和 1 8例术后经化疗复治的乳腺癌组织中TOPOⅡα、p53蛋白的表达。结果 TOPOⅡα在原发乳腺癌中阳性率为42 % ,阳性率与肿瘤类型、组织学分级、肿瘤大小、临床分期有关 (P <0 0 5 ,其中组织分级P <0 0 1 ) ;术后经化疗复治乳腺癌中阳性率为 1 7% ,与原发癌相比显著降低 (P <0 0 5) ;突变型p53在原发乳腺癌与化疗复治乳腺癌阳性率差异无显著性 (P >0 0 5) ;p53蛋白表达与TOPOⅡα无相关性 (P >0 0 5)。结论 TOPOⅡα表达可作为反映肿瘤增殖和恶性度的指标。TOPOⅡα参与化疗耐药性形成。

DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达与颅咽管瘤预后的关系

目的检测颅咽管瘤组织中DNA拓扑异构酶Ⅱα(DNATopoⅡα)的表达情况,分析其表达与肿瘤复发的关系,探讨其是否可作为判定颅咽管瘤预后的一个有效指标。方法设计前瞻性队列研究方案,采用免疫组化方法和图像分析技术测定63例颅咽管瘤组织切片中DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达水平,评价颅咽管瘤釉质上皮瘤与鳞状乳头瘤病理亚型、复发组与非复发组、原发组与复发组之间肿瘤细胞的增殖能力。结果32例釉质上皮瘤14例复发,31例鳞状乳头瘤6例复发;釉质上皮瘤与鳞状乳头瘤病理亚型之间以及复发组与非复发组肿瘤之间DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达水平有显著性差异(P<0.05),而原发组与复发组肿瘤之间DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达水平无统计学差异(P>0.05)。结论颅咽管瘤的病理亚型以及DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达水平与肿瘤的预后和复发有关,可作为预测肿瘤复发危险性的一个参考指标;DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达水平在原发组和复发组肿瘤之间无显著性差异,提示肿瘤在复发过程中瘤细胞的增殖活性无明显变化。

海南粗榧新碱衍生物HH07A对肿瘤细胞内DNA拓扑异构酶Ⅱ和蛋白激酶C活性的影响

ＨＨ０７Ａ５．５μｍｏｌＬ－１作用Ｌ１２１０细胞２４ｈ后，可使细胞的ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ活性下降；在无细胞系统，ＨＨ０７Ａ０．５５ｍｍｏｌＬ－１也能直接促进ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ引起的ＤＮＡ链断裂．经ＨＨ０７Ａ（Ｌ１２１０细胞５．５μｍｏｌＬ－１，ＨＬ－６０细胞８．２５μｍｏｌＬ－１）作用２４ｈ后，Ｌ１２１０及ＨＬ－６０细胞的胞浆蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性升高，胞膜ＰＫＣ活性下降，而全细胞ＰＫＣ活性变化不大．在无细胞系统中，ＨＨ０７Ａ１．１ｍｍｏｌＬ－１能明显抑制ＰＫＣ的活性．

竹叶防风中的香豆素类及其抑制DNA拓朴异构酶Ⅱ的作用

首次从竹叶防风(Seseli mairei Wolff)的根中分得7种香豆素类成分,经光谱分析和化学方法鉴定它们的结构为:异爱得尔庭(isoedultin)、前胡亭(peucendin)、哥伦比亚内酯(columbianadin)、5-甲氧基补骨脂素(5-methoxypsoralen)、补骨脂素(psoralen)、乙酰伞形花内酯(ace-tylumbelliferone)和表迪可醇(3’-epidecursinol)。其中哥伦比亚内酯、5-甲氧基补骨脂素、补骨脂素和乙酰伞形花内酯在剂量10μm时显示一定的抑制DNA拓朴异构酶Ⅱ的作用。

应用组织芯片探讨宫颈癌前病变及宫颈癌中DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达及其临床意义

目的：探讨DNA拓扑异构酶Ⅱα（TopoⅡα）蛋白在宫颈癌前病变及宫颈癌中的表达及其在宫颈癌发生发展中的作用。方法选取2007-2008年在山西省肿瘤医院行宫颈病变诊治的患者，其中包括慢性宫颈炎，低级别和高级别宫颈上皮内瘤变（CIN）和宫颈浸润性鳞癌（SCC）的患者分别21、33、30、73例，制作组织芯片，应用免疫组织化学法（SP）检测宫颈组织中TopoⅡα蛋白的表达情况。结果结果TopoⅡα蛋白在慢性宫颈炎上皮组织、CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ、SCC中的表达率分别是5％，12％，90％，97％，表达率逐渐增加，高级别CIN和浸润性鳞癌的表达显著高于低级别CIN和正常宫颈组织，差异有统计学意义；而高级别CIN与浸润性癌之间、低级别CIN与正常宫颈上皮之间的表达差异均无统计学意义。结论 TopoⅡα蛋白表达随着宫颈癌前病变的严重程度的加重而增加，因此T o poⅡα蛋白可能参与了宫颈上皮的异常增生和恶性转变。

芦笋提取物对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性作用的研究

通过体外ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ介导ＤＮＡ裂解实验观察了芦笋提取物对该酶活性的影响。从小鼠白血病Ｌ１２１０细胞中提取ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ，以ｐＢＲ（３２２）ＤＮＡ为底物，将１μｇＤＮＡ与０．２Ｕ拓扑异构酶Ⅱ温孵，当分别加入芦笋提取物２２０、２２、２．２μｇ／ｍｌ３个终浓度时，裂解能力可提高到原来的５倍，说明该药的直接作用靶点是ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ，而不是直接裂解ＤＮＡ。

消化道恶性肿瘤组织中P糖蛋白、DNA拓扑异构酶Ⅱ及谷胱甘肽转移酶π亚型的表达

目的:检测P糖蛋白(P-gp)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)和谷胱甘肽转移酶π亚型(GsTπ)在消化道恶性肿瘤组织中的表达,并初步探讨其临床意义。方法:用免疫组化法检测P-gp、TopoⅡ和GSTπ在47例消化道恶性肿瘤(食管癌15例,胃癌12例,结直肠癌15例,肝癌4例,胆囊癌1例)组织中的表达,并对其与病理参数的关系进行了研究。结果:(1)在食管癌、胃癌及结直肠癌组织中,P-gp表达阳性率分别为0、16.7％和66.7％;TopoⅡ表达阳性率分别为86.7％、91.7％和100％;GSTⅡ表达阳性率分别为20.0％、25.0％和48.9％。(3)P-gp和GSTπ表达有明显相关性(r=0.979,P<0.05)。(2)P-gp和GSTπ表达的阳性率在胃癌肠型与弥漫型、高和中分化型腺癌与低分化型腺癌之间均无统计学差异(P>0.05);而结直肠癌高分化型腺癌组织中P-gp的表达阳性率显著高于中分化型腺癌(P<0.05)。结论:P-gp、TopoⅡ与GSTπ在食管癌和胃癌的多药耐药表型中的作用有限;结直肠癌的耐药表型与P-gp表达密切相关。

动物组织及细胞DNA拓扑异构酶Ⅱ提取及解结活性的比较研究

本文用改进的方法从一些动物组织中抽提了DNA拓扑异构酶Ⅱ,并用电镜、电泳方法对该酶解结活性进行了鉴定。酶活力测定结果表明该酶在不同组织中分布不尽相同,增殖较旺盛的组织具有相对较高的酶活性。pH值、温度、一些激动剂、抑制剂及组织的状态均对酶活力有影响。

DNA拓扑异构酶Ⅱ在食管癌的表达及意义

目的:观察DNA拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)在食管癌的表达,初步探讨其临床生物学意义。方法:应用S-P免疫组织化学方法检测原发性食管癌103例,其中鳞状细胞癌100例,腺癌3例和癌周正常黏膜组织32例TOPOⅡ的表达。结果:TOPOⅡ在食管癌的表达明显高于癌周组织,癌周鳞状上皮基细胞可见少数核阳性表达。鳞状细胞癌高于腺癌的表达。食管鳞状细胞癌的分化程度与TOPOⅡ的表达呈正相关。结论:TOPOⅡ在食管癌周的表达早于食管癌分生过程中的细胞形态变化,可能成为食管癌发生的早期标志物。TOPOⅡ食管癌表达低,符合其比食管鳞状细胞预后差,对放疗、化疗不敏感的事实。TOPOⅡ在高中分化食管鳞状细胞癌的表达低分化者,提示食管癌高分化者对拓扑异构酶抑制剂化疗药敏感、预后好。

原发性肝细胞癌中P-gp、TopoⅡα和P53的表达及意义

目的研究原发性肝细胞癌(pri mary hepatocellular carcinoma,PHC)组织中多药耐药基因P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、拓扑异构酶Ⅱα(topoisomeraseⅡalpha,TopoⅡα)和P53的表达及共表达情况,分析其表达与PHC临床特征的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测P-gp、TopoⅡα和P53的表达,并结合临床特征进行分析。结果 P-gp、TopoⅡα和P53阳性表达率分别为80.74%(109/135)、46.67%(63/135)和33.33%(45/135),P-gp阳性率明显高于TopoⅡα、P53(P=0.000),TopoⅡα阳性率高于P53(P<0.05)。P-gp阳性率与患者年龄、肿瘤细胞分化程度、肿瘤大小有关,患者血清AFP升高者P-gp、TopoⅡα阳性率均高于AFP正常者(P<0.05),血清AST升高者P-gp、P53阳性率均高于AST正常者(P<0.05)。TopoⅡα和P53阳性率与患者年龄、肿瘤细胞分化程度、肿瘤大小无关(P>0.05)。两种和三种基因产物共表达阳性率为51.85%(70/135),明显高于单一基因产物表达阳性率34.07%(χ2=8.706,P<0.01)。结论肝癌多药耐药是由多种耐药基因产物共同作用的结果,单基因和多基因共同作用,以多基因共表达为主。联合检测肝癌患者的多药耐药基因产物,对于临床合理用药、提高化疗疗效具有指导意义。

大肠癌组织中P-gp和GST-π及TopoⅡ的表达及其临床意义的研究

目的:探讨多药耐药P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、谷胱甘肽转移酶(glutathione-S-trannsferaseπ,GST-π)和拓扑异构酶(DNA topoisomeraseⅡ,TopoⅡ)在大肠癌组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化SP法联合检测P-gp、GST-π和TopoⅡ在84例大肠癌组织和20例正常大肠黏膜组织中的表达,并结合临床病理参数进行分析。结果:P-gp、GST-π在大肠癌组织中的表达率分别为71.4%(60/84)和75.0%(63/84),高于正常大肠黏膜组织(8/20和11/20),χ2值分别为6.91和3.14,P均<0.05;P-gp表达强度与临床分期相关,高分期P-gp表达(86.7%、39/45)较低分期(65.5%、19/29)高,χ2=5.28,P<0.05;TopoⅡ在大肠癌组织中的阳性率为45.3%(38/84),低于正常大肠黏膜组织65%(13/20),χ2=0.382,P>0.05;高、中和低分化腺癌P-gp(87.5%、80.7%和54.5%)和GST-π(87.5%、82.5%和54.5%)的表达率由高到低;TopoⅡ的表达率由低到高(37.5%、45.6%和63.6%)。淋巴结转移组P-gp和GST-π的表达显著高于无淋巴结转移组,P<0.05。结论:P-gp、GST-π和TopoⅡ均在大肠癌原发性多药耐药中起重要作用。联合检测P-gp、GST-π和TopoⅡ对于大肠癌化疗方案选择具有一定的指导意义。

拓扑异构酶Ⅱα和Ki-67表达与子宫肉瘤预后的相关性研究

目的通过检测DNA拓扑异构酶Ⅱα(TopoⅡα)、细胞核相关抗原-67(Ki-67)的表达水平,评价子宫肉瘤细胞增殖的生物学行为,寻找其预后相关因素。方法回顾性分析解放军总医院因子宫肉瘤行肿瘤切除手术的患者48例。按照国际妇产科联盟(FIGO)分期标准,分为Ⅰ期22例,Ⅱ期12例,Ⅲ期8例,Ⅳ期6例。按照美国妇科肿瘤组(GOG)病理组织学分类,包括子宫平滑肌肉瘤(LMS)19例,子宫内膜间质肉瘤(ESS)21例,子宫恶性中胚叶混合瘤(MMMT)8例。应用免疫组织化学(IHC)方法检测TopoⅡα、Ki-67在子宫肉瘤中的表达水平并分析其与子宫肉瘤预后的相关性。结果TopoⅡα和Ki-67的高增殖(LI)组(阳性表达细胞数>25%)患者的2年、5年生存率与低LI组(阳性表达细胞数≤25%)患者比较均无明显差别,但总体生存率高LI组均明显低于低LI组(分别为P=0.002,P=0.004)。TopoⅡα和ki-67低LI组患者的复发包块体积均大于高LI组(P=0.005,P=0.000),且复发时间均明显长于高LI组(P=0.000,P=0.000)。TopoⅡα与Ki-67表达呈明显正相关(r=0.9355,P=0.000)。COX多因素分析表明,除病理类型及分期外,TopoⅡα和Ki-67的表达与患病年龄、初潮年龄、孕产次、月经周期及经期、是否绝经均无关。结论TopoⅡα与Ki-67均可作为细胞增殖的特异性标记物,但TopoⅡα在反映细胞精确的增殖状态方面较Ki-67可能有更好的特异性,结合病理类型及分期,可能对判断子宫肉瘤的预后具有重要指导意义。

p63、P-gp、GST-π及Topo-Ⅱ在食管鳞癌组织中的表达

目的:观察比较p63、P-糖蛋白(P-gp)、谷甘胱肽-S-转移酶π(GST-π)、DNA拓扑异构酶(Topo-Ⅱ)在食管癌中的表达情况,并探讨其关系和临床意义。方法:采用免疫组化方法对168例食管鳞癌组织中p63、P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ蛋白进行检测,分析其与病理特征的关系及协同表达的意义。结果:p63、P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ蛋白在食管鳞癌中的阳性表达率分别为81.0%、57.1%、71.4%、78.6%。p63的表达与肿瘤的临床分期、浸润深度、淋巴结转移相关(P<0.05),P-gp和TopoⅡ的表达与淋巴转移有关(P<0.05),GST-π的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05)。p63的阳性表达与P-gp、GST-π呈正相关(r=0.193、0.197,P<0.05),P-gp与GST-π表达呈正相关(r=0.224,P<0.05),P-gp与TopoⅡ表达呈负相关(r=-0.218,P<0.05)。结论:p63、P-gp、GST-π及Topo-Ⅱ均与食管癌发生发展有关,对肿瘤化疗方案的选择和预后判断有重要的临床意义。

卵巢癌拓扑异构酶Ⅱα表达与化疗敏感性的关系

目的 :研究卵巢癌拓扑异构酶Ⅱα表达与化疗敏感性的关系。方法 :采用免疫组化Envision法检测 81例上皮性卵巢癌TopoⅡα的表达 ,并予以 3～ 8个疗程以铂类为主的联合化疗。结果 :低分化卵巢癌TopoⅡα的表达明显高于中、高分化者 (P =0 .0 4 7) ,术前行化疗的卵巢癌TopoⅡα表达明显低于术前未化疗者 (P =0 .0 0 2 ) ,而复发性卵巢癌TopoⅡα表达再次升高 ;不考虑MDR1因素时 ,TopoⅡα与化疗敏感性间未见明显的相关性 (P =0 .0 73) ,而在排除MDR1影响后 ,TopoⅡα表达与化疗疗效间具有明显相关性 (P=0 .0 2 6 ) ,阳性表达时化疗效果好 ,未发现TopoⅡα的表达强度与化疗疗效间有相关性(P =0 .98)。结论 :TopoⅡα表达与卵巢癌分化程度有关 ,化疗影响TopoⅡα的表达 ,复发病例TopoⅡα表达重新增强 ,MDR1阴性时 ,TopoⅡα表达与化疗敏感性间具有明显相关性。因此 ,可以根据卵巢癌TopoⅡα表达情况 。