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Cloning, Characterization, and FISH Mapping of Four Satellite DNAs from Black Muntjac (Muntiacus crinifrons) and Fea’s Muntjac (M. feae) 被引量:2
1
作者 刘妍 佴文惠 +4 位作者 黄玲 王金焕 苏伟婷 LIN Chyi Chyang 杨凤堂 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期225-235,共11页
Recent molecular cytogenetic studies demonstrate that extensive centromere-telomere fusions are the main chromosomal rearrangements underlying the karyotypic evolution of extant muntjacs. Although the molecular mechan... Recent molecular cytogenetic studies demonstrate that extensive centromere-telomere fusions are the main chromosomal rearrangements underlying the karyotypic evolution of extant muntjacs. Although the molecular mechanism of tandem fusions remains unknown, satellite DNA is believed to have facilitated chromosome fusions by non-allelic homologous recombination. Previous studies detected non-random hybridization signals of cloned satellite DNA at the postulated fusion sites on the chromosomes in Indian and Chinese muntjacs. But the genomic distribution and organization of satellite DNAs in other muntjacs have not been investigated. In this study, we have isolated four satellite DNA clones (BMCS, BM700, BM 1.1 k and FM700) from the black muntjac (Muntiacus crinifrons) and Fea's muntjac (M. feae), and hybridized these four clones onto chromosomes of four muntjac species (M. reevesi, M. crinifrons, M. gongshanenisis and M. feae). Besides the predominant centromeric signals, non-random interstitial hybridization signals from satellite I and II DNA clones (BMC5, BM700 and FM700) were also observed on the arms of chromosomes of these four muntjacs. Our results provide additional support for the notion that the karyotypes of M. crinifrons, M. feae and M. gongshanensis have evolved from a 2n = 70 ancestral karyotype by a series of chromosome fusions. 展开更多
关键词 FISH mapping satellite dna Muntiacus Tandem chromosome fusion
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基于中医证候与精液质量相关参数构建精子DNA碎片预测模型与验证
2
作者 周超 庾广聿 +4 位作者 阳绍华 高磊磊 金珍 蒋月园 李欢 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第13期2661-2668,共8页
背景:中医证候与精液质量相关参数相结合,共同预测精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)异常增高的发生并绘制列线图,能显著提高临床的实操性与应用效能,为临床全面评估精液质量,采取积极干预措施以改善临床结局及制定个体化... 背景:中医证候与精液质量相关参数相结合,共同预测精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)异常增高的发生并绘制列线图,能显著提高临床的实操性与应用效能,为临床全面评估精液质量,采取积极干预措施以改善临床结局及制定个体化医疗方案提供依据。目的:探讨基于中医证候与精液质量相关参数构建精子DNA碎片的预测模型与验证。方法:回顾性分析2019年7月至2021年7月在广西壮族自治区南溪山医院中医男科接受中医证候诊断及精子DNA碎片率检查的不育患者共420例,据《人类精液检查与处理实验室手册》(第6版),将其中137例精子DFI>30%患者纳入精子DFI异常增高组,将283例精子DFI≤30%作为对照组;首先采用单因素分析筛选精子DFI异常增高的影响因素,然后采用套索算法(LASSO)校正因子共线性问题并筛选出最佳匹配因子后,将其纳入多因素向前逐步Logistic回归找出其独立影响因素并绘制列线图,最后采用受试者工作曲线、校准曲线、临床决策曲线、临床影响曲线对该预测模型进行区分度与准确度及临床应用效能验证。结果与结论:①单因素分析结果显示,年龄、体质量指数、前向运动率、精子总活率、精子浓度、精子形态学、肾阳虚衰证、湿热下注证、肾精不足证为引发精子DFI异常增高的影响因子(P<0.05);②通过LASSO回归进一步筛选出的最佳匹配因素为年龄、体质量指数、精子总活率、精子浓度、精子形态学、肾阳虚衰证、湿热下注证、肾精不足证(P<0.05);③多因素向前逐步Logistic回归结果显示年龄、体质量指数、精子浓度、精子总活率、湿热下注证、肾阳虚衰证共6项为引发精子DFI异常增高的独立影响因素;④受试者工作曲线显示,模型组曲线下面积为0.760(0.713,0.806),验证组曲线下面积为0.745(0.714,0.776),说明该预测模型具有较好的区分度;⑤校准曲线平均绝对误差0.040,Hosmer-Lemeshow检验P>0.05,表明该模型预测发生精子DFI异常增高的概率与实际发生精子DFI异常增高的概率无显著统计学差异,证实该模型具有较好的准确度;⑥临床决策曲线与临床影响曲线显示,模型组与验证组分别在阈概率值为0.08-0.84与0.09-0.78时具有临床最大净获益,且在该阈概率范围内具有较好的临床应用效能;⑦结果表明,年龄、体质量指数、精子浓度、精子总活率、湿热下注证、肾阳虚衰证为引发精子DFI异常增高的独立影响因素,通过其构建的临床预测模型列线图具有较好的临床预测价值与临床应用效能,可为临床全面评估精液质量、预后与干预及个体化医疗服务提供依据。 展开更多
关键词 精子dna碎片 精子dna完整性 中医证候 精子dna碎片指数 预测模型
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新型超声快速处理活检标本保存不同年限对DNA质量的影响
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作者 石晨曦 朱卫东 +3 位作者 李三恩 李秀明 师逢 丁亚云 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第13期2655-2660,共6页
背景:新型超声组织处理技术越来越多地被用来进行分子生物学分析,研究新型超声处理不同存储年限组织DNA的质量,对进一步分子检测的标本质控具有重要意义。目的:探讨新型超声处理活检标本存储不同年限对DNA质量的影响,以期为分子检测探... 背景:新型超声组织处理技术越来越多地被用来进行分子生物学分析,研究新型超声处理不同存储年限组织DNA的质量,对进一步分子检测的标本质控具有重要意义。目的:探讨新型超声处理活检标本存储不同年限对DNA质量的影响,以期为分子检测探索最佳的标本存储时间。方法:收集40例乳腺穿刺小活检组织,采用超声技术制作石蜡标本,按照存储年限分为4组:<1年组、1-3年组、>3-5年组及>5年组,每组10例,对石蜡标本进行切片,每张切片厚3μm,切片10-15张,提取DNA后通过Nanophotometer N60超微量分光光度计和Qubit 4.0荧光计检测DNA的质量浓度,记录A_(260)/A_(280)比值判定DNA的纯度,利用全自动毛细管电泳核酸分析仪(Qsep 100)检测DNA片段完整性,以评估DNA片段的质量。结果与结论:4组样本A_(260)/A_(280)均值在1.8-2.0之间,达到纯度要求,无明显差异。4组样本的DNA质量浓度(Qubit浓度)均值分别为30.39,14.33,2.52,1.95 ng/μL;DNA的平均N/Q比值分别为6.48,14.18,24.56,29.86;DNA质量数均值分别为5.64,1.76,1.24,0.80;大片段占比均值分别为56.08%,17.72%,12.68%,7.90%。PCR检测内控基因Ct均值分别为15.32,17.09,18.39,21.24。与<1年组相比,其余3组DNA浓度显著降低,N/Q比值显著增加,DNA质量数和大片段占比均值显著降低,Ct值升高,差异有显著性意义(P<0.05)。实验结果表明,对于新型超声处理活检标本,应优先选择存储<1年的样本进行日常分子检测,储存3年内的样本可满足二代测序等检测要求,5年内样本仅可尝试进行PCR等检测,存储超过5年的样本不建议进行后续分子检测。 展开更多
关键词 超声处理 存储年限 dna质量 片段完整性 降解程度 二代测序
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Bioinformatic Analysis of BBTV Satellite DNA in Hainan 被引量:1
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作者 Nai-tong Yu Tuan-cheng Feng Yu-liang Zhang Jian-hua Wang Zhi-xin Liu 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2011年第4期279-284,共6页
Banana bunchy top virus (BBTV),family Nanaviridae,genus Babuvirus,is a single stranded DNA virus (ssDNA) that causes banana bunchy top disease (BBTD) in banana plants.It is the most common and most destructive of all ... Banana bunchy top virus (BBTV),family Nanaviridae,genus Babuvirus,is a single stranded DNA virus (ssDNA) that causes banana bunchy top disease (BBTD) in banana plants.It is the most common and most destructive of all viruses in these plants and is widespread throughout the Asia-Pacific region.In this study we isolated,cloned and sequenced a BBTV sample from Hainan Island,China.The results from sequencing and bioinformatics analysis indicate this isolate represents a satellite DNA component with 12 DNA sequences motifs.We also predicted the physical and chemical properties,structure,signal peptide,phosphorylation,secondary structure,tertiary structure and functional domains of its encoding protein,and compare them with the corresponding quantities in the replication initiation protein of BBTV DNA1. 展开更多
关键词 Banana bunchy top virus satellite PREDICTION
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板栗叶片DNA的提取及AFLP反应体系的建立 被引量:28
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作者 程丽莉 苏淑钗 +1 位作者 秦岭 尹伟伦 《北京农学院学报》 2005年第2期5-9,共5页
以初展开的板栗嫩叶为材料,利用改进的CTAB法,提取到高质量的板栗叶片总DNA。通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件,建立了板栗AFLP银染反应体系,得到了清晰的板栗AFLP指纹图谱。为板栗品种的分子标记和板栗品种间亲缘关系... 以初展开的板栗嫩叶为材料,利用改进的CTAB法,提取到高质量的板栗叶片总DNA。通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件,建立了板栗AFLP银染反应体系,得到了清晰的板栗AFLP指纹图谱。为板栗品种的分子标记和板栗品种间亲缘关系等研究奠定了基础。研究结果表明:①DNA模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应。以初展开的嫩叶提取的板栗叶片总DNA纯度最高,所含蛋白质、小分子杂质少,改良的CTAB提取法可用于板栗AFLP分析,形成清晰的AFLP指纹。②先进行酶切后再进行酶连的反应体系比酶切酶连一起进行的体系效果更好。板栗基因组DNA最佳酶切反应体系为:模板DNA总量500ng,反应体积为25μl,10×Y+/TanqoTMBuffer2.5μl,BSA0.8μl,EcoRI5U,MseI5U。连接反应体系中T4DNA连接酶浓度2U即达最佳效果。酶切、酶连反应最佳温度均为37℃。③以板栗为材料进行AFLP标记时,E AAC+M CAA、E AAC+M CAT和E AGT+M CAT三个引物均获得较好的多态性。其中以E AGT+M CAT引物组合的扩增条带信号强度一致性好,条带分布均匀,能够得到稳定、清晰、分辨率较高的指纹谱带,可进行中国板栗的遗传变异分析。 展开更多
关键词 反应体系 叶片dna 板栗 AFLP指纹图谱 种间亲缘关系 AFLP分析 基因组dna AFLP标记 遗传变异分析 CTAB法 选择性扩增 dna模板 dna纯度 模板dna dna连接 dna 试验条件 分子标记 质量影响 研究结果 反应体积 最佳温度 信号强度
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基于活产建立体外受精-胚胎移植精子DNA碎片指数的参考阈值及子代短期安全性
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作者 周超 王淑娴 +2 位作者 于春梅 庾广聿 蒋月园 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第1期111-119,共9页
背景:精子DNA碎片指数与受精、胚胎发育潜能、胚胎植入、流产及子代安全性等存在显著的相关性。然而,其临床参考值受多种因素的影响,导致临床意义极其有限,该研究以活产为结局,通过倾向评分匹配校正其他混杂因素后,构建精子DNA碎片指数... 背景:精子DNA碎片指数与受精、胚胎发育潜能、胚胎植入、流产及子代安全性等存在显著的相关性。然而,其临床参考值受多种因素的影响,导致临床意义极其有限,该研究以活产为结局,通过倾向评分匹配校正其他混杂因素后,构建精子DNA碎片指数与活产的最佳临床截断值,并对其进行内外部验证,具有较好的预测价值及临床应用效能。目的:探讨基于活产建立体外受精-胚胎移植精子DNA碎片指数的参考阈值及子代短期安全性。方法:选取2019年5月至2021年5月于常州市妇幼保健院接受体外受精-胚胎移植患者1921例,以倾向匹配容差0.02为标准,1∶1进行倾向评分匹配,结果活产组与非活产组各成功匹配540例,以此建立模型组;通过选取同时期广西壮族自治区南溪山医院接受体外受精-胚胎移植患者135例作为外部验证组;采用受试者工作曲线探求精子DNA碎片指数对活产的临床最佳截断值,分别采用限制性立方样条曲线、标准曲线、临床决策曲线、临床影响曲线及内外部验证等方法,对该截断值的准确性及临床应用效能进行评估。结果与结论:(1)非活产组精子DNA碎片指数显著高于活产组且与活产存在显著的负相关性(r=-0.444,P<0.001);(2)受试者工作曲线结果显示,DNA碎片指数对活产的最佳截断值为24.33%,曲线下面积为0.775(0.746,0.804),特异度为72.60%,敏感度为78.90%,准确度为75.70%;(3)限制性立方样条曲线拟合Logistic回归结果显示,当精子DNA碎片指数大于24.57%时,临床非活产的风险呈趋势性增涨;(4)Logistic回归概率分析结果显示,精子DNA碎片指数为活产的危险因素[OR(95%CI)=0.916(0.904,0.928),P<0.001],且当精子DNA碎片指数大于27.78%时,临床活产发生的概率将小于50%,随着精子DNA碎片指数每增高1个单位,活产的概率下降8.4%;(5)内外部对该临床截断值的验证均显示,该截点具有一定的临床预测价值及准确性;(6)临床决策曲线与临床影响曲线显示,以该临床截断值建立的预测模型在阈概率为0.22-0.73时具有临床最大净获益值,且在该阈概率范围内损失与获益的比值始终小于1,证实该预测模型具有较好的临床应用效能;(7)精子DNA碎片指数与子代短期安全性分析结果显示,精子DNA碎片指数与出生儿早产、体质量、畸形、性别差异无显著性;(8)结果表明,精子DNA碎片指数对体外受精-胚胎移植活产的最佳临床截断值为24.33%,以此建立的临床预测模型具有较好的区分度、准确度与临床应用效能,精子DNA碎片指数对子代短期安全性影响并不显著,但仍需大样本及长期的追踪评估。 展开更多
关键词 精子dna碎片指数 活产 体外受精-胚胎移植 子代安全性 最佳截断值
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FTA-环介导等温扩增技术直接提取变异链球菌DNA的效果评价
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作者 王玥晖 尚进 +4 位作者 杨晨 符冬格 曹灿 张晓东 王敬夫 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第5期1043-1049,共7页
背景:变异链球菌是龋病的重要病原菌,及时检测变异链球菌水平对龋病的早发现、早治疗有重要意义。目的:建立并评价FTA-环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术直接提取变异链球菌DNA的应用效果。方法:①制备... 背景:变异链球菌是龋病的重要病原菌,及时检测变异链球菌水平对龋病的早发现、早治疗有重要意义。目的:建立并评价FTA-环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术直接提取变异链球菌DNA的应用效果。方法:①制备含有ATCC标准菌株变异链球菌的菌悬液,接种于脑心浸出液培养基,充分混匀后按10倍梯度稀释成7种浓度(4.2×10^(7),4.2×10^(6),4.2×10^(5),4.2×10^(4),4.2×10^(3),4.2×10^(2),4.2×10 CFU/mL),每个稀释级做2个平行对照,并增加无菌水作为空白对照;②分别采用FTA卡、常规煮沸法、试剂盒提取及裂解液提取4种方法直接提取菌株DNA,通过LAMP技术进行扩增,并进行特异性试验,比较4种提取方法的差异。结果与结论:①4种方法提取的DNA均满足LAMP扩增的要求;②特异性试验结果显示,只有变异链球菌才可特异扩增出靶基因;③裂解液提取法最低检测限为4.2×10^(3) CFU/mL,FTA卡提取法最低检测限为4.2×10^(4) CFU/mL,试剂盒提取法和常规煮沸法最低检测限分别为4.2×10^(6) CFU/mL和4.2×10^(7) CFU/mL;④4种提取方法其他方面的比较显示,试剂盒提取法的实验成本、步骤数和时间都是最高;其他3种方法步骤数一致,其中FTA卡所需仪器设备最少,常规煮沸法单次成本最低,裂解液提取法所需时间最少;FTA卡和裂解液提取法仅需少量菌即可提取成功,后者在时间方面优于FTA卡,但相较于FTA卡其单次成本高,所需设备多;⑤结果说明,该研究建立的FTA-LAMP技术具有操作简便、特异性强、灵敏度高、结果可视化等优势,有望为高效提取检测变异链球菌提供新途径。 展开更多
关键词 变异链球菌 环介导等温扩增 FTA卡 dna 可视化
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DNA存储技术:挑战与未来 被引量:1
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作者 褚利康 何磊 韩达 《集成技术》 2024年第3期116-127,共12页
随着全球数据呈现指数级增长,当前的信息存储技术面临维护成本高昂、存储寿命有限等多个缺陷,逐渐无法满足日益凸显的需求。因此,迫切需要引入新的信息存储方法来解决这一问题。DNA作为一种天然的遗传信息载体,具备高存储密度、潜在低... 随着全球数据呈现指数级增长,当前的信息存储技术面临维护成本高昂、存储寿命有限等多个缺陷,逐渐无法满足日益凸显的需求。因此,迫切需要引入新的信息存储方法来解决这一问题。DNA作为一种天然的遗传信息载体,具备高存储密度、潜在低维护成本和长寿命等优势,因此被视为一种有潜力的新型信息存储介质。该文对DNA数据存储技术的基本原理和流程进行了概述,并回顾了其历史发展。同时,对当前基于DNA存储的领域仍面临的挑战进行了总结,如缓慢的数据写入和读取速度等,以及应对这些挑战的一些潜在策略。最后,为了满足全球对新存储方法的需求,该文指出了DNA数据存储技术的未来发展方向。 展开更多
关键词 dna 数据存储 dna序列 dna纳米技术 信息加密
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DNA存储系统中的数据写入 被引量:1
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作者 张宣梁 李青婷 王飞 《合成生物学》 CSCD 北大核心 2024年第5期1125-1141,共17页
世界的数字化给人们的生活带来了极大的变化,但与此同时,史无前例的数据激增使得信息存储面临的挑战日益严峻。随着全球数据总量的指数级增长,传统存储介质将无法满足数字化带来的存储需求。使用DNA分子作为基本载体的信息存储展现出高... 世界的数字化给人们的生活带来了极大的变化,但与此同时,史无前例的数据激增使得信息存储面临的挑战日益严峻。随着全球数据总量的指数级增长,传统存储介质将无法满足数字化带来的存储需求。使用DNA分子作为基本载体的信息存储展现出高存储密度、低维护成本和易于化学修饰等独特优势。DNA存储主要包括编码、写入、保存、检索、读取和解码六个主要步骤,其中数据的写入是实现DNA存储功能的基础。本文首先介绍DNA存储系统中体外写入数据的策略方法,主要分为将数据写入DNA序列和写入DNA结构两个部分,接着概述体内写入数据技术的发展,最后将讨论DNA存储系统中数据写入面临的写入成本高、写入速度慢等挑战,并对大规模合成高纯度DNA、改进生物酶等具有前景的应用技术进行展望。 展开更多
关键词 dna存储 dna合成 核酸序列 dna纳米技术 框架核酸材料
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Peripheral mitochondrial DNA as a neuroinflammatory biomarker for major depressive disorder
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作者 Jinmei Ye Cong Duan +5 位作者 Jiaxin Han Jinrong Chen Ning Sun Yuan Li Tifei Yuan Daihui Peng 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS 2025年第6期1541-1554,共14页
In the pathogenesis of major depressive disorder, chronic stress-related neuroinflammation hinders favorable prognosis and antidepressant response. Mitochondrial DNA may be an inflammatory trigger, after its release f... In the pathogenesis of major depressive disorder, chronic stress-related neuroinflammation hinders favorable prognosis and antidepressant response. Mitochondrial DNA may be an inflammatory trigger, after its release from stress-induced dysfunctional central nervous system mitochondria into peripheral circulation. This evidence supports the potential use of peripheral mitochondrial DNA as a neuroinflammatory biomarker for the diagnosis and treatment of major depressive disorder. Herein, we critically review the neuroinflammation theory in major depressive disorder, providing compelling evidence that mitochondrial DNA release acts as a critical biological substrate, and that it constitutes the neuroinflammatory disease pathway. After its release, mitochondrial DNA can be carried in the exosomes and transported to extracellular spaces in the central nervous system and peripheral circulation. Detectable exosomes render encaged mitochondrial DNA relatively stable. This mitochondrial DNA in peripheral circulation can thus be directly detected in clinical practice. These characteristics illustrate the potential for mitochondrial DNA to serve as an innovative clinical biomarker and molecular treatment target for major depressive disorder. This review also highlights the future potential value of clinical applications combining mitochondrial DNA with a panel of other biomarkers, to improve diagnostic precision in major depressive disorder. 展开更多
关键词 BIOMARKER cytokine EXOSOMES INFLAMMASOME major depressive disorder MICROGLIA mitochondrial dna mitochondrial dysfunction NEUROINFLAMMATION Toll-like receptor
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cDNA文库构建策略及其分析研究进展 被引量:81
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作者 晏慧君 黄兴奇 程在全 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第1期1-6,共6页
cDNA文库构建和筛选是基因克隆的重要方法之一,它是目前发现新基因和研究基因功能的基本工具。从cDNA文库中可以筛选到目的基因,并直接用于该基因的表达。经典cDNA文库存在克隆的片段短等缺点,而全长cDNA文库则能提供完整的mRNA信息,从... cDNA文库构建和筛选是基因克隆的重要方法之一,它是目前发现新基因和研究基因功能的基本工具。从cDNA文库中可以筛选到目的基因,并直接用于该基因的表达。经典cDNA文库存在克隆的片段短等缺点,而全长cDNA文库则能提供完整的mRNA信息,从而克隆cDNA全长;对文库进行均一化处理即均一化cDNA文库,可以增加克隆低丰度mRNA的机会;差减cDNA文库在研究生物体某一时期基因差异表达上具有重要的意义;改进的固相cDNA很大程度上提高了建库的效率和质量。本文以阐述基本原理为主,介绍几种近年来常用的cDNA构建的方法及其优缺点。 展开更多
关键词 Cdna文库 Cdna全长 基因克隆 均一化cdna文库 差减Cdna文库 固相cdna文库 快速扩增cdna末端(RACE)
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Taq DNA聚合酶的分子改造及其在探针法qPCR直扩体系中的应用
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作者 胡松青 袁家惠 +1 位作者 刘光毅 侯轶 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第4期8-16,共9页
Taq DNA聚合酶作为实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)技术的核心组分,其性能优劣直接影响qPCR技术的进一步发展。然而,野生型Taq DNA聚合酶的耐抑制剂性能差、延伸性能不足。为获得具有高性能的Taq DNA聚合酶,采用基因工程技术将双链DN... Taq DNA聚合酶作为实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)技术的核心组分,其性能优劣直接影响qPCR技术的进一步发展。然而,野生型Taq DNA聚合酶的耐抑制剂性能差、延伸性能不足。为获得具有高性能的Taq DNA聚合酶,采用基因工程技术将双链DNA结合蛋白Sso7d或Sto7d融合在野生型Taq DNA聚合酶的N端或C端,构建了4个均可溶表达的改造体,再经过耐受性测试筛选较优的改造体,结果显示:改造体Taq-Sto的耐受性最高,其热稳定性不受影响,且在1 s/kbp的延伸条件下能成功扩增靶标,表明Taq-Sto具有增强的延伸性能,在TaqMan探针法qPCR体系中对腐殖酸、单宁酸、全血等抑制剂同样表现出良好的耐受性。EMSA实验发现:Taq-Sto对DNA模板的结合亲和力有所提高,有利于增强Taq-Sto对模板的竞争力;将Taq-Sto应用于非洲猪瘟病毒(ASFV)的TaqMan探针法qPCR检测,与商品化试剂相比,Taq-Sto具有更低的ASFV检出限,且在体积分数为2%~6%的猪粪便样本或猪肉样本中的检测灵敏度分别为100.0%和85.4%,说明Taq-Sto在直扩qPCR检测领域更具有优势。 展开更多
关键词 Taq dna聚合酶 双链dna结合蛋白 耐受性 聚合酶链式反应
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DNA损伤修复相关通路的合成致死靶点研究及其在卵巢癌中的应用和前景
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作者 程洪艳 栾文庆 昌晓红 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期740-748,共9页
DNA损伤引发细胞启动一系列DNA损伤应答(DNA damage response,DDR),包括DNA损伤修复、细胞周期检查点激活、细胞周期阻滞、各种细胞内信号转导途径的活化和细胞凋亡等。DNA损伤修复(DNA damage repair)是细胞维持基因组稳定性的重要机制... DNA损伤引发细胞启动一系列DNA损伤应答(DNA damage response,DDR),包括DNA损伤修复、细胞周期检查点激活、细胞周期阻滞、各种细胞内信号转导途径的活化和细胞凋亡等。DNA损伤修复(DNA damage repair)是细胞维持基因组稳定性的重要机制,于2015年获得诺贝尔化学奖。DNA损伤修复途径主要包括:碱基切除修复(base-excision repair,BER)、核苷酸切除修复(nucleotide excision repair,NER)、错配修复(mismatch repair,MMR)、同源重组(homologous recombination,HR)和非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)等,分别在DNA单链断裂(single-strand break,SSB)或双链断裂(double-strand break,DSB)等损伤修复中发挥重要作用。DNA损伤修复缺陷与肿瘤发生发展密切相关,同时也是肿瘤治疗的重要靶点。DNA损伤修复通路的多聚ADP核糖聚合酶(poly-ADP-ribose polymerase,PARP)与乳腺癌易感基因BRCA 1/2等存在合成致死(synthetic lethality)作用,使PARP抑制剂(PARP inhibitor,PARPi)成为第一个也是目前唯一上市的肿瘤治疗合成致死靶药。PARPi在卵巢癌及多种实体瘤治疗中疗效良好,使DNA损伤修复及相关DDR通路的合成致死靶药研发成为热点,其他在研靶点主要包括:共济失调毛细血管扩张突变蛋白(ataxia telangiectasia-mutated protein,ATM)、共济失调毛细血管扩张与RAD3相关蛋白(ataxia telangiectasia and Rad3 related protein,ATR)、DNA依赖性蛋白质激酶催化亚单位(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)、细胞周期检测点激酶1(checkpoint kinase1,CHK1)、细胞周期检测点激酶2(checkpoint kinase 2,CHK2)、阻止有丝分裂的蛋白质激酶WEE1等。PARPi与其他DDR靶药、抗血管生成药物及免疫检查点抑制剂的联用,有可能成为克服PARPi耐药、提高疗效的有效手段和发展前景。本文针对DNA损伤修复及相关DDR通路的关键分子和潜在肿瘤治疗靶点进行综述,阐述了DNA损伤修复相关通路的合成致死靶点研究及在卵巢癌的应用和前景,为基础研究及临床应用提供指导。 展开更多
关键词 卵巢癌 dna损伤应答 dna损伤修复 PARP抑制剂 合成致死 靶向治疗
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不同DNA条形码在微口线虫属形态相近物种分类上的应用
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作者 周仁桂 郭玉清 +1 位作者 朱慧兰 施宜佳 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期52-62,共11页
为建立和完善海洋线虫相近物种的DNA条形码鉴定方法,本研究以深圳福田红树林湿地自由生活的海洋线虫优势属微口线虫属(Terschellingia)为研究对象,在形态分类鉴定基础上,将DNA条形码技术引入海洋线虫形态相似物种的鉴定,研究线粒体细胞... 为建立和完善海洋线虫相近物种的DNA条形码鉴定方法,本研究以深圳福田红树林湿地自由生活的海洋线虫优势属微口线虫属(Terschellingia)为研究对象,在形态分类鉴定基础上,将DNA条形码技术引入海洋线虫形态相似物种的鉴定,研究线粒体细胞色素氧化酶第一亚基(COⅠ)基因、18S核糖体RNA基因(18S rDNA)和28S rDNA三种基因序列片段的物种分类效果。研究共鉴定出微口线虫属4个不同的形态学种,获得其中3个种的DNA序列。18S rDNA及28S rDNA两种条形码所构建的发育树支持将本属划分成6个类群;Kimura 2 parameter(K2P)种内和种间阈值分别为18S rDNA的0%~2.5%和0.4%~13.7%,28S rDNA的0%和20.5%~84.6%。18S rDNA的MN18F-Nem_18S_R引物对所扩增的序列最适合作为微口线虫属种类鉴定的DNA条形码,并可用于区分物种复合体。28S rDNA序列虽然能成功扩增,但扩增效率相对较低;COⅠ基因片段无法在所有物种中成功扩增,推测现有引物可能不适合用于本属序列的提取。研究结果表明,DNA条形码可以用于自由生活海洋线虫形态相似物种的识别,但不同的单基因片段对相同物种的鉴定结果有明显差异。 展开更多
关键词 海洋线虫 微口线虫属 dna条形码 18S rdna 28S rdna
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“DNA粗提取和鉴定”实验设计与改进
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作者 张晓娟 《生物学教学》 北大核心 2024年第2期40-42,共3页
对DNA粗提取与鉴定实验进行优化,探究植物组织的多种破碎方法对DNA粗提取的影响,并用氯仿等有机物对DNA粗提取物进一步纯化,分析DNA未纯化与纯化后的纯度差异。结果显示,相较于破壁机破碎、加液氮研钵研磨以及玻璃匀浆器研磨,不添加液... 对DNA粗提取与鉴定实验进行优化,探究植物组织的多种破碎方法对DNA粗提取的影响,并用氯仿等有机物对DNA粗提取物进一步纯化,分析DNA未纯化与纯化后的纯度差异。结果显示,相较于破壁机破碎、加液氮研钵研磨以及玻璃匀浆器研磨,不添加液氮用研钵研磨效果更好。DNA粗提液经纯化后纯度显著提高,蛋白质及盐类等污染明显减少。 展开更多
关键词 dna的粗提取 实验改进 dna纯化 高中生物学
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利用基于Python/RGB模块的DNA电泳图像分析方法检测绵羊血浆中羊源性成分
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作者 曹诗林 张春鸿 +12 位作者 赖昕珏 袁志涛 郝锦亨 陈慧 马俊炜 李鑫尧 余洁婷 罗佳伟 陈胤熹 郑少鹏 郑焜文 林小茹 陈宛涓 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2024年第6期252-259,共8页
该文探究了运用Python处理食品中DNA分子量与含量测定的新方法,建立了DNA凝胶图像分析方法。将不同分子量的DNA Marker与DNA标准样品进行琼脂糖凝胶电泳并拍照,利用自行开发Python程序分析凝胶图,对图像进行灰度图转换、高斯模糊、图像... 该文探究了运用Python处理食品中DNA分子量与含量测定的新方法,建立了DNA凝胶图像分析方法。将不同分子量的DNA Marker与DNA标准样品进行琼脂糖凝胶电泳并拍照,利用自行开发Python程序分析凝胶图,对图像进行灰度图转换、高斯模糊、图像阈值化、轮廓检测的图像优化步骤,探究了轮廓平均值法、轮廓中线法、全局数据平均法、全局数据积分法反映出DNA浓度与RGB数值间的线性关系,选取最优处理方法,通过读取像素迁移距离、RGB-灰度、RGB-向量、RGB-亮度进行DNA分子量与含量的测定实验,建立一种基于Python/RGB色彩体系的DNA凝胶电泳中分子量与含量的分析方法。检测结果误差较小,证明了Python/RGB的DNA分子量与含量分析方法的可行性,同时将该文所构建的凝胶图像分析方法应用于绵羊血浆中羊源性成分检测,结果显示所得目的蛋白为296 bp,而用DNA检测法得出样品中片段大小为294 bp,误差为0.99%,有望构建一种肉类源性成分检测的新方法。 展开更多
关键词 dna凝胶电泳 dna分子量 dna含量 PYTHON
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Genetic Polymorphism in GDF8 Region of HU Sheep Based on Microsatellite DNA 被引量:5
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作者 吴文忠 钱建共 +1 位作者 陈玲 孙伟 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2009年第4期68-71,共4页
[ Objective ] This study was to analyze the genetic polymorphism in GDF8 Region of HU sheep. [Method] Four microsatellite loci including BMS1591, TEXAN-2, FCB128 and BM81124 mapped on GDF8 region of chromosome No. 2 o... [ Objective ] This study was to analyze the genetic polymorphism in GDF8 Region of HU sheep. [Method] Four microsatellite loci including BMS1591, TEXAN-2, FCB128 and BM81124 mapped on GDF8 region of chromosome No. 2 of sheep that may be correlated with growth performance were chosen to detect the molecular genetics foundation of growth performance of Hu sheep. [ Result] Four microsatellite loci detected were high in heterozygosity, more in effective alleles number and rich in polymorphic information, all the three indices passed through the high polymorphic level (PIC 〉0.5). [ Conclusion ] The four microsatellite loci detected could be used to estimate the genetic polymorphism of growth performance of Hu sheep. 展开更多
关键词 Hu sheep GDFS Microsatellite dna Growth performance
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DNA聚合酶θ的合成致死作用研究
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作者 朱雨龙 李婷 龚国清 《中文科技期刊数据库(引文版)医药卫生》 2024年第2期0193-0197,共5页
利用合成致死(SL)作用治疗癌症可能会成为一种有效且对患者安全的方案。在诱导合成致死效应的众多因素中,参与DNA修复的因素是最密切相关的。当一个经典的DNA双链断裂(DSB)修复途径发生突变时,替代途径可能是消除肿瘤细胞的靶标。目前,... 利用合成致死(SL)作用治疗癌症可能会成为一种有效且对患者安全的方案。在诱导合成致死效应的众多因素中,参与DNA修复的因素是最密切相关的。当一个经典的DNA双链断裂(DSB)修复途径发生突变时,替代途径可能是消除肿瘤细胞的靶标。目前,抑制缺乏经典修复途径肿瘤细胞中的RAD52和/或PARP1一直是诱导合成致死作用的潜在靶标,但是,常用的PARP1抑制剂(PARPi)的耐药性是制定治疗方案的最大障碍。由POLQ基因编码的DNA聚合酶θ(Polθ)介导的末端连接(TMEJ)在另一种DSB修复途径起关键作用。因此,它是治疗具有同源重组修复(HRR)缺陷肿瘤的潜在靶点,抑制其活性可以诱导SL。在本综述中,主要讨论了基于靶点Polθ合成致死性的抗癌疗法的现状。 展开更多
关键词 dna损伤 dna修复 dna聚合酶θ 合成致死
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深圳献血员HBsAg阴性HBVDNA阳性的追踪分析 被引量:1
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作者 王飞 尚桂芳 +4 位作者 杨立新 王良华 叶贤林 茹丽梅 孟庆云 《国际医药卫生导报》 2005年第11期100-101,共2页
目的对酶联检测结果阴性NAT筛查为HBVDNA阳性标本8份中的6份进行HBVDNA定量追踪分析,以期发现血清转换期标本。方法采用国产及进口试剂同时检测乙肝表面抗原(HBsAg),丙型肝炎抗体(抗-HCV),爱滋病抗体(抗-HIV),梅毒螺旋体抗体(抗-TP),丙... 目的对酶联检测结果阴性NAT筛查为HBVDNA阳性标本8份中的6份进行HBVDNA定量追踪分析,以期发现血清转换期标本。方法采用国产及进口试剂同时检测乙肝表面抗原(HBsAg),丙型肝炎抗体(抗-HCV),爱滋病抗体(抗-HIV),梅毒螺旋体抗体(抗-TP),丙氨酸氨基转移酶(ALT),对各项结果均为阴性者进行核酸检测(NAT)筛查,对HBVDNA阳性献血员进行核酸定量追踪。结果从16512人份标本中筛出8份HBVDNA阳性,其中7例HBVDNA定量检测均能检测出HBVDNA的拷贝数,1例因HBVDNA含量过低不能检出拷贝数;随后追踪标本中HBVDNA含量均无显著性变化,未发现血清转换期献血员。结论所用酶联检测试剂及NAT筛查试剂均有较高灵敏度,核酸定量检测试剂定量较准确,HBVDNA定性检测结果为阳性并不一定说明体内有较高含量的HBVDNA拷贝数;应加大核酸筛查力度,才能发现血清转换期标本,从而为卫生部门制定相关政策提供科学依据。 展开更多
关键词 追踪分析 HBSAG阴性 献血员 丙氨酸氨基转移酶(ALT) HBVdna阳性 HBVdna含量 HBVdna定量检测 HBVdna定性 梅毒螺旋体抗体 深圳 血清转换 乙肝表面抗原 丙型肝炎抗体 酶联检测试剂 dna拷贝数 检测结果 核酸定量 阳性标本
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Construction Fractional Genomic Libraries and Screening Microsatellites DNA of Esox reieherti Dybowski 被引量:8
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作者 王洪哲 殷倩茜 +3 位作者 冯志纲 李大宇 孙效文 李婵 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期245-252,共8页
Esox reieherti Dybowsk genomic microsateUites were developed by using enrichment protocols combined with radioactive hybridization protocol. Four hundred to nine hundred base pair fragments were selected for the whole... Esox reieherti Dybowsk genomic microsateUites were developed by using enrichment protocols combined with radioactive hybridization protocol. Four hundred to nine hundred base pair fragments were selected for the whole genome. DNA PCR amplification after digestion with restriction endonuclease Sau 3A Ⅰ, and (CA)12, (GA)12 probes marked with biotin were used for microsateUite DNA enrichment. The product fragments were connected with carder pGEM-T and transferred into DH5α Escherichia coli competent cells, and radioactive isotope probes marked with γ^-32 p were used for the second hybridization. As a result, a total of 1600 bacteria were obtained in the microsatellite genomic libraries, positive clones accounted for 90.91% before hybridization and 81.25% after hybridization, amounting to 1300. One hundred and ninety-six positive clones were selected for sequencing, and 192 clones included microsateUite sequences. The microsateUite sequences obtained, mono-nucleotide, quad-nucleotide and quint-nucleotide repeat motifs were observed beside double-base-pairs CA/GT, GA/CT. Seventy primers were designed according to the flanking sequences by using software Primer Premier 5.0, and 32 primers were selected to be synthesized. After optimizing PCR reaction conditions, 28 primers were amplified and produced clear purpose bands. The aim of our research was to promote the development and utilization of E. reieherti genomic resource, and lay the foundation for optimizing E. reieherti breeding strain in order to detect the genetic diversity and construct a genetic map. 展开更多
关键词 Esox reieheri Dybowsk MicrosateUite dna Magnetic beads enrichment protocol
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