乳腺病变的DNA图像定量分析研究

目的：应用自制ＤＮＡ图像分析系统，对５５例乳腺良恶性病变进行测量和研究，评价该软件系统的性能及ＤＮＡ图像分析在乳腺病理诊断中的应用价值。方法：福尔马林固定，石蜡包埋的良、恶性乳腺病变标本经机械及酶消化后，分离成单细胞。涂片行Ｆｅｕｌｇｅｎ染色后进行测量。结果：２９例良性乳腺病变均为二倍体，无１例非整倍体出现（特异性为１００％）；６例非典型增生病变中，有３例为非整倍体；２０例乳腺癌中有１７例非整倍体（敏感性为８５％）。结论：该ＤＮＡ图像分析系统，在乳腺病理诊断中具有辅助诊断意义。

质粒DNA对大鼠骨骼肌肌质网Ca^(2+)转运的影响

目的：观察ＤＮＡ与骨骼肌肌质网蛋白结合后对肌质网功能的影响。方法：应用差速离心分离大鼠骨骼肌肌质网，并用４５ＣａＣｌ２作为示踪剂，观察质粒ＤＮＡｐｃＤＮＡ３和ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ对肌质网钙转运功能的影响。结果：两种质粒均可明显增加肌质网Ｃａ２＋摄取，呈明显的量效关系，并且也可促进肌质网钙释放。结论：外源质粒ＤＮＡ可影响肌质网钙转运功能。

工频磁场对人晶状体上皮细胞DNA双链断裂的影响

目的:采用γH2AX免疫荧光法观察工频磁场对人晶状体上皮细胞DNA双链断裂的影响。方法:将人晶状体上皮细胞暴露于0.4 mT、50 Hz工频磁场2 h、6 h、12 h、24 h、48 h,以0.1μmol/L的DNA损伤剂4-硝基喹啉-1-氧化物作用1 h作为阳性对照,结束处理后进行γH2AX免疫荧光检测。计算细胞平均焦点数。将细胞平均焦点数及焦点阳性细胞率作为评价细胞DNA双链断裂程度的指标。结果:工频磁场暴露24 h的平均焦点数、γH2AX焦点阳性细胞率分别为(2.93±0.43)、(27.88±2.59)%,与假辐照组(1.77±0.37)、(19.38±2.70)%相比,差异具有显著性(P<0.05);工频磁场暴露48 h的平均焦点数、γH2AX焦点阳性细胞率分别为(3.14±0.35)、(31.00±3.44)%,与假辐照组相比,差异具有显著性(P<0.01);而工频磁场暴露2 h分别为(2.11±0.61)、(22.44±5.09)%,6 h分别为(2.18±0.47)、(22.59±3.08)%和12 h分别为(2.35±0.43)、(23.35±2.93)%,与假辐照组比较,差异没有显著性(P>0.05)。结论:体外实验表明,0.4 mT工频磁场长时间辐照可以使人晶状体上皮细胞DNA双链断裂增加。

淫羊藿、枸杞子对老年大鼠线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体和ATP合成的影响

目的 :研究淫羊藿、枸杞子对老年大鼠线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及ATP合成的影响。方法 :Wistar系雄性大鼠 ,幼年大鼠 (1月龄 )、青年大鼠 (4月龄 )每组均为 1 2只 ;老年大鼠 (2 2月龄 ,31只 ) ,随机分为对照组 (1 0只 )、淫羊藿组 (1 0只 )和枸杞子组 (1 1只 )。用聚合酶链反应 (PCR)、酶动力学和生物发光技术进行检测。结果 :淫羊藿、枸杞子可减少老年大鼠心、脑、骨骼肌组织线粒体DNA缺失 ,提高心、脑线粒体三磷酸腺苷(ATP)的合成和心、骨骼肌线粒体呼吸链复合酶Ⅳ活力及脑线粒体呼吸链复合酶Ⅰ活力 ;淫羊藿还可提高脑线粒体呼吸链复合酶Ⅳ活力和骨骼肌线粒体ATP的合成。结论 :淫羊藿。

人线粒体DNA与衰老和退行性疾病的研究进展

人线粒体基因组包括1 500多个基因,分属于线粒体DNA(m tDNA)和核基因组DNA(nDNA)两个部分。除m tDNA自身编码的37个基因外,其余与线粒体结构和功能相关的基因均由nDNA编码。线粒体产生的大量活性氧类(ROS)可致m tDNA突变,继而诱发衰老及许多与衰老相关的疾病,包括神经退行性疾病、心肌病、糖尿病和恶性肿瘤等。

用mRNA差异显示法分离大鼠吗啡依赖相关基因

目的：分离并克隆大鼠吗啡依赖相关基因。方法：ＳＤ大鼠用递增剂量的吗啡作皮下注射，形成吗啡依赖的动物模型。分离鼠脑的中脑导水管周围灰质、伏核、纹状体等核团，提取总ＲＮＡ，用ｍＲＮＡ差异显示（ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙＰＣＲ，ＤＤＰＣＲ）的方法，筛选吗啡依赖大鼠特异表达产物的ｃＤＮＡ片段。用３组锚定引物（Ｔ１２ＭＮ，Ｍ＝Ａ，Ｇ，Ｔ或Ｃ，Ｎ＝Ａ，Ｃ或Ｇ）和６组随机引物（ＡＰ１～ＡＰ６）作不同组合进行ＰＣＲ扩增。结果：获得了８０余个差异表达产物的ｃＤＮＡ片段，经斑点杂交初步筛选，克隆了１０个阳性片段，选取４个克隆进行序列分析，获得了４个ｃＤＮＡ片段。结论：通过ＢＬＡＳＴ数据库序列比较，现已确认获得了４个吗啡依赖表达的新基因片段。

早期胃癌淋巴结微小转移的临床病理学及生物学特征研究

目的:研究早期胃癌淋巴结微小转移的临床病理学及生物学特征,探讨微小转移的诊断、治疗及其预后,阐明早期胃癌淋巴结转移发生、发展机理。方法:以11例有微小淋巴结转移者作为微小转移组,以46例有淋巴结转移者作为对照组。应用免疫组织化学染色检测ssDNA、bcl-2、p53、c-myc、E-cadherin、Ki-67和CD34。将各组的肿瘤灶亚分类为表层部、浸润部和淋巴结部,对各病例的各部位、各个指标进行统计学分析。结果:微小转移组中表层部的ssDNA阳性率高于对照组、浸润部和淋巴结部,bcl-2的阳性率高于浸润部和淋巴结部,c-myc阳性率高于对照组;其淋巴结部的E-cadherin阳性率和微血管面积比低于对照组;其表层部和淋巴结部的Ki-67阳性率低于对照组。微小转移组中淋巴结等于或小于4mm者占27.3%。结论:ssDNA、E-cadherin和Ki-67低表达的早期胃癌癌细胞恶性程度较高,黏附力较低,但增殖能力较弱,部分处于静止状态;而微血管增加是转移灶形成和发展的基础。

HL-60细胞降钙素基因高甲基化的发生机制

目的 :探讨HL 6 0细胞降钙素基因高甲基化的发生机制。方法 :采用HL 6 0细胞 ,以正常骨髓单个核细胞为对照 ,应用甲基化敏感的限制性内切酶消化 ,结合设有内外参照的PCR技术 ,检测CT基因甲基化状态 ;应用同位素微量分析法检测DNA 胞嘧啶 甲基转移酶 (DNA cytosin methyltransferase,MTase)活性 ;应用RT PCR技术检测MTase基因表达水平。结果 :HL 6 0细胞经甲基化敏感的内切酶HpaⅡ消化后仍可扩增出清晰的CT基因特异条带 ,提示CT基因 5′端呈高甲基化状态 ;HL 6 0细胞MTase活性平均测定值为 5 39.9Bq ,是正常骨髓单个核细胞 (平均 2 1 8Bq)的 2 9.8倍 ;MTase基因的mRNA表达水平以MTase与β actin内参照RT PCR产物的比值表示 ,HL 6 0细胞 (0 .72 )为正常对照 (0 .0 2 )的 36倍。结论 :HL 6 0细胞CT基因呈高甲基化状态 。

脑星形细胞瘤DNA倍体与ras癌基因表达的关系与预后

目的:探讨脑星形细胞瘤组织学结构与预后的关系。方法:应用流式细胞术和细胞免疫荧光技术,对46例脑星形细胞瘤DNA倍体和癌基因ras p21的表达进行定量分析,并结合随访进行研究。结果:肿瘤的二倍体指数(DI值)和荧光指数(FI值)以及DNA倍体出现率随组织学分级的增高而增高。ras p21阳性率和异倍体出现率分别为50%和71.74%。随组织学分级的增高p21表达亦增高。结论:脑星形细胞瘤DI>1.3和p21表达阳性者预后差。

家兔实验性心肌梗塞时心肌细胞凋亡研究

目的：探讨急性心肌梗塞时心肌细胞凋亡情况。方法：采用ＤＮＡ缺口末端标记法（ＮＥＬＭ）、透射电镜和琼脂糖凝胶电泳对家兔实验性心肌梗塞时不同损伤区心肌细胞凋亡情况进行研究。结果：在梗塞交界区心肌组织中可见散在大量ＮＥＬＭ染色阳性细胞；电镜检查细胞呈凋亡特征。在坏死区和正常心肌组织中均未发现ＮＥＬＭ染色阳性细胞。梗塞交界区ＤＮＡ电泳呈梯状，符合细胞凋亡图谱。坏死区心肌ＤＮＡ电泳图谱呈均匀弥散状态，正常心肌ＤＮＡ电泳呈一条整齐的区带。结论：急性心肌梗塞时，由于缺血程度的不同心肌细胞既可发生凝固性坏死，也可诱发凋亡，这对进一步研究心肌梗塞的治疗及预后估计提供了一个新依据。

胃癌细胞α-Catenin基因产物表达的定量研究及其意义

目的;α-Catenin(α-CA)在介导正常细胞相互粘附方面起着重要作用,但在胃癌情况下,α-CA的表达研究甚少。方法:采用流式细胞术。定量检测了80例福尔马林固定、石蜡包埋胃癌标本钙粘附素相关基因α-CA产物的表达和细胞DNA含量。结果:α-CA在胃癌表达全部降低。表达量(FI值)为0.64±0.07,明显低于正常胃粘膜的表达(0.99±0.02,P<0.001)。在未分化型,弥漫浸润生长,及淋巴结转移阳性胃癌组降低更明显(P<0.05～0.001),异倍体、增殖旺盛胃癌α-CA明显降低(P<0.002)。结论:α-CA表达与胃癌细胞分化、浸润和淋巴转移呈负相关。