环维黄杨星D对去甲肾上腺素诱导大鼠心肌细胞凋亡影响

目的研究环维黄杨星D(CVB-D)对去甲肾上腺素(NE)诱导乳鼠心肌细胞损伤凋亡的影响。方法取SD大鼠乳鼠心肌细胞做原代培养,20μmol.L-1NE诱导心肌细胞凋亡模型,Giemsa染色TUNEL、DNA-Ladder凝胶电泳检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测caspase-3蛋白的表达,检测细胞LDH的外漏率,线粒体琥珀酸脱氢酶(MSDH)的活力,观察CVB-D的保护作用。结果模型组Giemsa染色形态学上出现典型的凋亡特征;DNA Ladder凝胶电泳出现典型的梯状条带;TUNEL染色法测定的凋亡率增高;Caspase-3的阳性表达率增高,细胞LDH的外漏率增加,MSDH活力降低。CVB-D明显的降低了细胞LDH的外漏率,提高了MSDH的活力,对心肌细胞的凋亡具有明显的保护作用。结论 CVB-D对心肌细胞凋亡和细胞的能量代谢障碍具有显著的保护作用。

NaCl胁迫对花生种子萌发的影响

以花生品种鲁花14号(LH14)和丰花1号(FH1)为材料,通过对不同NaCl浓度(0、1002、00、300、4005、00mmol/L)处理的花生种子研究表明:低浓度NaCl处理(100 mmol/L)对花生种子的萌发影响相对较小;随着NaCl浓度增加,花生种子的发芽势和发芽率逐渐降低,根长、根表面积、根体积、根鲜重和胚根粗逐渐减小,MDA和脯氨酸含量逐渐增加;高浓度NaCl处理情况下,花生根尖DNA凝胶电泳出现明显的连续拖带现象,根尖细胞凋亡相对严重。

紫外辐射诱发NIH3T3细胞凋亡时DNA断裂的特性

用常规琼脂糖凝胶电泳ＵＶＢ照射后培养不同时间的ＮＩＨ３Ｔ３细胞ＤＮＡ，两个样本均未出现凋亡梯形带，而用相同条件处理的昆明小鼠胸腺细胞ＤＮＡ出现了典型的梯形带．再用反转电场琼脂糖凝胶电泳（ＦＩＧＥ）ＵＶＢ照射后培养不同时间的ＮＩＨ３Ｔ３细胞ＤＮＡ，发现ＤＮＡ先断裂成低于２３ｋｂ的大分子片段，然后进一步断裂成小分子片段，但始终未出现梯形带，说明ＤＮＡ并不总是从核小体之间断裂的．

山楂中谷甾醇抑制肿瘤细胞的研究

目的从山楂中提取及鉴定谷甾醇,并研究其对3种肿瘤细胞和人体正常肝脏细胞的作用。方法取对数生长期的细胞进行MTT法细胞增殖实验及DNA凝胶电泳实验,观察谷甾醇对不同细胞的作用。结果MTT法细胞增殖实验显示一定剂量的谷甾醇对体外培养的HepS、S180、EAC细胞有显著的抑制作用(P<0.01),抑制率总体上与时间和浓度呈正相关;对L02细胞无明显的抑制作用(P>0.05);电泳结果显示经谷甾醇作用的HepS细胞DNA出现梯带。结论谷甾醇可能是通过促进肿瘤细胞凋亡来抑制其增殖。

Hg^(2+)胁迫对浮萍体细胞DNA一级结构和抗氧化酶系的损伤(英文)

主要从DNA一级结构及抗氧化酶系变化两方面 ,研究了Hg2 + 胁迫下浮萍体细胞的损伤。结果表明 :运用随机扩增多态性DNA法 (RandomamplifiedpolymorphismDNA ,RAPD)和DNA梯法 (DNALadder) ,5～ 1 0mg·L- 1 Hg2 +处理组可检测到基因组DNA的明显损伤 ,2 0mg·L- 1 Hg2 + 已导致细胞坏死 ;RAPD法较DNALadder法更灵敏。本文还发现 ,活性氧和抗氧化酶系很可能参与了浮萍体细胞凋亡过程。低浓度的Hg2 + 胁迫可刺激抗氧化酶活性升高 ,以清除体内活性氧 ,而一旦活性氧水平超出一定域值 ,抗氧化酶活性急速下降 。

钬离子溶液诱导蚕豆根细胞凋亡的初步研究

运用硝酸钬溶液对蚕豆根尖染毒,提取根尖细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳;取根尖压片观察细胞核异常情况;同时取根尖细胞进行单细胞凝胶电泳。结果表明,钬离子诱导了根尖细胞核异常;在8mg·L-1剂量下,彗星细胞尾长和拖尾细胞数量在24h内随着根尖处理时间的延长而增加,处理24h时,琼脂糖凝胶电泳中出现明显的连续拖尾带型;处理48h后彗星拖尾缩短,琼脂糖凝胶电泳中拖尾带型缩短,推测可能发生了DNA修复作用或者交联作用。64mg·L-1剂量处理24h,彗尾缩短且出现核碎裂,琼脂糖凝胶电泳中未出现拖尾带型。实验中未观察到细胞凋亡的典型DNA"梯状带型"和特征性彗星拖尾现象。

杆状病毒诱导昆虫细胞凋亡的初步研究

Microscopic examination of Spodoptera litura(SL-1)cell infected with AcMNPV or SfaMNPV revealed progressive cell blebbing starting at 8h～12h postinfection and culminating in total cell destruction at 24h postinfection.The fragmentation of the infected cell nuclei was observed by stained with the specific fluorescent dye DAPI.Agarose gel electrophoresis analysis of the DNA extracted from infected cells show typical DNA ladder. All these supported that both viruses infected SL-1 cells undergo apoptosis.Through lipofectin transinfection,we observed that only the DNA of AcMNPV or SfaMNPV can also induce apopotosis of SL-1 cell.Virus titer analysis revealed that neither viruses can duplicate in SL-1 cells.

乙烯诱导胡萝卜原生质体凋亡

乙烯是一种参与多种重要生理学过程的植物激素。用乙烯利在密闭条件下处理胡萝卜（ＤａｕｃｕｓｃａｒｏｔａＬ．）原生质体（在ｐＨ＞４．１时释放乙烯），发现随着乙烯利浓度增加，细胞死亡率逐渐增高。经乙烯利处理的胡萝卜原生质体出现核内染色质固缩，形成凋亡小体等典型的细胞凋亡的形态学特征。用中性法彗星电泳观测到彗星状的核ＤＮＡ片段的迁移。ＤＮＡ电泳分析观察到细胞凋亡时产生的典型的核小体间ＤＮＡ断裂所形成的梯状条带。结果表明。

三种猕猴桃多酚粗提物对A549和Hela细胞的抑制作用

使用60%的乙醇提取三种猕猴桃多酚,离心后上清液通过旋转蒸发仪真空浓缩获得猕猴桃多酚粗提物,通过细胞形态分析、MTT实验以及DNALadder实验分析三种猕猴桃粗提物对A549和Hela细胞的抑制作用。结果表明狗枣猕猴桃多酚粗提物具有较好的抗肿瘤增殖活性,因此,软枣猕猴桃多酚可以作为新的癌症抑制剂,具有潜在的应用价值。

蓖麻毒素诱导的小鼠淋巴细胞的凋亡

无菌制备小鼠脾淋巴细胞,以不同浓度蓖麻毒素(0、0.3、3、30、300μg/mL)对细胞进行处理,于不同时间段(3、6、122、4 h)采用MTS法对细胞活力进行检测。结果表明,蓖麻毒素对淋巴细胞有明显的毒性作用,3μg/mL的毒素处理细胞24 h后,细胞活力降为60%左右。为研究蓖麻毒素是否是通过诱发凋亡作用而引起细胞死亡,本试验对典型的凋亡特征进行了检测,首先用流式细胞仪对细胞的线粒体膜电位进行了检测,证明经毒素处理细胞后,其电位发生显著变化(P<0.05);Ho-echst33258染色和DNA梯度裂解检测结果同时也证明,接毒细胞发生了明显的调亡作用。此结果可为深入研究蓖麻毒素的毒理作用机制提供理论依据。

Parasiticein诱导烟草细胞凋亡的形态及生化特征

【目的】研究烟草细胞对parasiticein的反应,了解parasiticein诱导烟草细胞的PCD的发生机制。【方法】用浓度约100nmol·L-1的parasiticein处理烟草悬浮细胞,相差显微镜下观察细胞的形态变化。【结果】发现烟草细胞的细胞膜收缩,与细胞壁间形成空隙,原生质浓缩等;用trypanblue染色后观察到类似现象。对诱导处理的悬浮细胞经DAPI(4,6-diamino-2-phenylindole)染色后,通过荧光显微镜观察,发现细胞核先后表现染色质凝集、形成颗粒状等特征;对处理的悬浮细胞提取基因组DNA并进行琼脂糖凝胶电泳,可观察到梯状的DNA条带(DNA laddering)。研究还发现,parasiticein诱导的烟草细胞死亡可被蛋白激酶信号通路抑制剂K252-a部分抑制。【结论】parasiticein诱导的烟草细胞死亡具有细胞凋亡的典型形态及生化特征,是一种主动的细胞死亡过程。

药物诱导的玉米根尖细胞凋亡

同时应用DNALaddering、DNAGelBlot以及基于染色体涂片的原位末端标记技术 ,从染色体、细胞核和DNA不同水平对细胞毒素类药物放线菌D、放线菌酮和秋水仙碱诱导的玉米 (ZeamaysL .)根尖分生组织细胞死亡作了检测。结果表明 :同动物中一样 ,这些药物诱导的玉米根尖分生组织细胞死亡也具有DNALadder、染色质和细胞核浓缩等典型的凋亡特征 ,说明这些细胞毒素类药物能够诱导植物体内的细胞凋亡。

三肽化合物酪丝缬肽对人肝癌BEL-7402细胞增殖抑制作用的实验研究

目的观察三肽化合物酪丝缬肽(tyroservaltide,YSV)对体外培养人肝癌BEL7402细胞增殖的抑制作用。方法建立人肝癌BEL7402及Chang氏肝细胞体外培养体系,用BrdU法、MTT法及LDH法,观察YSV对体外培养的BEL7402细胞、Chang氏肝细胞DNA分裂指数、MTT代谢率、LDH释放量的影响,用琼脂糖凝胶电泳观察药物对体外培养BEL7402细胞DNA片段化的影响。结果YSV对BEL7402细胞作用48h、72h时药物浓度为1mg·L-1和0.1mg·L-1组与阴性对照组比较:①能显著抑制肿瘤细胞DNA的合成(P<0.01),抑制率最高为药物浓度1mg·L-1作用72h时可达32.53%,②能表现出明显抑制细胞代谢的作用(P<0.05)其中YSV0.1mg·L-1作用72h时抑制率最高为19.12%,③能增加胞浆内LDH的释放(P<0.05),YSV(1mg·L-1)作用72h时抑制率最高,为36.13%,④能诱导BEL7402肝癌细胞DNA片断化成低分子量DNA,经1%琼脂糖电泳后显示为DNALadder。对正常肝细胞系Chang氏肝仅0.1mg·L-1在48h表现出抑制DNA合成能力的作用。结论YSV抑制人肝癌BEL7402细胞的增殖,对正常肝细胞系Chang氏肝没有影响。

干旱胁迫诱导苹果属植物细胞程序性死亡的研究

用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG6000)对苹果属植物平邑甜茶(Malus hupehensis pamp Reld.)和新疆野苹果〔M.sieversii(Ledeb)Roem.〕幼苗进行水分胁迫处理,通过Southern杂交和Western杂交的方法检测胁迫条件下幼苗体内DNA Ladder及Caspase-3蛋白酶。Southern杂交结果表明,干旱处理后,两种苹果的根和叶片中都有DNA Ladder产生;Western杂交结果显示,在苹果的叶片中有杂交印迹,而根中没有。这说明干旱胁迫可以诱导两种苹果属植物发生细胞程序性死亡,并且在细胞程序性死亡过程中叶片中都有类Caspase-3蛋白酶的产生。

赭曲霉毒素A对BHK细胞毒害作用的研究

以叙利亚仓鼠肾细胞(BHKcell)为模型,用噻唑兰(MTT)法检测赭曲霉毒素(ochratoxin A,OTA)对细胞活力的影响,用单细胞凝胶电泳法和DNA梯形条带法检测OTA对细胞DNA的损伤,用黄嘌呤氧化酶法检测细胞中SOD活力的变化,用硫代巴比妥酸(TBA)法测定细胞培养液中MDA的含量。结果显示:OTA对BHK细胞活力的影响呈现时间和剂量依赖性的抑制作用。染毒12h后,2.5、5、10、20和40μg·mL-1OTA剂量组BHK细胞的活力均显著降低(P<0.05),至染毒24h,40μg·mL-1OTA染毒剂量组细胞活力下降达90%。OTA对BHK细胞DNA的损伤作用同样存在明显的剂量效应关系,与对照组相比,除2.5μg·mL-1剂量组外,其余各剂量组的彗尾DNA含量和拖尾率差异极显著(P<0.01),40μg·mL-1剂量组的细胞拖尾率是对照组的80倍。40μg·mL-1OTA处理BHK细胞24h后检测到特征性的凋亡梯形条带,而对照组则未检测到。OTA作用于BHK细胞使细胞内SOD活力显著降低(P<0.05),细胞培养液中MDA含量则显著升高(P<0.05)。OTA染毒24h后,40μg·mL-1OTA剂量组细胞内SOD活力降低至对照组的25%,培养液中MDA含量较对照组增高了500%。上述结果表明:OTA对BHK细胞活力的影响与细胞内过氧化物的大量生成和抗氧化酶活力下降有关,且对细胞DNA造成损伤,引起细胞凋亡。

钬元素对小鼠肝脏细胞DNA损伤的影响

背景与目的: 通过研究钬离子溶液对小鼠肝脏细胞DNA的损伤 ,探讨钬元素对诱导动物细胞凋亡的影响。材料与方法:处理组1:小鼠定时灌胃氯化钬溶液50mg/(kg·d),连续5d;组2～3 :小鼠分别定时腹腔注射氯化钬溶液60mg/(kg·d)和120mg/(kg·d) ,连续2d ;组4:小鼠一次性腹腔注射氯化钬溶液320mg/kg;每次染毒相间24h,组1～4:小鼠均在末次染毒24h后处死 ,提取肝脏DNA。组5:小鼠一次性腹腔注射等体积生理盐水 ;组6～9 :小鼠一次性腹腔注射氯化钬溶液80mg/kg,分别于注射后12、24、48和96h处死小鼠提取肝脏DNA。通过琼脂糖凝胶电泳研究各组DNA带型变化。 结果 :处理组7DNA电泳中出现连续的弥散带型 ,其它各组均未观察到明显的拖尾现象。也未观察到“DNAladder"。 结论 :钬离子对小鼠肝脏细胞DNA的断裂作用可能与其剂量大小、处理时间及DNA修复作用有关 ,而且无特异性。本实验结果表明 。

黄癸素诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的研究

目的探讨黄癸素诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的作用。方法应用MTT法检测黄癸素对体外培养的B16细胞增殖的抑制作用,观察量效及时效关系;通过Rhodamine123染色、琼脂糖凝胶电泳、Hoechst33258染色、caspase-3和caspase-8活性检测,观察黄癸素诱导细胞凋亡的作用和机制。结果黄癸素抑制B16细胞的增殖,具有明显的时间依赖性和浓度依赖性,作用24、48、72h的IC50分别为16.59、9.29和6.22mg·mL-1;B16细胞经黄癸素处理后,出现染色质固缩、DNALadder等凋亡表现,Rhodamine123染色荧光降低和caspase-3、caspase-8活性增强,提示黄癸素引起线粒体膜电位降低可能触发caspases级联反应而导致细胞凋亡。结论黄癸素可抑制B16细胞增殖,诱导B16细胞凋亡。

还原型谷胱甘肽对抗硫芥诱导大鼠脾淋巴细胞毒性作用

目的观察还原型谷胱甘肽(glutath ione,GSH)对硫芥(su lfurmustard,SM)诱导大鼠脾淋巴细胞线粒体功能的保护作用。方法用密度梯度离心法分离大鼠脾淋巴细胞,与硫芥共同进行体外培养。用MTT法检测线粒体功能状态;用荧光分光法检测细胞内GSH含量和用琼脂糖DNA凝胶电泳观察DNA的损伤。结果硫芥作用的线粒体功能变化具有剂量和时间依赖性,它与细胞内GSH含量下降呈直线正相关(P<0.01)。使用GSH后,对不同剂量组的线粒体功能早期均有保护作用。保护效果最好时间的DNA断裂情况有所减轻,甚至可以逆转坏死向凋亡发展。结论GSH可部分保护线粒体功能。

5-氟尿嘧啶诱导肿瘤细胞凋亡的研究

为进一步了解抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-Fu）的作用机制，研究了5-Fu对体外培养的人乳腺癌细胞系（MCF-7）和人宫颈癌细胞系（Hela）这两种肿瘤细胞生长繁殖的影响及有效的诱导肿瘤细胞凋亡的浓度和作用时间。使用Leukostat染色法测定了细胞凋亡的百分率；DNA电泳分析了细胞凋亡出现的特异的DNAladder现象。结果表明，用10～20mmol／L浓度范围的5-Fu作用24h，能够引起肿瘤细胞产生典型的凋亡现象。

小麦与叶锈菌互作过程中细胞程序性死亡的生化证据(简报)

细胞程序性死亡(Programmed Cell Death,PCD)是一种受基因调控的、主动的、连续的程序化反应.一般发生程序性死亡的细胞具有较为典型的形态及生化特征:细胞收缩、核染色质浓缩、趋边化;DNA在一定位点被核酸内切酶降解成以180bp为基数的片段,在琼脂糖凝胶电泳中呈现"梯"状条带(DNA Ladder),即:DNA片段化[1,2]等.近年来,随着植物细胞程序性死亡的研究进展,人们逐渐认识到细胞程序性死亡不但是植物正常发育中必不可少的组成部分[3-5],而且是植物抵抗病原体侵染的重要机制.