墨西哥利什曼原虫环形DNA1含有编码核苷酸结合蛋白基因(英文)

目的 对扩增的墨西哥利什曼原虫环形 DNA1(CD1)部分片段进行测序 ,确定具有蛋白编码功能的开放阅读框。 方法 通过脉冲电泳方法分离并使用琼脂糖酶方法回收 CD1,酶切的 CD1片段克隆于 p Zero载体 ,用 M13通用引物自动测序决定核苷酸序列 ,用 GCG- PCGENE程序分析序列。 结果 测出 4385个核苷酸序列 ,通过分析发现两个开放阅读框具有蛋白质编码功能 (编码核苷酸结合蛋白 )。 结论 墨西哥利什曼原虫

结直肠癌组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白的表达变化及其意义

目的观察结直肠癌(CRC)组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DNA损伤结合蛋白1和CUL4相关因子7(DCAF7)蛋白的表达变化,并探讨其临床意义。方法CRC患者98例,均接受手术治疗,术中留取CRC组织和癌旁组织,采用Real-time PCR法检测CRC组织和癌旁组织中miR-138-5p、miR-876-5p,采用蛋白印迹法检测CRC组织和癌旁组织中DCAF7蛋白,分析miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者临床病理参数的关系。以CRC组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量的中位数为临界值,将CRC患者分为miR-138-5p高表达组和miR-138-5p低表达组、miR-876-5p高表达组和miR-876-5p低表达组、DCAF7蛋白高表达组和DCAF7蛋白低表达组,并分析miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者预后的关系。结果CRC组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量分别为1.36±0.29、1.41±0.36、0.59±0.19,癌旁组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量分别为2.15±0.48、2.08±0.44、0.20±0.08,两者相比,P均<0.05。miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者是否合并淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关(P均<0.05)。miR-138-5p低表达组3年总体生存率为67.3%,miR-138-5p高表达组3年总体生存率为86.6%,两组相比,P<0.05。miR-876-5p低表达组3年总体生存率为66.7%,miR-876-5p高表达组3年总体生存率为85.1%,两组相比,P<0.05。DCAF7蛋白高表达组3年总体生存率为67.2%,DCAF7蛋白低表达组3年总体生存率为87.5%,两组相比,P<0.05。结论CRC组织中miR-138-5p低表达、miR-876-5p低表达、DCAF7蛋白高表达,miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者是否合并淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关。与miR-138-5p高表达、miR-876-5p高表达、DCAF7蛋白低表达的CRC患者相比,miR-138-5p低表达、miR-876-5p低表达、DCAF7蛋白高表达的CRC患者术后3年总体生存率低。

miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。

DNMT1与T淋巴细胞因子在急性髓系白血病中的表达水平及相关性分析

目的分析DNA甲基转移酶1(DNMT1)与T淋巴细胞因子在急性髓系白血病(AML)中的表达水平及相关性。方法选取昆明医科大学第一附属医院2020年1月至2022年12月收治的初诊AML患者作为AML组(38例),另选取同期在昆明医科大学第一附属医院进行骨髓穿刺的缺铁性贫血患者作为对照组(21例)。检测并比较两组骨髓DNMT1的信使RNA(mRNA)表达水平及T淋巴细胞因子[白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10、干扰素-γ(INF-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)]水平,以及比较不同临床特征AML患者DNMT1表达水平。采用Pearson相关分析AML患者DNMT1表达水平与T淋巴细胞因子水平的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析DNMT1、T淋巴细胞因子单独及联合检测对AML的诊断效能。结果AML组DNMT1 mRNA表达水平高于对照组(P<0.001)。白细胞计数(WBC)≥5.0×10^(10)/L、骨髓幼稚细胞比例≥60%、外周血幼稚细胞比例≥60%、乳酸脱氢酶(LDH)≥300 U/L、骨髓外浸润、染色体核型预后不良患者DNMT1表达水平分别高于WBC<5.0×10^(10)/L、骨髓幼稚细胞比例<60%、外周血幼稚细胞比例<60%、LDH<300 U/L、无骨髓外浸润、染色体核型预后良好患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。AML组血清IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ水平高于对照组,TGF-β水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,DNMT1表达水平与IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ水平呈正相关(r=0.574、0.619、0.527、0.483,P<0.05),与TGF-β水平呈负相关(r=-0.475,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,DNMT1联合IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ检测诊断AML的曲线下面积分别为0.918、0.711、0.756、0.726。结论AML患者的DNMT1表达水平升高、T淋巴细胞因子表达失衡,二者存在一定相关性,DNMT1与部分T淋巴细胞因子联合检测对AML具有诊断价值。

结直肠癌p53和DNA损伤调节基因1的表达及临床意义

目的 分析p53和DNA损伤调节基因1(p53 and DNA damage regulated gene 1,PDRG1)在结直肠癌中的表达及其临床意义。方法 检索癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中结直肠癌数据集,比较PDRG1 mRNA在结直肠癌组织和正常结直肠组织中的表达差异,分析其表达与临床病理特征及预后的关系。DNA甲基化交互可视化数据库(DNA methylation interactive visualization database,DNMIVD)分析PDRG1基因甲基化与m RNA表达水平的关系。另选取本院2019年2月至2020年5月存档的102例结直肠癌组织及其癌旁正常结直肠组织石蜡标本进行验证,采用免疫组织化学法检测PDRG1蛋白的表达。结果 TCGA数据库分析发现,PDRG1 mRNA在结直肠癌组织(n=284)中的表达较正常结直肠组织(n=41)增高(P<0.01),且结直肠癌PDRG1 mRNA表达与拷贝数变异呈正相关(n=273;r=0.792,P<0.01)。DNMIVD分析显示,PDRG1启动子甲基化β值与基因表达水平呈负相关(r=-0.34,P<0.01)。TCGA数据库分析显示,结直肠癌患者(n=273)PDRG1 mRNA表达在肿瘤位置、TNM分期及远处转移方面比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05);对245例结直肠癌患者进行Kaplan-Meier生存分析发现,PDRG1 mRNA高表达患者(以中位数为分界值,大于中位数为高表达)无瘤生存期较短(P=0.019)。免疫组织化学检测显示,结直肠癌组织中PDRG1蛋白表达阳性率高于正常结直肠癌组织[87.3%(89/102) vs32.4%(33/102),P<0.01]。结论 PDRG1在结直肠癌中高表达,且与肿瘤位置、远处转移和无瘤生存期有关,可能成为结直肠癌潜在的生物标志物。

何首乌饮通过DNA甲基转移酶1延缓大鼠睾丸间质细胞衰老

目的探讨何首乌饮能否通过DNA甲基转移酶1(DNMT1)延缓大鼠睾丸间质细胞衰老。方法40只Wistar雄性大鼠随机分为4组,每组10只。免疫组织化学检测各组大鼠睾丸组织中DNMT1表达水平。ELISA实验检测各组大鼠血清中的睾酮含量。通过自由基氧化损伤建立大鼠睾丸间质细胞衰老模型。在睾丸间质细胞中使用慢病毒敲低DNMT1,通过β-半乳糖苷酶(β-GAL)染色、免疫荧光染色和ELISA实验检测细胞衰老状态和细胞上清液中睾酮和睾酮合成关键酶3β羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、细胞色素P450家族成员11A1(CYP11A1)的含量。结果与青年对照组相比,自然衰老组大鼠睾丸组织中P16蛋白表达和β-GAL阳性率明显升高,DNMT1表达和血清睾酮含量降低(P<0.05);何首乌饮干预能够降低衰老大鼠睾丸组织P16蛋白表达和β-GAL阳性率,提高DNMT1表达和血清中的睾酮含量(P<0.05)。衰老的睾丸间质细胞中呈现相同的趋势。在睾丸间质细胞中敲低DNMT1后,β-GAL阳性率和P16蛋白表达明显增加,睾丸间质细胞的睾酮分泌量和睾酮合成关键酶3β-HSD、CYP11A1含量明显减少,与正常组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。加入何首乌饮后,上述现象得到改善。结论何首乌饮可以通过DNMT1延缓大鼠睾丸间质细胞衰老。

血清DNMT1在心力衰竭病人中的表达及其与预后的相关性

目的:探讨血清DNA甲基化转移酶1(DNMT1)在心力衰竭病人中的表达情况及其与预后的相关性。方法:选取华北医疗健康集团邯矿总医院收治的128例心力衰竭病人作为观察组,另选取120名同期健康体检者为对照组,采用酶联免疫吸附法检测两组观察对象的血清DNMT1、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平,用Pearson相关性分析血清DNMT1、hs-CRP与血清白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、N末端B型钠尿肽前体(NT-proBNP)的相关性,随访12个月,统计病人预后情况,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析DNMT1、hs-CRP对心力衰竭病人预后的预测价值,多因素Logistic回归分析心力衰竭病人预后的影响因素。结果:观察组血清DNMT1、hs-CRP水平高于对照组(P<0.05);预后不良组纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级Ⅲ级或Ⅳ级比例、DNMT1、hs-CRP、IL-1、IL-6、NT-proBNP、左室舒张末期内径(LVEDD)水平高于预后良好组,左室射血分数(LVEF)水平低于预后良好组(P<0.05);经Pearson相关性分析,血清DNMT1与IL-1、IL-6、NT-proBNP呈正相关(r值分别为0.351,0.527,0.326,P均<0.05),血清hs-CRP与血清IL-1、IL-6、NT-proBNP呈正相关(r值分别为0.453,0.324,0.443,P均<0.05);ROC曲线显示,血清DNMT1预测心力衰竭病人预后不良的ROC曲线下面积(AUC)为0.780,最佳截断值为40.206μg/L;血清hs-CRP预测心力衰竭病人预后不良的AUC为0.840,最佳截断值为2.347 mg/L;血清DNMT1与hs-CRP联合预测心力衰竭病人预后不良的AUC为0.922,大于DNMT1、hs-CRP单独预测;多因素Logistic回归分析显示,DNMT1、hs-CRP、心功能分级、LVEF、LVEDD是心力衰竭病人预后不良的影响因素(P<0.05)。结论:DNMT1在心力衰竭病人血清中高表达,是心力衰竭病人预后的影响因素,其与hs-CRP联合检测对心力衰竭病人预后具有较高预测效能。

基于HCR放大的无标记型荧光传感器的构建及H5N1 DNA检测

对于高致病性H5N1禽流感病毒,构建检测该病毒的高灵敏生物传感器,并与智能包装相结合用于实时监测,这对禽流感的防控具有重要意义。基于杂交链式反应(HCR)信号放大策略,以AgNCs作为荧光信号基团,构建了一种无标记“turn on”型荧光生物传感器用于检测代表H5N1病毒的H5N1基因序列。该传感器以H5N1 DNA作为触发剂引发HCR过程,使AgNCs产生强的荧光信号变化。研究表明,当H5N1 DNA浓度在0.2~800.0 nmol/L内,该传感器具有良好的响应信号,且在0.2~200.0 nmol/L之间的荧光强度与H5N1 DNA浓度呈线性相关,线性方程为y=10.982C+567.435(R^(2)=0.99273),检测限为176 pmol/L。核酸传感体系具有通用性,通过简单调整目标序列,可实现对不同目标物的特异性灵敏检测。该研究有望为高灵敏分析禽流感病毒标志物的通用传感平台设计提供思路。

DNA甲基转移酶在结直肠癌发生发展中的作用研究

目的 探讨DNA甲基转移酶在结直肠癌发生发展过程中发挥的作用。方法 选取2021年9月至2022年6月包头医学院第二附属医院结直肠癌患者的结直肠癌组织及癌旁组织。通过Real-time PCR和Western Blot对癌组织及癌旁组织中DNMT1、DNMT3A及DNMT3B的m RNA和蛋白水平表达进行检测。结果 与癌旁组织相比,DNMT1、DNMT3A、DNMT3B在结直肠癌中m RNA表达水平及蛋白表达水平均显著上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DNA甲基转移酶的过表达促进了结直肠癌发生发展。

急性脑出血患者血清E盒锌指结合蛋白1及DNA甲基化转移酶1与神经功能缺损和预后的相关性分析

目的探讨急性脑出血(ACH)患者血清E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)、DNA甲基化转移酶1(DNMTl)与神经功能缺损、预后的关系。方法选取2019年7月—2022年7月本院收治的105例ACH患者为ACH组,依据ACH患者入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将其分为轻度组(n=34)、中度组(n=41)、重度组(n=30)。根据改良Rankin量表(mRS)评分将ACH患者分为预后良好组(n=65)和预后不良组(n=40)。另纳入同期105例体检健康者为对照组。选取2021年7月—2022年7月本院诊治的45例ACH患者对构建的ACH预后模型的受试者工作特征(ROC)曲线进行验证。采用酶联免疫吸附试验检测血清ZEB1、DNMT1水平;采用Spearman法分析ACH患者ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分的关系;采用多因素Logistic回归模型分析ACH患者预后的影响因素,采用ROC曲线评估血清ZEB1、DNMT1水平对ACH患者预后的预测价值。结果与对照组相比,ACH组血清ZEB1、DNMT1水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与轻度组相比,中度组和重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与中度组相比,重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman分析结果显示,ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.569、0.763,P均<0.001)。单因素分析结果显示,与预后良好组比较,预后不良组患者NIHSS评分、血肿体积、ZEB1及DNMT1水平均升高或增大,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,ZEB1、DNMT1、NIHSS评分、血肿体积增大是ACH患者预后不良的危险因素(P<0.05)。血清ZEB1、DNMT1预测ACH患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.834、0.854,ZEB1、DNMT1联合预测ACH患者预后的AUC为0.944,灵敏度为95.0%,特异度为86.2%。以验证组人群对预测预后的ROC曲线进行验证,结果显示AUC为0.903(95%CI:0.854~0.951),提示预后预测曲线具有较好的区分度。结论ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平较高,二者均与ACH患者神经功能缺损、预后显著相关,且血清ZEB1、DNMT1联合可能更有利于临床评估ACH患者预后情况。

不同抗病毒治疗方案对HIV病毒库的影响

目的随着抗逆转录病毒疗法(antiretroviral therapy,ART)的进步,使艾滋病(acquired immune deficiency syndrome,AIDS)从一种致死性疾病转化为可治疗的慢性感染性疾病。通过前瞻性队列研究,掌握整合酶抑制剂(integrase inhibitors,INSTI)时代不同ART方案降低人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)DNA速率的特征和结局,探索最佳治疗模型。方法选取2020年9月—2022年8月重庆市公共卫生医疗救治中心招募的HIV感染者,采用前瞻性队列研究方法,实时PCR对外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的总HIV-1 DNA进行定量,这些PBMC采集自744例初治及经治感染者,分为四组同时进行临床观察:第一组初治,第3种药物为非核苷类反转录酶抑制剂(non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors,NNRTI)。第二组初治,第3种药物为INSTI。第三组经治,继续原方案使用NNRTI。第四组经治,由NNRTI转换成INSTI。在治疗前(0周)及治疗后每3个月(3、6、9、12、15、18、21、24个月),检测病毒载量(HIV-1 RNA)、CD4^(+)T淋巴细胞(CD4^(+)T lymphocyte,CD4^(+))、CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞(CD8^(+)T lymphocyte,CD8^(+))比值及HIV-1 DNA定量水平。观察不同治疗方案HIV-1 DNA下降速率及HIV-1 DNA水平是否有差异。结果初治HIV感染者只要采用规范的抗病毒治疗方案,无论是INSTI联合治疗方案或NNRTI联合治疗方案,HIV-1 DNA均获得有效降低,INSTI治疗组的HIV-1 DNA减少较NNRTI治疗组更明显。经治HIV感染者,不管继续原方案或转换成INSTI,HIV-1 DNA量未发现差异。结论HIV-1 DNA水平是初治患者治疗方案评估的新指标;最新一代药物,如INSTI可能是治疗HIV感染的最佳选择。

外周血单核细胞DNMT1及血清IL-6在糖尿病肾脏病中的表达及意义

目的 探讨外周血单核细胞DNA甲基化转移酶1(DNMT1)及血清白介素-6(IL-6)在糖尿病肾脏病(DKD)中的表达及临床意义。方法 选取150例DKD患者(DKD组)及50例同期健康体检者(对照组)。比较2组IL-6、DNMT1、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血肌酐、空腹血糖、肾小球滤过率估计值(e GFR)、24 h尿白蛋白排泄率(24 h UAER)的差异。Pearson相关分析IL-6、DNMT1与其他临床指标的相关性。多因素Logistic回归分析DKD发生的影响因素。受试者工作特征(ROC)曲线分析24 h UAER、IL-6、DNMT1及联合检测对DKD的诊断价值。结果 与对照组比较,DKD组的空腹血糖、IL-6、DNMT1、血肌酐、24 h UAER、LDL-C、糖化血红蛋白水平升高,而eGFR、HDL-C水平降低(均P<0.05)。DKD组的IL-6与DNMT1呈正相关(r=0.560,P<0.05);且IL-6、DNMT1与24 h UAER呈正相关(r分别为0.551和0.570,P<0.05)。24 h UAER、IL-6及DNMT1升高是影响DKD发生的独立危险因素(P<0.05)。24 h UAER、IL-6、DNMT1联合检测诊断DKD的曲线下面积优于单一指标检测。结论 DKD患者DNMT1、IL-6水平升高,24 h UAER、DNMT1、IL-6联合检测可作为临床诊断DKD的良好指标。

CEBPG、DNMT1、miR-214-3p在卵巢癌组织中的表达及相关性

目的探讨CCAAT增强子结合蛋白γ(CEBPG)、DNA甲基转移酶1(DNMT1)、微小核糖核酸-214-3p(miR-214-3p)在卵巢癌组织中的表达及相关性。方法取卵巢癌患者癌组织、癌旁组织标本进行免疫组化染色,Western blot法检测CEBPG、DNMT1表达,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测miR-214-3p表达。比较癌旁组织、癌组织中CEBPG、DNMT1、miR-214-3p表达水平;分析癌组织中CEBPG、DNMT1、miR-214-3p表达水平与卵巢癌患者病理特征的关系;分析癌组织中CEBPG、DNMT1、miR-214-3p表达的相关性;分析CEBPG、DNMT1、miR-214-3p单一及联合检测对卵巢癌预后的预测价值。结果癌组织中CEBPG、DNMT1、miR-214-3p表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。与无远处转移、Ⅰ+Ⅱ期、高分化、预后良好患者相比,有远期转移、Ⅲ+Ⅳ期、低中分化、预后不良患者的CEBPG、DNMT1、miR-214-3p表达水平更高(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,CEBPG与DNMT1表达呈正相关(r=0.427,P=0.001);CEBPG与miR-214-3p表达呈正相关(r=0.503,P=0.001);DNMT1与miR-214-3p表达呈正相关(r=0.537,P=0.001)。三者联合对卵巢癌患者预后的预测价值最高。结论CEBPG、DNMT1、miR-214-3p在卵巢癌中表达异常与卵巢癌发生发展密切相关,三者联合对卵巢癌预后具有较高的预测价值。

DNA甲基化调控p16表达在替格瑞洛改善血管内皮功能中的作用及机制

目的:探讨替格瑞洛对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导内皮损伤的影响及机制。方法:采用ELISA法检测人血清内皮素-1、一氧化氮含量,CCK-8法、EdU法、Transwell法检测细胞活力、增殖及迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡,real-time PCR法、Western blot法检测DNA甲基化转移酶1(DNA Methyltransferase 1,DNMT1)、p16表达,慢病毒过表达载体构建p16的过表达系统,慢病毒敲除载体构建DNMT1和p16的敲除系统,甲基化特异性PCR法测定p16启动子区甲基化水平。结果:替格瑞洛促进ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical endothelial cell,HUVEC)活力、增殖及迁移能力,并显著抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡;替格瑞洛抑制ox-LDL诱导的HUVEC中p16表达,而过表达p16可逆转替格瑞洛对ox-LDL诱导HUVEC损伤的保护作用;DNMT1通过影响p16启动子区的甲基化水平抑制p16表达。结论:替格瑞洛可通过DNMT1介导的DNA甲基化调控p16表达,进而减轻ox-LDL诱导的HUVEC损伤,改善血管内皮功能。

DNMT1表达降低对结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的研究降低DNMT1表达对结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法应用反转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测DNMT1在结直肠癌细胞株HCT-8和正常肠上皮细胞株NCM460的表达水平。通过LV-hDNMT1-shRNA慢病毒转染结直肠癌细胞株HCT-8,下调DNMT1在结直肠癌细胞系中表达;细胞功能学实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;qRT-PCR、Western blot和亚硫酸氢盐甲基化特异性PCR(MSP)方法检测各组细胞中增殖、迁移和侵袭相关指标基因表达水平和甲基化水平。结果结直肠癌细胞HCT-8 DNMT1 mRNA表达水平略高于NCM460。降低HCT-8细胞DNMT1表达,细胞增殖、迁移和侵袭能力增强,Ki-67表达增加,MMP9基因甲基化程度降低其基因表达水平增加、TIMP3基因甲基化程度升高其基因表达降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论DNMT1表达降低可促进结直肠癌细胞的HCT-8增殖、迁移和侵袭,其机制可能通过调控MMP9、TIMP3基因甲基化水平影响其蛋白表达,进而对肿瘤细胞侵袭转移产生影响。

血清DNMT1和lncRNA MEG3表达水平与帕金森病的关联性研究

目的探讨血清DNA甲基转移酶1(DNMT1)、长链非编码RNA人类母系表达基因3(lncRNA MEG3)表达水平与帕金森病(PD)的关联性。方法招募2020年3月至2023年1月青海红十字医院神经内科收治的PD患者106例作为PD组,另选择同期健康体检者103名作为对照组。比较两组的临床资料,分析PD患者血清DNMT1、lncRNA MEG3表达水平与临床指标的相关性。采用多因素logistic回归分析影响PD发生的因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清DNMT1、lncRNA MEG3水平对PD的诊断价值。结果PD组血清DNMT1水平高于对照组,总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及lncRNA MEG3水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,PD患者血清DNMT1水平与TC、TG、LDL-C水平呈负相关(P<0.05),与统一帕金森病评定量表(UPDRS)Ⅰ评分、UPDRSⅡ评分、UPDRSⅢ评分、Hoehn-Yahr(H-Y)分期呈正相关(P<0.05)。lncRNA MEG3水平与TC、TG、LDL-C水平呈正相关(P<0.05),与UPDRSⅠ评分、UPDRSⅡ评分、UPDRSⅢ评分、H-Y分期呈负相关(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,较高的血清DNMT1水平是促进PD发生的独立危险因素(P<0.05),较高的lncRNA MEG3水平是抑制PD发生的独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清DNMT1、lncRNA MEG3水平具有诊断PD的应用价值(P<0.05),且联合两指标可进一步提高诊断效能[AUC(95%CI)=0.906(0.865~0.947)],灵敏度和特异度分别为80.21%和89.34%。结论PD患者血清DNMT1呈高表达,lncRNA MEG3呈低表达,二者联合检测有助于临床诊断PD。

脱氧核糖核酸拓扑异构酶Ⅱβ结合蛋白1与肿瘤的研究进展

脱氧核糖核酸(DNA)损伤应答(DDR)是维持内稳态及肿瘤发展重要机制之一。DNA拓扑异构酶Ⅱβ结合蛋白1(TopBP1)在维持基因组稳定性及调控DDR相关信号通路中扮演着关键角色。最新研究发现,TopBP1通过多种分子机制促进肿瘤细胞的生长、转移及耐药,并且与肿瘤发病风险及预后显著相关。本文对TopBP1在乳腺及妇科、呼吸及消化系统肿瘤中的最新研究进展进行综述,以期深入了解TopBP1在不同肿瘤中的作用机制,推动其转化为临床标志物或药物干预靶点,并为基于DDR的抗癌策略提供新思路。

PAQosome各亚基的基本功能研究概况

PAQosome可协助热激蛋白90组装大量的大型多亚基蛋白复合物,并参与蛋白质合成、核糖体生物发生、转录、剪接等基本细胞功能。目前,PAQosome各亚基作用的相关研究主要集中在肿瘤方面,其在多数肿瘤中上调,且与肿瘤的发生、发展、预后密切相关。此外,其还与阿尔茨海默病的发生、淋巴细胞和生殖细胞的发育、纤维化的形成有关,而上述功能的实现依赖于PAQosome各亚基的功能差异。因此,深入认识PAQosome各亚基的基本功能有助于进一步指导后续PAQosome在非肿瘤疾病中功能的研究。

USP7和DNMT1在乙肝相关性肝癌中的表达及意义

目的 :研究泛素特异性蛋白酶7(ubiquitin-specific proteinase, USP7)、DNA甲基化转移酶1(DNA methylation transferase 1, DNMT1)在慢性乙型病毒性肝炎(以下简称乙肝)相关性肝癌中的表达及临床意义。方法 :收集乙肝患者17例、乙肝肝硬化患者18例、乙肝相关性肝癌患者30例和健康体检者19例血清,采用ELISA法检测USP7、DNMT1、甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)的表达情况,并分析其临床意义。结果:肝癌患者血清AFP、USP7、DNMT1水平较健康体检者、乙肝及肝硬化患者高(P<0.05)。肝癌患者血清中USP7与肿瘤分期、Child-Pugh分级呈正相关(P<0.05),DNMT1与肿瘤分期、肿瘤个数呈正相关(P<0.05)。AFP、USP7、DNMT1均为乙肝相关性肝癌的影响因素(均P<0.05)。血清AFP、USP7、DNMT1水平均在肝细胞癌中有诊断效能(均P<0.05),且联合检测诊断效能高于单一检测。结论 :肝癌患者血清AFP、USP7、DNMT1水平较高,USP7、DNMT1与临床病理特征相关。三项指标联合测定能提高鉴别乙肝相关性肝癌的诊断效能。

血清DNMT1与TET1表达水平在肺癌早期诊断中的临床价值

目的:检测不同类型肺癌患者与健康人血清中DNA甲基化酶1(DNA methylase 1,DNMT1)和甲基胞嘧啶双加氧酶(ten-eleven translocation methylcytosine dioxygenase 1,TET1)的表达水平,探讨2种酶对肺癌早期诊断的临床意义。方法:选取170例初诊为肺癌的患者血清与90例体检中心健康成年人血清,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunoadsordent assay,ELISA)检测血清中DNMT1与TET1的表达水平。使用SPSS 26.0与Medcalc软件进行统计分析,比较健康成年人与肺癌患者血清中DNMT1与TET1表达水平的差异;比较血清DNMT1和TET1表达水平在不同临床分期、不同类型肺癌、不同性别、不同年龄段、不同吸烟史、不同癌症家族史之间的差异。结果:肺癌患者血清中的DNMT1显著高于健康成年人,而TET1的表达水平低于健康成年人,差异均有统计学意义(均P<0.05)。两种酶在肺癌患者血清中的表达水平与肺癌患者的临床病理分期有关。此外,DNMT1与TET1表达水平与不同类型肺癌的分类有关。结论:DNMT1与TET1有作为肺癌早期诊断标志物的潜在价值。