大黄中氨基酸的DNFB柱前衍生化高效液相色谱测定

通过升高色谱柱温度,结合线性梯度洗脱的分离模式调整分离选择性,发展了一种氨基酸的2,4-二硝基氟苯柱前衍生化高效液相色谱分析方法,也将该方法用于大黄中氨基酸含量的测定。所发展的方法采用Kromasil C18,(250mm×4.6mm I.D.5μm)色谱柱,44℃柱温,以3段线性梯度可以在30分钟内基线分离17种基本氨基酸,方法具有普适性好、稳定性高等特点。

DNFB皮肤延迟过敏反应对膀胱肿瘤患者细胞免疫状态的检测

对27例膀胱肿瘤患者进行DNFB延迟型变态反应皮肤试验,检测机体细胞免疫功能状态,结果表明DNF啵肤试验反应与膀胱肿瘤的分级分期的高低有密切关系,阴性率高多表示肿瘤恶性程度高或浸润较深。对致敏剂量的DNFB不产生自发性红斑反应者,其免疫功能是异常的。

不同品种大枣对DNFB诱导小鼠超敏反应的抑制作用

目的:研究不同品种大枣对二硝基苯(DNFB)诱导的小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响;评价不同品种大枣在免疫抑制作用上的差异。方法:将昆明小鼠随机分为对照组、DTH组与不同品种大枣给药组,通过致敏剂DNFB诱发DTH模型,检测不同品种大枣给药后模型小鼠耳廓重量的变化,同时测定肝指数、脾指数、胸腺指数进行综合评价。结果:实验表明行唐大枣、山东长枣、诺羌大枣、宁夏滩枣能够明显抑制DNFB引起的超敏反应,同时,还可对免疫器官胸腺起到保护作用。结论:不同产地大枣的免疫活性存在差异。

米诺环素对DNFB诱导的小鼠迟发型超敏反应的抑制作用

为了分析MNC对二硝基氟苯(DNFB)诱导的小鼠迟发型超敏反应(DTH)的药理效应,探讨其在体内免疫抑制作用的机制,我们采用0.5%DNFB腹部致敏,耳廓激发的方法建立小鼠DTH模型。激发后48 h,取小鼠双耳称重分析MNC对DTH模型小鼠耳组织肿胀、炎性细胞浸润度和胸腺指数、脾脏指数的影响;光学显微镜下观察小鼠耳廓组织学变化;噻唑兰(MTT)法检测淋巴结淋巴细胞和脾脏淋巴细胞增殖情况。双耳称重结果显示,MNC(70 mg/ml)处理组与DTH组相比,能明显抑制DNFB引起的炎症反应(P<0.05);耳廓局部组织学检测也表明,MNC能够抑制DNFB诱导的DTH,明显减少淋巴细胞的浸润;MNC能降低DTH小鼠胸腺指数和脾脏指数,抑制淋巴结淋巴细胞(P<0.05)和脾脏淋巴细胞的增殖(P<0.05)。实验结果提示,MNC可显著抑制DTH小鼠耳组织肿胀和淋巴细胞浸润程度,降低胸腺和脾脏指数,抑制淋巴细胞的增殖可能是其作用机制之一。

脑蛋白水解物中氨基酸的柱前衍生高效液相色谱测定

通过升高色谱柱温度，结合线性梯度洗脱的分离模式调整色谱分离的选择性，提出了一种测定脑蛋白水解物注射液中氨基酸含量的2，4-二硝基氟苯（DNFB）柱前衍生高效液相色谱方法。本法采用Kromasil C18（250×4．6mmi．d．，5μm）色谱柱，柱温44℃，在30min内以3个线性梯度能完全分离17种氨基酸，定量线性范围为0．2～1．0mg／L；加标回收率为89％～108％。该法具有适用性好、稳定性高等特点，也可以应用于其它种类样品中氨基酸的测定。

山羊角提取物中氨基酸含量测定研究

目的:对山羊角提取物中氨基酸进行含量测定研究。方法:采用高效液相柱前衍生2,4-二硝基氟苯法(DNFB-HPLC)检测山羊角提取物中常规氨基酸含量。色谱柱为Elite AAK(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A:乙腈-水(1∶1),流动相B:0.05 mol/L的醋酸钠缓冲液(pH=6.4),流速为1.2 mL/min,检测波长360 nm,柱温27℃。结果:氨基酸浓度在2.50～125.0μg/mL范围内,线性相关系数均大于0.99;氨基酸的平均回收率在97%～106%之间。但山羊角提取物各批次之间氨基酸含量差异较大。结论:柱前衍生DNFB法适合用于山羊角提取物中氨基酸的检测。

HPLC法测定丙酸菌发酵液中游离氨基酸的含量

建立了一种利用反相高效液相色谱法检测18种氨基酸的方法。以2,4-二硝基氟苯(DNFB)为柱前衍生剂,使用TIANHE Kromasil C18(4.6mm×250mm,5μm)反相色谱柱,采用二元梯度洗脱,流动相A相为0.05mM醋酸钠缓冲液(pH5.3),B相为乙腈-水(v/v=1∶1)。在该条件下,各氨基酸线性回归方程相关系数均大于0.9991,18种氨基酸的加样回收率均在95%103%范围内,该法快速、可靠,并将其应用于丙酸菌发酵液中的氨基酸检测。

外用苦豆子干馏油治疗小鼠变应性接触性皮炎机制初探

目的探讨外用苦豆子干馏油对小鼠变应性接触性皮炎模型的疗效及作用机理。方法用2,4-二硝基氟苯(2,4-DNFB)对BALB/c小鼠进行皮肤致敏和激发皮炎,制成小鼠接触性皮炎模型。将实验小鼠分为4组,一组未作任何处理,以外用苦豆子干馏油作为治疗组,以外用艾洛松作为阳性对照组,以外用生理盐水作为阴性对照组,连续3天外搽药物。24h后对小鼠耳肿胀度和质量分数进行测量,并对皮肤取材进行HE染色后测定皮损组织的炎症细胞计数。结果外用苦豆子干馏油治疗组小鼠的耳肿胀度及质量分数显著下降;HE染色显示外用苦豆子干馏油治疗后皮肤组织的炎症细胞数明显下降,接近正常皮肤组。结论外用苦豆子干馏油对2,4-DNFB所致的小鼠变应性接触性皮炎具有显著抑制作用。

高效液相色谱分析氨基酸的方法研究及优化

为了建立一种高效、快捷、准确、价格低廉的氨基酸分析方法,试验采用高效液相色谱(HPLC)法,比较研究异硫氰酸苯酯(PITC)、邻苯二甲醛(OPA)、2,4-二硝基氟苯(DNFB)3种不同衍生剂对氨基酸分析的影响,并对结果进行优化。结果表明:PITC柱前衍生化氨基酸分析方法高效、快捷、重现性好,可广泛用于样品中氨基酸分析。

盐酸奥芬米洛对二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应的影响

[目的]观察盐酸奥芬米洛对小鼠迟发型变态反应的影响。[方法]取体重为18～22g的ICR小鼠120只，雌雄各半，按体重随机分6组，即空白对照组、模型对照组、盐酸奥芬米洛高（10．0mg／kg）、中（5．0mg／kg）、低（2．5mg／kg）剂量组和阳性对照（CsA 15mg／kg）组，每组20只，各给药组分别给予相应浓度的相应药物，空白与模型对照组给予蒸馏水10ml／kg，每日1次，连续给药1周后，除空白对照组外，每鼠腹部用1％DNFB溶液均匀涂抹进行致敏，致敏后第5天，将1％DNFB溶液均匀涂抹于小鼠右耳进行攻击，空白对照组同样涂耳但未致敏，攻击后24h，测定右耳的肿胀度和小鼠的脾指数和胸腺指数。[结果]不同剂量的盐酸奥芬米洛能不同程度地降低DNFB致敏ICR小鼠耳廓肿胀度、降低脾脏系数和胸腺指数，[结论]盐酸奥芬米洛可抑制DNFB诱导小鼠迟发型变态反应（DTH），具有抑制小鼠的特异性细胞免疫功能的作用。

氧化苦参碱对 CD_4^+CD_(25)^+调节性T细胞(Tr)和淋巴细胞增殖的影响(英文)

目的通过分析氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)各剂量组对小鼠外周血调节性T细胞(regulatory Tcells,Tr细胞)数量的影响,同时检测OMT对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠淋巴结T细胞增殖的影响,探讨OMT治疗ACD的免疫学作用机制,以期为临床用OMT治疗变态反应性疾病提供更深入的理论和实验依据。方法建立DNFB诱发的小鼠ACD模型,以不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT)进行腹腔注射(ip),在实验进程的第1、7、14、21和28天小鼠尾静脉采血,抗-CD3、抗-CD4、抗-CD25单抗进行三色免疫荧光标记,流式细胞术检测各组CD4+CD25+T细胞数量。利用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,流式细胞术检测OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖的影响。实验数据以SPSS10.0以及CELLQuest软件进行处理。结果体外实验证明,在500、125和31μg/mL组的OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖呈剂量依赖性抑制,而在16、8、4和2μg/mL组的OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖起促进作用,但其剂量依赖关系不明显。腹腔注射OMT能明显提高小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞的数量,与HCT组比较(P<0.01),与PBS组比较(P<0.01)。结论OMT对小鼠淋巴结T细胞的增殖呈双向作用;腹腔注射OMT能明显提高小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞的数量;即OMT对免疫系统的影响呈双向作用,OMT是一种双向免疫调节剂。

UPLC快速测定可溶性肽或蛋白中谷氨酰胺含量

建立了UPLC测定谷氨酰胺的方法。采用BTI([bis(trifluoroacetoxy)iodo]benzene,BTI)衍生化肽或蛋白中非氮端的谷氨酰胺(Glutamine,Gln),衍生产物L-2,4-二氨基丁酸(L-2,4-Diaminobutyric acid,DABA)经2,4-二硝基氟苯(2,4-Dinitrofluorobenzene,DNFB)紫外显色后,用超高效液相色谱仪(UPLC)在355nm下进行检测测定。结果表明,DABA的最低检出限为0.2ng/mL,线性范围为1～10μg/mL。经Ala-Gln、β-乳球蛋白、α-乳清蛋白和溶菌酶四种蛋白标品检验,测得标样中Gln的回收率为93%±2%～98%±3%。所用方法具有检出限低、样品用量少、高效快速等特点。

反相高效液相色谱法测定发酵液中L-精氨酸含量

建立了一种用反相高效液相色谱测定发酵液中精氨酸含量的方法。以丙氨酸为内标物 ,2 ,4 二硝基氟苯为柱前衍生剂 ,用C18色谱柱在柱温 30℃下 ,于 36 2nm波长处检测 ,精氨酸质量浓度在 0 .5 g/L～ 1g/L时 ,其峰面积与内标物峰面积的比值和精氨酸的质量浓度的线形相关系数大于 0 .9998,加标回收率在 10 4 %左右。

柱前衍生反相高效液相色谱法测定绞股蓝茶叶中17种游离氨基酸含量

建立2,4-二硝基氟苯柱前衍生化-反相高效液相色谱法测定绞股蓝茶叶中17种游离氨基酸的含量。以Phenomenex Gemini NX C18(4.6mm×250mm,5μm)为分析柱,采用梯度洗脱,流动相A为0.05mol·L-1乙酸钠(pH=6.4,含0.1%N,N-二甲基甲酰胺),流动相B为乙腈-水(1∶1,v/v),检测波长为360nm,柱温35℃;经方法学考察,该方法具有良好的稳定性和重现性。测定结果表明,绞股蓝茶叶中17种游离氨基酸总量为39.79mg·g-1,其中人体必需氨基酸占游离氨基酸总量的36.57%。从氨基酸含量考虑,绞股蓝茶叶具备一定的开发利用价值。

苦豆子总碱治疗鼠模型变应性接触性皮炎的效果评价

目的:评价苦豆子总碱(TASA)对小鼠变应性接触性皮炎的抗炎效果。方法:用2,4-二硝基氟苯(2,4-DNFB)对BALB/c小鼠进行皮肤致敏和激发,制成小鼠接触性皮炎模型,其中3组分别外用0.05%、0.1%和0.2%TASA治疗,连续3天,以非治疗组和哈西奈德溶液治疗组作对照,24 h后对小鼠耳肿胀度和质量进行测定,并对皮损行组织病理检查。结果:0.1%和0.2%治疗组小鼠的耳肿胀度及质量均显著下降;HE染色显示外用0.1%和0.2%治疗组皮肤组织的炎症程度明显减轻。结论:外用0.1%和0.2%的TASA对DNFB所致的小鼠变应性接触性皮炎具有抑制作用。

流动相梯度与柱温梯度联合使用测定19种氨基酸

目的:利用2,4-二硝基氟苯(DNFB)作为衍生化试剂,利用XDB-C8柱,建立分离19种常见氨基酸的HPLC分析方法。结果:19种氨基酸浓度在2.5～250μmol/L(胱氨酸浓度在1.25～125μmol/L)时,其峰面积和氨基酸浓度的线性良好,回收率在94.3%～102.9%之间,取得了满意的结果。结论:本法能很好分离19种氨基酸,含量测定准确,重复性好。

前列腺素E1对家免细胞免疫反应的影响

已经证实,前列腺素E1(PGE1)对免疫反应具有调节作用,尤其在体液免疫方面已有若干报道,但对细胞免疫反应的影响如何,研究较少。为此,我们在过去有关的两项实验基础上.

CKLF1-C19多肽对小鼠特应性皮炎样皮损的影响

目的观察CKLF1-C19多肽对小鼠特应性皮炎(AD)样皮损的影响。方法将2,4-二硝基氟苯外搽在8周龄BALB/c小鼠剃毛后的背部皮肤上,以建立实验性特应性皮炎样模型并进行药物早期干预。将小鼠分为7组:模型组(不治疗)、灭菌水组(腹腔注射灭菌水)、治疗组(C19多肽1μg,10μg,100μg腹腔注射)、氢化可的松组(腹腔注射氢化可的松)和空白对照组。建模第2天开始给药,连续5周,观察小鼠背部皮损并评分,测量皮褶厚度,并在皮损处取材,进行HE染色及甲苯胺蓝染色以观察小鼠皮损组织病理变化并计数肥大细胞。结果 C19多肽早期干预可缓解皮肤红斑、鳞屑、水肿及炎细胞浸润,在一定程度上减轻皮肤炎症反应。结论 C19多肽能缓解小鼠AD模型的炎症反应,可能与抑制炎症细胞趋化反应有关。

芦笋片的质量标准研究

目的:建立芦笋片的质量控制标准。方法:采用薄层色谱法定性鉴别芦笋片中的门冬氨酸。采用反相高效液相色谱法测定芦笋片中门冬氨酸的含量,柱前衍生试剂为2,4-二硝基氟苯,色谱柱为Chromsil ODS柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流速为1.0 ml/min,流动相A为50 mmol/l的醋酸钠溶液(p H=6.4),流动相B为体积分数50%的乙腈溶液,进行梯度洗脱,检测波长为360 nm,柱温为35℃。结果:门冬氨酸的线性范围为0.154~2.044μg,r=0.999 9,平均加样回收率为98.98%,RSD为1.23%。结论:本方法稳定可靠、简便快捷、重复性好,能准确测定芦笋片中门冬氨酸的含量,为芦笋片的质量控制提供了依据。

2种柱前衍生法测定地龙注射液主要氨基酸的含量

目的建立2种柱前衍生HPLC法测定地龙注射液中5种主要氨基酸的含量。方法分别以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯(AQC)和2,4-二硝基氟苯(DNFB)为衍生剂,用Agilent高效液相色谱仪,测定地龙注射液中丙氨酸、缬氨酸、盐酸赖氨酸、异亮氨酸和亮氨酸的含量。结果 2种衍生方法均可实现对地龙注射液中5种氨基酸的分离测定。结论两种方法测定结果基本一致,可根据实际情况应用于地龙注射液的生产和质量控制。