hSOD1-G93A突变的肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠脊髓中5-mC水平以及DNMT1、DNMT3A和DNMT3B表达的变化

目的探讨5-甲基胞嘧啶(5-mC)水平以及DNA甲基转移酶1、3A和3B(DNMT1、DNMT3A和DNMT3B)蛋白表达变化与肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)之间的关系。方法选用发病前期(70 d)、发病早期(95 d)、发病中期(108 d)和发病晚期(122 d)的hSOD1-G93A突变的ALS转基因小鼠,以同窝野生型(wild type,WT)小鼠作为对照,应用ELISA和Dot blot技术检测ALS小鼠脊髓中5-mC水平的变化规律,采用Western blot和免疫荧光双标染色技术检测ALS小鼠不同时期的脊髓中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B的蛋白水平变化以及定位。结果ELISA和Dot blot结果显示,与WT小鼠相比,ALS转基因小鼠脊髓中5-mC水平升高;Western blot分析显示,与WT小鼠相比,ALS转基因小鼠脊髓中DNMT1蛋白水平在70 d无显著性变化,在95 d、108 d和122 d显著升高;DNMT3A蛋白水平在70 d、95 d和108 d升高,在122 d无显著性变化;DNMT3B蛋白水平在70 d无显著性变化,在95 d、108 d和122 d显著升高。结论ALS转基因小鼠脊髓中5-mC水平及关键DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的蛋白水平异常升高与ALS发病密切相关。

DNMT3b在膀胱癌组织中的表达及与经尿道膀胱肿瘤电切术后复发的相关性

目的 探究DNMT3b在膀胱癌组织中的表达及与经尿道膀胱肿瘤电切术后复发的相关性。方法 选取膀胱癌患者82例,并收集患者临床资料。免疫组化法检测DNMT3b水平,并分析其与经尿道膀胱肿瘤电切术后复发的相关性。结果 DNMT3b与TNM分期、T分期、肿瘤最大直径、淋巴结转移有关(P<0.05)。DNMT3b表达阳性、TNM分期越高膀胱癌患者经尿道膀胱肿瘤电切术后复发率均显著升高(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,DNMT3b表达、TNM分期均为影响膀胱癌患者经尿道膀胱肿瘤电切术后复发的独立危险因素(P<0.05)。结论 膀胱癌患者经尿道膀胱肿瘤电切术治疗后存在一定的复发性,DNMT3b表达、TNM分期是膀胱癌患者术后复发的独立危险因素。

散发性乳腺癌中DNMT3a、DNMT3b表达与ERα基因启动子甲基化状态及蛋白表达的关系

目的探讨散发性乳腺癌中DNA甲基转移酶（DNMT）3a、DNMT3b蛋白表达情况及其与雌激素受体（ER）α基因启动子甲基化状态及蛋白表达的关系。方法选取180例散发性乳腺癌与30例乳腺纤维腺瘤组织,采用免疫组化法检测组织中DNMT3a、DNMT3b蛋白的表达情况,甲基化特异性PCR检测97例散发性乳腺癌中ERα基因启动子的甲基化状态。结果乳腺纤维腺瘤与乳腺癌组织中的DNMT3a、DNMT3b蛋白阳性表达率差异无统计学意义;Ⅲ-Ⅳ期乳腺癌组织的DNMT3a、DNMT3b水平高于Ⅰ-Ⅱ期,有淋巴结转移者的DNMT3a表达水平高于无淋巴结转移者（均P〈0.05）;97例乳腺癌中有39例（40.2%）发生ERα基因启动子甲基化,DNMT3a蛋白阳性表达与ERα基因甲基化呈正相关（rs=0.250）;DNMT3a蛋白表达对患者的总体生存期（OS）有显著影响（P=0.035）,对无病生存期（DFS）无明显影响（P=0.064）,DNMT3b蛋白表达对患者的OS和DFS无影响（P分别为0.914、0.961）。结论DNMT3a、DNMT3b阳性表达与乳腺癌侵袭转移、病程进展、预后相关;DNMT3a与ERα基因启动子甲基化状态呈正相关;抑制DNMT3a、DNMT3b蛋白可能有利于散发性乳腺癌的预防和治疗。

DNMT3B基因在肝细胞癌中的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭迁移的影响

目的探讨DNA甲基转移酶3b(DNMT3B)基因在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其对肝癌细胞增殖、侵袭迁移的影响及机制。方法收集46例肝癌患者的癌组织与对应癌旁组织,qRT-PCR法检测DNMT3B在肝癌组织及对应癌旁组织中的表达,并分析其与临床病理特征之间的关系;应用RNA干扰(RNAi)技术合成针对DNMT3B的siRNA并转染MHCC97-H细胞,qRT-PCR和Western blot检测相关基因mRNA和蛋白表达;MTT法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果 46例肝癌患者中,DNMT3B基因在肝癌组织中的表达较对应癌旁组织升高者占73.91%,其高表达与肝癌的病理分化类型和肿瘤大小有关(P均<0.05);在细胞水平,抑制DNMT3B基因表达使MHCC97-H细胞增殖及侵袭迁移能力降低;干扰DNMT3B基因可以增加抑癌相关基因RASSFA1、APC、MTSS1mRNA和蛋白表达水平。结论 DNMT3B与肝癌的进展密切相关,它可能通过调控下游抑癌基因甲基化水平影响其表达,从而抑制肝癌细胞的增殖及侵袭迁移能力。

DNMT3b基因在骨髓瘤RPMI 8226细胞株中的表达及其生物学意义

目的:研究多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226中DNMT3b基因的表达情况并分析其生物学意义。方法:ELISA方法检测RPMI 8226中DNA甲基转移酶的活性;半定量RT-PCR及实时荧光定量PCR方法检测RPMI 8226细胞中DNMT3b基因mRNA的表达;不同浓度地西他滨干预RPMI8226细胞24 h后观察细胞增殖及DNMT3b基因mRNA表达水平的变化。结果:RPMI8226细胞中DNMT活性升高,DNMT3b基因mRNA表达水平升高。不同浓度地西他滨干预24 h后RPMI8226细胞增殖抑制,发生凋亡,DNMT3b基因mRNA表达水平降低。结论:骨髓瘤RPMI8226细胞中DNMT3b基因表达水平升高,地西他滨可能通过抑制DNMT3b表达从而抑制RPMI8226细胞增殖并诱导其凋亡。因此,DNMT3b有望作为骨髓瘤治疗的新靶点。

miR-124通过靶向调控DNMT3B抑制胃癌细胞增殖

目的明确miR-124是否通过靶向调控DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)表达而抑制胃癌细胞增殖能力,从而揭示miR-124的抑瘤分子机制。方法采用MTT检测miR-124对人胃癌MKN-45细胞的增殖能力;构建DNMT3B 3'UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告检测观察miR-124对DNMT3B3'UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-124 mimics转染胃癌细胞MKN-45,采用Western blot检测DNMT3B表达水平。结果 MTT结果显示,在转染miR-124 mimics 24、48和72 h后OD值(0.264±0.023、0.377±0.041、0.524±0.029)分别与对照组(0.414±0.051、0.619±0.065、0.898±0.072)比较,差异均有显著性(均P<0.05),且具有时间依赖性;荧光素报告载体系统证实DNMT3B是miR-124直接调控的靶基因。Western blot结果显示,miR-124可抑制DNMT3B蛋白的表达。结论 miR-124通过靶向调控DNMT3B的表达而抑制胃癌细胞增殖能力。

DNMT1和DNMT3B基因多态性与食管癌发病风险的关联分析

目的探讨DNMTl基因多态性位点（rsl6999593，rs2228611）和DNMT3B基因多态性位点（rs2424908）的基因型与食管癌及其病理参数的关联。方法采用病例对照研究，使用MassARRAY检测技术对258例食管癌患者和260例健康对照的3个多态性位点基因型分布进行分析。采用Logistic回归模型分析各基因型与食管癌发生的关系并比较不同基因型与食管癌病理参数的关系。结果DNMT1基因rs16999593位点TC基因型（OR=0．69，95％CI：0．47—1．00）和rs2228611位点GA基因型（OR=0．67，95％CI：0．46—0．98）与食管癌的低风险相关，rs16999593TC、CC基因型与食管癌分化程度相关（中分化：TCvs.TT：OR=0．53，95％CI：0．33—0．86；低分化：CCVS．1Tr：OR=2．79，95％CI：1．12—6．91），rs2228611GA基因型与高分化食管癌（GAVS．GG：OR=0．47，95％CI：0．25～0．88）和无周围淋巴结转移（GAVS．GG：OR=0．62，95％CI：0．39—0．98）有关，DNMT3B基因rs2424908CC基因型与肿瘤Ⅲ-Ⅳ分期（CCVS．Tr：OR=0．38，95％CI：0．15～0．92）及远端淋巴结转移（CCvs．TT：OR=0．18，95％CI：0．40—0．80）相关。结论本研究发现rs16999593和rs2228611位点与食管癌的发生及分化程度相关，rs2228611和rs2424908位点和淋巴结转移相关，rs2424908位点和肿瘤分期有相关性。

血液系统条件性DNMT3B基因敲除小鼠的构建及鉴定

目的构建可在血液系统中条件性敲除DNMT3B基因小鼠并进行鉴定,为研究DNMT3B基因的生物学功能及其在血液肿瘤疾病的作用机制提供动物模型。方法将引进的DNMT3B^(flox/flox)小鼠与Mx1-Cre^+小鼠进行杂交繁殖,得到基因型DNMT3B^(flox/+)Mx1-Cre^+及DNMT3B^(flox/+)Mx1-Cre^-两种子代,再用这两种子代杂交产生子代小鼠,通过PCR法鉴定子代小鼠的基因型;获得基因型为DNMT3B^(flox/flox )Mx1-Cre^+的小鼠,通过腹腔注射p I-p C共5次诱导DNMT3B敲除,然后用半定量PCR方法鉴定DNMT3B基因敲除情况。结果基因型鉴定确认在13只子鼠中有2只为DNMT3B^(flox/flox) Mx1-Cre^+,经p I-p C腹腔注射后,DNMT3B基因通过Cre/lox P系统被成功敲除。结论该方法成功构建可以在血液系统条件性敲除DNMT3B基因的小鼠,并进行敲除后鉴定。

年龄因素对小鼠肺纤维化模型中DNMT3a DNMT3b及CDH1表达的影响

特发性肺纤维化（IPF）是一类原因未明的慢性进展性间质性肺疾病。目前,DNA甲基化通过调控IPF中关键基因的表达而对IPF的发生发展起重要作用,已经成为研究IPF的分子机制、临床诊断与治疗的新方向。DNA甲基化通过DNA甲基转移酶（DNMT）催化,DNMT3a和DNMT3b主要催化重新甲基化作用。DNMT3a、DNMT3b也被认为是DNA甲基化的关键限速因子[1]。

反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体联合转染对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体对人胆管癌细胞株QBC-939的增殖能力和细胞凋亡的影响。方法分别构建反义DNMT1基因和反义DNMT3b基因真核表达载体,脂质体介导法将二者先后转染入QBC-939,经G418筛选和荧光细胞克隆挑选得到稳定转染细胞株,并用Western blot检测转染前后的蛋白表达变化;用MTT法和软琼脂克隆形成试验观察各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞生长周期及凋亡率的变化。结果Western blot检测证实转染反义基因能使相应蛋白表达水平降低;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因能影响QBC-939的生长曲线,使细胞增殖减慢,并以前者为甚;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因的细胞克隆形成率分别为(6.78±0.89)%和(14.86±2.13)%,明显低于未转染组;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1能影响QBC-939的细胞周期,使之阻滞于G1期,细胞凋亡率从(1.63±0.27)%分别增加到(18.47±1.46)%和(6.19±0.78)%;在上述效应检测中,单独转染反义DNMT3b基因实验组对QBC-939细胞的生长无明显影响。结论通过联合转染反义DNMT1和DNMT3b基因真核表达载体,能抑制胆管癌细胞的生长和增殖,并促进凋亡的发生,其效果明显优于单独转染DNMT1反义基因;在DNA甲基化的过程中,DNMT1起着主要的作用,DNMT3b扮演着协同的角色,二者通过甲基化途径对胆管癌的发生发挥作用。

Dnmt1和Dnmt3b在唾液腺黏液表皮样癌中的表达及意义

目的:探讨DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,Dnmt)在唾液腺黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)中的表达及意义。方法:选取2010年1月—2013年9月间中国医科大学附属盛京医院口腔颌面外科手术切除的唾液腺术后的标本43例,正常唾液腺组织17例,应用免疫组织化学和蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测正常组织及MEC组织中Dnmt1和Dnmt3b的表达。采用SPSS22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:Dnmt1在MEC组织中的阳性表达率为37.21%,与正常唾液腺组织的17.65%相比,差异无显著性(P>0.05);Dnmt3b在MEC组织中的阳性表达率为83.72%,显著高于正常唾液腺组织的11.76%(P<0.01);但两者的高表达与临床病理参数之间无显著相关性(P>0.05)。结论:Dnmt3b在唾液腺MEC的发生中可能发挥一定作用。

体外受精-胚胎移植通过影响DNMT3B表达水平影响小鼠妊娠中晚期胎盘生长动力学轨迹

目的:从分子信号通路水平更多地揭示体外受精(IVF)致胎盘生长动力轨迹改变的机制,为促进和改善IVF的体外操作提供理论支持和预警靶点,降低子代远期代谢疾病的发病风险。方法:构建IVF小鼠模型,比较IVF组与自然妊娠组(NC组)小鼠胎盘在妊娠12.5、14.5、16.5天与18.5天的胎盘质量与胎盘效率,绘制IVF小鼠胎盘与NC组小鼠胎盘妊娠中晚期胎盘质量与胎盘效率曲线。Q-RT-PCR检测两组胎盘在妊娠中晚期不同时间H19及其衍生的miR-675表达水平,IGFs及其受体表达水平。Western blot法检测两组胎盘在妊娠中晚期不同时间甲基化酶类蛋白水平。Chip-q-PCR检测两组胎盘在妊娠12.5天及18.5天DNMT3B与H19ICR区的结合丰度。结果:IVF组小鼠胎盘质量在妊娠12.5天显著低于NC组,胎盘效率显著低于NC组,而在妊娠16.5天及18.5天胎盘质量显著高于NC组,胎盘效率显著低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。IVF组小鼠胎盘H19及其衍生的miR-675在妊娠12.5天显著高于NC组,而在妊娠16.5天及18.5天显著低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。IVF组小鼠胎盘IGFs及其受体mRNA相对表达量在妊娠12.5天显著低于NC组,而在妊娠16.5天及18.5天显著高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。IVF组小鼠在妊娠12.5天胎盘甲基化酶DNMT3B及其与H19ICR区的结合丰度显著低于NC组,而在妊娠18.5天胎盘甲基化酶DNMT3B及其与H19ICR区的结合丰度显著高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:IVF通过妊娠末期下调H19及其衍生的miR-657激活了IGFs及其下游信号通路,致小鼠妊娠末期胎盘生长曲线偏离。IVF通过调节DNMT3B表达水平及其与H19ICR区的结合水平引起小鼠妊娠中晚期胎盘生长动力学轨迹改变。

DNMT3B通过Hippo信号通路促进肝癌细胞的增殖与侵袭

目的探索DNMT3B对肝癌细胞的增殖与侵袭的影响。方法收集2008年5月~2013年5月在重庆医科大学附二院确诊的175例肝癌患者并制作成组织芯片,分析DNMT3B蛋白表达水平的差异与患者的预后情况及患者肿瘤无瘤生存率与肿瘤特异性生存率的关系。使用单因数与多因素Cox回归分析DNMT3B的表达对肝癌患者预后的影响。使用小干扰RNA(siRNA)与慢病毒过表达干扰DNMT3B的表达,利用CCK-8及EDU染色检测肝癌细胞增殖情况,对细胞进行Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力分析。结果免疫组化显示DNMT3B蛋白在肝癌中的表达率(67.4%)高于配对癌旁组织的表达率(41.1%)。DNMT3B的高表达与肿瘤大小(P=0.001)、血管侵犯(P=0.004)、肝内转移(P=0.018)密切相关。DNMT3B高表达患者其肿瘤无瘤生存率与肿瘤特异性生存率低于DNMT3B低表达患者(P<0.005)。沉默DNMT3B显著抑制Huh-7细胞增殖,Transwell实验检测结果表明,与对照组相比沉默DNMT3B抑制Huh-7细胞的迁移与侵袭能力。Western blot检测显示,沉默DNMT3B的表达升高了LATS1的表达水平,降低了YAP1的表达,激活了Hippo信号通路。同时,甲基化特异性PCR显示LATS1的甲基化水平降低。结论肝癌中DNMT3B的表达高于癌旁组织,并且DNMT3B的高表达与患者的低生存率密切相关。沉默DNMT3B抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力。DNMT3B主要通过甲基化LATS1并抑制其表达,促进癌基因YAP1的表达进而抑制Hippo信号通路的抑癌作用,从而促进肝癌恶性发展。

DNMT3b基因在人膀胱癌组织中的表达及与临床预后的相关性

目的探讨DNMT3b在人膀胱癌组织的表达和意义及与膀胱癌患者术后生存期的相关性。方法采用免疫组织化学技术(IHC)分别检测DNMT3b基因在38例手术切除人膀胱癌组织和38例相应癌旁组织的蛋白表达水平,分析其表达水平与患者年龄、性别、病理分级、肿瘤大小、T分期,淋巴转移和TNM分期临床病理参数的相关性,探讨DNMT3b对患者预后影响。结果在38例膀胱癌组织中,DNMT3b高表达率为63.16%,而在对应的38例癌旁组织中高表达率为13.16%,两者间具有显著差异(P<0.05)。DNMT3b在膀胱癌组织中高表达与患者病理分级(P=0.002)、肿瘤大小(P<0.001)、T分期(P<0.001)、淋巴转移(P=0.039)和TNM分期(P<0.001)相关,而与性别、年龄无明确相关性。多因素Logistic回归分析发现,DNMT3b的蛋白表达水平与肿瘤大小(P=0.008)和TNM分级(P=0.042)相关。Kaplan-Meier生存分析显示,DNMT3b高表达组患者的总生存期明显缩短,与低表达组相比具有显著差异性(P=0.021)。结论DNMT3b在膀胱癌组织中高表达,与病理分级、肿瘤大小、原发肿瘤范围、淋巴转移和临床分期等临床病理特征及总生存期密切相关,结果提示DNMT3b有望成为判断膀胱癌预后的标志物和肿瘤防治的新的靶点。

高糖促进小鼠肾小管上皮细胞DNMT3B表达并通过激活β-catenin信号通路促进纤维化相关蛋白分泌

目的观察高糖条件下小鼠肾小管上皮细胞(RTEC)中DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)对分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)表达的影响及对Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用。方法将体外培养的小鼠RTEC分为正常糖(NG)组和高糖(HG)组。RTEC分别转染DNMT3B短发夹RNA(sh-DNMT3B)及DNMT3B过表达(DNMT3B-OE)质粒后,反转录PCR检测RTEC的DNMT3B、 SFRP1、Ⅳ型胶原蛋白(Col4)、纤连蛋白(FN)mRNA表达,Western blot法检测DNMT3B、 SFRP1、糖原合成酶3β(GSK3β)、磷酸化的GSK3β(p-GSK3β)、β-catenin、 Col4、 FN的蛋白表达。免疫荧光细胞化学染色检测DNMT3B和SFRP1在RTEC的表达和定位。结果与NG组相比,HG组RTEC中DNMT3B、β-catenin、 p-GSK3β、 Col4、 FN蛋白表达增加,SFRP1表达降低。与空载体组比较,敲低DNMT3B后,HG条件下RTEC的SFRP1 mRNA及蛋白表达均增加,β-catenin、 p-GSK3β、 Col4蛋白表达降低,FN的mRNA和蛋白表达均降低,而β-catenin mRNA表达无明显改变;过表达DNMT3B后,各指标表达情况与上述结果相反。DNMT3B及SFRP1在RTEC的细胞核及细胞质中均有表达,与NG组相比,HG组的细胞可见DNMT3B在细胞核内聚集,且与SFRP1的共定位增加。结论 HG刺激增加RTEC的DNMT3B表达,下调SFRP1表达,激活Wnt/β-catenin信号通路促进细胞外基质形成。

重金属宫内暴露对胎儿DNMT3B基因甲基化的影响

目的分析胎儿宫内暴露重金属与脐带血中DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)基因甲基化的关系。方法本研究基于在山西开展的病例对照研究,共纳入173例无重大体表出生缺陷胎儿。采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)仪检测脐带组织中砷(As)、铅(Pb)、镉(Cd)、镍(Ni)四种重金属的含量,采用MassARRAY时间飞行质谱阵列基因分析平台检测脐带血中DNMT3B的甲基化水平。运用多重线性回归模型分析重金属暴露对DNMT3B甲基化的影响。结果脐带组织中砷、铅、镉、镍含量中位值及四分位间距分别为7.66(5.24-10.30)ng/g、23.91(16.74-44.29)ng/g、0.95(0.47-2.71)ng/g、21.42(15.61-32.2)ng/g。脐带血中DNMT3B基因甲基化水平为(7.38±2.66)%。脐带组织镉对DNMT3B甲基化水平有影响(β=0.74,P=0.03),镉与砷、铅、镍对DNMT3B甲基化水平的影响均无交互作用。结论脐带组织重金属暴露会影响胎儿DNMT3B的甲基化水平。

LncRNA-FKBP1C通过顺式调控DNMT3B影响鸡骨骼肌生长

为研究lncRNA对鸡骨骼肌生长的影响,在UCSC上预测lncRNA-FKBP1C顺式调控的靶基因为DNMT3B,随后采用qPCR检测DNMT3B在隐性白羽洛克鸡和杏花鸡中的表达量,并在鸡原代成肌细胞中过表达和干扰lnc RNA-FKBP1C,同时对IGF1R基因启动子活性和甲基化进行分析。结果显示,DNMT3B在杏花鸡中差异上调;在鸡原代成肌细胞中发现lncRNA-FKBP1C能抑制DNMT3B、促进IGF1R、FGF12、FGF14、FGF18、FGFR2基因的表达;而DNMT3B可能通过影响IGF1R启动子活性区域的非CpG甲基化来抑制其表达。研究结果提示lncRNA-FKBP1C可能通过顺式调控作用抑制DNMT3B基因的表达,从而影响鸡生长相关基因的表达。

RNAi及DNA芯片分析肝癌细胞系中受DNMT3B调控的下游基因(英文)

为揭示DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)在肝癌中是否参与了肿瘤的发生,应用Westernblotting及细胞免疫化学方法分析DNMT3B蛋白在人的正常肝细胞株、肝癌癌旁细胞株及肝癌癌细胞株中的表达。构建了DN-MT3B的RNAi稳定表达的重组载体,并转染入肝癌细胞株SMMC-7721中。以半定量RT-PCR及Westernblot-ting分别鉴定DNMT3BRNAi表达载体对内源性DNMT3B的抑制效率。用高通量的cDNA基因芯片分析了SMMC-7721中DNMT3B抑制后有影响的下游基因谱。结果显示,DNMT3B在肝癌细胞株中的表达水平明显高于肝癌癌旁和正常肝细胞株。DNMT3B的RNAi稳定表达重组载体转染SMMC-7721细胞株2个月后,观察到DNMT3B明显受到抑制。cDNA基因芯片分析发现,DNMT3B抑制后诱导26条基因表达下调,115条基因表达上调,包括一些发育相关基因以及肿瘤相关基因,如SNCG、NOTCH1、MBD3、WNT11、MAOA、FACL4等。提示DNMT3B的高表达可能与肝癌的发生有关,并以调控其他相关基因的表达而起作用,包括与发育相关的重要基因。

山羊DNMT3B和KHDRBS2多态性及其与繁殖性能关联分析

本研究旨在分析DNMT3B和KHDRBS2单核苷酸多态性(SNPs)与山羊繁殖性状的关联。通过MassARRAY>SNP分型技术对DNMT3B和KHDRBS2SNPs位点进行分型,检测其在云上黑山羊(n=544)、济宁青山羊(n=133)和辽宁绒山羊(n=91)3个群体中的遗传学特征,并将其多态性与繁殖性能(产羔数、初生窝重和断奶窝重)进行关联分析。群体遗传学分析表明,DNMT3B g.61480806G>A位点在云上黑山羊中为中度多态(0.25<PIC<0.5),在济宁青山羊和辽宁绒山羊中为低度多态(PIC<0.25)-DNMT3B g.61491787C>T在云上黑山羊、济宁青山羊和辽宁绒山羊中均为低度多态(PIC<0.25);卡方适合性检验表明g.61480806G>A和g.61491787C>T两个位点在云上黑山羊、济宁青山羊和辽宁绒山羊中均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05).KHDRBS2 g.48441364C>T位点在3种山羊中均为中度多态(0.25<PIC<0.5),KHDRBS2 g.47872502C>T、g.48441325T>C和g.48610246G>C位点在3种山羊中均为低度多态(PIC<0.25);卡方检验表明,KHDRBS2g.48610246G>C位点在3个群体中均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)KHDRBS2 g.47872502C>T、g.48441325T>C和g.48441364C>T 3个位点在云上黑山羊中处于Hardy-Weinberg平衡状态(.P>0.05)关联分析结果表明,DNMT3Bg.61491787C>T位点TC型的初生窝重和断奶窝重显著高于TT型(P<0.05);KHDRBS2 g.47872502C>T位点CC型的产羔数显著高于CT型(P<0.05),g.48441364C>T位点CC型产羔数显著高于CT型和TT型(P<0.05)综上所述,DNMT3Bg.61491787C>T位点或可作为筛选云上黑山羊初生窝重和断奶窝重的潜在分子标记,KHDRBS2 g.47872502C>T和g.48441364C>T位点或可作为云上黑山羊产羔数选择的潜在分子标记。

江苏宿迁地区汉族人群DNMT3B基因启动子区-149C>T和-579G>T多态性与食管癌易感性的分析

目的分析江苏宿迁地区汉族人群DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)基因启动子区-149C>T和-579G>T单核苷酸多态性(SNP)与食管癌(EC)易感性的关系。方法利用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术分析246例食管癌患者及240例健康对照者的DNMT3B启动子区-149C>T和-579G>T位点的基因型。结果在-149C>T位点中,食管癌组和对照组的基因型TT与CT比较差异无统计学意义(χ~2=0.089,P>0.05)。在-579G>T位点中,食管癌组和对照组的基因型TT与GT+GG比较差异无统计学意义(χ~2=0.649,P>0.05)。在年龄和性别分组中,两位点在食管癌组和对照组间基因型频率差异均无统计学意义(χ~2=0.044~0.876,P值均>0.05)。结论 DNMT3B基因启动子区-149C>T和-579G>T与食管癌遗传易感性无相关性。