旋毛虫新生幼虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ基因家族的筛选和分析

利用旋毛虫新生幼虫期特异性基因N5cDNA作为探针,对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行筛选,并将阳性克隆全部送测序公司测序。对测序结果进行序列分析后,根据信号肽不同分为15种基因。NCBI BLAST检索表明,其中有13种基因均为旋毛虫未知基因序列,并且氨基酸序列最前面均包含有1个信号肽,属于分泌性蛋白。InterProScan检索表明,15种氨基酸序列均编码脱氧核糖核酸酶Ⅱ（DNaseⅡ）,均含有DNaseⅡ的保守序列。通过互联网将编码蛋白序列输入CLUSTAL W数据库,检索结果表明,这些编码的脱氧核糖核酸酶Ⅱ蛋白质同源性高达85%-98%。

遗传性牙本质发育不全Ⅱ型家系致病基因的连锁分析及DMP1的突变检测

目的 :对中国江苏淮阴一个遗传性牙本质发育不全Ⅱ型家系的致病基因进行定位 ,同时对该疾病的候选基因之一DMP1进行突变检测。方法 :用位于 4q2 1区域的 7个微卫星位点对家系进行遗传连锁分析 ,并通过聚合酶链反应 -单链构象多态分析 (PCR -SSCP)和DNA测序方法对DMP1基因进行突变检测。结果 :所选的 7个位点中 ,除D4S45 1和D4S15 34之外 ,最大Lod值Zmax均大于 3(θ =0 ) ;PCR -SSCP和测序结果显示DMP1Exon 2～ 6均无突变。结论 :遗传性牙本质发育不全Ⅱ型与位于 4q2 1区域的微卫星位点GATA6 2A11、DSP、DMP1、SPP1和D4S15 6 3连锁 ;排除了DMP1做为该疾病致病基因的可能性。

高血压病人健康子女胰岛素抵抗与AngⅡ及降钙素基因相关肽变化

目的检测原发性高血压(EH)病人之健康子女的胰岛素抵抗(IR)、血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及降钙素基因相关肽(CGRP)的变化,探讨其在高血压发病机制中的作用以及在高血压一级预防中的意义。方法随机选择60例具有高血压家族史的健康子女,其中父亲或母亲一方患高血压的健康子女30例为单亲组,双亲均患高血压的健康子女30例为双亲组,无高血压家族史的健康子女30例为对照组。用放免法测定空腹血浆胰岛素(FINS)、AngⅡ和CGRP的含量,计算胰岛素抵抗指数(IRI)。结果双亲组和单亲组IRI、血浆AngⅡ及CGRP含量均高于对照组,差异具有显著性(F=14.43～16.63,q=6.48～8.15,P<0.01);双亲组血浆AngⅡ和CGRP含量高于单亲组,差异有统计学意义(F=15.14、16.63,q=3.12、3.98,P<0.05)。两研究组血浆AngⅡ与CGRP含量呈正相关(r=0.682,P<0.01)。结论具有高血压家族史的健康子女在血压升高之前已经存在IR等代谢改变,血浆AngⅡ及CGRP等血管活性物质的升高可能是高血压的始动因素;发现IR、血浆中AngⅡ及CGRP水平升高的有高血压家族史的健康子女,可能是高血压的高危对象,应积极采取一级预防措施防止高血压的发生。

旋毛虫新生幼虫期特异性基因N10的表达及鉴定

根据旋毛虫新生幼虫期特异性基因pBK-CMV-N10序列设计引物,利用PCR技术将基因N10的信号肽去除后,用T/A法克隆到pMD-18T载体,转化至大肠杆菌NovaBlue,经鉴定及序列测定,结果显示成功克隆到N10基因。将重组质粒pMD-18T-N10进行酶切后连接到原核表达载体pET-28a中,重组质粒经鉴定后转化大肠杆菌BL21star(DE3),用IPTG诱导表达出与理论相符的融合蛋白,相对分子质量为38700,诱导4h的表达量占菌体总蛋白量的15%。从N10重组蛋白提取可溶性融合蛋白,对其生物学特性初步鉴定结果表明,具有类似脱氧核糖核酸酶的活性。

血管紧张素Ⅱ1型受体基因A1166C在汉族人群中的分布及其与家族性高血压的相关性

目的 研究血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）基因A1166C在正常汉族人群中的分布特征,及其与家族性原发性高血压的相关性.方法 选取健康成年人150例（正常对照组）和家族性原发性高血压患者178例（家族性高血压组）,提取所有受试者外周血白细胞DNA,PCR-RFLP方法进行AT1R基因A1166C多态性检测.结果 正常汉族人群中AA、AC和CC基因型及该点A、C等位基因频率分布,在不同性别及年龄间比较均无显著性差异（P〉0.05）;家族性高血压组基因型分布[AA 131（73.6%）、AC 41（23.03%）、CC 6（3.37%）],等位基因频率分布[A 303（85.11%）、C53（14.89%）],与正常对照组比较差异均有明显统计学意义（P〈0.05）.结论 AT1R基因A1166C在成人汉族人群中的分布特征与性别、年龄无关;AT1R基因A1166C多态性与家族性原发性高血压明显相关,1166C携带者可能有较高患病风险.

肉碱棕榈酰转移酶Ⅱ缺乏症家系CPT2基因突变分析及产前诊断

分析肉碱棕榈酰转移酶Ⅱ(CPTⅡ)缺乏症患儿及其父母CPT2基因突变类型,为家系成员提供遗传咨询及产前诊断。先证者,女,于3个月时发烧8 h入院,血液酯酰肉碱谱分析显示棕榈酰肉碱显著增高,提示CPTⅡ缺乏症。收集患儿临床资料,采集患儿和父母外周血,提取基因组DNA,应用直接测序法进行CPT2基因5个外显子编码区及与外显子交界的部分内含子区域进行测序。患儿母亲于妊娠中期采取羊水,分取羊水细胞进行CPT2基因突变分析。Sanger测序发现先证者CPT2基因存在两个已知致病突变c.886C>T(p.R296X)和c.1148T>A(p.F383Y),突变来自父母双方。母亲第二胎羊水细胞CPT2基因存在c.886C>T(p.R296X),为致病基因携带者。胎儿出生后血液酯酰肉碱谱正常,发育正常。通过家系CPT2基因分析,证实了先证者死因为CPTⅡ缺乏症,在突变明确的前提下,成功地进行了下一胎同胞的产前诊断,为该家庭提供帮助。