基于TCGA数据库分析DTX2在肾透明细胞癌组织中表达的临床意义及其对肾癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的:基于TCGA数据库分析Deltex E3泛素连接酶2(DTX2)在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的表达水平及临床意义,探讨DTX2对ccRCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:利用TIMER数据库分析DTX2在泛癌组织中的表达水平,通过UALCAN数据库进一步验证ccRCC组织和癌旁组织中DTX2 mRNA和蛋白表达差异。使用UALCAN数据库中的TCGAccRCC队列数据集,分析ccRCC中DTX2表达与患者临床病理特征的相关性。通过K-M plot数据库分析DTX2表达与ccRCC患者预后的相关性。利用DAVID数据库对DTX2相关基因进行GO和KEGG通路富集分析。通过qPCR法检测DTX2基因在人胚肾293(HEK293)细胞和ccRCC细胞A498、Caki-1中的表达水平。利用siRNA技术分别将DTX2 siRNA及其阴性对照质粒转入A498、Caki-1细胞,采用CCK-8法、平板克隆实验、划痕实验及Transwell侵袭实验分别检测敲低DTX2对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:TCGA数据库分析结果表明,与癌旁组织相比,ccRCC组织中DTX2 mRNA和蛋白均呈高表达(均P<0.01)。DTX2表达水平与ccRCC患者的病理分期、临床分级、不同亚型和淋巴结转移相关联(均P<0.01),DTX2高表达与患者的不良预后具有相关性(均P<0.01)。GO功能和KEGG通路富集分析结果显示,DTX2表达相关基因主要参与蛋白酶体介导的泛素依赖性蛋白质分解代谢等生物学过程,并主要富集到了mTOR信号通路等与肿瘤的相关信号通路中(均P<0.05)。体外细胞实验结果表明,A498和Caki-1细胞中DTX2表达水平高于HEK293细胞;敲低DTX2表达可显著降低A498和Caki-1细胞的增殖、迁移及侵袭能力(均P<0.01)。结论:DTX2在ccRCC组织和细胞中呈高表达,其高表达患者的预后较差。敲低DTX2表达可抑制ccRCC细胞增殖、迁移和侵袭,DTX2有望成为ccRCC新的生物标志物和治疗靶点。

DTX2通过Notch2/Akt轴促进结直肠癌细胞的迁移和侵袭

目的探讨DTX2对结直肠癌(CRC)细胞迁移侵袭的影响及作用机制。方法利用基因工具干预CRC细胞,分为敲低组(DTX2-shRNA)、敲低空载组(neg-shRNA)、未转染组(con)、过表达空载组(pcDNA)及过表达组(pcDNA-DTX2),利用qRTPCR及Western blotting法检测转染效率。采用划痕和Transwell侵袭实验检测DTX2基因的表达改变对CRC细胞迁移侵袭能力的影响,并通过Western blotting检测各组中Notch2、NICD、Akt、p-AKT、MMP-2及MMP-9蛋白的表达水平。CRC细胞共转染pcDNA-DTX2和Notch2 siRNA,检测回复实验对CRC细胞迁移侵袭能力的影响。结果CRC细胞中DTX2 mRNA和蛋白表达量,敲低组中明显降低(P<0.01),过表达组中明显升高(P<0.01)。划痕和Transwell侵袭实验提示,CRC细胞迁移侵袭能力,DTX2 shRNA显著低于con和neg-shRNA(P<0.01);pcDNA-DTX2显著高于con和pcDNA(P<0.01)。Western blotting检测提示,Notch2、NICD、p-Akt及MMP-2蛋白平均表达水平,与con和neg-shRNA相比,DTX2 shRNA明显降低(P<0.05);与con和pcDNA相比,pcDNA-DTX2明显升高(P<0.05),而这些蛋白在con、neg-shRNA及pcDNA间的平均表达水平无明显差异(P>0.05)。回复实验提示,siRNA-Notch2可扭转pcDNA-DTX2增强的CRC细胞迁移侵袭的能力(P<0.01),相应蛋白水平的变化也具有统计学意义。结论DTX2通过Notch2/Akt轴促进CRC细胞迁移侵袭的能力,DTX2可能成为CRC的新型生物学指标。

酶联免疫吸附分析检测鳍藻毒素DTX1和DTX2

利用BALB/c小鼠腹水大量制备抗大田软海绵酸(Okadaic Acid,OA)的单克隆抗体,并以此抗体为探针建立了检测鳍藻毒素(Dinophysistoxins,DTXs)DTX1和DTX2的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)。DTX1和DTX2各组分的标准曲线在一定范围内都有良好的线性范围和相关系数,最低检出浓度为0.53μg/L和0.45μg/L;批内和批间平均变异系数为6.18%、5.11%和7.28%、5.79%;加标样品平均回收率为76.4%、79.9%;OA与DTX1和DTX2的交叉反应率分别为53%和79%。结果表明,该方法可用于贝类样品中DTX1和DTX2的残留检测。

人类RING型锌指蛋白DTX2的全长cDNA克隆与序列分析

鉴定了一个人类WWE与RING型锌指基因DTX2,位于人染色体7q11．23．通过RACE获得的全长cDNA显示,DTX2编码包含两个WWE区域与一个RING锌指区域的蛋白．

结直肠癌组织中DTX2分子的表达及临床意义

目的探讨DTX2分子在结直肠癌(CRC)组织中的表达及临床意义。方法利用Oncomine、GEPIA数据库分析DTX2基因在CRC组织与正常结直肠组织(简称“正常组织”)中的表达情况,同时运用人类蛋白图谱(HPA)数据库在线数据分析DTX2蛋白表达与CRC患者生存预后的关系。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR法)、Western blot法及免疫组织化学染色法检测大连大学附属新华医院的55例CRC组织及其相应的癌旁正常(PN)组织中DTX2 mRNA及蛋白表达,并分析CRC组织中DTX2表达与CRC患者临床病理特征的关系。结果(1)Oncomine和GEPIA数据库中的数据均发现,DTX2 mRNA在CRC组织中的表达水平均明显高于正常组织(P<0.05);HPA在线数据分析结果发现,DTX2低表达CRC患者的总生存情况好于DTX2高表达者(P=0.0098)。(2)qRT-PCR法和Western blot法检测结果均显示CRC组织中DTX2 mRNA和蛋白表达水平均明显高于PN组织(t=0.722,P<0.001;t=1.314,P<0.001);免疫组织化学染色结果显示,CRC组织中DTX2蛋白表达阳性率高于PN组织(χ^(2)=0.899,P<0.001),而且DTX2蛋白表达阳性率、mRNA和蛋白表达量均与CRC患者的肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关,即肿瘤浸润深度越深、淋巴结分期和TNM分期越晚者,DTX2蛋白表达阳性率、mRNA和蛋白表达量越高(P<0.05)。结论DTX2基因在CRC组织中的高表达提示其可能作为评估CRC进展的新生物学指标,但DTX2蛋白表达对CRC预后的评估价值需临床进一步验证。