DUSP9真核表达载体的构建及其在Hepa1-6肝细胞中的表达

目的构建小鼠DUSP9基因真核表达载体,并在小鼠Hepa1-6肝细胞中表达DUSP9蛋白。方法采用RT-PCR方法,从小鼠肝组织获取DUSP9cDNA片断,经双酶切、连接重组至真核表达载体pEGFP-N1,构建pEGFP-DUSP9重组质粒,双酶切及DNA测序对该重组质粒进行鉴定。脂质体介导pEGFP-DUSP9转染Hepa1-6肝细胞,实时荧光定量PCR、Western blot检测DUSP9mRNA及蛋白表达水平的变化。结果 pEGFP-DUSP9重组质粒经双酶切及测序鉴定证明构建完全正确,成功转染Hepa1-6肝细胞并高效表达,检测到明显上调的DUSP9mRNA和蛋白表达水平。结论成功构建真核表达载体pEGFP-DUSP9,并在Hepa1-6肝细胞中表达了DUSP9蛋白,可为研究DUSP9的生理功能及了解其在糖、脂代谢、胰岛素抵抗进程中的作用奠定坚实的基础。

DUSP9基因多态性与妊娠期糖尿病的相关性研究

目的探讨双特异性磷酸酶9(dual specificity phosphatase 9, DUSP9)基因rs5945326位点单核苷酸多态性与妊娠期糖尿病(diabetes gestational mellitus, GDM)及相关临床指标的关系。方法应用基因测序技术,检测成都地区206例GDM孕妇(GDM组)和189名正常孕妇(对照组)DUSP9基因rs5945326位点多态性,比较GDM孕妇和正常孕妇基因型频率和等位基因频率,并比较不同基因型的血糖、血脂、体质指数等临床指标。结果GDM组DUSP9基因rs5945326位点AA、AG、GG基因型频率分别为32.2%、52.2%、15.6%,对照组分别为41.2%、43.9%、15.0%,两组比较差异无统计学意义(χ^2=3.601,P=0.165);GDM组A、G等位基因频率分别为58.3%、41.7%,对照组分别为63.1%、36.9%,两组比较差异也无统计学意义(χ2=1.894,P=0.188)。DUSP9基因rs5945326位点GG基因型高密度脂蛋白水平[(2.34±0.61) mmol/L]高于AG+AA基因型[(2.06 ± 0.56) mmol/L],差异有统计学意义(t=2.993, P=0.003);不同基因型间其它临床指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论DUSP9基因rs5945326位点单核苷酸多态性可能与成都地区GDM发病无相关性,但与高密度脂蛋白水平密切相关。