DABDAB2相互作用蛋白和相互作用蛋白和β-联蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达联蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的目的探讨食管鳞状细胞癌组织中DAB2相互作用蛋白(DAB2IP)和β-联蛋白(β-catenin)表达情况,并分析其与食管鳞状细胞癌患者临床特征和预后的关系。方法方法收集92例食管鳞状细胞癌患者的食管鳞状细胞癌组织和癌旁正常黏膜组织,另取55例食管上皮内瘤变患者的食管上皮内瘤变组织。采用免疫组化法检测3种组织中DAB2IP和β-catenin表达情况,并分析其与食管鳞状细胞癌患者临床特征的关系。绘制Kaplan-Meier生存曲线,分析DAB2IP和β-catenin表达情况与患者预后的关系。采用Cox回归模型分析食管鳞状细胞癌患者预后的影响因素。结果结果食管鳞状细胞癌组织中DAB2IP阳性表达率低于食管上皮内瘤变组织和癌旁正常黏膜组织,β-catenin阳性表达率高于食管上皮内瘤变组织和癌旁正常黏膜组织,食管上皮内瘤变组织中β-catenin阳性表达率高于癌旁正常黏膜组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。食管鳞状细胞癌组织中DAB2IP和β-catenin表达呈负相关(r=-0.609,P﹤0.01)。不同分化程度、远处转移情况、淋巴结转移情况和TNM分期食管鳞状细胞癌患者的食管鳞状细胞癌组织中DAB2IP阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);不同分化程度、浸润深度、远处转移情况、淋巴结转移情况和TNM分期食管鳞状细胞癌患者的食管鳞状细胞癌组织中β-catenin阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。DAB2IP阳性表达患者生存情况优于DAB2IP阴性表达患者,β-catenin阴性表达患者生存情况优于β-catenin阳性表达患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素分析结果显示,远处转移、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期和DAB2IP阴性表达均是食管鳞状细胞癌患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论结论食管鳞状细胞癌组织中DAB2IP阳性表达率较低,β-catenin阳性表达率较高,二者有可能成为食管鳞状细胞癌临床诊断和预后评估的重要指标。

皮肤鳞状细胞癌组织Sirt3、DAB2IP表达与病理特征相关性及对术后复发的预测意义

目的分析皮肤鳞状细胞癌(cSCC)组织沉默信息调节因子3(Sirt3)、DOC2/DAB2相互作用蛋白(DAB2IP)表达与病理特征的关系,并分析二者对术后复发的预测价值。方法选取2018年7月—2020年6月本院cSCC患者193例,均行扩大切除病灶手术。观察cSCC患者肿瘤组织与癌旁组织Sirt3、DAB2IP表达情况,统计术后复发情况并比较术后复发与未复发cSCC患者的相关资料,采用Logistic回归分析cSCC患者术后复发的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Sirt3、DAB2IP预测cSCC患者术后复发的价值,绘制Sirt3、DAB2IP预测cSCC患者术后复发的决策曲线并进行分析,不同Sirt3、DAB2IP表达的cSCC患者术后复发情况。结果cSCC患者肿瘤组织Sirt3、DAB2IP高表达例数多于低表达,差异有统计学意义(P<0.05);193例患者术后复发42例,未复发151例,术后复发的cSCC患者病灶直径、分化程度、术后切缘阳性、Sirt3及DAB2IP表达情况与未复发患者比较,差异有统计学意义(P<0.05);分化程度为低分化、术后切缘阳性Sirt3及DAB2IP高表达是cSCC患者术后复发的独立危险因素(P<0.05);Sirt3、DAB2IP联合检测预测cSCC患者术后复发的曲线下面积(AUC)值为0.669,高于二者单独检测;决策曲线分析显示,当风险阈值为0.20~0.45时,Sirt3、DAB2IP联合检测的净受益率大于单独检测;Sirt3+/DAB2IP+的cSCC患者术后复发率明显高于Sirt3+/DAB2IP-、Sirt3-/DAB2IP+及Sirt3-/DAB2IP-的患者(P<0.05)。结论cSCC组织中Sirt3、DAB2IP均呈高表达,二者同时高表达表明患者术后复发风险较高,可通过检测二者表达情况为临床早期筛查提供依据。

circTRIM33-12调控miR-191/DAB2轴对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化的影响

目的探讨circTRIM33-12通过miR-191/DAB2轴对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法RT-qPCR法检测circTRIM33-12、miR-191和DAB2在脑胶质瘤细胞CHG-5和人正常脑胶质上皮细胞HEB中的表达。将培养的CHG-5细胞进行分组:siRNA NC组、circTRIM33-12 siRNA组、DAB2 siRNA组;mimics NC组、miR-191 mimics组;circ‐TRIM33-12 WT+mimics NC组、circTRIM33-12 WT+miR-191 mimics组、circTRIM33-12 MUT+mimics NC组、circTRIM33-12 MUT+miR-191 mimics组;inhibitor NC组、miR-191 inhibitor组;pcDNA+mimics NC组、pcDNA-TRIM33-12+mimics NC组、pcDNA+miR-191 mimics组、pcDNA-TRIM33-12+miR-191 mimics组;DAB2 WT+mimics NC组、DAB2 WT+miR-191 mimics组、DAB2 MUT+mimics NC组、DAB2 MUT+miR-191 mimics组。CCK-8实验检测circTRIM33-12、miR-191和DAB2的表达对CHG-5细胞增殖能力的影响;流式细胞仪检测circTRIM33-12、miR-191和DAB2的表达对CHG-5细胞凋亡的影响;Western blot检测circTRIM33-12、miR-191和DAB2的表达对CHG-5细胞EMT的影响。TargetScan数据库分析miR-191与DAB2、circTRIM33-12的关系,双荧光素酶报告基因实验验证其关系。RT-qPCR法检测circTRIM33-12通过miR-191对DAB2表达的影响。结果与HEB细胞相比,CHG-5细胞中circTRIM33-12的表达下调(P<0.01),miR-191表达上调(P<0.01),DAB2表达下调(P<0.01)。与siRNA NC组相比,circTRIM33-12 siRNA组和DAB2 siRNA组CHG-5细胞增殖活力、N-cadherin表达明显升高(P<0.01),细胞凋亡率、E-cadherin表达降低(P<0.01)。circTRIM33-12靶向miR-191,miR-191靶向DAB2。与inhibitor NC组相比,miR-191 inhibitor组CHG-5细胞增殖活力、N-cadherin表达明显降低(P<0.01),细胞凋亡率E-cadherin表达升高(P<0.01)。circTRIM33-12过表达通过miR-191抑制CHG-5细胞增殖与EMT。结论circTRIM33-12可能通过miR-191/DAB2轴调控脑胶质瘤细胞的增殖、凋亡与EMT。

DAB2IP基因及其相关信号通路在恶性肿瘤中的研究进展

DAB2IP是一种肿瘤抑制蛋白,能够调节各种致癌途径的细胞质步骤,DAB2IP最初被发现是RASGTPase(Ras-GAP)家族的成员,与肿瘤抑制因子DOC2/DAB2(卵巢癌-2/Disabled-2中差异表达)相互作用,转化细胞中DAB2IP的功能抑制有利于对多种细胞外输入的促癌反应。

敲低DAB2相互作用蛋白(DAB2IP)促进膀胱癌细胞增殖并抑制其凋亡

目的研究残疾基因同源物2(DAB2)相互作用蛋白(DAB2IP)在人膀胱癌组织中的表达并分析与肿瘤病理分级、临床分期的相关性,同时观察DAB2IP与膀胱癌化疗耐药的关系。方法通过免疫组织化学染色方法检测初发和复发膀胱癌中DAB2IP的表达差异。应用RNA干涉(RNAi)技术敲低5637和253J膀胱癌细胞中DAB2IP的表达后,采用MTT法、克隆形成实验验证癌细胞对吡柔比星的敏感性的变化,流式细胞术检测吡柔比星处理后DAB2IP低表达细胞的凋亡率。结果 DAB2IP的表达与膀胱癌TNM分期、病理分级及淋巴结转移等负相关,复发的膀胱癌组织DAB2IP的表达低于初发膀胱癌组织。DAB2IP的低表达与膀胱癌细胞抗药性相关,敲低DAB2IP的水平增强膀胱癌细胞的集落形成能力,促凋亡蛋白PARP和caspase-3表达减少,抑制凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1的表达增加,癌细胞凋亡能力降低、引起化疗耐受。结论敲低DAB2IP的水平可促进膀胱癌细胞的增殖并抑制凋亡,同时增强其化疗耐受性。

Dab2调控阿尔茨海默病小鼠模型海马内TGF-β1/SMADs信号传导并减轻其脑损伤

目的研究Dab2蛋白对阿尔茨海默病疾病模型中TGF-β1/SMADs信号通路的调节作用以及其对阿尔茨海默病小鼠脑损伤的影响。方法 24只APP/PS1双转基因小鼠随机分为AD组、Vector组和Dab2组,每组8只,并将10只阴性对照小鼠作为对照组(Control)。对照组不做任何处理;饲养1个月后,AD组小鼠经双侧海马注射生理盐水,Dab2组小鼠双侧海马注射Dab2腺相关病毒质粒,Vector组小鼠双侧海马注射阴性对照质粒。所有小鼠于鼠龄9个月时进行行为学检测。10月龄时处死ELISA法检测脑组织中Aβ含量;Western blot检测海马中Dab2、TβRII和p-SMAD2/3的表达。结果 Dab2腺相关病毒质粒可在小鼠海马内高效表达Dab2。Dab2组小鼠海马组织中TβRII、p-SMAD2和p-SMAD3含量明显高于其阴性对照Vector组。Dab2组小鼠海马内Aβ含量明显低于Vector组,并且行为学评分明显高于Vector组小鼠。结论 Dab2过表达可通过上调TGF-β1/SMADs信号通路的传导,减轻阿尔茨海默病小鼠海马内Aβ的含量并改善其神经功能。

DAB2IP基因的研究进展

hDAB2IP（human DOC2/DAB2 interaction protein）基因为一种新发现的肿瘤抑制基因,参与细胞的信号转导,影响细胞的生长发育和凋亡,近来的研究发现它在多种恶性肿瘤的发生发展过程中表达下调,因而引起人们的关注。DAB2IP是Ras GTPase-activating protein（Ras GAP）家族的新成员,它与DAB2/DOC2蛋白的N末端相结合,是DAB2信号途径的下游效应器;而DAB2是一个重要的肿瘤抑制基因,在多种肿瘤的发生中发挥作用。DAB2IP作为一种新的GTPase激活蛋白,

结直肠异型增生性异常隐窝灶中DAB2IP、GSK-3β蛋白表达变化及意义

目的观察DAB2互作蛋白(DAB2IP)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)在结直肠异型增生性异常隐窝灶(ACF)中的表达变化,探讨异型增生性ACF与结直肠癌发生发展的关系。方法收集直肠镜检查中使用放大内镜窄带成像技术获取的组织标本,其中结肠正常黏膜38例、异型增生性ACF 40例、管状腺瘤40例、腺瘤癌变35例,均经病理确诊,采用免疫组化法检测各组织中的DAB2IP和GSK-3β。结果 DAB2IP蛋白在结直肠正常黏膜、异型增生性ACF、管状腺瘤及腺癌中阳性表达率逐步降低,分别为94.7%、77.5%、52.5%、14.3%,P均<0.05;GSK-3β蛋白在结直肠正常黏膜、异型增生性ACF、管状腺瘤及腺癌中阳性表达率逐步升高,分别为13.2%、57.5%、75.0%,97.1%,P均<0.05;在异型增生性ACF、管状腺瘤及腺瘤癌变过程中,DAB2IP和GSK-3β蛋白表达呈负相关(r=-0.576,P<0.05)。结论 DAB2IP低表达与GSK-3β高表达可能在结直肠癌前病变中起一定作用,可能作为结直肠肿瘤早期诊断治疗的物生学指标。

不同临床预后患者胃癌组织中DAB2IP表达的差异

目的探讨胃癌中人DOC-2/DAB-2交互蛋白(DOC-2/DAB-2 interaction protein,DAB2IP)的表达与临床预后生存时间的关系。方法收集82例正常胃黏膜及胃癌组织,采用免疫组化方法进行蛋白检测,对随访资料进行Kaplan-Meier生存分析和COX回归分析。结果 DAB2IP在正常胃黏膜组织中多以强阳性表达;在胃癌组织中阳性表达较少,多以弱阳性或阴性为主;DAB2IP在胃癌组织中的阳性评分低于正常黏膜,差异有统计学意义(P<0.05)。DAB2IP阳性表达的胃癌患者中位生存时间为40.8个月,明显长于阴性表达患者的中位生存时间(33.7个月),差异有统计学意义(P<0.05)。COX多因素回归分析显示,较低的DAB2IP表达水平和较高的TNM分期是胃癌预后生存时间的独立危险因素(P<0.05)。结论 DAB2IP下调可能在胃癌的发生、发展中起一定的作用,对预测胃癌患者的预后生存时间具有一定的意义。

膀胱尿路上皮癌中DAB2IP和β-catenin的表达及临床意义

目的探讨DAB2相互作用蛋白(DOC-2/DAB2 interactive protein,DAB2IP)及β-连环蛋白(β-catenin)在膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma,BUC)中的表达及临床意义。方法采用免疫组化EnVision两步法检测104例BUC组织和40例癌旁正常膀胱黏膜组织中DAB2IP及β-catenin蛋白表达,并分析两者表达与BUC临床病理特征及预后的关系。结果BUC组织中DAB2IP蛋白表达明显低于癌旁正常膀胱黏膜组织,β-catenin蛋白表达明显高于癌旁正常膀胱黏膜组织(P<0.05)。DAB2IP蛋白表达与BUC组织学分级、病理分期及5年生存率差异有显著性(P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤直径以及初发/复发患者无相关性(P>0.05)。β-catenin蛋白表达与BUC患者年龄、组织学分级、病理分期、肿瘤直径及5年生存率有相关性(P<0.05),与患者性别以及初发/复发患者无相关性(P>0.05)。BUC组织中DAB2IP及β-catenin蛋白表达呈负相关(P<0.05)。结论 BUC组织中DAB2IP表达下调,β-catenin表达升高,且两者表达呈负相关,DAB2IP和β-catenin异常表达与BUC组织学分级、病理分期及预后有关。

DAB2IP基因及蛋白在结直肠癌组织中的表达研究

目的从mRNA和蛋白两个水平上探讨DAB2IP在结直肠癌组织中的表达及意义。方法应用核酸原位杂交和免疫组织化学两种方法分别检测127例结直肠癌组织和36例癌旁正常黏膜组织中DAB2IP的表达情况,分析DAB2IP基因及其蛋白表达与结直肠癌淋巴结转移、分化程度及Dukes分期等临床病理特征的关系。结果结直肠癌组织中DAB2IP mRNA与蛋白的阳性表达率分别为85.04%、79.53%,低于癌旁正常组织的100.00%、94.45%,差异有统计学意义(P均<0.001)。高、中分化到低分化结直肠癌组织中,DAB2IP的阳性表达率均逐渐下调,3组间差异有统计学意义(P<0.01)。结直肠癌无淋巴结转移组中的DAB2IP阳性表达率高于淋巴结转移组,且其mRNA与蛋白表达水平与淋巴结转移呈负相关(r=-0.2361,r=-0.3060;P均<0.01)。DAB2IP的表达水平与Dukes分期有关,从A期到D期DAB2IP表达逐渐下调,差异有统计学意义(P<0.01);但DAB2IP表达与结直肠癌患者的年龄、性别、发生部位及肿瘤大小均无关(P>0.05)。结论 DAB2IP在结直肠癌的发生、发展中具有重要作用,且其表达水平与淋巴结转移呈负相关,可作为预测结直肠癌转移潜能及判断预后的一个重要指标。

DAB2IP在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究DAB2IP(DOC-2/DAB2 interactive protein)在人前列腺癌、前列腺增生组织中的表达,探讨其与前列腺癌Gleason评分的关系。方法:应用免疫组织化学S-P法检测50例前列腺癌和30例前列腺增生组织中DAB2IP蛋白的表达情况,分析DAB2IP表达水平与前列腺癌Gleason评分之间的相关性。结果:DAB2IP在前列腺癌及前列腺增生组织中均可检出,在50例前列腺癌组织中,DAB2IP主要呈局灶性低表达,强阳性表达率为10.0%(5/50);而在30例前列腺良性增生组织切片中,DAB2IP的阳性表达率为100.0%(30/30),其强阳性表达率为83.3%(25/30),差异具有统计学意义(P<0.05);前列腺癌中DAB2IP表达强度在不同Gleason评分之间差异有统计学意义(P<0.05),但是与神经侵犯不相关(P>0.05)。结论:DAB2IP表达下调可能在前列腺癌的发生发展过程中发挥促进作用,为前列腺癌的诊治提供新的思路和线索。

膀胱移行细胞癌中Dab2/DOC-2与GRB2表达的相关性及临床意义

目的探讨Dab2、GRB2在膀胱移行细胞癌中表达的临床意义及其相关性。方法应用免疫组织化学方法检测Dab2、GRB2在64例膀胱移行细胞癌中的表达,采用卡方检验分析两者表达与膀胱移行细胞癌临床病理学特征之间的关系。结果膀胱移行细胞癌中Dab2和GRB2阳性表达率分别是43.8%和81.3%,表达呈负相关(r=-0.383,P=0.002)。Dab2表达水平与肿瘤病理学分期有关,GRB2表达与肿瘤的病理学分级有关。结论Dab2、GRB2蛋白表达可作为判断膀胱移行细胞癌生物学行为的重要指标。

新型Ras-GAP蛋白DAB2IP在前列腺癌中的研究进展

DAB2IP是Ras-鸟苷三磷酸酶激活蛋白(Ras-GAP)家族的新成员。作为一种新型抑癌基因,其表达在多种类型肿瘤细胞中普遍缺失。近年来,我们对DAB2IP在前列腺癌(PCa)恶性进展中作用的研究取得了重大突破,发现了它是维系前列腺上皮细胞自身稳定的重要支架蛋白,协调细胞内部多种信号通路的平衡,其表达缺失可促发细胞内信号紊乱,引起PCa细胞耐受凋亡、生长失控和侵袭转移。本文将综述DAB2IP的发现、表达调节以及生理功能的研究进展,重点论述其在PCa发生、发展中的作用及机制,为进一步开展有关PCa恶性进展的基础与临床研究提供参考。

宫颈癌中cIAP1与Dab2的基因改变

目的通过检测cIAP1与Dab2基因在宫颈癌中是否有扩增或丢失,确定与宫颈癌发生发展相关的分子标志。方法对41例新鲜宫颈癌标本进行显微切割和DNA提取;PCR扩增宫颈癌DNA中的靶基因cIAP1与Dab2;运用bandscan 4.3对PCR扩增产物的电泳条带进行灰度扫描,并用软件SPSS13.0对数据进行处理,确定发生扩增或丢失的基因。结果在宫颈癌中,cIAP1与Dab2均有不同程度的扩增,宫颈癌组织中cIAP1相对灰度的均值为0.716,正常宫颈组织相对灰度的均值为0.550;宫颈癌组织中Dab2相对灰度值的均值为0.235,正常宫颈组织相对灰度的均值为0.189。癌组织较正常组织中cIAP1与Dab2的拷贝数明显增加,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 cIAP1与Dab2在宫颈癌中均表现为扩增,提示两者均可作为宫颈癌发生发展的分子标志物。

抑癌基因DAB2IP在结直肠癌中的表达及临床意义

目的:探讨抑癌基因DAB2IP在结直肠癌中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学方法对103例结直肠癌组织、正常黏膜和转移淋巴结组织进行蛋白检测。结果:DAB2IP在正常黏膜中的表达远高于结直肠癌组织和转移淋巴结组织(P<0.05),其表达水平与淋巴结转移、远处转移、淋巴结转移度、临床Dukes分期、CEA和生存时间相关(P<0.05),DAB2IP是结直肠癌重要的预后因素(P<0.05)。结果:DAB2IP下调可能导致结直肠癌的发生、浸润转移和生存时间减少。

结直肠癌患者DAB2IP及NET-1的表达及诊断意义

目的探讨结直肠癌(CRC)患者DOC⁃2/DAB2相互作用蛋白(DAB2IP)与新四极体⁃1(NET⁃1)的表达水平,并分析在CRC中的诊断意义,为提高CRC的确诊率提供参考。方法选取河北北方学院附属第一医院收治的148例CRC患者癌症组织和76例正常黏膜组织,通过免疫组化法检测DAB2IP与NET⁃1的表达,分析CRC癌组织DAB2IP与NET⁃1表达的相关性,分析两因子表达情况与CRC临床病理参数的关系及临床诊断效能。结果CRC组织中DAB2IP的阳性表达率27.70%(41/148)低于正常组织96.05%(73/76)(P<0.05);CRC组织中NET⁃1的阳性表达率66.89%(99/148)高于正常组织10.53%(8/76)(P<0.05)。DAB2IP与NET⁃1的表达呈负相关(P<0.05)。DAB2IP的阳性表达与CRC患者的TNM分期、分化程度、淋巴结转移、血管浸润、浆膜浸润和肝转移有关(均P<0.05),与肿瘤的大小无关(P>0.05),NET⁃1阳性表达与CRC的TNM分期、淋巴结转移、血管浸润、浆膜浸润和肝转移有关(均P<0.05),与肿瘤的大小和分化程度无关(均P>0.05)。DAB2IP诊断CRC的灵敏度、特异度和准确度分别为72.30%(107/148)、96.05%(73/76)和80.36%(167/224),NET⁃1分别为66.89%(99/148)、89.47%(68/76)和74.55%(180/224),DAB2IP联合NET⁃1分别96.62%(143/148)、97.37%(74/76)和96.88%(217/224),与DAB2IP或NET⁃1相比,DAB2IP联合NET⁃1的灵敏度、特异度和准确度均较高。结论CRC组织中DAB2IP呈低表达,NET⁃1呈高表达,DAB2IP与NET⁃1表达呈负相关DAB2IP联合NET⁃1可能为CRC诊断提供依据。

ZEB1与DAB2IP在子宫腺肌病中的表达及意义

目的探讨转录因子E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)与抑癌基因DAB2相互作用蛋白(DAB2IP)在子宫腺肌病中的表达及临床意义,为提高子宫腺肌病的诊治水平提供依据。方法对我院2014年3月至2016年9月手术切除的73例子宫腺肌病子宫内膜、48例正常子宫内膜组织的临床病理特征进行回顾性分析,比较两组中ZEB1与DAB2IP的表达水平,并分析其与临床病理特征的相关性。结果 (1)子宫腺肌病子宫内膜组织ZEB1阳性表达率为80.82%,DAB2IP阳性表达率为72.60%;(2)两组中ZEB1与DAB2IP阳性表达率比较存在明显差异,有统计学意义(P<0.05);(3)子宫腺肌病子宫内膜组织中ZEB1、DAB2IP表达与患者的年龄、痛经、月经异常无关(P>0.05),但与患者腺肌瘤大小、肌瘤浸润深度密切相关(P<0.05);(4)经多元Cox逐步回归分析:腺肌瘤>3 cm、肌瘤深层浸润为子宫腺肌病患者的独立危险因素(P<0.05)。结论子宫腺肌病子宫内膜组织中ZEB1、DAB2IP阳性表达率高,其表达水平与肌大小、浸润深度密切相关,联合检测对评估子宫腺肌瘤病预后情况具有重要意义。

DOC-2/DAB2结合蛋白、caspase 8在皮肤基底细胞癌中的表达及作用机制

目的探讨DOC-2/DAB2结合蛋白(DAB2IP)、caspase 8在皮肤基底细胞癌(BCC)中的表达及作用机制。方法选取80例BCC患者和30例接受整形外科手术的健康者,分别取其BCC组织和正常皮肤组织,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测DAB2IP mRNA的相对表达量,蛋白质印迹(Western blot)法检测DAB2IP、caspase 8蛋白的相对表达量。将si-DAB2IP、si-NC通过脂质体转染至BCC细胞系TE-354.T,分别作为si-DAB2IP组和si-NC组,Western blot法检测细胞中DAB2IP、caspase 8蛋白的相对表达量。结果BCC组织中DAB2IP mRNA的相对表达量明显低于正常皮肤组织(P﹤0.01),DAB2IP、caspase 8蛋白的相对表达量均明显低于正常皮肤组织(P﹤0.01)。抑制DAB2IP基因的表达后,si-DAB2IP组细胞中DAB2IP、caspase 8蛋白的相对表达量均明显低于si-NC组(P﹤0.01)。肿瘤直径≥1 cm、病理类型为浅表型BCC患者BCC组织中DAB2IP、caspase 8蛋白的相对表达量均高于肿瘤直径﹤1 cm、病理类型为浸润型患者(P﹤0.05)。Pearson相关分析结果表明,BCC组织中caspase 8的表达与DAB2IP的表达呈正相关(r=0.72,P﹤0.05)。结论caspase 8、DAB2IP在BCC组织中低表达,DAB2IP可能通过促进caspase 8的表达发挥抗肿瘤作用,靶向DAB2IP或可成为BCC治疗的新靶点。

DAB2IP基因慢病毒载体构建及其在前列腺癌PC3细胞中的表达

目的:构建重组慢病毒质粒pSin-EF2-Puro-DAB2IP并转染前列腺癌PC3细胞,观察其转染效率及其在PC3细胞中的表达。方法:以人前列腺癌PC3细胞基因组cDNA为模板PCR扩增获得目的基因DAB2IP片段后,应用基因重组技术将目的片段克隆到PC3-pSin慢病毒表达载体,经PCR、双酶切和测序鉴定后,重组慢病毒表达质粒和包装质粒共转染293FT细胞,获得携带DAB2IP基因的重组慢病毒。取病毒上清感染人前列腺癌PC3细胞,以PC3-pSin-EF2为对照,分别采用RT-QPCR、Western blotting法检测DAB2IP在靶细胞中的表达水平。结果:重组慢病毒质粒pSin-EF2-Puro-DAB2IP经PCR、EcoRⅠ和NheⅠ双酶切鉴定结果与目的基因条带吻合,克隆测序结果与NCBI收录的DAB2IP基因序列(NM_138709)完全一致。重组慢病毒质粒转染293FT细胞收获慢病毒上清可高效感染PC3细胞,对照组细胞株PC3-pSin-EF2及过表达细胞株PC3-pSin-EF2-DAB2IP内DAB2IP基因的相对拷贝数分别为0.001±0.000和0.158±0.013,与对照组细胞比较,过表达细胞内DAB2IP基因mRNA表达水平上调(179.37±15.89)倍,差异有统计学意义(P<0.001);Western blotting法,对照组PC3-pSin-EF2细胞中DAB2IP蛋白表达水平为内参的(1.002±0.783)倍,PC3-pSin-EF2-DAB2IP细胞组为内参的(2.431±0.892)倍,过表达组DAB2IP蛋白表达水平为对照组的(2.415±0.961)倍,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:成功构建携带DAB2IP基因的慢病毒表达载体pSin-EF2-Puro-DAB2IP,并使目的基因在靶细胞中稳定表达,为进一步研究DAB2IP基因的相关功能提供了优质的稳定转染载体。