Advances in Research of Pharmacological Effects and Molecular Mechanisms of Daurisoline

Daurisoline is an important bisbenzylisoquinoline alkaloid and mainly exists in the rhizome of Menispermum dauricum DC.,a plant of the family Menispermaceae.Due to its pharmacological effects such as anti-arrhythmia,anti-ischemia and anti-cancer,daurisoline has attracted wide attention of researchers.In this paper,the pharmacological effects and action mechanism of daurisoline were reviewed in combination with relevant research literature,to provide a theoretical basis for the development and clinical application of daurisoline.

l-S·R-daurisoline protects cultured hippocampal neurons against glutamate neurotoxicity by reducing nitric oxide production

目的：探讨ｌＳ·Ｒ蝙蝠葛苏林碱（ＤＳ）保护神经元的作用机制．方法：原代培养大鼠海马神经细胞，用台盼蓝染色和ＭＴＴ法检测神经细胞损伤，以去内皮的大鼠胸主动脉作为分析ＮＯ含量的生物检测器．结果：ＤＳ００１－１０μｍｏｌ·Ｌ－１剂量依赖性地抑制谷氨酸（Ｇｌｕ）神经毒性，ＩＣ５０为２８μｍｏｌ·Ｌ－１（９５％可信限为１２－５９μｍｏｌ·Ｌ－１），ＤＳ１０μｍｏｌ·Ｌ－１能够抑制Ｇｌｕ引起的主动脉条舒张，但对亚硝基铁氰化钠（ＳＮＰ）的动脉条舒张和神经毒性无明显的影响．表明ＤＳ不能直接对抗ＮＯ的毒性，但能抑制Ｇｌｕ刺激ＮＯ的产生．结论：ＤＳ对抗Ｇｌｕ引起的神经毒性的作用与抑制Ｇｌｕ刺激ＮＯ的合成有关．

EFFECTS OF DAURISOLINE ON CYTOSOLIC FREE CALCIUMIN FETAL RAT CEREBRAL CELLS

Cytosolic free Ca([Ca]i)was measured in dissociated cerebral cells isolated from fetal rats with the fluorescent indicater fura-2. Increase in[Ca]i occurred rapidly following explsure of the cells to 50 mmol/L KCI,10mol/L Bayk 8644 or 200μmol/L glutamate（Glu）.[Ca]i elevated by

Circular dichroism of tail-to-tail bisbenzylisoquinoline and the absolute configuration of daurisoline isolated from Menispermum dauricum

Since two asymmetric centres are usually present in the bisbenzylisoquinolines,the circular dichroism is known to be an important method to elucidate their stereochemistry.We studied the relationships of the CD spectra with the stereochemistry of synthetic RR-(1),SS-(2),RS-daurisoline(3) and SR-daurisoline(4).By comparision of the CD spectrum of natural daurisoline(1)from Menis- permum dauricum(Menispermaceae)with those of synthetic enantiomers,the absolute configuration was established as RR-daurisoline(1).

蝙蝠葛苏林碱对缺血性损伤细胞的保护作用

采用培养ＰＣ１２细胞为材料，观察了蝙蝠葛苏林碱（Ｄａｕｒｉｓｏｌｉｎｅ，Ｄａｕ）对六种脑缺血样损伤模型中的细胞保护作用及其作用机制进行了分析。实验结果表明：Ｄａｕ１００μｍｏｌ／Ｌ对细胞损伤有明显的保护作用，其保护作用又以对一氧化氮毒性损伤较为敏感。

蝙蝠葛苏林碱在犬体内药动学-药效学结合模型研究

目的 :研究蝙蝠葛苏林碱在beagle犬体内的药动学与药效学之间的关系。 方法 :4只beagle犬给予蝙蝠葛苏林碱 6mg·kg-1静脉注射后 ,分时取血 ,同时通过生理记录仪观察犬心电、血压及血流动力学的变化。采用反相高效液相色谱法测定血浆中蝙蝠葛苏林碱的浓度。结果 :蝙蝠葛苏林碱在犬体内动力学行为符合二房室开放模型 ,对犬药效学影响峰值为 10～ 15min ,皆明显滞后于血药浓度峰值。结论 :通过在beagle犬体内建立的蝙蝠葛苏林碱药动学 药效学 (PK PD)结合模型 ,可以成功预测蝙蝠葛苏林碱的血药浓度及其药理效应。

RP-HPLC法对不同产地蝙蝠葛几种主要生物碱的测定

目的：研究不同产地蝙蝠葛几种主要生物碱在质与量上的区别。方法：采用有机溶剂提取生药，应用ＲＰ－ＨＰＬＣ方法对东北产和咸宁产蝙蝠葛根茎中几种主要脂溶性生物碱进行定性定量测定。结果：东北生药中含量最高的生物碱前３位依次是蝙蝠葛苏林碱、蝙蝠葛碱和ｇｕａｔｅｇａｕｍｅｒｉｎｅ；而咸宁药材则为蝙蝠葛碱、蝙蝠葛诺林碱及蝙蝠葛新诺林碱，不含蝙蝠葛苏林碱。结论：不同产地蝙蝠葛药材所含生物碱在质和量两方面均有显著差异。

蝙蝠葛苏林碱抗实验性心律失常作用

蝙蝠葛苏林碱ｉｖ给药能显著增加乌头碱诱发大鼠心律失常及哇巴因致豚鼠室性心律失常的用量；能显著提高电刺激兔心室致颤阈；对大鼠冠状动脉左前降支结扎复灌注引起的室性心律失常有明显的保护作用；

蝙蝠葛苏林碱对小鼠和大鼠脑缺血的保护作用

目的研究蝙蝠葛苏林碱对小鼠缺氧、急性脑缺血和大鼠局灶性脑缺血的保护作用。方法采用小鼠常压密闭缺氧实验，观察了蝙蝠葛苏林碱对小鼠耗氧量和存活时间的影响；结扎小鼠双侧颈总动脉造成急性全脑缺血模型，观察了蝙蝠葛苏林碱对急性脑缺血小鼠死亡率的影响；电凝阻断大鼠一侧大脑中动脉造成大鼠局灶性脑缺血模型，观察了蝙蝠葛苏林碱对局灶性脑缺血大鼠梗塞面积和行为障碍的影响。结果蝙蝠葛苏林碱能明显降低常压密闭缺氧小鼠整体耗氧速度，延长缺氧小鼠的存活时间；明显降低急性脑缺血小鼠２ｈ死亡率；显著降低局灶性脑缺血大鼠梗塞范围，明显改善行为障碍。结论蝙蝠葛苏林碱具有抗缺氧、抗脑缺血作用。

山豆根碱与山豆根苏林碱对血小板聚集和粘附的影响

观察山豆根碱（Ｄａｕｒｉｃｉｎｅ，Ｄａｕ）及山豆根苏林碱（Ｄａｕｒｉｓｏｌｉｎｅ，Ｄａｓ）对人血小板聚集和粘附功能的影响，并探讨其作用机制。结果表明，两者均可抑制由二磷酸腺苷、花生四烯酸和胶原引起的血小板聚集，药物浓度与聚集抑制率表现出明显的量效关系。Ｄａｕ处理的血小板其对二磷酸腺苷、花生四烯酸和胶原诱导聚集抑制的ＩＣ＿（５０）（ｍｍｏｌ／Ｌ）分别为０．０４２（ｎ＝５），０．０２８（ｎ＝９）及０．０４６（ｎ＝１０）；Ｄａｓ则分别为０．０４２（ｎ＝５），０．０２６（ｎ＝５）及０．０５７（ｎ＝４）。Ｄａｓ表现出对血小板粘附的明显抑制作用。测定经Ｄａｕ与Ｄａｓ处理的血小板内ｃＡＭＰ浓度，发现Ｄａｕ不影响血小板内ｃＡＭＰ水平，而Ｄａｓ可使ｃＡＭＰ水平明显升高。提示，Ｄａｕ与Ｄａｓ有很强的抗血小板生物活性作用，Ｄａｓ的作用可能与血小板内ｃＡＭＰ升高有关。

蝙蝠葛苏林碱对家兔在体心脏单相动作电位的影响(英文)

采用单相动作电位记录技术研究蝙蝠葛苏林碱 (DS)对家兔在体心脏单相动作电位 (MAP)作用的使用依赖性特征 .结果显示DS在 2 4 0 ,2 10 ,180ms起搏周长 (CL)均能降低MAP振幅 (MAPA) ,延长MAP复极达 50 %和 90 %的时程 (MAPD50 ,MAPD90 ) ,有效不应期 (ERP)和ERP/MAPD90 .延长MAPD50 百分率分别为 12 .8± 2 .9,9.5± 2 .6 ,9.0± 1.6 ,延长MAPD90 百分率分别为 10 .9± 2 .6 ,7.5± 2 .4 ,6 .5±2 .7,延长ERP百分率分别为 2 5.7± 4 .3,18.5±4 .1,2 4 .2± 7.2 ,延长ERP/MAPD90 百分率分别为13.7± 4 .5,10 .2± 2 .2 ,16 .1± 5.1(P >0 .0 5) .其延长作用均呈非使用依赖性特征 .在所有起搏周长下 ,索他洛尔亦降低MAPA ,延长MAPD50 ,MAPD90 ,ERP ,ERP/MAPD90 ,但其延长MAPD90 ,ERP的作用均呈逆向使用依赖性特征 (P <0 .0 5) .结果表明 ,DS能明显降低家兔在体心脏MAPA ,延长MAPD50 ,MAPD90 ,ERP ,ERP/MAPD90 ,该作用呈非使用依赖性特征 .

蝙蝠葛苏林碱及异构体对PC12细胞缺血性损伤的保护作用

用细胞培养术，以ＮａＣＮ加缺糖引起ＰＣ１２细胞损伤作为细胞缺血性损伤的模型，观察蝙蝠葛苏林碱（ＤＳ）及其３个光学异构体对ＰＣ１２细胞缺血性损伤的保护作用；以Ｆｕｒａ２／ＡＭ为Ｃａ２＋的荧光探针，用ＡＲＣＭＭＩＣ阳离子测定系统观察ＤＳ及异构体对ＮａＣＮ引起的Ｃａ２＋内流的抑制作用。结果表明ＤＳ及３个异构体在１０－８～１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１的浓度范围内对ＰＣ１２细胞损伤有较明显的保护作用，其机制之一与抑制ＮａＣＮ加缺糖诱发的细胞内游离Ｃａ２＋异常升高有关。

蝙蝠葛苏林碱在兔血浆浓度监测及药代动力学

目的 建立测定血浆中蝙蝠葛苏林碱浓度的方法 ,并研究蝙蝠葛苏林碱在家兔体内的药代动力学。方法以蝙蝠葛碱作为内标。血浆样品经乙腈去蛋白 ,再用二氯甲烷两次萃取 ,采用RP HPLC方法检测。结果 血浆药物浓度在 0 0 5～ 2 0 0 0mg·L- 1 线性关系良好 (r=0 9996 ) ,最低定量浓度为 0 0 5mg·L- 1 ,绝对回收率均大于 80 % ,相对回收率为 (10 1± 5 ) % ,精密度试验的日内及日间RSD %分别为 1 9%～ 5 6 %和 3 5 %～ 6 5 %。药代动力学研究表明 ,家兔蝙蝠葛苏林碱单剂量iv后 ,其体内血药浓度时间数据符合二房室开放模型。结论 本方法专属性强、灵敏度高、回收率高、重现性好 ,可用于蝙蝠葛苏林碱血药浓度测定及药代动力学研究。

静脉注射蝙蝠葛苏林碱在兔体内的药动学

目的研究蝙蝠葛苏林碱（DS）在兔体内的药动学和组织分布特征。方法兔耳缘静脉注射Ds后，采用HPLC测定各时间点血浆和组织器官药物浓度。结果兔DS2．5，5．0，10．0mg·kg^-1静脉注射后，体内动力学行为符合二室开放模型。t1／2α分别为0、024，0．030，0．018h；t1／2β分别为3．0，3．4，6．9h；CL分别为3．1，3．6，4．4L·kg^-1·h^-1；Vd分别为13．1，18．0，43．6L·kg^-1。在Ds2．5—5．0mg·kg^-1内主要药动学参数无显著性差异（P〉0．05），但DS 10.0mg·kg^-1静脉注射后，Po超比例增加（由2．08mg·L^-1增加至10．72mg·L^-1，P〈0．01），t1／2β明显延长（P〈0．01）。结论DS在兔体内分布迅速、广泛，消除较快。在2．5～5．0mg·kg^-1内DS的消除为线性动力学，而10．0mg·kg^-1静脉注射后，本品在兔体内的消除未呈线性动力学。组织分布以肺脏含量最高，各组织器官中药量均显著高于血浆药物浓度。

(-)-S·R-蝙蝠葛苏林碱对谷氨酸引起的大鼠大脑皮质神经元损伤的保护作用

用细胞培养方法，在原代培养的大鼠皮质神经细胞上，观察了（－）Ｓ·Ｒ蝙蝠葛苏林碱对谷氨酸引起的神经元损伤的保护作用。以Ｆｕｒａ２／ＡＭ为Ｃａ２＋的荧光指示剂，用ＡＲＣＭＭＩＣ阳离子测定系统观察（－）Ｓ·Ｒ蝙蝠葛苏林碱对谷氨酸诱发大鼠脑皮质神经细胞内Ｃａ２＋升高的影响。结果表明（－）Ｓ·Ｒ蝙蝠葛苏林碱能剂量依赖性地抑制谷氨酸的神经毒作用，对谷氨酸诱发的神经细胞内游离Ｃａ２＋升高有明显的抑制作用。提示蝙蝠葛苏林碱对缺血性脑损伤有保护作用。

蝙蝠葛苏林碱对PC12细胞内游离钙浓度的影响

目的进一步探讨蝙蝠葛苏林碱（Dau）的抗脑缺血／缺氧损伤与其钙拮抗作用间的关系。方法：培养的PC12细胞用Fura－2／AM负载，用AR－CM－MIC阳离子测定系统观测Dau对单细胞内游离钙（[Ca(2+)]_i）升高的影响。结果：Dau（0．1～100μmol·L(－1)）可浓度依赖性抑制高钾和caffeine引起的[Ca(2+)］_i增加，对肌浆网钙泵抑制剂cy－clopiszonicacid引起的[Ca(2+)]_i升高也有抑制作用。结论：Dau不仅抑制电压依赖性钙通道开放引起的细胞外钙内流和caffeine引起的内钙释放．而且对钙泵也可能有影响，这可能是其抗脑缺血／缺氧损伤的重要机制。

DSL对复灌性局部脑缺血大鼠脑电活动的影响

研究目的探讨蝙蝠葛苏林碱(DSL)对局部脑缺血-再灌注损伤的治疗作用。研究背景已确证某些钙通道阻断剂(如尼莫地平)有抗脑缺血作用。DSL是新近证明的、能选择性作用于神经细胞的钙通道阻断剂,它对脑缺血的影响尚未见研究报道。研究方法 40只wistar雄性大鼠随机分为5组。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是低、中、高3个不同剂量DSL的实验组;Ⅳ为阴性对照组;Ⅴ为尼莫地干阳性对照组。用尼龙线经颈内动脉可逆性插入到大脑前动脉内,建立大鼠局部脑缺血再灌注模型。脑电图在双侧顶区记录。研究结果 MCA阻断后,缺血侧的EEG波幅降低,甚至成电平线,然后逐渐恢复,1小时后可恢复到50％以上。复通后1小时Ⅱ、Ⅲ及Ⅴ组的EEG波幅有明显增高,与阴性对照的Ⅳ组差异显著(P<0.05),且这3组动物的生存时间也明显延长。结论 DSL对局部脑缺血-再灌注损伤有一定的保护作用。

蝙蝠葛苏林碱光学异构体的合成及其钙拮抗活性的研究

以香兰醛和苯乙腈为起始原料,经合成及拆分得到四个光学活性的单苄基异喹啉化合物5～8。进而通过 Ullmann 反应,使5-7,6-8,5-8,6-7结合,然后分别脱苄基得 R,R-、S,S-、R,S-和 S,R-蝙蝠葛苏林碱。药理试验表明,其钙拮抗活性的顺序是 S,R-构型>R,S-构型>R,R-构型>S,S-构型。

(一)蝙蝠葛苏林碱对兔淋巴细胞内钙含量的影响

采用钙荧光指示剂Fura—2/Am定量测试法检测了静息淋巴细胞胞浆内游离钙浓度,并以Ca^(2+)载体A23187作为阳性对照.观察了(一)蝙蝠葛苏林碱(8701)对兔淋巴细胞胞浆内Ca^(2+)浓度的影响。结果表明:8701的各种实验浓度均可显著地促进淋巴细胞内Ca^(2+)浓度增加,在浓度为10^(-4)mol·L^(-1)时,增加细胞内Ca^(2+)浓度的作用显著高于Ca^(2+)载体A23187的作用(P<0.01),提示该药有可能作为淋巴细胞的刺激剂或在高浓度时可能造成淋巴细胞的Ca^(2+)中毒作用。

HPLC法同时测定北豆根胶囊中蝙蝠葛新苛林碱等5种生物碱的含量

目的建立HPLC法同时测定北豆根胶囊中5种生物碱的含量。方法采用phenomenex C18色谱柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,以体积分数0.1%三乙胺水溶液（A）-乙腈（B）为流动相,梯度洗脱,检测波长为284 nm。结果蝙蝠葛新苛林碱、蝙蝠葛新诺林碱、N-去甲基蝙蝠葛碱、蝙蝠葛苏林碱和蝙蝠葛碱的线性范围为4.76-38.08、9.16-73.28、5.88-47.04、42.52-340.2和52.48-419.8 mg·L-1,线性关系良好（r≥0.999 4）;平均加样回收率分别为102.6%、97.4%、96.8%、97.9%和98.9%,RSD（n=9）分别为2.4%、2.3%、3.1%、2.7%和2.5%。结论该方法可用于北豆根胶囊的质量控制,为其临床用药的安全性和有效性提供质量保证。